班級(jí)整的分子生物學(xué)檢驗(yàn)終

臨床分子生物學(xué)檢——11級(jí)醫(yī)3分子生物學(xué)：是利用分子生物學(xué)理論與技術(shù) ★表觀遺傳geneticsDNA（DNAmethylation生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNAmethyltransferase，DNMT）S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosyl臨床分子生物學(xué)檢——11級(jí)醫(yī)3分子生物學(xué)：是利用分子生物學(xué)理論與技術(shù) ★表觀遺傳geneticsDNA（DNAmethylation生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNAmethyltransferase，DNMT）S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）為甲基供體，將甲★突變：是指DNA序列的改變或重排。從突變的尺度和性質(zhì)分突變組突變結(jié)構(gòu)的改變突變的突變★組：一個(gè)細(xì)胞或一種生物體的整套遺傳物質(zhì)，包和非編碼DNADNA原核生物（prokaryote）是細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體、放線菌和藍(lán)綠★質(zhì)粒：細(xì)菌下質(zhì)粒的不兼容性利用同系統(tǒng)的質(zhì)粒（FColEI）（omptibility串聯(lián)重復(fù)序列：人組中10~15序列（重復(fù)序列）DNADNAE5~E6bp小DNA：可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)，10~100bp*幾十或幾百或幾千=1~5kb的重復(fù)序列★循環(huán)核酸：是存在RNA體液中細(xì)胞外游離狀態(tài)的核酸，包括游離循環(huán)DNA多態(tài)性DNADNA核酸分子雜交技術(shù)探針與核酸分子雜交特異性識(shí)別靶DNA或RNA以檢測(cè)靶序列的一★變性（denaturation）:在某些理DNADNA（renaturation：螺旋結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象，它是變性的一種逆轉(zhuǎn)過(guò)程。temperaturem50%DNA★分子雜交（molecularhybridization）:★核酸探針（nucleicacidprobe)：是特定核苷酸序列（單鏈，被標(biāo)記）與靶序列發(fā)生特cDNA針mRNADNARNAFISH引物：是★實(shí)時(shí)定量★核酸探針（nucleicacidprobe)：是特定核苷酸序列（單鏈，被標(biāo)記）與靶序列發(fā)生特cDNA針mRNADNARNAFISH引物：是★實(shí)時(shí)定量PCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR★聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainR）（意位置上，一般熒光域值的設(shè)置是基線（背景）熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。Ct值：PCR擴(kuò)增過(guò)程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過(guò)的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)★熒光定量PCR（FQ-PCR）基于熒光能量傳遞技術(shù)（FluorescenceresonanceenergytransferFRET）,通過(guò)受體發(fā)色團(tuán)之間偶極-偶極相互作用,能量從供體發(fā)色團(tuán)轉(zhuǎn)移到受體發(fā)色團(tuán),效率與兩個(gè)發(fā)色團(tuán)之間距離的6DNAPCR★生技術(shù)是指通過(guò)微加工和微電子技術(shù)在固相基質(zhì)表面集成了成千上萬(wàn)密集排列檢測(cè)的技術(shù)★蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics：以蛋白質(zhì)組★雙向凝膠電泳（two-DE：SDS聚丙烯凝膠電泳（SDS）組成的分離系統(tǒng)。IEF是基于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（pI）的差異進(jìn)行分離，SDS則是根據(jù)蛋白質(zhì)分子量（Mw）的不同進(jìn)行分離。