維生素 E 含量檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4379

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微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體60mL×1瓶（自備）常溫保存試劑二液體60mL×1瓶（自備）常溫保存試劑三液體50mL×1瓶4℃保存試劑四液體3mL×1瓶4℃保存試劑五粉劑×1瓶4℃保存試劑六液體7mL×1瓶4℃保存標準品液體20mg×1支-20℃保存溶液的配制：1、試劑一：自備無水乙醇，常溫保存。2、試劑二：自備正庚烷，常溫保存。32mL無水乙醇配制成貯備液，4℃避光保存待用。420倍稀釋后使用，建議當天配制當天使用。5、標準品：臨用前加入1mL試劑三，配成20mg/mL的標準品溶液。產(chǎn)品說明：維生素E（VitaminE）是一種天然脂溶性抗氧化劑，能阻斷機體不飽和脂肪酸的過氧化，維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整性和正常功能，并可清除超氧陰離子自由基，具有延緩衰老、預防溶血性貧血等作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應用價值。VE還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡合物，在510nm有特征吸收峰。技術指標：最低檢出限：2.9178μg/mL線性范圍：3.125-100μg/mL注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計/酶標儀、天平、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、漩渦震蕩儀、無水乙醇、正庚烷、蒸餾水和EP管。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）組織樣本試劑名稱組織(g)0.1蒸餾水(μL)200試劑一(μL)300試劑二(μL)5005min（充分抽提300μL900μL無水乙醇中（=1:3）混勻待測。注意：離心后，吸取上層正庚烷抽提液時，切勿將中間無水乙醇與水的液相層吸入。血清（血漿）樣本試劑名稱血清（血漿）(μL)200蒸餾水(μL)200試劑一(μL)300試劑二(μL)5005min（充分抽提300μL900μL無水乙醇中（=1:3）混勻待測。注意：離心后，吸取上層正庚烷抽提液時，切勿將中間無水乙醇與水的液相層吸入。二、測定步驟分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至510nm，無水乙醇調零。標準溶液的制備：將20mg/mL標準液用試劑三稀釋為50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL的標準溶液備用。操作表：依次加入下列試劑試劑名稱對照管測定管標準管空白管待測樣本(μL)100100--標準溶液(μL)--100-試劑三(μL)100試劑四(μL)20202020試劑五(μL)-2020-試劑一(μL)20--20充分混勻，立即記時，25℃反應5min試劑六(μL)60606060510nmA對照管和AA標準管和AΔ測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管。三、維生素E含量計算標準曲線的繪制：以各個標準溶液的濃度為x軸，其對應的ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得到x（μg/mL）。維生素E含量的計算：按樣本質量計算VE含量（μg/g質量）=x×4×V樣總÷W=2x÷W按血清（血漿）體積計算VE含量（μg/mL）=x×4×V樣總÷V血清（漿）=10x4：待測樣本為300μL的正庚烷抽提液加9