感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件

章病毒感染的檢查方法與防治原則章病毒感染的檢查方法與防治原則1（優(yōu)選）章病毒感染的檢查方法與防治原則（優(yōu)選）章病毒感染的檢查方法與防治原則標(biāo)本的采集與送檢

1.標(biāo)本中常加入抗生素。2.低溫保存，盡快送檢。3.血清學(xué)標(biāo)本兩份標(biāo)本的采集與送檢二、病毒的分離與鑒定標(biāo)本分離培養(yǎng)動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒形態(tài)觀察光鏡電鏡包涵體病毒體CPETCID50,PFU二、病毒的分離與鑒定標(biāo)分離培養(yǎng)動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒形（一）病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種應(yīng)用尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)動(dòng)物兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒（一）病毒的分離培養(yǎng)動(dòng)物接種動(dòng)物接種2.雞胚培養(yǎng)采用孵化914天的雞胚絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）嗜神經(jīng)病毒2.雞胚培養(yǎng)感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件痘苗病毒、人類皰疹病毒病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）尿囊腔（allantoiccavity）臨床診斷少用病毒＋中和抗體病毒失去感染性血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）中和試驗(yàn)（neutralizingtest）早期抗體檢測（IgM）（plaqueformationtest）痘苗病毒、人類皰疹病毒中和試驗(yàn)（neutralizingtest）卵黃囊（yolksac）干擾現(xiàn)象（interference）三、病毒感染的血清學(xué)診斷臨床診斷少用病毒成分（抗原或核酸）優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜痘苗病毒、人類皰疹病毒優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件3.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）

原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）3.細(xì)胞培養(yǎng)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞

病毒增殖的指征

1.細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。病毒增殖的指征感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱融合即抗原的cDNA或mRNA與載體（如質(zhì)（血凝抑制試驗(yàn)）①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚人工被動(dòng)免疫(artificialpassiveimmunization)病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）三、病毒感染的血清學(xué)診斷細(xì)胞代謝變慢載體疫苗是活疫苗，具有和減毒活疫苗相似的特點(diǎn)。體內(nèi)常帶有潛伏病毒輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過程。（plaqueformationtest）早期抗體檢測（IgM）絨毛尿囊膜（allantocherion）細(xì)胞代謝變慢補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixationtest）病毒＋中和抗體病毒失去感染性嗜神經(jīng)病毒包涵體EBV早期抗原抗體形成包涵體(inclusionbody)即抗原的cDNA或mRNA與載體（如質(zhì)形成包涵體(inclu腮腺炎病毒感染細(xì)胞2.紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體腮腺炎病毒感染細(xì)胞2.紅細(xì)胞吸附（hemadsorption3.干擾現(xiàn)象（interference）4.細(xì)胞代謝改變

細(xì)胞代謝變慢pH變化減慢3.干擾現(xiàn)象（interference）

（二）病毒的鑒定

病毒形態(tài)學(xué)鑒定病毒血清學(xué)鑒定

病毒分子生物學(xué)鑒定（二）病毒的鑒定（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.空斑形成試驗(yàn)（plaqueformationtest）3.50％組織細(xì)胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死空斑試驗(yàn)空斑試驗(yàn)三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：1.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和抗體病毒失去感染性

特點(diǎn)特異性高，抗體維持時(shí)間長應(yīng)用人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和

2.血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集（血凝抑制試驗(yàn)）

2.血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination3.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixationtest）用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體特點(diǎn)特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快應(yīng)用近期感染指標(biāo)。3.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixatio四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查包涵體（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)基因測序（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）*基因工程亞單位疫苗的安全性好，但免疫原性較差，需使用佐劑以提高其免疫原性。體內(nèi)常帶有潛伏病毒EBV早期抗原抗體應(yīng)用尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)子結(jié)合遞呈后，在輔助因子的協(xié)助下誘呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞TCID50,PFU單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）尿囊腔（allantoiccavity）絨毛尿囊膜（allantocherion）③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination卵黃囊（yolksac）②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；缺點(diǎn)有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物中和試驗(yàn)（neutralizingtest）血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination（三）早期抗體檢測可診斷急性感染特異性IgM抗體孕婦感染風(fēng)疹病毒EBV早期抗原抗體

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（三）早第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防人工主動(dòng)免疫(artificialactiveimmunization):將疫苗(vaccine)或類毒素(toxoid)接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施。主要用于預(yù)防人工主動(dòng)免疫(artificialactiveimmu疫苗

第一代疫苗第二代疫苗第三代疫苗死疫苗活疫苗亞單位疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗合成肽疫苗DNA疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗疫第一代疫苗第二代疫苗第三代疫苗死疫苗亞單位疫苗基因工程疫苗感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件*載體疫苗利用非致病微生物做載體，將病毒的保護(hù)性抗原基因片段重組到載體微生物基因組中，用表達(dá)保護(hù)性抗原的微生物作為疫苗。載體疫苗是活疫苗，具有和減毒活疫苗相似的特點(diǎn)。

