21生物化學(xué)習(xí)題與解析-常用分子生物學(xué)技術(shù)的原理及其應(yīng)用Word版

整理為word格式整理為word格式整理為word格式常用分子生物學(xué)技術(shù)的原理及其應(yīng)用一、選擇題（一）A型題1．分子雜交實驗不能用于A．單鏈DNA與RNA分子之間的雜交B．雙鏈DNA與RNA分子之間的雜交C．單鏈RNA分子之間的雜交D．單鏈DNA分子之間的雜交E．抗原與抗體分子之間的雜交2．關(guān)于探針敘述錯誤的是A．帶有特殊標(biāo)記B．具有特定序列C．必須是雙鏈的核酸片段D．可以是基因組DNA片段E．可以是抗體3．下列哪種物質(zhì)不能用作探針A．DNA片段B．cDNAC．蛋白質(zhì)D．氨基酸E．RNA片段4．印跡技術(shù)可以分為A．DNA印跡B．RNA印跡C．蛋白質(zhì)印跡D．斑點印跡E．以上都對5．PCR實驗延伸溫度一般是A．90℃B．72℃C．80℃D．95℃E．60℃6．Westernblot中的探針是A．RNAB．單鏈DNAC．cDNAD．抗體E．雙鏈DNA7．Northernblotting與Southernblotting不同的是A．基本原理不同B．無需進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化C．探針必須是RNAD．探針必須是DNAE．靠毛細(xì)作用進(jìn)行轉(zhuǎn)移8．可以不經(jīng)電泳分離而直接點樣在NC膜上進(jìn)行雜交分析的是A．斑點印跡B．原位雜交C．RNA印跡D．DNA芯片技術(shù)E．DNA印跡9．下列哪種物質(zhì)在PCR反應(yīng)中不能作為模板A．RNAB．單鏈DNAC．cDNAD．蛋白質(zhì)E．雙鏈DNA10．RT-PCR中不涉及的是A．探針B．cDNAC．逆轉(zhuǎn)錄酶D．RNAE．dNTP11．關(guān)于PCR的基本成分?jǐn)⑹鲥e誤的是A．特異性引物B．耐熱性DNA聚合酶C．dNTPD．含有Zn2+的緩沖液E．模板12．DNA鏈末端合成終止法不需要A．ddNTPB．dNTPC．引物標(biāo)記D．DNA聚合酶E．模板13．cDNA文庫構(gòu)建不需要A．提取mRNAB．限制性內(nèi)切酶裂解mRNAC．逆轉(zhuǎn)錄合成cDNAD．將cDNA克隆入質(zhì)?；蚴删wE．重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞14．標(biāo)簽蛋白沉淀是A．研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)B．基于親和色譜原理C．常用標(biāo)簽是GSTD．也可以是6組氨酸標(biāo)簽E．以上都對15．研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下相互作用的技術(shù)是A．標(biāo)簽蛋白沉淀B．酵母雙雜交C．凝膠遷移變動實驗D．染色質(zhì)免疫沉淀法E．噬菌體顯示篩選系統(tǒng)16．動物整體克隆技術(shù)又稱為A．轉(zhuǎn)基因技術(shù)B．基因滅活技術(shù)C．核轉(zhuǎn)移技術(shù)D．基因剔除技術(shù)整理為word格式整理為word格式整理為word格式E．基因轉(zhuǎn)移技術(shù)17．目前主要克隆的致病基因是A．糖尿病致病基因B．惡性腫瘤致病基因C．單基因致病基因D．多基因致病基因E．高血壓致病基因18．基因疫苗主要是指A．DNA疫苗B．RNA疫苗C．反義核酸D．核酶E．小干擾RNA19．目前基因治療中選用最多的基因載體是A．噬菌體B．脂質(zhì)體C．逆轉(zhuǎn)錄病毒D．腺病毒相關(guān)病毒E．腺病毒20．目前基因治療多采用的方法是A．基因增補B．基因置換C．基因矯正D．基因滅活E．基因疫苗（二）B型題A．SouthernblottingB．NorthernblottingC．WesternblottingD．dotblottingE．insituhybridization1．不需要電泳、轉(zhuǎn)膜等程序2．電泳前不需進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化3．靠電轉(zhuǎn)移完成生物大分子的轉(zhuǎn)移4．直接在組織切片或細(xì)胞涂片上進(jìn)行雜交A．逆轉(zhuǎn)錄PCRB．原位PCRC．實時PCRD．多重PCRE．RFLP5．將目的基因擴(kuò)增與定位相結(jié)合6．