農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定

關(guān)于農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定第一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日農(nóng)藥（pesticides）是指一大類主要用于防治農(nóng)作物病蟲害和殺滅林業(yè)、畜牧業(yè)、公共場(chǎng)所、建筑物和家庭蟲害的化學(xué)物。第二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日[Introduction

-

Definition]

Apesticide

isanysubstanceormixtureofsubstancesintendedforpreventing,destroying,repelling,ormitigatinganypest.

A

pestisanyharmful,destructive,ortroublesomeanimal,plantormicroorganism.

（theU.SEPA）

第三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日分類（用途）

殺蟲劑殺螨劑殺鼠劑殺菌劑

除草劑脫葉劑植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等第四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日有機(jī)磷類有機(jī)氯類氨基甲酸酯類

按成分和分子結(jié)構(gòu)

脒類有機(jī)氟類無(wú)機(jī)類擬除蟲菊酯類第五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥第二節(jié)有機(jī)氯農(nóng)藥第三節(jié)擬除蟲菊酯類殺蟲劑第四節(jié)殺蟲脒第六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日有機(jī)磷農(nóng)藥大多為磷酸酯類(organophosphates)或硫代磷酸酯類(thio-organophosphates)化合物包括磷酸酯類、硫代磷酸酯類、磷酰胺類、硫代磷酰胺類、焦磷酸酯類和硫代焦磷酸酯類等化合物。第一節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥R2R1O(orS)PX有機(jī)磷農(nóng)藥的通式結(jié)構(gòu)與其生物活性有一定關(guān)聯(lián)：如堿性基團(tuán)中乙氧基比甲氧基毒性大；酸性基團(tuán)中強(qiáng)酸根比弱酸根毒性大，磷酸酯可直接與膽堿酯酶共價(jià)結(jié)合，毒作用迅速，而硫代磷酸酯，須經(jīng)代謝、氧化脫硫，才能與膽堿酯酶結(jié)合發(fā)揮毒作用，毒作用相對(duì)較弱，但往拄持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。堿性基團(tuán)：烷氧基、苯基、烷胺基等酸性基團(tuán)：-F、-CN、-OCN、-SCN、烷基、烷氧基、硫代烷基、芳香基、芳氧基等第七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日商品化的有機(jī)磷農(nóng)藥有近百種，一半以上是有機(jī)磷農(nóng)藥與其他農(nóng)藥的混合制劑。有機(jī)磷農(nóng)藥絕大部分為殺蟲劑，少數(shù)為殺菌劑、除草劑等。第八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日我國(guó)目前生產(chǎn)的有機(jī)磷農(nóng)藥主要品種有對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、馬拉硫磷、樂(lè)果、氧樂(lè)果、敵百蟲、敵敵畏、內(nèi)吸磷、甲胺磷、乙酰甲胺磷、殺螟硫磷、辛硫磷、三唑磷和久效磷、稻豐散、異稻瘟凈、磷胺、草甘磷等。第九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日一、理化特性有機(jī)磷農(nóng)藥多數(shù)為淡黃色或棕黃色油狀液體，少數(shù)為白色結(jié)晶，有大蒜樣臭味。大部分有機(jī)磷農(nóng)藥沸點(diǎn)較高，但是在常溫下即可揮發(fā)、產(chǎn)生蒸氣，逸散入空氣。一般難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑和植物油。多數(shù)在水中易發(fā)生水解，尤其在堿性條件下；對(duì)光、氧、熱較穩(wěn)定。

第十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日表7-1常用有機(jī)磷農(nóng)藥的理化性質(zhì)、毒性分類及ADI名稱分子式分子量感官特征沸點(diǎn)或熔點(diǎn)（℃）WHO毒性分類ADI（mg/kg體重）備注內(nèi)吸磷、1059（Demeton）C8H19O3PS2258.34淺黃色油狀液體沸點(diǎn)：134Ⅰa0.0003