生物信息學(xué)（bioinformatics）:包含生物信息的獲取、處理、貯存、分發(fā)、分析和一級(jí)數(shù)數(shù)據(jù)都直接來(lái)源于實(shí)驗(yàn)獲得的二級(jí)數(shù)據(jù)庫(kù)：由核酸和蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)、生物大分子三位空間結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)ORF：（TG3（GAAGAA間策略基于遺傳標(biāo)記與致。mtDNA★異質(zhì)性變異mtDNA發(fā)生了某一變異，異質(zhì)性變異的程度往往★動(dòng)態(tài)突變(Dynamic):不穩(wěn)定三核苷酸重復(fù)序列其突變是由 組中脫氧三核苷酸串無(wú)創(chuàng)產(chǎn) ?！锼幗M學(xué)指以藥物效應(yīng)和安全性為目標(biāo)藥代和藥效差異 特性以PGD：胚胎間策略基于遺傳標(biāo)記與致。mtDNA★異質(zhì)性變異mtDNA發(fā)生了某一變異，異質(zhì)性變異的程度往往★動(dòng)態(tài)突變(Dynamic):不穩(wěn)定三核苷酸重復(fù)序列其突變是由 組中脫氧三核苷酸串無(wú)創(chuàng)產(chǎn) ?！锼幗M學(xué)指以藥物效應(yīng)和安全性為目標(biāo)藥代和藥效差異 特性以PGD：胚胎與導(dǎo)斷某些 遺傳病★原核生組特組較真核小4.6E6bp ：RNA和支架蛋白 ：雙鏈閉環(huán)超螺旋。原核生物的mRNA ：無(wú)內(nèi)含子 。 DNA★組特 組中非編碼序列少編碼>90%(組 之間無(wú)間隔區(qū).mRNA5’端無(wú)帽子結(jié)構(gòu).★人組的特PCR：使用兩對(duì)引物，一對(duì)引物序列在模板的外側(cè)，用于擴(kuò)增含目的的大片段，另一對(duì)引物序列在模板內(nèi)側(cè)，用于擴(kuò)增目的PCRPCRPCR★YMDD突變：YMDD代表四個(gè)氨基酸殘基，即酪氨酸-蛋氨酸-天門(mén)冬氨酸-天門(mén)冬氨酸，其中★完整性檢出策略夠出帶菌者和潛在染者，并能對(duì)進(jìn)行拷貝數(shù)測(cè)定、分型檢測(cè)及亞型和耐藥 +97%DNA(轉(zhuǎn)座因子和大量不屬于已知分類(lèi)序列 串聯(lián)重復(fù)序列|組中10~15%序列（重復(fù)序列DNA首尾相連多次重復(fù)，長(zhǎng)度可達(dá)到E5~E6bp，為高度重復(fù)序列，又稱(chēng)微 +97%DNA(轉(zhuǎn)座因子和大量不屬于已知分類(lèi)序列 串聯(lián)重復(fù)序列|組中10~15%序列（重復(fù)序列DNA首尾相連多次重復(fù)，長(zhǎng)度可達(dá)到E5~E6bp，為高度重復(fù)序列，又稱(chēng)微 element，SINE）LTRpolyApolyA 第二種為L(zhǎng)TR反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子（LTR- ons），也稱(chēng)為反轉(zhuǎn)樣元件-like DNA轉(zhuǎn)座子（DNA Tm的影：DNApH核酸探針的種DNA方法 聚合酶鏈反應(yīng) 特點(diǎn)克隆在載體中的RNA而言，DNA探針不易降解，表 RNA酶的影響， RNARNA探針與靶序列的雜交效率較高，RNA分子大多以單鏈形式存在，RNA分子中不存在高度重復(fù)序列，非特異性雜交少，雜交后未雜交的探針?lè)肿涌捎肦NA酶水解去除，本底的干擾低。RNA探針有易降解和標(biāo)記方法復(fù)雜等缺點(diǎn)， 特點(diǎn)探針長(zhǎng)度較短（一般為 由于探針的長(zhǎng)度較短，特異性較低，，但經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)仍可★核酸分子雜交技術(shù)類(lèi)DNA特點(diǎn)探針長(zhǎng)度較短（一般為 由于探針的長(zhǎng)度較短，特異性較低，，但經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)仍可★核酸分子雜交技術(shù)類(lèi)DNARNASouthernDNANorthernRNADNARNADNA變性→中和→Southern、Northern印跡雜交Southern印跡雜交比較RNARNASouthernRNARNA2’-RNA分子形成發(fā)夾式的二級(jí)結(jié)構(gòu)，以保持其單鏈線形★PCR術(shù)原 的過(guò)程，在DNA模板、引物、四種dNTP存在下，DNA聚合酶的聚合反應(yīng)，由變性、退火、延伸三個(gè)步驟組成。