肝脂酶（HL）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4411

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁肝脂酶（HL）活性檢測試劑盒說明書貨號:UPLC-MS-4411規(guī)格:100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體110mL×1瓶4℃保存試劑二液體1.5mL×1瓶4℃保存試劑三粉劑×1瓶4℃保存試劑四粉劑×2支-20℃保存標準品粉劑×1瓶4℃保存溶液的配制：1、試劑三：臨用前加入10mL雙蒸水，充分溶解待用，用不完的4℃保存兩周；211mL-20℃36.94mL丙酮10μmol/mLα-萘酚標準溶液，充分溶解待用，用不完的-20℃產(chǎn)品說明：竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面，可水解各種脂蛋白中的甘油三酯（G）和磷脂（，使各種脂蛋白顆粒的HL及其活性增高時，可導(dǎo)致血漿中低密度脂蛋白（LDL）水平升高，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。α-α-B595nm有特征吸收峰，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝脂酶活性成正相關(guān)。注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測需自備的儀器和用品：可見分光光度計//96/漩渦震蕩儀、EP管、丙酮、蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1（g）︰試劑一體積(mL)1︰5~10的比例（0.1g1L試劑一4℃，10000×g10min，取上清待測。2、細胞：按照細胞數(shù)量（104個）︰試劑一體積（mL）500~1000︰1的比例（5001mL試劑一（300W373min10min，取上清待測。3、血清/血漿：直接測定。二、測定步驟1、分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至595nm，用蒸餾水調(diào)零。2、將試劑三在30℃預(yù)熱20min以上。310μmol/mL5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的標準溶液備用。4對照管測定管標準管空白管樣品（μL）2020--標準溶液（μL）--20-試劑一（μL）908080100試劑二（μL）-101010混勻，30℃反應(yīng)10min--試劑三（μL）80808080試劑四（μL）10101010595nmA對照管、A測定管、AAΔA=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A（1-2次）三、HL酶活計算1、標準曲線的繪制：xΔAyy=kx+bΔA帶x（L。2、HL酶活的計算：按蛋白濃度計算酶活定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/mgprot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr按樣本質(zhì)量計算酶活定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/g鮮重）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T=0.1x÷W按照細胞數(shù)量計算酶活定義：每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/104cell）=x×V樣÷（V樣×細胞數(shù)量（萬個）÷V樣總）÷T=0.1x÷細胞數(shù)量（萬個）按液體體積計算酶活定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=0.1xV反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min。注意事項：1、若樣本為動物肝臟，建議將樣本用試劑一稀釋25倍以上再進行檢測，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。2、若樣本為肥胖型動物