甲基內(nèi)吸磷、甲基1059（Demeton-S-methyl）C6H15O3PS2320.29黃色油狀液體沸點(diǎn)：131Ⅰb0.0003

敵敵畏（Dichlorvos）C4H7Cl2O4P220.98無(wú)色油狀沸點(diǎn)：74Ⅰb0.0004

敵百蟲（Trichlorfon）C4H7Cl2O4P257.45無(wú)色結(jié)晶粉末熔點(diǎn)：83～84Ⅲ0.01

樂(lè)果（Dimethoate）C5H12NO3PS2299.26純品白色固體熔點(diǎn)：51～52Ⅱ0.002工業(yè)品黃褐色油狀馬拉硫磷（Malathion）C10H19O6PS2330.36黃色油狀沸點(diǎn)：156Ⅲ0.3工業(yè)品：褐色油狀對(duì)硫磷（Parathion）C10H14NO5PS291.27純品無(wú)色無(wú)臭液體沸點(diǎn)：157～162Ⅰa0.004工業(yè)品淡黃色油狀有蒜臭甲基對(duì)硫磷（Para-thionmethyl）C8H10NO5PS263.21純品白色結(jié)晶熔點(diǎn)：36沸點(diǎn)：158Ⅰa0.003工業(yè)品淡黃色油狀稻豐散（Phenthoate）C12H17O4PS2320.37黃至棕褐色液體

Ⅱ0.003工業(yè)品純度95%磷胺（Phosphamidon）C10H19NO5P299.69淺黃油狀沸點(diǎn)：162Ⅰa0.0005

注：WHO分類：Ⅰa，極度有害；Ⅰb，高度有害；Ⅱ，中等有害；Ⅲ，輕度有害。ADI，AcceptableDailyIntake，每日可接受攝入量。第十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日class

LD50fortherat(mg/kgBodyWeight)

oral

dermalsolidsliquidssolidsliquidsⅠaExtremelyhazardous≤5≤

20≤

10≤

40ⅠbHighlyhazardous5～5020～20010～10040～400ⅡModeratelyhazardous50～500200～2000100～1000400～4000ⅢSlightlyhazardous＞500＞2000＞1000＞4000Ⅲ+Unlikelytopresenthazardinnormaluse＞2000＞3000——TheWHORecommendedClassificationofPesticidesbyHazard第十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日級(jí)別經(jīng)口LD50（mg/kg）經(jīng)皮LD50（mg/kg）吸入LC50（mg/m3,2h）劇毒＜5＜20＜20高毒5～5020～20020～200中（等）毒50～500200～2000200～2000低毒微毒500～5000＞50002000～5000＞50002000～5000＞5000我國(guó)農(nóng)藥急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)第十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)有機(jī)磷農(nóng)藥可經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚吸收，可分布在肝、腎、肺、脂肪中。有機(jī)磷農(nóng)藥在體內(nèi)主要通過(guò)氧化、還原、水解和結(jié)合等方式進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化，少量可與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合。第十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日有機(jī)磷農(nóng)藥的氧化作用包括脫硫作用、脫烷基作用、脫烷?；饔谩⒚摲枷慊饔?，硫酯基的氧化和單鏈氧化作用。氧化作用的后果往往使農(nóng)藥的毒性增強(qiáng)。

有機(jī)磷農(nóng)藥的水解作用常使農(nóng)藥的毒性降低。第十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日在氧化、水解之后進(jìn)一步在轉(zhuǎn)移酶的作用下可以結(jié)合上羧酸、醇、酚、氨基，亞氨基等基團(tuán)而排泄。主要由尿、少量由糞便、呼出氣排出。第十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日有機(jī)磷農(nóng)藥的生化作用主要是

對(duì)膽堿酯酶的抑制。中毒表現(xiàn):中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)障礙。第十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日體內(nèi)有兩類ChE乙酰膽堿酯酶(AChE)

亦稱真性ChE，具有水解Ach的特殊功能。主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)及紅細(xì)胞表面(由神經(jīng)細(xì)胞及幼稚紅細(xì)胞合成)，對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)起作用的是真性ChE丁酰膽堿酯酶(BuChE)

也稱假性（擬）ChE，存在于血清、唾液腺及肝臟中(在肝臟中合成)，分解丁酰膽堿的作用較強(qiáng)，分解丙酰膽堿及乙酰膽堿的作用較弱有機(jī)磷中毒時(shí)，兩類ChE都可被抑制Ach和ChE的生理第十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日（2）AChE有兩個(gè)活性中心

陰離子部位和酶解部位陰離子部位與Ach中帶有正電荷的氮(N)結(jié)合酶解部位與Ach中的乙?；械奶荚?C)結(jié)合，形成膽堿和乙?；憠A酯酶乙?；憠A酯酶在乙酰水解酶的作用下水解，乙?；纬梢宜?，膽堿酯酶恢復(fù)原來(lái)狀態(tài)AchE分解Ach示意圖-第十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日（3）有機(jī)磷對(duì)ChE的抑制作用有機(jī)磷化合物+ChE磷?；憠A酯酶Ach蓄積毒蕈堿樣癥狀煙堿樣癥狀中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀有機(jī)磷酸酯對(duì)ChE活性的抑制示意圖對(duì)硝基酚O-對(duì)硝基苯基---M樣作用興奮M受體，心血管抑制，腺體分泌增加，平滑肌痙攣，瞳孔縮小，膀胱及子宮收縮，肛門括約肌松弛等N樣作用N受體受到興奮，作用與煙堿相似，小劑量興奮，大劑量抑制、麻痹中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂。主要是使大腦先興奮后抑制，突出表現(xiàn)為驚厥、昏迷和對(duì)呼吸中樞的抑制。第二十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日生物檢測(cè)標(biāo)志物血液中有機(jī)磷農(nóng)藥的濃度可作為有機(jī)磷農(nóng)藥的接觸生物標(biāo)志物。由于有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)入生物體內(nèi)后能很快抑制膽堿酯酶活性，并具有一定的特異性。故常用膽堿酯酶活性來(lái)反映機(jī)體與有機(jī)磷農(nóng)藥的接觸程度，或中毒深度。第二十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日三、樣品采集及保存1.血液中有機(jī)磷農(nóng)藥測(cè)定

肘靜脈血+0.1mol/L鹽酸溶液，冰凍貯存2.血液中膽堿酯酶活性測(cè)定

FeCl3比色法，DTNB光度法取末梢血+pH7.4磷酸緩沖液，混勻、加塞。4℃冰箱保存，盡快測(cè)定。第二十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日四、血液中有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定GCHPLCGC-MS第二十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日氣相色譜法1．原理

血液中有機(jī)磷農(nóng)藥在酸性條件下被環(huán)己烷萃取，經(jīng)PT-C18色譜柱凈化，濃縮后，再以2%SE-30為固定相、氮?dú)鉃檩d氣的玻璃填充柱分離，F(xiàn)PD檢測(cè)，保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。

第二十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.色譜條件p115第二十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3.樣品處理和測(cè)定

用丙酮將100μg/ml的有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成0.40、2.0、4.0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，進(jìn)樣2μl。以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將酸處理過(guò)的血樣從冷藏箱中取出，恢復(fù)至室溫，取8.0ml（相當(dāng)于2ml血樣），置于10ml具塞刻度離心管中，加2ml環(huán)己烷振蕩萃取，于2000r/min離心10min，收集上清液，將上清液通過(guò)已用環(huán)己烷處理過(guò)的PT-C18色譜預(yù)處理柱凈化，再重復(fù)萃取、凈化二次，收集凈化液，在氮?dú)饬飨聯(lián)]發(fā)定容至0.10ml。取1～5μl進(jìn)樣。從標(biāo)準(zhǔn)曲線（色譜圖）上查得農(nóng)藥種類和濃度。

第二十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日注意事項(xiàng)1.SE-30為弱極性化合物，可作為有機(jī)磷農(nóng)藥通用的固定相。2.采用SPME(固相微萃取)直接將經(jīng)環(huán)己烷處理過(guò)的微量固相萃取器萃取頭插入血樣，平衡2min～30min(視血樣有機(jī)磷農(nóng)藥濃度而定)，然后將SPME針管插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口?？擅馊シ爆嵉妮腿艋^(guò)程，且可減少采血量。3.色譜柱也可用寬口徑石英毛細(xì)管色譜柱。

第二十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日

固相微萃取關(guān)鍵在于選擇石英纖維上的涂層（吸附劑），要使目標(biāo)化合物能吸附在涂層上，而干擾化合物和溶劑不吸附，一般是：目標(biāo)化合物是非極性時(shí)選擇非極性涂層；目標(biāo)化合物是極性時(shí)選擇極性涂層。

采樣方法是將固相微萃取針管（不銹鋼套管）穿過(guò)樣品瓶密封墊，插入樣品瓶中。然后推出萃取頭，將萃取頭浸入樣品（浸入方式）或置于樣品上部空間（頂空方式），進(jìn)行萃取。萃取時(shí)間大約2-30min，以達(dá)到目標(biāo)化合物吸附平衡為準(zhǔn)。最后縮回萃取頭，將針管拔出。第二十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日五、全血膽堿酯酶活性的測(cè)定

乙酰膽堿酯酶（真性膽堿酯酶）丁酰膽堿酯酶（擬膽堿酯酶）有機(jī)磷農(nóng)藥中毒時(shí)，主要是乙酰膽堿酯酶活性受抑制。

體內(nèi)的膽堿酯酶

第二十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日當(dāng)受一種以上有機(jī)磷農(nóng)藥影響、且又不明是何（幾）種有機(jī)磷農(nóng)藥時(shí)，可考慮采用哪些測(cè)定方法？全血膽堿酯酶活性的測(cè)定GC-MS思考第三十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日測(cè)定方法：有簡(jiǎn)易測(cè)定法、滴定法、酸度法和比色法等，其中較為常用的是三氯化鐵分光光度法。電化學(xué)分析法、熒光法以及放射測(cè)量法第三十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日（一）三氯化鐵分光光度法1.原理

乙酰膽堿膽堿和乙酸剩余的乙酰膽堿+堿性羥胺乙酰羥胺+三氯化鐵

紅棕色羥肟酸鐵絡(luò)合物血液膽堿酯酶水解被水解的乙酰膽堿酸性終止反應(yīng)后剩余的乙酰膽堿顏色深淺與剩余乙酰膽堿的量成正比，于波長(zhǎng)520nm比色定量第三十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日反應(yīng)式如下：第三十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.樣品采集和處理

用血色素管取40μI耳垂血，注入盛有pH7.4磷酸緩沖液的比色管中；若不能立即測(cè)定，則取0.50ml靜脈血，注入預(yù)先含肝素鈉抗凝劑的比色管中，混勻，置于4℃冰箱中可保存l周。第三十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3.測(cè)定（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（2）樣品測(cè)定P116中間第三十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日4.注意事項(xiàng)1．采血時(shí)不應(yīng)擠壓耳垂。因?yàn)楸痉ㄊ峭瑫r(shí)測(cè)定血球真性膽堿酯酶和血清假性膽堿酯酶；測(cè)得的血液膽堿酯酶活性值中，真性膽堿酯酶占85％。2.乙酰膽堿水解的溫度和時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很大，應(yīng)嚴(yán)格控制。T：37℃±0.5℃時(shí)間：準(zhǔn)確反應(yīng)30min第三十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3．加堿性羥胺溶液和1+2鹽酸時(shí)，必須嚴(yán)格控制振搖時(shí)間，使反應(yīng)徹底，否則影響測(cè)定結(jié)果。4．加三氯化鐵溶液形成的棕色羥肟酸鐵絡(luò)合物易褪色，故必須在20min內(nèi)比色完畢。5．計(jì)算膽堿酯酶活性百分?jǐn)?shù)，應(yīng)以本地區(qū)正常人全血膽堿酯酶活性為基準(zhǔn)。各地區(qū)測(cè)定正常值，例數(shù)不應(yīng)少于30人。

第三十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日（二）DTNB分光光度法1.原理

硫代乙酰膽堿

硫代膽堿

黃色化合物（412nm波長(zhǎng)進(jìn)行分光光度法測(cè)定）膽堿酯酶水解乙酸+DTNB5,5－二硫代雙（2－硝基苯甲酸）第三十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日第三十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.樣品采集和保存取10μl末梢血，置于盛有3mlpH7.4的磷酸鹽緩沖液的試管中，混勻、加塞，置冰瓶中運(yùn)輸，或在4℃冰箱中保存，宜盡快分析測(cè)定。第四十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3.樣品測(cè)定

4.注意事項(xiàng)P117第四十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日第二節(jié)有機(jī)氯農(nóng)藥有機(jī)氯農(nóng)藥（Organochlorinepesticides）是指一類氯化烴類的農(nóng)藥，包括有機(jī)氯殺蟲劑、殺螨劑和殺菌劑。第四十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日有機(jī)氯農(nóng)藥主要有三類，即①滴滴涕(DDT)和DDT類似物；②六氯苯類：六六六、林丹等；③環(huán)戊二烯類：艾氏劑、狄氏劑、氯丹等第四十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日絕大多數(shù)性質(zhì)穩(wěn)定，在正常環(huán)境條件下不易降解，易于在生物體內(nèi)蓄積。

危害主要表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和對(duì)肝臟的作用。

我國(guó)從1983年起禁止生產(chǎn)有機(jī)氯農(nóng)藥，1985年起禁止使用。

第四十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日一、理化性質(zhì)多數(shù)為白色或淡黃色至棕黃色結(jié)晶或蠟狀固體，氯丹為淡黃色液體。一般揮發(fā)性不大在正常環(huán)境條件下不易分解，有較高的化學(xué)穩(wěn)定性，但遇堿易分解失效；水中溶解度極低，而可溶于有機(jī)溶劑、植物油和脂肪組織中。

第四十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日名稱分子式分子量感官特征熔點(diǎn)蒸氣壓溶解度備注滴滴涕（DDT）（ClC6H4）2CHCCl3354.5白色晶體無(wú)味、幾乎無(wú)嗅108.5～109℃2.53×10-5Pa（20℃）水1μg/L，分配比a有兩個(gè)異構(gòu)體p.p，-；o，p，-林丹C6H6Cl6290.8無(wú)色晶體112.8℃0.434×10-5kPa（20℃）水10mg/L（20℃），分配比a（對(duì)數(shù)值）3.2～3.7為六六六的γ-異構(gòu)體，含量99%.艾氏劑C12H8Cl6364.9純制劑為無(wú)色晶體104～104.5℃8.6mP（20℃）水27μg/L（27℃），溶于丙酮、二甲苯＞600g/L工業(yè)品為黃棕色至暗棕色，熔點(diǎn)49～60℃，純度90%狄氏劑C12H8OCl6380.9淺黃至亮黃薄片175～176℃0.4mP（20℃）水186μg/L（20℃），溶于芳烴、丙酮等工業(yè)品純度95%異狄氏劑C12H8Cl6O380.9白色至亮黃色晶體226～23036μPa（25℃）水0.23mg/L（25℃），易溶于芳烴、丙酮等為狄氏劑異構(gòu)體，產(chǎn)品純度不低于92%七氯C10H5Cl7373.3白色晶體，有輕度樟腦氣味93℃0.133×10-5kPa（25℃）水0.056mg/L丙酮750g/L二甲苯1020g/L工業(yè)品級(jí)含七氯72～74%，γ-氯丹20～22%，九氯4～8%，熔點(diǎn)46～74℃氯丹C10H6Cl8409.8粘稠的亮黃色至琥珀色液體γ-氯丹104～105℃，α-氯丹106～107℃0.133×10-5kPa（25℃）不溶于水，溶于多種有機(jī)溶劑工業(yè)級(jí)氯丹至少有26種成分，主要成分是α-氯丹、γ-氯丹，其次是七氯和九氯。表7-2主要有機(jī)氯農(nóng)藥的理化性質(zhì)第四十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)有機(jī)氯農(nóng)藥可以通過(guò)呼吸道、消化道和皮膚吸收。有機(jī)氯農(nóng)藥在脂肪組織中濃度最高，且成為有機(jī)氯農(nóng)藥及其代謝物的主要蓄積場(chǎng)所。有機(jī)氯農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物的主要經(jīng)腸道和泌尿系統(tǒng)排出，其次是泌乳。生物監(jiān)測(cè)樣品常用血樣、乳汁、耵聹和脂肪組織。第四十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日三、樣品采集和保存1．血樣

取肘靜脈血樣。皮膚經(jīng)消毒后再用丙酮或己烷擦拭，待干后用干燥的1次性注射器或真空抽血管取血4～8ml，置干燥的具塞試管中，于冰瓶中送實(shí)驗(yàn)室。對(duì)急性過(guò)度暴露，一般應(yīng)立即采樣。如作為一般暴露監(jiān)測(cè)，對(duì)采樣時(shí)間沒(méi)有嚴(yán)格要求。血樣在冷藏條件下可保存3天。第四十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.人乳

