性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件

性病的實(shí)驗(yàn)室診斷性病的實(shí)驗(yàn)室診斷1.有實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，實(shí)驗(yàn)人員分工明確2.實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該定期參加培訓(xùn)、進(jìn)修或?qū)I(yè)研討會3.有實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)管理制度4.制定常規(guī)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）性病實(shí)驗(yàn)室的組織管理1.有實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，實(shí)驗(yàn)人員分工明確性病實(shí)驗(yàn)室的組織管理性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理1．儀器、設(shè)備實(shí)驗(yàn)室所有使用儀器應(yīng)有使用、保養(yǎng)及維修記錄有溫控的儀器需每天記錄溫度2．培養(yǎng)基及試劑⑴嚴(yán)格按配方及技術(shù)要求配制培養(yǎng)基及試劑⑵對配制的培養(yǎng)基及試劑應(yīng)有質(zhì)檢⑶購買的試劑盒應(yīng)為經(jīng)國家有關(guān)部門檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品（附有關(guān)證明）⑷所有培養(yǎng)基及試劑的保存都應(yīng)符合要求性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理1．儀器、設(shè)備性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理3．質(zhì)控（1）實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)控，包括使用陽性對照和陰性對照質(zhì)控品（2）定期進(jìn)行室間質(zhì)控和參加外部質(zhì)控4性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理3．質(zhì)控4性病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)性病是一組傳染病，主要通過性的接觸傳染。包括細(xì)菌、真菌、病毒、衣原體、支原體、螺旋體、原蟲和寄生蟲等

性病實(shí)驗(yàn)室診斷有著及其重要的作用正確診斷提供科學(xué)依據(jù)5性病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)性病是一組傳染病，主要通過性的接觸傳染病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲疥蟲陰虱肝炎病毒－－－病種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：－－－性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)病原體病種性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)

主要常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測介紹梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染主要常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測介紹梅毒常用梅毒檢測方法病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測常用梅毒檢測方法病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動方式進(jìn)行檢測。方法：病原學(xué)檢查的主要方法有暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法病原學(xué)檢查暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本采集部位：一期或二期梅毒的皮膚或粘膜損害有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即檢查，未破潰者用手術(shù)刀刮破皮疹，取滲出液。淋巴結(jié)穿刺液以無菌操作法用注射器吸取0.3-0.5ml生理鹽水，穿刺入淋巴結(jié)，再回吸數(shù)次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查。暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本采集部位：暗視野顯微鏡檢查制片標(biāo)本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在暗室中于暗視野顯微鏡上油鏡觀察觀察先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光，螺旋整齊，運(yùn)動規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運(yùn)動）暗視野顯微鏡檢查制片梅毒螺旋體特征螺旋整齊，數(shù)目固定折光性強(qiáng)，較其他螺旋體亮運(yùn)動緩慢而有規(guī)律，有三種運(yùn)動方式圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動伸縮其螺旋間距離移動彎曲扭動如蛇行梅毒螺旋體特征螺旋整齊，數(shù)目固定病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋陰性結(jié)果不能排除梅毒，可能是：螺旋體數(shù)量不足已用過抗生素或某些外用藥損害接近自然消退暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋15非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒血清學(xué)檢測方法15非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒血清學(xué)梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求梅毒血清學(xué)試驗(yàn)操作和結(jié)果分析⑴標(biāo)本的采集和分離①編號或姓名登記②采血、分離血清和貯存16梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求梅毒血清學(xué)試驗(yàn)操作和結(jié)果分析16梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑵試劑準(zhǔn)備①溫度、器具的校正②試劑、血清和反應(yīng)板恢復(fù)到試驗(yàn)溫度③試劑鑒定17梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑵試劑準(zhǔn)備17梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑶試驗(yàn)操作①血清量的控制②試劑量的控制③旋轉(zhuǎn)儀速度和時間的控制18梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑶試驗(yàn)操作18非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體2、方法：

快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)

甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）

性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：梅毒螺旋體感染人體后，宿RPR

定性試驗(yàn)?在紙卡圓圈中加入50μL待檢血清，涂滿整個圓圈?使用滴管和專用針頭（60滴/mL），加1滴抗原懸液?旋轉(zhuǎn)100rpm8min?立即判斷結(jié)果RPR

定性試驗(yàn)RPR

定量試驗(yàn)待檢血清用等滲鹽水在紙卡圓圈中作6個稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32按定性試驗(yàn)步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度報告結(jié)果RPR

定量試驗(yàn)

RPR定量試驗(yàn)

中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性

RPR定量試驗(yàn)

中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：*敏感性特異性好

*不需要昂貴設(shè)備，簡單易行*適用于大量人群的血清篩查*有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)。*20分鐘可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。*試劑與方法均已標(biāo)化，各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可比較。*試驗(yàn)可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進(jìn)行。缺點(diǎn)：*敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗(yàn)，BFP反應(yīng)和前帶現(xiàn)象非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：

非特異性血清試驗(yàn)的假陰性：1）有25%~40%的未治梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)為陰性，約30%的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性。2）前帶現(xiàn)象（theprozonphenomenon）,即為抗原抗體量比例不適，抑制陽性反應(yīng)。一般易發(fā)生在滴度在1：500以上的標(biāo)本中。1%的II期梅毒會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。3）操作人員應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)的溫度，試劑盒從冰箱取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫，室溫過低（〈10℃）可能出現(xiàn)假陰性或結(jié)果不準(zhǔn)確。性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件

非特異性血清試驗(yàn)生物學(xué)假陽性0.25%~0.86%陽性標(biāo)本為生物學(xué)假陽性，主要出現(xiàn)在自身免疫疾?。ㄋ蠦FP反應(yīng)的14%）的患者、其它病原體感染（病毒性肺炎、惡性腫瘤和麻風(fēng)）、妊娠婦女。

應(yīng)排除技術(shù)性、生理性和生物學(xué)假陽性，并用特異性試驗(yàn)來證實(shí)。性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測梅毒患者血中

特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體2、方法：

梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒IgM抗體檢測（IgM）

梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原，或重組抗原包被固相，檢測特異性梅毒螺旋體抗體?其敏感性和特異性有待進(jìn)一步評價梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒快速試驗(yàn)-免疫滲濾法在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如47kD、15kD抗原，利用免疫滲濾技術(shù)，將試紙條插入待測血清，觀察血清與特定抗原成份的反應(yīng)?可在10分鐘之內(nèi)得到結(jié)果，快速、方便?是特異性螺旋體實(shí)驗(yàn)?需要進(jìn)一步驗(yàn)證方可用于臨床診斷快速試驗(yàn)-免疫滲濾法在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如4梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)◆梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)：用整菌和其片斷做抗原致敏的明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。敏感性和特異性接近最佳，分別為95%和99.9%。容許做梅毒的精確診斷。30梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)◆梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)：用整菌和其片[注意事項(xiàng)]

①新溶解的“C”“D”應(yīng)置30分鐘以上才能使用，已溶解的“C”“D”液用前需恢復(fù)至室溫并充分搖勻。專用滴管應(yīng)標(biāo)明不能混用，不能用來稀釋血清。②未致敏孔不發(fā)生凝集，否則試驗(yàn)無效。如果標(biāo)本與非致敏和致敏顆粒均產(chǎn)生凝集，需作重吸收試驗(yàn)。③反應(yīng)板要清潔干凈，孔內(nèi)無異物。④試劑保存于2~10℃，不可凍結(jié)，不同批號試劑間不可混用。性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如TRUST等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)仍可陽性，故TPPA等試驗(yàn)陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(討論RPR檢測抗心磷脂IgM/IgG抗體TPPA檢測抗梅毒螺旋體IgM/IgG抗體TP-IgM-ELISA試驗(yàn)檢測抗梅毒螺旋體IgM抗體IgM抗體最早產(chǎn)生并隨疾病的治療而逐漸下降或消失IgM試驗(yàn)可用早期診斷33討論RPR檢測抗心磷脂IgM/IgG抗體33梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯

TRUSTTPPA意義

RPRTP-ELISAVDRLTP-RT__排除梅毒一期梅毒的早期

++現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)+-生物學(xué)假陽性

-+早期梅毒經(jīng)治療后梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯TRUST以臨床診斷為目的的檢測策略一非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果梅毒螺旋體試驗(yàn)（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果非梅毒螺旋體定量試驗(yàn)報告檢測方法及定量結(jié)果以臨床診斷為目的的檢測策略一非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法以臨床診斷為目的的檢測策略二梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果非梅毒螺旋體抗體（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果非梅毒螺旋體定量試驗(yàn)？報告檢測方法及定量結(jié)果以臨床診斷為目的的檢測策略二梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法）陰二、淋病性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷淋病在我國的發(fā)病人數(shù)是最多的性病由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿生殖道的化膿性感染淋菌性尿道炎、淋菌性宮頸炎等實(shí)驗(yàn)室診斷本病主要為常規(guī)方法和分子生物學(xué)方法淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷淋病在我國的發(fā)病人數(shù)是最多的性病常用淋病檢測方法直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌常用淋病檢測方法直接顯微鏡檢查直接顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細(xì)胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。直接顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本

敏感性及特異性可高達(dá)95%～99%，具診斷價值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時敏感性僅40～70%。不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。亦不能用于療后判愈。如果在多形核細(xì)胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進(jìn)行確證。直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本直接顯微鏡檢查的臨床意義女性病人敏感性低，其影響因素較多。宮頸分泌物中雜菌較多，有的在形態(tài)上類似于淋球菌簡便、有效、價格低廉直接顯微鏡檢查的臨床意義淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌為需氧生長菌用普通培養(yǎng)基不易培養(yǎng)成功營養(yǎng)要求高,需在含有動物蛋白的培養(yǎng)基中能生長好生長時的營養(yǎng)要求不一營養(yǎng)需要不同的原因在于不同的菌株其生物合成酶有缺陷43淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌為需氧生長菌43淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌喜潮怕干，干燥的條件下1～２小時就死亡不完全干燥的條件下，附著衣服或被褥中生存18～24h室溫則1～2天內(nèi)死亡

-30℃可保寸2～3個月-70℃為6個月ph：7.0～7.544淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌喜潮怕干，干燥的條件下1～２小時就淋球菌培養(yǎng)1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點(diǎn)：敏感性81~100%。特異性100%

淋球菌培養(yǎng)1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌淋球菌培養(yǎng)培養(yǎng)條件：35℃～36℃，含5%～10%CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應(yīng)使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時間：24~48小時淋球菌培養(yǎng)培養(yǎng)條件：35℃～36℃，含5%～10%淋球菌的初步鑒定初步鑒定淋球菌的依據(jù)菌落特征氧化酶試驗(yàn)革蘭染色淋球菌的初步鑒定初步鑒定淋球菌的依據(jù)3

細(xì)菌培養(yǎng)

選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)——典型菌落——氧化酶試驗(yàn)陽性——鏡檢革蘭氏陰性雙球菌。3細(xì)菌培養(yǎng)性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件淋球菌培養(yǎng)的臨床意義培養(yǎng)法為診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn).用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗(yàn)。淋球菌培養(yǎng)的臨床意義培養(yǎng)法為診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn).

生殖道沙眼衣原體感染性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件常用生殖道衣原體感染檢測方法抗原檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫層析快速檢測核酸檢測常用生殖道衣原體感染檢測方法抗原檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)1、原理：與衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復(fù)合物，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測衣原體抗原。2、方法特點(diǎn)敏感性：79－97％特異性:97－99％試驗(yàn)結(jié)果陰性時，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標(biāo)本采集不當(dāng)?shù)木壒拭嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)1、原理：與衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗結(jié)果判讀客觀性強(qiáng)，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測。在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應(yīng)用時，結(jié)果解釋應(yīng)慎重。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)臨床意義酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)臨床意義抗原快速檢測1、原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標(biāo)記的沙眼衣原體抗體濾紙條或卡，快速檢測標(biāo)本中的沙眼衣原體抗原。2、方法特點(diǎn)簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位標(biāo)本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果抗原快速檢測1、原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標(biāo)記的抗原快速檢測臨床意義該方法主要適用于女性患者宮頸標(biāo)本的檢測，敏感性較低。該法快速、簡便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實(shí)驗(yàn)室開展?？乖焖贆z測臨床意義該方法主要適用于女性患者宮頸標(biāo)本的檢測，核酸擴(kuò)增檢測1、原理：核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過擴(kuò)增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA）檢測病原體。2、方法包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、等溫鏈置換擴(kuò)增技術(shù)（SDA）、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)（TMA）等。目前國內(nèi)廣泛使用的有實(shí)時熒光PCR。核酸擴(kuò)增檢測1、原理：核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過擴(kuò)增沙眼衣原體的多拷核酸擴(kuò)增檢測臨床意義核酸擴(kuò)增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴(kuò)大的生殖道沙眼衣原體感染實(shí)驗(yàn)室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。核酸擴(kuò)增檢測不僅可用于宮頸、尿道標(biāo)本中沙眼衣原體的檢測，也可用于男女性尿液標(biāo)本的檢測。開展核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過有關(guān)部門考核取得開展臨床核酸檢測技術(shù)資格證。核酸擴(kuò)增檢測臨床意義核酸擴(kuò)增檢測具有很高的敏感性和特異性，世方法評價核酸檢測

是目前為止最好的檢測方法－但存在檢測敏感性上的局限性ELISA抗原檢測

嚴(yán)格按操作說明進(jìn)行操作－是非常好的檢測方法高通量，自動化快速抗原檢測

操作時間短，單人份操作，但敏感性極低方法評價敬請批評指教！敬請性病的實(shí)驗(yàn)室診斷性病的實(shí)驗(yàn)室診斷1.有實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，實(shí)驗(yàn)人員分工明確2.實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該定期參加培訓(xùn)、進(jìn)修或?qū)I(yè)研討會3.有實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)管理制度4.制定常規(guī)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）性病實(shí)驗(yàn)室的組織管理1.有實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，實(shí)驗(yàn)人員分工明確性病實(shí)驗(yàn)室的組織管理性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理1．儀器、設(shè)備實(shí)驗(yàn)室所有使用儀器應(yīng)有使用、保養(yǎng)及維修記錄有溫控的儀器需每天記錄溫度2．培養(yǎng)基及試劑⑴嚴(yán)格按配方及技術(shù)要求配制培養(yǎng)基及試劑⑵對配制的培養(yǎng)基及試劑應(yīng)有質(zhì)檢⑶購買的試劑盒應(yīng)為經(jīng)國家有關(guān)部門檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品（附有關(guān)證明）⑷所有培養(yǎng)基及試劑的保存都應(yīng)符合要求性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理1．儀器、設(shè)備性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理3．質(zhì)控（1）實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)控，包括使用陽性對照和陰性對照質(zhì)控品（2）定期進(jìn)行室間質(zhì)控和參加外部質(zhì)控64性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理3．質(zhì)控4性病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)性病是一組傳染病，主要通過性的接觸傳染。包括細(xì)菌、真菌、病毒、衣原體、支原體、螺旋體、原蟲和寄生蟲等

性病實(shí)驗(yàn)室診斷有著及其重要的作用正確診斷提供科學(xué)依據(jù)65性病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)性病是一組傳染病，主要通過性的接觸傳染病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲疥蟲陰虱肝炎病毒－－－病種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：－－－性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)病原體病種性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)

主要常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測介紹梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染主要常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測介紹梅毒常用梅毒檢測方法病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測常用梅毒檢測方法病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動方式進(jìn)行檢測。方法：病原學(xué)檢查的主要方法有暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法病原學(xué)檢查暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本采集部位：一期或二期梅毒的皮膚或粘膜損害有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即檢查，未破潰者用手術(shù)刀刮破皮疹，取滲出液。淋巴結(jié)穿刺液以無菌操作法用注射器吸取0.3-0.5ml生理鹽水，穿刺入淋巴結(jié)，再回吸數(shù)次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查。暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本采集部位：暗視野顯微鏡檢查制片標(biāo)本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在暗室中于暗視野顯微鏡上油鏡觀察觀察先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光，螺旋整齊，運(yùn)動規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運(yùn)動）暗視野顯微鏡檢查制片梅毒螺旋體特征螺旋整齊，數(shù)目固定折光性強(qiáng)，較其他螺旋體亮運(yùn)動緩慢而有規(guī)律，有三種運(yùn)動方式圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動伸縮其螺旋間距離移動彎曲扭動如蛇行梅毒螺旋體特征螺旋整齊，數(shù)目固定病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋陰性結(jié)果不能排除梅毒，可能是：螺旋體數(shù)量不足已用過抗生素或某些外用藥損害接近自然消退暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋75非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒血清學(xué)檢測方法15非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒血清學(xué)梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求梅毒血清學(xué)試驗(yàn)操作和結(jié)果分析⑴標(biāo)本的采集和分離①編號或姓名登記②采血、分離血清和貯存76梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求梅毒血清學(xué)試驗(yàn)操作和結(jié)果分析16梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑵試劑準(zhǔn)備①溫度、器具的校正②試劑、血清和反應(yīng)板恢復(fù)到試驗(yàn)溫度③試劑鑒定77梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑵試劑準(zhǔn)備17梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑶試驗(yàn)操作①血清量的控制②試劑量的控制③旋轉(zhuǎn)儀速度和時間的控制78梅毒實(shí)驗(yàn)室操作要求⑶試驗(yàn)操作18非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體2、方法：

快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)

甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）

性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：梅毒螺旋體感染人體后，宿RPR

定性試驗(yàn)?在紙卡圓圈中加入50μL待檢血清，涂滿整個圓圈?使用滴管和專用針頭（60滴/mL），加1滴抗原懸液?旋轉(zhuǎn)100rpm8min?立即判斷結(jié)果RPR

定性試驗(yàn)RPR

定量試驗(yàn)待檢血清用等滲鹽水在紙卡圓圈中作6個稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32按定性試驗(yàn)步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度報告結(jié)果RPR

定量試驗(yàn)

RPR定量試驗(yàn)

中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性

RPR定量試驗(yàn)

中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：*敏感性特異性好

*不需要昂貴設(shè)備，簡單易行*適用于大量人群的血清篩查*有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)。*20分鐘可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。*試劑與方法均已標(biāo)化，各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可比較。*試驗(yàn)可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進(jìn)行。缺點(diǎn)：*敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗(yàn)，BFP反應(yīng)和前帶現(xiàn)象非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：

非特異性血清試驗(yàn)的假陰性：1）有25%~40%的未治梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)為陰性，約30%的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性。2）前帶現(xiàn)象（theprozonphenomenon）,即為抗原抗體量比例不適，抑制陽性反應(yīng)。一般易發(fā)生在滴度在1：500以上的標(biāo)本中。1%的II期梅毒會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。3）操作人員應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)的溫度，試劑盒從冰箱取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫，室溫過低（〈10℃）可能出現(xiàn)假陰性或結(jié)果不準(zhǔn)確。性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件

非特異性血清試驗(yàn)生物學(xué)假陽性0.25%~0.86%陽性標(biāo)本為生物學(xué)假陽性，主要出現(xiàn)在自身免疫疾病（所有BFP反應(yīng)的14%）的患者、其它病原體感染（病毒性肺炎、惡性腫瘤和麻風(fēng)）、妊娠婦女。

應(yīng)排除技術(shù)性、生理性和生物學(xué)假陽性，并用特異性試驗(yàn)來證實(shí)。性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測梅毒患者血中

特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體2、方法：

梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒IgM抗體檢測（IgM）

梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原，或重組抗原包被固相，檢測特異性梅毒螺旋體抗體?其敏感性和特異性有待進(jìn)一步評價梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒快速試驗(yàn)-免疫滲濾法在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如47kD、15kD抗原，利用免疫滲濾技術(shù)，將試紙條插入待測血清，觀察血清與特定抗原成份的反應(yīng)?可在10分鐘之內(nèi)得到結(jié)果，快速、方便?是特異性螺旋體實(shí)驗(yàn)?需要進(jìn)一步驗(yàn)證方可用于臨床診斷快速試驗(yàn)-免疫滲濾法在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如4梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)◆梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)：用整菌和其片斷做抗原致敏的明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。敏感性和特異性接近最佳，分別為95%和99.9%。容許做梅毒的精確診斷。90梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)◆梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)：用整菌和其片[注意事項(xiàng)]

①新溶解的“C”“D”應(yīng)置30分鐘以上才能使用，已溶解的“C”“D”液用前需恢復(fù)至室溫并充分搖勻。專用滴管應(yīng)標(biāo)明不能混用，不能用來稀釋血清。②未致敏孔不發(fā)生凝集，否則試驗(yàn)無效。如果標(biāo)本與非致敏和致敏顆粒均產(chǎn)生凝集，需作重吸收試驗(yàn)。③反應(yīng)板要清潔干凈，孔內(nèi)無異物。④試劑保存于2~10℃，不可凍結(jié)，不同批號試劑間不可混用。性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如TRUST等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)仍可陽性，故TPPA等試驗(yàn)陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(討論RPR檢測抗心磷脂IgM/IgG抗體TPPA檢測抗梅毒螺旋體IgM/IgG抗體TP-IgM-ELISA試驗(yàn)檢測抗梅毒螺旋體IgM抗體IgM抗體最早產(chǎn)生并隨疾病的治療而逐漸下降或消失IgM試驗(yàn)可用早期診斷93討論RPR檢測抗心磷脂IgM/IgG抗體33梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯

TRUSTTPPA意義

RPRTP-ELISAVDRLTP-RT__排除梅毒一期梅毒的早期

++現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)+-生物學(xué)假陽性

-+早期梅毒經(jīng)治療后梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯TRUST以臨床診斷為目的的檢測策略一非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果梅毒螺旋體試驗(yàn)（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果非梅毒螺旋體定量試驗(yàn)報告檢測方法及定量結(jié)果以臨床診斷為目的的檢測策略一非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法以臨床診斷為目的的檢測策略二梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果非梅毒螺旋體抗體（具體方法）陰性報告檢測方法及陰性結(jié)果陽性報告檢測方法及陽性結(jié)果非梅毒螺旋體定量試驗(yàn)？報告檢測方法及定量結(jié)果以臨床診斷為目的的檢測策略二梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)（具體方法）陰二、淋病性病實(shí)驗(yàn)室檢方法2課件淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷淋病在我國的發(fā)病人數(shù)是最多的性病由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿生殖道的化膿性感染淋菌性尿道炎、淋菌性宮頸炎等實(shí)驗(yàn)室診斷本病主要為常規(guī)方法和分子生物學(xué)方法淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷淋病在我國的發(fā)病人數(shù)是最多的性病常用淋病檢測方法直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌常用淋病檢測方法直接顯微鏡檢查直接顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細(xì)胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。直接顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本

敏感性及特異性可高達(dá)95%～99%，具診斷價值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時敏感性僅40～70%。不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。亦不能用于療后判愈。如果在多形核細(xì)胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進(jìn)行確證。直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本直接顯微鏡檢查的臨床意義女性病人敏感性低，其影響因素較多。宮頸分泌物中雜菌較多，有的在形態(tài)上類似于淋球菌簡便、有效、價格低廉直接顯微鏡檢查的臨床意義淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌為需氧生長菌用普通培養(yǎng)基不易培養(yǎng)成功營養(yǎng)要求高,需在含有動物蛋白的培養(yǎng)基中能生長好生長時的營養(yǎng)要求不一營養(yǎng)需要不同的原因在于不同的菌株其生物合成酶有缺陷103淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌為需氧生長菌43淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌喜潮怕干，干燥的條件下1～２小時就死亡不完全干燥的條件下，附著衣服或被褥中生存18～24h室溫則1～2天內(nèi)死亡

-30℃可保寸2～3個月-70℃為6個月ph：7.0～7.5104淋球菌的生物學(xué)特性淋球菌喜潮怕干，干燥的條件下1～２小時就淋球菌培養(yǎng)1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一