維生素 E 含量檢測(cè)試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4378

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可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體30mL×1瓶（自備）常溫保存試劑二液體30mL×1瓶（自備）常溫保存試劑三液體30mL×1瓶4℃保存試劑四液體7mL×1瓶4℃保存試劑五粉劑×1瓶4℃保存試劑六液體20mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體20mg×1支-20℃保存溶液的配制：1、試劑一：自備無(wú)水乙醇，常溫保存。2、試劑二：自備正庚烷，常溫保存。32mL無(wú)水乙醇配制成貯備液，4℃避光保存待用。420倍稀釋后使用，建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用。5、標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1mL試劑三，配成20mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。產(chǎn)品說明：維生素E（VitaminE）是一種天然脂溶性抗氧化劑，能阻斷機(jī)體不飽和脂肪酸的過氧化，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，并可清除超氧陰離子自由基，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血等作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。VE還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在510nm有特征吸收峰。技術(shù)指標(biāo)：最低檢出限：3.0152μg/mL線性范圍：3.125-50μg/mL注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)、天平、臺(tái)式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、漩渦震蕩儀、無(wú)水乙醇、正庚烷、蒸餾水和EP管。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）組織樣本試劑名稱組織(g)0.1蒸餾水(μL)200試劑一(μL)300試劑二(μL)5005min（充分抽提300μL900μL無(wú)水乙醇中（=1:3）混勻待測(cè)。注意：吸取上層正庚烷抽提液時(shí)，切勿將中間無(wú)水乙醇與水的液相層吸入。血清（血漿）樣本試劑名稱血清（血漿）(μL)200蒸餾水(μL)200試劑一(μL)300試劑二(μL)5005min（充分抽提300μL900μL無(wú)水乙醇中（=1:3）混勻待測(cè)。注意：離心后，吸取上層正庚烷抽提液時(shí)，切勿將中間無(wú)水乙醇與水的液相層吸入。二、測(cè)定步驟分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至510nm，無(wú)水乙醇調(diào)零。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：將20mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用試劑三稀釋為50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。操作表：（在1.5mL離心管中依次加入下列試劑）試劑名稱對(duì)照管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管待測(cè)樣本(μL)500500--標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL)--500-試劑三(μL)500試劑四(μL)100100100100試劑五(μL)-100100-試劑一(μL)100--100充分混勻，立即記時(shí)，25℃反應(yīng)5min試劑六(μL)3003003003001mL510nmAAA空白管。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。三、維生素E含量計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得到x（μg/mL）。維生素E含量的計(jì)算：按樣本質(zhì)量計(jì)算VE含量（μg/g質(zhì)量）=x×4×V樣總÷W=2x÷W按血清（血漿）體積計(jì)算VE含量（μg/mL）=x×4×V樣總÷V血清（漿）=10x4：待測(cè)樣本為300μL的正庚烷抽提液加900μL的無(wú)水乙醇，相當(dāng)于將抽提樣本稀釋4倍后檢測(cè)；V樣總：提取過程加入正庚烷的體積，0.5mL；W：樣本質(zhì)量，g；V血清（漿）：提取過程中加入血清（漿）體積，0.2mL。注意事項(xiàng)：離心后，在吸取上層正庚烷抽提液時(shí)，切勿將中間無(wú)水乙醇與水的液相層吸入，以免影響試驗(yàn)結(jié)果。如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)