每一個(gè)循環(huán)完成后DNA成為兩個(gè)分子。由于每個(gè)循環(huán)所生成的 段即為下一個(gè)★Southern印跡雜交原理及應(yīng)是膜上檢測(cè)DNA的雜交技術(shù)，是進(jìn)行 瓊脂凝膠電泳分離經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶消化的DN 段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈 構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。主 環(huán)的模板，反應(yīng)產(chǎn)物移植術(shù)形式增長(zhǎng)。N=期前特異性好。30個(gè)循環(huán)最多擴(kuò)增條1.PCR變性溫度：95℃~97DNATmTm5PCR擴(kuò)增特異環(huán)的模板，反應(yīng)產(chǎn)物移植術(shù)形式增長(zhǎng)。N=期前特異性好。30個(gè)循環(huán)最多擴(kuò)增條1.PCR變性溫度：95℃~97DNATmTm5PCR擴(kuò)增特異72TaqDNA2.PCR30725min3.PCR產(chǎn)物的保存與檢測(cè)：PCR4℃保存，PCRPCR技術(shù)PCR（PCRDNARNA★三大核酸數(shù)據(jù) ： EMBL(Europeanmolecularbiologicallaboratory) EBI（歐洲分子生物學(xué)SRS，提交通過(guò)WEBIN或sequin） （theNationalInstituteofGenetics，NIG）年建立也是一個(gè)全面的核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)與GenB 和EMBL數(shù)據(jù)庫(kù)合作檢索通過(guò)SRS，提交通過(guò)sequin。蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)★請(qǐng)分析PCR擴(kuò)增體系 （個(gè)人意見(jiàn)，另一份有詳細(xì)的 自80~90℃的水棲嗜熱菌中提取的耐熱酶。④dNTP：包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP。dNTP會(huì)絡(luò)合Mg離子，當(dāng)PCR需要較高濃度的dNTP時(shí)，應(yīng)在反應(yīng)體系中適當(dāng)增加Mg離子濃度。 最大的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)是UniProt：整合了SWISS-PROT 和TrEMBL和PIR-PSD（蛋白質(zhì)信息資源庫(kù)-公共蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)）SWISS-PROT：人工審閱嚴(yán)格，每個(gè)條目包含條基本信息、分類(lèi)信息（描述蛋白質(zhì)的生物來(lái)源）冗余度低。包括蛋白質(zhì)的功能、翻譯后修飾、結(jié)構(gòu)域和結(jié)合位點(diǎn)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、四級(jí)結(jié)構(gòu)、 最大的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)是UniProt：整合了SWISS-PROT 和TrEMBL和PIR-PSD（蛋白質(zhì)信息資源庫(kù)-公共蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)）SWISS-PROT：人工審閱嚴(yán)格，每個(gè)條目包含條基本信息、分類(lèi)信息（描述蛋白質(zhì)的生物來(lái)源）冗余度低。包括蛋白質(zhì)的功能、翻譯后修飾、結(jié)構(gòu)域和結(jié)合位點(diǎn)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、四級(jí)結(jié)構(gòu)、 TrEMBLEMBL庫(kù)中的核酸序列翻譯出的氨基酸序列；PIR -PSD蛋白質(zhì)信息資源－國(guó)際蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)Information ernationalProteinR-PSD)（MedlinePDBTIGR等PIR-PSD的另一個(gè)重要特征是其對(duì)蛋白質(zhì)超 PDB的策技術(shù)：PCR+PCR 存在與否做出明確販毒★HBV分子生物學(xué)檢驗(yàn)、PCRPCRDNA技術(shù)（DNA（bDNA）的帶有許多側(cè)鏈的HBVDNAFQ-PCR患HBVHBVDNA★HBVYMDD耐藥性突變檢法 PCRTM的分型檢測(cè)方法（可選一兩個(gè)具體描述HIV檢測(cè)的分子生物學(xué)檢HIV抗體檢測(cè)（p24）初篩試驗(yàn)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試紙（金標(biāo)試紙，雙抗原夾心法6確認(rèn)試驗(yàn)：免疫印跡（WesternblotHIVRNA結(jié)核分枝桿TB分子生物學(xué)檢驗(yàn)方1.HIV檢測(cè)的分子生物學(xué)檢HIV抗體檢測(cè)（p24）初篩試驗(yàn)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試紙（金標(biāo)試紙，雙抗原夾心法6確認(rèn)試驗(yàn)：免疫印跡（WesternblotHIVRNA結(jié)核分枝桿TB分子生物學(xué)檢驗(yàn)方1.TBDNAPCR擴(kuò)增所選靶序列65kD、MPB、、 DNA★2.TB耐藥 β基）或缺失。RNA 對(duì)異煙肼：過(guò)氧化氫酶Kat rrs 因（16srRNA）拓?fù)洚悩?gòu)酶（少見(jiàn)）gyrA和編碼DNA回旋酶 TB： 補(bǔ)：分 不外乎 雜 CFP10（ ESAT6(6kD性抗原靶 方法：時(shí)間分辨熒光免疫分析時(shí)間延遲 Tｒ★病例分析（12分問(wèn)答題模板，可能會(huì)換個(gè)疾病也可能不換解答重點(diǎn)1.①根據(jù)病情分析可能是發(fā)生了耐藥②青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)重要的外膜青霉素主要PBPs作用PBPs。主要有penA、，在較長(zhǎng)時(shí)間使用青霉治療可能使得這發(fā)1.①根據(jù)病情分析可能是發(fā)生了耐藥②青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)重要的外膜青霉素主要PBPs作用PBPs。主要有penA、，在較長(zhǎng)時(shí)間使用青霉治療可能使得這發(fā)生突變，從而導(dǎo)PBPs結(jié)構(gòu)的改變 奈瑟菌耐藥檢測(cè)的分子生物學(xué)技術(shù)：詳細(xì)描述1檢查為×××，疑為結(jié)核分枝桿解答重點(diǎn)方法列舉：PCR、real-timePCR、PCR-RFLP、線性探針雜交real-timePCR等1.提取該患者外周抗凝血中的2.庫(kù)中獲取結(jié)核分枝桿菌16S 的序列，利用軟件設(shè)計(jì)一QRreal-timePCR擴(kuò)增6S 上的特異片線粒組的特點(diǎn)：因組小,16569bpDNA組與耳mtDNA的A1555GmtDNAPCR-RFLPDHPLC RFLPDHPLC★線粒DNA突變A3243G析，充分確認(rèn)了該位點(diǎn)的存在。為異質(zhì)性突變不同人突變比例不同 方法：PCR技術(shù)、DHPLC技術(shù)、PCR-RFLP技術(shù)、分怎么檢測(cè)線DNA異質(zhì)性edNext-generationPyrosequencingTM倒位(Inver 或缺失(Indels)缺失或重復(fù)(Deletion/Duplication 的突變，直接揭示導(dǎo)致遺傳病發(fā)生的各種遺傳缺陷 融直策略（接檢出致對(duì)（AA對(duì)（ASO特異性RFLP、PCR-ELISA、DHPLCSSCPPyrosequencingTM倒位(Inver 或缺失(Indels)缺失或重復(fù)(Deletion/Duplication 的突變，直接揭示導(dǎo)致遺傳病發(fā)生的各種遺傳缺陷 融直策略（接檢出致對(duì)（AA對(duì)（ASO特異性RFLP、PCR-ELISA、DHPLCSSCP SouthernblotPCR★⑵動(dòng)態(tài)突變：outhernblot、Β珠蛋白生 性貧血及Ββ11 （掌握其中一個(gè)技術(shù)的原理 （反向點(diǎn)雜交）βα地中海貧血PCRsouthern印跡技術(shù)：BRCA的檢測(cè)-分子影像學(xué)：-HER2表達(dá)-胚胎植入前的分子生物學(xué)檢驗(yàn)PCR技術(shù)（PCR（熟悉原理及應(yīng)用。往屆考的名解和簡(jiǎn)答范圍名解和簡(jiǎn)答是關(guān)于老上課講的，講的少或沒(méi)講的沒(méi)有整理，有時(shí)間自己可以熟悉下05年級(jí)分子生物學(xué)檢驗(yàn)PCR、2-DEYMDD因的獲取方式、質(zhì)粒載體的特點(diǎn)、PCR06年級(jí)分子生物學(xué)檢驗(yàn)名解：T-載體、分子雜交(