能動態(tài)檢測反應(yīng)過程中的產(chǎn)物量7．將RNA的逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一項技術(shù)8．在同一反應(yīng)中采取多對引物A．功能克隆B．定位克隆C．轉(zhuǎn)基因技術(shù)D．核轉(zhuǎn)移技術(shù)E．基因剔除9．也叫基因靶向滅活10．該技術(shù)中，被導(dǎo)入的目的基因稱為轉(zhuǎn)基因11．從對基因編碼產(chǎn)物的功能的了解出發(fā)克隆致病基因A．基因疫苗B．基因矯正C．基因置換D．基因增補E．基因失活12．目前基因治療采用最多的方法是13．將致病基因的異常堿基進(jìn)行修正的基因治療方法是14．將正?；蚪?jīng)體內(nèi)基因同源重組原位替換致病基因的基因治療方法是15．利用特定的反義核酸阻斷變異基因異常表達(dá)的基因治療方法是A．酵母雙雜交技術(shù)B．標(biāo)簽蛋白沉淀C．電泳遷移率變動測定D．染色質(zhì)免疫沉淀E．熒光共振能量轉(zhuǎn)換效應(yīng)分析16．凝膠阻滯實驗17．需要設(shè)計誘餌基因18．近年該技術(shù)與芯片技術(shù)結(jié)合在一起，成為一項鑒定特定核蛋白的DNA結(jié)合靶點的新技術(shù)（三）X型題1．核酸探針可以是A．人工合成寡核苷酸片段B．基因組DNA片段C．RNA片段D．cDNA全長或部分片段E．核苷酸整理為word格式整理為word格式整理為word格式2．核酸分子雜交可以形成的雜化雙鏈有A．DNA/DNAB．RNA/RNAC．DNA/RNAD．寡核苷酸/RNAE．寡核苷酸/DNA3．PCR技術(shù)主要用于A．目的基因的克隆B．基因的體外突變C．DNA和RNA的微量分析D．DNA序列測定E．基因突變分析4．分子雜交技術(shù)的原理涉及A．分子雜交特性B．基因文庫C．印跡技術(shù)D．生物芯片E．探針技術(shù)5．關(guān)于DNA鏈末端合成終止法正確的是A．需加入的鏈終止劑ddNTPB．dNTP需要標(biāo)記C．引物也需要標(biāo)記D．又稱Sanger法E．ddNTP缺乏5'-OH6．基因組DNA文庫建立需要A．基因組進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化B．DNA片段克隆到相應(yīng)載體中C．重組體感染宿主菌D．篩選目的基因可以通過核酸分子雜交的方法進(jìn)行E．以λ噬菌體為載體的人基因組DNA文庫的克隆數(shù)目至少應(yīng)在106以上7．用于構(gòu)建基因組DNA文庫的載體有A．酵母人工染色體B．粘粒C．λ噬菌體D．腺病毒E．脂質(zhì)體8．基因診斷較常規(guī)診斷其特點有A．屬于病因診斷B．特異性強C．適用范圍窄D．靈敏度高E．有放大效應(yīng)9．基因失活的常用技術(shù)包括A．基因疫苗B．核酶C．小干擾RNAD．反義核酸E．基因置換10．克隆羊多莉的產(chǎn)生屬于A．同種異體細(xì)胞轉(zhuǎn)移技術(shù)B．同種異體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)C．試管內(nèi)受精D．無性繁殖E．同種異體細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù)11．疾病動物模型可用于A．探討疾病的發(fā)生機制B．克隆致病基因C．新治療方法的篩選系統(tǒng)D．新藥物的篩選系統(tǒng)E．新疾病模型的篩選系統(tǒng)12．蛋白質(zhì)芯片主要應(yīng)用于A．蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的研究B．蛋白質(zhì)表達(dá)譜的研究C．蛋白質(zhì)功能的研究D．蛋白質(zhì)之間的相互作用研究E．疾病的診斷和新藥的篩選13．研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)包括A．標(biāo)簽蛋白沉淀B．酵母雙雜交C．凝膠阻滯實驗D．噬菌體顯示篩選系統(tǒng)E．DNA印跡14．基因治療的基本程序包括A．治療性基因的選擇B．基因載體的選擇C．靶細(xì)胞的選擇D．基因轉(zhuǎn)移E．回輸體內(nèi)15．目前可用作基因治療的基因載體包括A．腺病毒相關(guān)病毒B．噬菌體C．腺病毒D．逆轉(zhuǎn)錄病毒E．粘粒二、是非題1．Southernblot主要用于RNA的定性和定量分析。2．