*載體疫苗*亞單位疫苗

用化學(xué)方法裂解和提取而制成的病毒保護(hù)性抗原組份。

其特點(diǎn)與滅活疫苗類似。

*亞單位疫苗基因工程亞單位疫苗*用基因工程表達(dá)的病毒蛋白抗原制成的疫苗。*表達(dá)外源基因的系統(tǒng)細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等。*基因工程亞單位疫苗的安全性好，但免疫原性較差，需使用佐劑以提高其免疫原性?；蚬こ虂唵挝灰呙?核酸疫苗@將編碼病毒某種抗原蛋白的外源基因，即抗原的cDNA或mRNA與載體（如質(zhì)粒DNA）重組直接注入體內(nèi)，使體細(xì)胞編碼病毒抗原，并通過細(xì)胞MHC分子結(jié)合遞呈后，在輔助因子的協(xié)助下誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和抗體應(yīng)答。@DNA疫苗；RNA疫苗。

*核酸疫苗人工被動(dòng)免疫(artificialpassiveimmunization)

輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過程。*免疫球蛋白

*細(xì)胞免疫制劑人工被動(dòng)免疫(artificialpassiveimmu血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination傳代細(xì)胞系（continuouscellline）（三）病毒數(shù)量與感染性測定infectiousdose,TCID50）（plaqueformationtest）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低應(yīng)用人群免疫情況的調(diào)查基因工程亞單位疫苗載體疫苗是活疫苗，具有和減毒活疫苗相似的特點(diǎn)。動(dòng)物兔、鼠、黑猩猩、猴等應(yīng)用近期感染指標(biāo)。③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。章病毒感染的檢查方法與防治原則痘苗病毒、人類皰疹病毒第三節(jié)病毒感染的治療血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）第三節(jié)病毒感染的治療章病毒感染的檢查方法與防治原則章病毒感染的檢查方法與防治原則40（優(yōu)選）章病毒感染的檢查方法與防治原則（優(yōu)選）章病毒感染的檢查方法與防治原則標(biāo)本的采集與送檢

1.標(biāo)本中常加入抗生素。2.低溫保存，盡快送檢。3.血清學(xué)標(biāo)本兩份標(biāo)本的采集與送檢二、病毒的分離與鑒定標(biāo)本分離培養(yǎng)動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒形態(tài)觀察光鏡電鏡包涵體病毒體CPETCID50,PFU二、病毒的分離與鑒定標(biāo)分離培養(yǎng)動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)病毒形（一）病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種應(yīng)用尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)動(dòng)物兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒（一）病毒的分離培養(yǎng)動(dòng)物接種動(dòng)物接種2.雞胚培養(yǎng)采用孵化914天的雞胚絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）嗜神經(jīng)病毒2.雞胚培養(yǎng)感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件痘苗病毒、人類皰疹病毒病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）尿囊腔（allantoiccavity）臨床診斷少用病毒＋中和抗體病毒失去感染性血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）中和試驗(yàn)（neutralizingtest）早期抗體檢測（IgM）（plaqueformationtest）痘苗病毒、人類皰疹病毒中和試驗(yàn)（neutralizingtest）卵黃囊（yolksac）干擾現(xiàn)象（interference）三、病毒感染的血清學(xué)診斷臨床診斷少用病毒成分（抗原或核酸）優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜痘苗病毒、人類皰疹病毒優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件3.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）

原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）3.細(xì)胞培養(yǎng)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞

病毒增殖的指征

1.細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。病毒增殖的指征感染的檢查方法與防治原則實(shí)用版課件麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱融合即抗原的cDNA或mRNA與載體（如質(zhì)（血凝抑制試驗(yàn)）①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚人工被動(dòng)免疫(artificialpassiveimmunization)病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）三、病毒感染的血清學(xué)診斷細(xì)胞代謝變慢載體疫苗是活疫苗，具有和減毒活疫苗相似的特點(diǎn)。體內(nèi)常帶有潛伏病毒輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過程。（plaqueformationtest）早期抗體檢測（IgM）絨毛尿囊膜（allantocherion）細(xì)胞代謝變慢補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixationtest）病毒＋中和抗體病毒失去感染性嗜神經(jīng)病毒包涵體EBV早期抗原抗體形成包涵體(inclusionbody)即抗原的cDNA或mRNA與載體（如質(zhì)形成包涵體(inclu腮腺炎病毒感染細(xì)胞2.紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體腮腺炎病毒感染細(xì)胞2.紅細(xì)胞吸附（hemadsorption3.干擾現(xiàn)象（interference）4.細(xì)胞代謝改變

細(xì)胞代謝變慢pH變化減慢3.干擾現(xiàn)象（interference）

（二）病毒的鑒定

病毒形態(tài)學(xué)鑒定病毒血清學(xué)鑒定

病毒分子生物學(xué)鑒定（二）病毒的鑒定（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.空斑形成試驗(yàn)（plaqueformationtest）3.50％組織細(xì)胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死空斑試驗(yàn)空斑試驗(yàn)三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：1.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和抗體病毒失去感染性

特點(diǎn)特異性高，抗體維持時(shí)間長應(yīng)用人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和

2.血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集（血凝抑制試驗(yàn)）

2.血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutination3.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixationtest）用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體特點(diǎn)特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快應(yīng)用近期感染指標(biāo)。3.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixatio四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查包涵體（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)基因測序（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）*基因工程亞單位疫苗的安全性好，但免疫原性較差，需使用佐劑以提高其免疫原性。體內(nèi)常帶有潛伏病毒EBV早期抗原抗體應(yīng)用尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)子結(jié)合遞呈后，在輔助因子的協(xié)助下誘呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞TCID50,PFU單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer