油脂的測(cè)定-上海液質(zhì)檢測(cè)

油脂的測(cè)定一、概述動(dòng)、植物組織中含有油脂和類脂兩大類物質(zhì)，總稱為脂類。油脂是油和脂肪的總稱。通常把常溫下的液體叫做油，如菜油、桐油把常溫下是固定的叫做脂肪，如豬油、羊油。油脂不論來自動(dòng)物或植物體，不論在常溫下是液態(tài)或固態(tài)，它們的水解產(chǎn)物均有高級(jí)脂肪酸和甘油。因此，油脂都是高級(jí)脂肪酸和甘油所形成的脂類化合物。脂類在植物細(xì)胞和組織中存在形態(tài)可分為兩類一類為游離態(tài)，另一類為結(jié)合態(tài)。游離態(tài)油脂常常大量堆積于植物的貯藏器官中，以小滴形狀而存在。所以當(dāng)破壞細(xì)胞而施用壓力可以將個(gè)別的小滴聯(lián)成大滴，而有足夠的大滴時(shí)就得到了液體油。這是榨油工業(yè)的基礎(chǔ)。另一類是與其他成分相結(jié)合的脂類，例如存在于谷物等淀粉顆粒中以及植物營養(yǎng)組織中結(jié)合態(tài)的脂類。不同植物油中所含的脂肪酸根不同，所以它們理化性質(zhì)也不一樣。但是，它們都不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，如乙醚、三氯甲烷、苯、二硫化碳、四氟化碳等。因此，可以將油脂溶解出來與其他成分分離，然后趕去溶劑即為油脂，可求得油脂含量。溶劑最普遍應(yīng)用的為乙醚，因其有較低沸點(diǎn)和容易提取等優(yōu)點(diǎn)但有易著火爆炸等缺點(diǎn)。所以，在測(cè)定過程中要注意通風(fēng)和嚴(yán)禁明火。結(jié)合態(tài)脂類用乙醚提取法不能完全提取出來。因此，將試樣與鹽酸溶液一同加熱，淀粉、蛋白質(zhì)等加水分解，使脂類呈游離狀態(tài)，因而容易用溶劑提取。但是，在鹽酸溶液中加熱，磷脂幾乎完全分解為脂肪酸和堿。所以，酸分解法用于含有大量磷脂的產(chǎn)品時(shí)，測(cè)定值偏低。AOAC公定法采用酸水解法測(cè)定谷物、面粉21中脂類含量。脂類中含有較多的磷脂，不宜采用酸分解法【3】，如大豆脂類含量相當(dāng)高，其中含有較多的磷脂及結(jié)合脂類。為了有效地提取并定量全部脂類，采用氯仿一甲醇（CM）混合溶液提取法3），比較適合。在生物化學(xué)領(lǐng)域里對(duì)于脂類的研究，歷來用氯仿—甲醇作為提取全部脂類的溶劑。在農(nóng)業(yè)利用上作為提取油的原料來評(píng)價(jià)谷類和油料作物種子的品質(zhì)時(shí)，測(cè)定游離態(tài)油脂具有重要意義。作物種子中游離態(tài)的油脂測(cè)定法有油重法（直接法）和殘余法（間接法）。乙醚提取——直接測(cè)定油重法451，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，廣為國內(nèi)外所采用。我國國家標(biāo)準(zhǔn)中將油重法作為仲裁法，但此法所用儀器每次只能測(cè)定一個(gè)樣品，不適宜于大批樣品的測(cè)定。間接測(cè)定殘余法適合于大批樣品的分析，分析效率較高，測(cè)定結(jié)果與油重法較為一致。在有精密析光儀的條件下，大批同種油料作物種子樣品含油量的測(cè)定，采用簡(jiǎn)單快速而準(zhǔn)確的折光法21，最為方便。本節(jié)著重介紹油重法、殘余法和折光法。二、油重法（索氏提取法）方法原理油脂不溶于水，但能溶于乙醚（沸點(diǎn)35℃）、石油醚（沸程30~60℃）、二硫化碳（沸點(diǎn)46.3℃）、丙酮（沸點(diǎn)56.5℃）、四氯化碳（沸點(diǎn)70℃）、三氯甲烷（沸點(diǎn)61℃）、苯（沸點(diǎn)80℃）等有機(jī)溶劑。因此，可以用這些溶劑將植物樣品中油脂浸提出來，然后加熱趕去溶劑即可求得油脂%。常用來測(cè)定脂肪的溶劑為無水乙醚及石油醚，因其有低沸點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)，便于提取但又有易著火爆炸等缺點(diǎn)，測(cè)定時(shí)務(wù)須嚴(yán)防著火爆炸。這些溶劑除提取出游離態(tài)脂肪外，也能提出“類脂肪”，亦即溶于上述溶劑中的其它脂溶性物質(zhì)，如磷脂、高級(jí)醇、色素、蠟以及脂肪酸等，故稱之為“粗脂肪”。主要儀器：電熱恒溫水浴、電熱恒溫烘箱、索氏脂肪提取器（圖16-1）、粉碎機(jī)或研缽、圓筒濾紙（直徑22mm×100mm）或脫脂大濾紙。試劑（1）無水乙醚（化學(xué)純）（*），或?qū)⒐I(yè)用乙醚放在分液漏斗中，加水洗3～4次，洗去丙酮及乙醇等雜質(zhì)。再將乙醚放入干燥的試劑瓶中加入固體顆粒狀或經(jīng)750℃灼燒過的CaCl2，直至吸水固體不再流散為止。這一作用要進(jìn)行幾天。最后將乙醚倒入瓶中蒸餾，得到無水乙醚，或再將乙醚放入另一試劑瓶中，加人幾小片擦凈的金屬鈉，放置至不再放出氫氣為止。這些操作必須在通風(fēng)、低溫?zé)o明火條件下進(jìn)行。（2）石油醚（化學(xué)純，沸程30～60℃)。（3）濃堿乙醇洗液。濃NaOH溶液（450gL-1）與工業(yè)乙醇按3∶1體積比例混合。操作步驟（1）試樣制備4。選取有代表性的種子，去除雜質(zhì)，按四分法縮減取樣。小粒種子，如芝麻、油菜籽等取樣量不得少于25g。大粒種子，如大豆、花生仁等取樣量不得少于30g。將樣品預(yù)先在80℃烘箱中干燥約2h。谷類、大豆等經(jīng)粉碎后通過40目篩。帶殼油料種子如花生果、蓖麻籽、向日葵籽等。取樣量不得少于50g，通過剝殼，分別稱重，計(jì)算出仁率。再用切片機(jī)或小刀片切成0.5mm以下薄片，籽仁粉碎至均勻粉狀。芝麻、油菜子用粉碎機(jī)或研缽細(xì)心研碎，注意不要留有整粒。樣品處理完畢，立即混勻，裝入磨口瓶中備用。（2）測(cè)定。稱取經(jīng)105±2℃烘干1h后粉碎試樣2～5g（精確至0.001g）兩份，全部移入干燥濾紙筒內(nèi)，試樣上面用脫脂棉塞?。?2），以防試樣漂浮，然后移入浸提筒內(nèi)（如無濾紙筒時(shí)也可使用濾紙包）（*3）。事先將潔凈的接受器燒瓶在100～105℃烘箱內(nèi)干燥0.5～1h，烘至恒重（m1），加入約瓶體2/3的無水乙醚，如圖16-1把索氏提取器各部分連接起來，打開冷凝水流，在水浴上進(jìn)行抽提。調(diào)節(jié)水浴溫度（夏天約65℃，冬天約80℃。切忌明火，注意室內(nèi)通風(fēng)），使冷凝下滴的乙醚速度為120～180滴/min，使乙醚不斷回流提取，一般浸提時(shí)間8~10h/年4）。提取結(jié)束后，取下浸提筒，用鑷子取出圓筒濾紙，連接好浸提筒，在水浴中加熱蒸餾回收接受器燒瓶中的乙醚，用紗布擦凈燒瓶外部，取下燒瓶，在沸水浴上蒸去全部殘余的醚（*5）。將盛有脂肪的燒瓶放入105±2℃烘箱中，烘干1h移入干燥器中冷卻至室溫（45～60min）后稱重，精確至0.001g。再烘30min，冷卻，稱重，直至恒重（m2）（注6）g.結(jié)果計(jì)算平行測(cè)定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)后兩位。平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)相差，大豆不得大于2%，油料作物種子不得大于1%。注釋注1.乙醚能與乙醇混溶，也能溶解相當(dāng)量的水，含水和乙醇的乙醚必須提純，回收的乙醚也須脫水后再用，否則樣品中水溶性和醇溶性物質(zhì)也將被浸提出來，測(cè)定游離態(tài)脂肪時(shí)的樣品、乙醚及儀器均必須干燥，防止水溶物質(zhì)浸出產(chǎn)生的誤差。注2.使用符合醫(yī)藥部門規(guī)定的脫脂棉。注3.見圖16-3殘余法濾紙包折疊方法來代替濾紙筒，包的大小，以能平整地放入浸提器內(nèi)為度（寬度不大于浸提器的內(nèi)徑，長(zhǎng)度不超過浸提器的虹吸管），否則將影響浸提完全。注4.樣品浸提時(shí)間隨樣品種類（含油量不同）和浸提條件而定。注5.乙醚稍有殘留，放入烘箱時(shí)也有發(fā)生燃燒爆炸的危險(xiǎn)。注6.反復(fù)加熱會(huì)因脂類氧化而增重，質(zhì)量增加時(shí)，以增重前的質(zhì)量作為恒重。三、殘余法方法原理油脂不溶于水，但能溶于乙醚（沸點(diǎn)35℃）、石油醚（沸程30~60℃）、二硫化碳（沸點(diǎn)46.3℃）、丙酮（沸點(diǎn)56.5℃）、四氯化碳（沸點(diǎn)70℃）、三氯甲烷（沸點(diǎn)61℃）、苯（沸點(diǎn)80℃）等有機(jī)溶劑。因此，可以用這些溶劑將植物樣品中油脂浸提出來，然后加熱趕去溶劑即可求得油脂%。常用來測(cè)定脂肪的溶劑為無水乙醚及石油醚，因其有低沸點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)，便于提取但又有易著火爆炸等缺點(diǎn)，測(cè)定時(shí)務(wù)須嚴(yán)防著火爆炸。這些溶劑除提取出游離態(tài)脂肪外，也能提出“類脂肪”，亦即溶于上述溶劑中的其它脂溶性物質(zhì)，如磷脂、高級(jí)醇、色素、蠟以及脂肪酸等，故稱之為“粗脂肪”。本方法樣品在YG-2型脂肪浸提器中，用能與脂肪溶混的有機(jī)溶劑除去脂肪，從樣品質(zhì)量和殘?jiān)|(zhì)量之差計(jì)算粗脂肪的含量。主要儀器：YG-2型脂肪浸提器（圖16-2）、切片機(jī)、刀片、電熱恒溫水浴、電熱恒溫烘箱、索氏脂肪提取器（圖16-1）、粉碎機(jī)或研缽、圓筒濾紙（直徑22mm×100mm）或脫脂大濾紙。操作步驟（1）樣品制備。選取有代表性的種子，去除雜質(zhì)，按四分法縮減取樣。小粒種子，如芝麻、油菜籽等取樣量不得少于25g。大粒種子，如大豆、花生仁等取樣量不得少于30g。將樣品預(yù)先在80℃烘箱中干燥約2h。谷類、大豆等經(jīng)粉碎后通過40目篩。（2）測(cè)定。浸提前，先將脂肪浸提器的三個(gè)部分————接受燒瓶、浸提筒和冷凝管，洗凈、烘干。將濾紙剪成7cm×7cm（或其他適當(dāng)規(guī)格），并疊成一邊不封口的紙包（圖16-3中8所示）用鉛筆編上序號(hào)，放入同一編號(hào)的稱量瓶中（注1）。將稱量瓶及濾紙包移入105±2℃干燥箱中干燥2h。取出，放入干燥器中冷卻至室溫（約30min），準(zhǔn)確稱濾紙包和稱量瓶的質(zhì)量（m），稱量時(shí)室內(nèi)相對(duì)濕度不得高于7%。用骨匙將已制備好的樣品（谷物1～2g，油料種子1g左右，不必準(zhǔn)確稱量）裝入濾紙包中封上包口（圖16-3），盛于原稱量瓶中，放入105±2℃干燥箱中，干燥3h以除去樣品中水分，冷至室溫后準(zhǔn)確稱重（m2），（m2-m）即為樣品質(zhì)量（g）。將樣包（已稱重）裝入浸提筒中（獨(dú)2），注入乙醚，使之剛好超過樣包高度。連接好浸提器的各部分，浸泡一夜。將浸泡后的無水乙醚，流入浸提燒瓶（浸提瓶中加有幾粒玻璃珠或浮石）。然后在浸提筒中重新注入無水乙醚，使其完全浸泡樣包。連接好浸提器的各部分，接通冷凝水流，在水浴（或燈炮）上進(jìn)行浸提，并調(diào)節(jié)溫度45℃左右。室內(nèi)切忌明火存在，以防止溶劑蒸汽著火燃燒。抽提時(shí)，燒瓶的乙醚加熱沸騰后，溶劑的蒸汽由大的側(cè)管進(jìn)入冷凝管凝為液體滴入抽提器中，浸提樣本并將油脂溶解，當(dāng)溶劑超過抽提器內(nèi)虹吸管高度時(shí)，溶有脂肪的溶劑就流入燒瓶中，如此反復(fù)。將脂肪留于燒瓶?jī)?nèi)，樣本中的油脂不斷地被抽提出來。調(diào)節(jié)水溫，使其冷凝下滴之乙醚呈連球狀（回流量>20mL·min'l），這時(shí)水浴溫度大約在70～80℃，一般須抽提8～10h（依樣品含油量而異），抽提完畢，取出樣包，先在通風(fēng)處晾干除去乙醚，而后放在105±2℃下烘2h，稍冷卻后，放入干燥器中冷卻至室溫，再將各包放入原稱量瓶中稱量（m3）。（m2-m3）即為粗脂肪質(zhì)量，多余的乙醚，可用水