蛋白質(zhì)印跡分析技術(shù)中蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移，可以用電轉(zhuǎn)移，也可以靠毛細(xì)作用轉(zhuǎn)移。整理為word格式整理為word格式整理為word格式3．實時PCR技術(shù)與普通PCR技術(shù)相比，它可以動態(tài)監(jiān)測反應(yīng)過程中產(chǎn)物的量。4．Sanger法在測定核酸序列時，反應(yīng)管中加入的dNTP僅標(biāo)記一種即可。5．生物芯片可以是DNA芯片、cDNA芯片或蛋白質(zhì)芯片。6．酵母雙雜交技術(shù)是分析DNA—蛋白質(zhì)相互作用的一項重要技術(shù)。7．核轉(zhuǎn)移技術(shù)，是指將動物體細(xì)胞核全部導(dǎo)入另一個體去除了胞核的卵細(xì)胞內(nèi)，使之發(fā)育成個體。8．基因矯正是用正常的基因通過體內(nèi)基因同源重組，替換致病基因來達(dá)到治療目的。9．目前基因治療多采用基因增補的方式。10．RNA印跡技術(shù)中，RNA分子在轉(zhuǎn)移前需進(jìn)行限制性內(nèi)切酶切割。11．PCR反應(yīng)中變性主要是使模板DNA完全變性為單鏈。12．實時PCR技術(shù)中，TagDNA聚合酶在鏈延伸過程中遇到熒光探針，可發(fā)揮3'→5'核酸外切酶活性。13．酵母雙雜交系統(tǒng)可用于證明兩種已知基因序列的蛋白質(zhì)可以相互作用的生物信息學(xué)推測。14．轉(zhuǎn)基因技術(shù)即動物克隆技術(shù)，是無性繁殖。15．內(nèi)源基因結(jié)構(gòu)突變發(fā)生在生殖細(xì)胞可引起惡性腫瘤。16．基因轉(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)在醫(yī)學(xué)中最重要的用途是建立疾病動物模型。17．定位克隆是指從對基因編碼產(chǎn)物的功能的了解出發(fā)來克隆致病基因。18．目前DNA序列分析是找出患者有關(guān)基因變異所在的最為直接和確切的基因診斷法。三、填空題1．分子雜交是利用DNA和這一基本性質(zhì)來進(jìn)行DNA或RNA定性、定量分析的。2．在印跡技術(shù)中，將DNA片段在瓊脂糖凝膠中使其成為，利用使膠中的生物大分子轉(zhuǎn)移到膜上，使之成為固相化分子。3．印跡技術(shù)的基本流程依次為、、和。4．Southernblotting主要用于定性和定量分析，亦可用于和的分析。5．Northernblotting主要用于檢測的表達(dá)水平，敏感性較PCR，但其具有和的優(yōu)點。6．Westernblotting主要用于檢測樣品中的存在、細(xì)胞中以及的相互作用研究等。7．PCR的基本反應(yīng)步驟包括、、。8．基因芯片適用于分析不同組織細(xì)胞或同一細(xì)胞不同狀態(tài)下的，其原理是基于。9．在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，被導(dǎo)入的目的基因稱為，目的基因的受體動物稱為。10．標(biāo)簽融合蛋白結(jié)合實驗主要用于證明是否存在直接的物理結(jié)合，分析結(jié)合的及篩選細(xì)胞內(nèi)與融合蛋白相結(jié)合的。11．染色質(zhì)免疫沉淀法是目前可以研究與相互作用的主要方法。12．目前克隆致病相關(guān)基因主要有和兩大策略。13．根據(jù)受體細(xì)胞的類型不同，基因治療分為的基因治療和的基因治療兩大類。14．目前使用的基因載體有和兩大類。整理為word格式整理為word格式整理為word格式15．在人類基因治療實施中，導(dǎo)入基因的方式有和兩大類。四、名詞解釋1．probe2．blottingtechnologe3．genelibary4．核轉(zhuǎn)移技術(shù)5．genechip6．genetherapy7．genediagnosis8．基因疫苗9．geneinactivation10．genereplacement11．geneaugmentation12．PCR13．exvivo五、問答題1．簡述印跡技術(shù)的分類及應(yīng)用。2．簡述PCR反應(yīng)體系的基本成分、PCR的基本反應(yīng)步驟和主要用途。3．簡述PCR技術(shù)的基本原理。4．簡述逆轉(zhuǎn)錄PCR、原位PCR和實時PCR技術(shù)的基本原理和主要區(qū)別。5．簡述DNA鏈末端合成終止法（Sanger法）測序的基本原理。6．簡述基因轉(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)在醫(yī)學(xué)發(fā)展中的作用。7．簡述酵母雙雜交技術(shù)的基本原理及應(yīng)用。8．試述染色質(zhì)免疫沉淀法基本原理及用途。9．簡述基因診斷的概念及特點。10．何為基因治療，目前基因治療有哪些基本策略？11．試述基因治療的基本程序。12．欲生產(chǎn)一種藥用多肽，科學(xué)家已經(jīng)將此多肽的基因與某真核表達(dá)質(zhì)粒重組在一起。請你設(shè)計一個實驗，利用PCR方法鑒定此重組表達(dá)質(zhì)粒是否含有這一多肽的基因。13．請設(shè)計一個實驗，利用酵母雙雜交系統(tǒng)檢測從某一癌組織中提取、純化的一種未知蛋白質(zhì)X與兩種已知蛋白質(zhì)a、b之間是否有相互作用。14．請為某一單基因遺傳?。ǖ捅磉_(dá)或不表達(dá)）的患者設(shè)計一個基因治療方案。整理為word格式整理為word格式整理為word格式參考答案一、選擇題（一）A型題1．B2．C3．D4．E5．B6．D7．B8．A9．D10．A11．D12．C13．B14．E15．D16．C17．C18．A19．D20．A（二）B型題1．D2．B3．C4．E5．B6．C7．A8．D9．E10．C11．A12．D13．B14．C15．E16．C17．A18．D（三）X型題1．ABCD2．ABCDE3．ABCDE4．ACE5．ABD6．ABCDE7．ABC8．ABDE9．BCD10．BD11．ACD12．BCDE13．AB14．ABCD15．ACD二、是非題1．B2．B3．A4．A5．A6．B7．B8．B9．A10．B11．A12．B13．A14．B15．B16．A17．B18．A三、填空題1．變性復(fù)性2．變性單鏈毛細(xì)作用NC3．電泳轉(zhuǎn)移雜交放射自顯影或化學(xué)顯色4．DNA重組質(zhì)粒噬菌體5．mRNA差特異性強假陽性率低6．特異性蛋白質(zhì)的存在特異性蛋白質(zhì)的半定量分析蛋白質(zhì)分子7．變性退火延伸8．基因差異表達(dá)情況雙色熒光探針雜交9．轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因動物10．兩種蛋白質(zhì)分子具體結(jié)構(gòu)部位未知分子11．體內(nèi)DNA蛋白質(zhì)12．功能克隆定位克隆13．體細(xì)胞生殖細(xì)胞14．病毒載體非病毒載體15．直接體內(nèi)療法間接體內(nèi)療法四、名詞解釋1．探針，是指帶有特殊可檢測標(biāo)記（放射性核素或其它化合物標(biāo)記）的核酸片段，它具有特定的序列，能夠與待測的核酸片斷互補結(jié)合，因此可用于檢測核酸樣品中特定的基因。2．印跡技術(shù)，是指將在凝膠中分離的生物大分子轉(zhuǎn)移或直接放在固定化介質(zhì)上并加以檢測分析的技術(shù)。它包括DNA印跡技術(shù)、RNA印跡技術(shù)和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)等。整理為word格式整理為word格式整理為word格式3．基因文庫，是指一個包含了某一生物體全部DNA序列的克隆群體?；蛭膸炜梢苑譃榛蚪MDNA文庫和cDNA文庫。4．核轉(zhuǎn)移技術(shù)，即所謂動物整體克隆技術(shù)，是指將動物體細(xì)胞核全部導(dǎo)入另一個體去除了胞核的激活的卵細(xì)胞內(nèi)，使之發(fā)育成個體。這樣的個體所攜帶的遺傳性狀僅來自一個父親或母親個體，因而為無性繁殖。從遺傳角度上講，是一個個體的完全拷貝，故稱之為克隆。5．基因芯片，又稱DNA微陣列，包括DNA芯片(DNAchip)和cDNA芯片(cDNAchip)，是指將許多特定的DNA片段或cDNA片段作為探針，有規(guī)律地緊密排列固定于支持物上，然后與待測的熒光標(biāo)記樣品進(jìn)行雜交，雜交后用熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描，通過計算機系統(tǒng)對每一位點的熒光信號做出檢測、比較和分析，從而迅速得出定性和定量的結(jié)果。6．基因診斷，是指利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)和方法，直接檢測基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否正常，從而對疾病作出診斷的方法。7．基因治療，從廣義上講，是指將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到患者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，以達(dá)到治療疾病目的的方法。8．基因疫苗，主要是指DNA疫苗，是第三代疫苗。其將編碼外源性抗原的基因插入到真核表達(dá)質(zhì)粒中，直接導(dǎo)入人體內(nèi)，抗原基因在一定時間內(nèi)持續(xù)表達(dá)，不斷刺激機體免疫系統(tǒng)，達(dá)到治病或防病目的。9．基因失活，是指將特定的序列導(dǎo)入細(xì)胞后，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些基因的異常表達(dá)，已達(dá)到治療疾病的目的。10．基因置換，是指用正常的基因通過體內(nèi)基因同源重組，原位替換致病基因，使細(xì)胞內(nèi)的DNA完全恢復(fù)正常狀態(tài)。11．基因增補，是指將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，不去除異?；?，而通過目的基因的非定點整合，使其表達(dá)產(chǎn)物彌補缺陷基因的功能或使原有的功能增強。12．聚合酶鏈反應(yīng)，指以DNA分子為模板，以一對與模板序列相互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，完成新的DNA的合成，重復(fù)這一過程使目的DNA片段得到擴(kuò)增。這一技術(shù)可以將微量目的DNA片段擴(kuò)增一百萬倍以上。13．間接體內(nèi)療法，是指在體外將外源基因?qū)氚屑?xì)胞內(nèi)，再將這種基因修飾過的細(xì)胞回輸病人體內(nèi)，使帶有外源基因的細(xì)胞在體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)產(chǎn)物，已達(dá)到治療的目的。五、問答題1．簡述印跡技術(shù)的分類及應(yīng)用。答：印記技術(shù)是指將在凝膠中分離的生物大分子轉(zhuǎn)移或直接放在固定化介質(zhì)上并加以檢測分析的技術(shù)。它主要包括DNA印跡技術(shù)(Southernblot)、RNA印跡技術(shù)(Northernblot)和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Westernblot)等。DNA印跡技術(shù)主要用于基因組DNA的定性和定量分析，例如對基因組中特異基因的定位及檢測等，此外亦可用于分析重組質(zhì)粒和噬菌體。RNA印跡技術(shù)主要用于檢測某一組織或細(xì)胞中已知的特異mRNA的表達(dá)水平，也可以比較不同組織和細(xì)胞中的同一基因的表達(dá)情況。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)，也叫免疫印跡，用于檢測樣品中特異性蛋白質(zhì)的存在、細(xì)胞中特異蛋白質(zhì)的半定量分析以及蛋白質(zhì)分子的相互作用研究等。2.簡述PCR反應(yīng)體系的基本成分、PCR的基本反應(yīng)步驟和主要用途。整理為word格式整理為word格式整理為word格式答：組成PCR反應(yīng)體系的基本成分包括模板DNA、特異性引物、耐熱性DNA聚合酶、dNTP以及含有Mg2+的緩沖液。PCR的基本反應(yīng)步驟包括：(1)變性：將反應(yīng)體系加熱至95℃，使模板DNA完全變性為單鏈，同時因物自身以及引物之間存在的局部雙鏈也得以消除。(2)退火：將溫度下降至適宜溫度使引物與模板結(jié)合。(3)延伸：將溫度升至72℃，DNA聚合酶以dNTP為底物催化DNA的合成反應(yīng)。PCR主要用途：(1)目的基因的克??；(2)基因的體外突變；(3)DNA和RNA的微量分析；(4)DNA序列測定；(5)基因突變分析。3．簡述PCR技術(shù)的基本原理及應(yīng)用。答：PCR技術(shù)類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。以DNA分子為模板，以一對與模板序列互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶作用下，利用4種脫氧核苷酸，完成新的DNA的合成，重復(fù)這一過程使目的DNA片段得到擴(kuò)增。這一技術(shù)可以將微量目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上?；静襟E是首先待擴(kuò)增DNA模板加熱變性解鏈，隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火，再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。這種變性-復(fù)性-延伸的過程就是一個PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。主要用于目的基因的克隆、基因的體外突變、DNA和RNA的的微量分析、DNA序列測定和基因突變分析等。4.簡述逆轉(zhuǎn)錄PCR、原位PCR和實時PCR技術(shù)的基本原理和主要區(qū)別。答：逆轉(zhuǎn)錄PCR是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。即首先以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA，再以后者為模板通過PCR反應(yīng)來擴(kuò)增目的基因。原位PCR是在固定液固定、石蠟包埋的組織切片或細(xì)胞涂片上的單個細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的PCR反應(yīng)，然后用特異性探針進(jìn)行原位雜交，即可檢出待測DNA或RNA是否在該組織或細(xì)胞中存在。實時PCR的基本原理是引入了熒光標(biāo)記分子，并使熒光信號強度與PCR產(chǎn)物量成正比，對每一反應(yīng)時刻的熒光信號進(jìn)行實時分析，計算出PCR產(chǎn)物量。根據(jù)動態(tài)變化數(shù)據(jù)，可以精確計算出樣品中最初的含量差異。逆轉(zhuǎn)錄PCR與傳統(tǒng)PCR相比，將RNA的逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)聯(lián)合起來，可以對已知序列的RNA進(jìn)行定性及半定量分析。常規(guī)PCR或RT-PCR技術(shù)的產(chǎn)物不能在組織細(xì)胞中定位原位，因而不能與特定的組織細(xì)胞特征表型相聯(lián)系，原位PCR技術(shù)可以將目的基因的擴(kuò)增與定位相結(jié)合。實時PCR技術(shù)與傳統(tǒng)PCR反應(yīng)相比，在常規(guī)正向和反向引物之間，增加了一特殊引物作為探針。該技術(shù)可以通過動態(tài)監(jiān)測反應(yīng)過程中的產(chǎn)物量，消除了產(chǎn)物堆積對定量分析的干擾。5.簡述DNA鏈末端合成終止法（Sanger法）的基本原理。答：DNA鏈末端合成終止法基本原理是：將2'，3'-雙脫氧核苷酸(ddNTP)代替部分dNTP作為底物摻入到新合成的DNA鏈中，由于ddNTP缺乏3'-OH，一旦ddNTP摻入到DNA鏈中，就不能與下一核苷酸形成磷酸二酯鍵，因此合成反應(yīng)終止。測定時，首先將模板分為四組，每一組分別加入引物和DNA聚合酶及由32P或35S標(biāo)記的dNTP，啟動DNA合成，一定時間后，每一組加入四種ddNTP中的一種，就可以獲得在不同部位終止的、長短不同的DNA鏈，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離這些片段，通過反射自顯影就可以讀出DNA的序列。整理為word格式整理為word格式整理為word格式6.簡述基因轉(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)在醫(yī)學(xué)發(fā)展中的作用。答：基因轉(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)在醫(yī)學(xué)中最重要的用途是建立疾病動物模型。以往的遺傳疾病動物模型主要是自然發(fā)生或用化學(xué)藥物、放射誘導(dǎo)等方式獲得?；蜣D(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)為直接建立動物模型提供了有效的手段。這些模型可用于探討疾病的發(fā)生機制，更重要的是可作為新的治療方法和新的藥物的篩選系統(tǒng)。建立動物模型：(1)單基因決定疾病模型：應(yīng)用基因剔除模擬基因失活，如動脈硬化癥疾病模型。(2)多基因決定疾病模型7．簡述酵母雙雜交技術(shù)的基本原理及應(yīng)用。答：酵母雙雜交系統(tǒng)目前已成為分析細(xì)胞內(nèi)未知蛋白相互作用的主要手段之一。該技術(shù)是基于酵母轉(zhuǎn)錄激活因子GAL4分子的DNA結(jié)合區(qū)(BD)和促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的活性區(qū)(AD)被分開后將喪失對下游基因的激活作用，但BD和AD分別融合了具有配對相互作用的兩種蛋白質(zhì)分子后，就可以依靠所融合的蛋白質(zhì)分子之間的相互作用而恢復(fù)對下游基因的表達(dá)激活作用。酵母雙雜交系統(tǒng)可以用于(1)證明兩種已知基因序列的蛋白質(zhì)可以相互作用的生物信息學(xué)推測；(2)分析已知存在相互作用的兩種蛋白質(zhì)分子的的相互作用功能結(jié)構(gòu)域或關(guān)鍵的氨基酸殘基；(3)將擬研究的蛋白質(zhì)的編碼基因與BD基因融合成為“誘餌”表達(dá)質(zhì)粒，可以篩選AD基因融合的“獵物”基因表達(dá)文庫，篩選未知的相互作用蛋白質(zhì)。8．試述染色質(zhì)免疫沉淀法基本原理及用途。答：染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)是目前可以研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的主要方法。該法可以研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)狀態(tài)下的相互作用，闡明真核生物基因表達(dá)機制。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下用化學(xué)交聯(lián)試劑固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，再利用PCR技術(shù)特異性的富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。9．簡述基因診斷的概念及特點。答：基因診斷是指利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)和方法，直接檢測基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否正常，從而對疾病作出診斷的方法?；蛟\斷與其他診斷方法相比，基因診斷的方法特點是：（1）針對性強，以基因作為檢查材料和探察目標(biāo)，屬于“病因診斷”。（2）特異性強，用分子雜交技術(shù)選用特定基因序列作為探針，故有很高的特異性。（3）靈敏度高，所用技術(shù)具有放大效應(yīng)，故診斷靈敏度高（4）適用性強，診斷范圍廣。10．何為基因治療，目前基因治療有哪些基本策略？答：從廣義上講，是指將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到患者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，以達(dá)到治療疾病目的的方法，均謂之基因治療。(1)缺陷基因精確的原位修復(fù)包括對致病基因的突變堿基進(jìn)行矯正的基因矯正和用正?；蛲ㄟ^重組原位替換致病基因的基因置換。這兩種方法是對缺陷基因精確的原位修復(fù)，不涉及基因組的任何改變，是最為理想的治療方法，但技術(shù)上目前尚未突破。整理為word格式整理為word格式整理為word格式(2)基因增補是指將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，不去除異?；?，而通過目的基因的非定點整合，使其表達(dá)產(chǎn)物彌補缺陷基因的功能或使原有的功能增強。目前基因治療多采用此法。(3)基因失活是指將特定的序列導(dǎo)入細(xì)胞后，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些基因的異常表達(dá)，已達(dá)到治療疾病的目的。(4)基因疫苗主要是指DNA疫苗，是第三代疫苗。其將編碼外源性抗原的基因插入到真核表達(dá)質(zhì)粒中，直接導(dǎo)入人體內(nèi)，抗原基因在一定時間內(nèi)持續(xù)表達(dá)，不斷刺激機體免疫系統(tǒng)，達(dá)到治病或防病目的。11．試述基因治療的基本程序。答：基本程序如下：(1)治療性基因選擇選擇對疾病有治療作用的特定目的基因。(2)基