人乳采集時(shí)需脫離污染環(huán)境，在無(wú)污染條件下采集。采樣時(shí)先用75%酒精消毒乳房皮膚，再用丙酮或正己烷擦拭，待干后才取樣。用清潔并已消毒過(guò)的吸奶器吸取乳汁，置干燥并消毒過(guò)的試管中。立即封口后送檢。如不能立即檢驗(yàn)則需冷藏，并于24h內(nèi)檢測(cè)完畢，否則需冷凍保存。第四十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3.脂肪組織

脂肪組織樣本一般均經(jīng)由外科手術(shù)取樣，或者取自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，或尸體材料。通常取乳房或腹部的脂肪組織。取下后置于內(nèi)部放有冰塊的消毒小玻璃瓶中，并在30min內(nèi)進(jìn)行分析測(cè)定。如不能及時(shí)測(cè)定，則宜在零度以下保存。保存時(shí)間越久，所需保存的溫度越低，最低保存溫度可達(dá)-70℃。第五十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日4．耵聹

在耳廓皮膚消毒后，用圓頭小鑷子直接經(jīng)外耳道鑷取耵聹，置于經(jīng)消毒的小燒杯中，于冰瓶中送實(shí)驗(yàn)室。其他處理與脂肪組織樣本相同。5.尿樣

尿樣的采集和保存方法參考第一章第二節(jié)有關(guān)內(nèi)容。第五十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日樣品血樣尿樣人乳脂肪組織耵聹采集消毒后用丙酮或己烷擦拭，取肘靜脈血4-8ml，具塞試管冰瓶中運(yùn)輸。采樣后立即測(cè)定尿比重或肌酐，密封。脫離污染環(huán)境，75%酒精消毒后丙酮或己烷擦拭，吸奶器吸取乳汁，具塞試管送檢。手術(shù)取樣或尸體材料，乳房或腹部脂肪，冰瓶保存。消毒后圓頭小鑷子采樣，冰瓶中運(yùn)輸。保存冷藏下保存3天，否則冷凍保存立即測(cè)定，否則4℃保存，-20℃可長(zhǎng)期保存。如不立即測(cè)定，冷藏，24h測(cè)定完畢，否則冷凍保存。30min內(nèi)分析，否則<0℃保存。同脂肪三、樣品采集和保存第五十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日四、人體組織和人乳中有機(jī)氯農(nóng)藥的測(cè)定各種生物材料樣品中有機(jī)氯農(nóng)藥的測(cè)定方法一般都采用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器法（GC-ECD）。第五十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日GC-ECD測(cè)定有機(jī)氯農(nóng)藥1．原理：生物材料中的有機(jī)氯農(nóng)藥經(jīng)取樣、有機(jī)溶劑浸提、凈化、濃縮后，用色譜柱分離、ECD檢測(cè)，以保留時(shí)間定性、峰高或峰面定量。第五十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日樣品處理：提取：浸漬法，搗碎法，索氏提取法，加速溶劑萃取法，液－液萃取法，蒸餾法凈化：柱色譜法，液-液萃取法，皂化法，磺化法，紙色譜法和薄層色譜法，固相萃取法，凝膠滲透色譜法濃縮：直接水浴濃縮法，氣流吹蒸濃縮法，減壓蒸餾濃縮法第五十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.儀器操作條件3.樣品處理和測(cè)定（1）樣品處理（2）樣品測(cè)定（外標(biāo)法定性定量；內(nèi)標(biāo)法：二氯苯并葑酮）第五十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日1.人體組織用組織搗碎機(jī)將人體組織（脂肪組織）樣品絞碎，取絞碎均勻的樣品2.00g置乳缽中，加約8g無(wú)水硫酸鈉（以樣品碾后呈干粉狀為度）與樣品一起碾磨。碾磨后移入100ml具塞錐形瓶中，加10ml石油醚，于震蕩器上震蕩30min。然后抽濾。殘?jiān)儆眉s10ml石油醚分3次洗滌，洗滌液并入濾液。第五十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日將濾液置于50ml分液漏斗中，加入2ml硫酸。振蕩30s、靜置、分層后棄去下層液。將上層液從分液漏斗上口倒入另一50ml分液漏斗中，用少量石油醚洗滌原分液漏斗，并入洗液。加入20ml20g/L硫酸鈉溶液，振蕩30s、靜置、分層棄去下層水溶液，用濾紙吸除漏斗頸內(nèi)外水。然后將有機(jī)相通過(guò)一高約3～4cm、直徑1cm，內(nèi)置無(wú)水硫酸鈉的小柱，最后再用3ml石油醚洗滌小柱，收集洗滌液，并用濃縮器濃縮至約0.5ml，再用石油醚溶解并稀釋至1.0ml，供氣相色譜測(cè)定。第五十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.耵聹取20.0mg樣品置于乳缽中，加約0.1g無(wú)水硫酸鈉（以樣品碾后呈干粉狀為度）與樣品一起碾磨。以下處理步驟除所用試劑相應(yīng)減少外與脂肪組織相同。第五十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3.人乳取10.00g勻質(zhì)奶樣置于50ml離心管中，加入20ml1：1丙酮/己烷溶液，用超聲波振蕩器振蕩1min。以2000r/min離心5min，分出有機(jī)相。在殘?jiān)性儆?0ml1：1丙酮/己烷溶液重復(fù)提取一次。合并提取液于50ml比色管中。在比色管中加入5g無(wú)水硫酸鈉，不時(shí)顛倒攪混，以脫水。30min后用漏斗過(guò)濾，漏斗頸內(nèi)填充玻璃棉，漏斗中鋪無(wú)水硫酸鈉適量。再依此重復(fù)過(guò)濾、脫水一次。第六十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日將濾液在45℃下，緩緩?fù)ㄈ隢2氣，以揮去有機(jī)溶劑。所得殘留物即奶脂。稱重，并計(jì)算奶脂百分含量。用己烷分?jǐn)?shù)次洗出奶脂（控制量約為50mg脂肪/ml己烷），定容至5.0ml。將5.0ml洗出液置具塞試管中，加入5ml濃硫酸，上下顛倒25次左右，去塞，用聚乙烯薄膜封口，離心（2000rpm）3分鐘。取己烷層供色譜分析。第六十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日4.血液與尿液血液與尿液樣品的預(yù)處理方法基本上與人乳樣品預(yù)處理方法相同，只是取樣量和所用各種試劑量需根據(jù)樣品用量按比例作相應(yīng)改動(dòng)。第六十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日（2）樣品測(cè)定取處理后的樣品10μl注入色譜柱。常采用外標(biāo)法對(duì)樣品進(jìn)行定性定量測(cè)定。將色譜純標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0mg分別用己烷溶解并稀釋至10ug/ml有機(jī)氯農(nóng)藥，作為貯備液。臨用時(shí)配制成0.5，2，10，50，200，1000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列，取2μl進(jìn)樣。第六十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日4．注意事項(xiàng)（1）所用玻璃器具需徹底清洗，最后用丙酮或己烷沖洗，以去除污染。（2）萃取處理后的樣品要徹底脫水，否則在揮干時(shí)油水相混不易排除水分，要去除水分則要提高揮干溫度，而使低沸點(diǎn)有機(jī)氯農(nóng)藥嚴(yán)重?fù)p失。（3）樣品加硫酸凈化量要足。操作時(shí)顛倒混合，不宜振蕩混合，否則會(huì)產(chǎn)生膠狀混懸物，不易離心分離。第六十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日第三節(jié)擬除蟲菊酯類殺蟲劑擬除蟲菊酯類(Syntheticpyrethroids)

是仿效天然除蟲菊化學(xué)結(jié)構(gòu)的合成農(nóng)藥，其分子由菊酸和醇兩部分構(gòu)成。

第六十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日擬除蟲菊酯主要用于農(nóng)業(yè)、家庭用殺蟲劑現(xiàn)我國(guó)使用的有20幾種，常用的有氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯和胺菊酯等。第六十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日一、理化特性絕大多數(shù)為粘稠油狀液體，呈黃色或黃褐色，也有少數(shù)為白色結(jié)晶。易溶解于多種有機(jī)溶劑，難溶于水，大多不易揮發(fā)，在酸性溶液中穩(wěn)定，遇堿則分解失效。在化學(xué)結(jié)構(gòu)上包含多個(gè)異構(gòu)體。第六十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日根據(jù)分子結(jié)構(gòu)中是否含有氰基，可分為Ⅰ型（分子中不含α-氰基）和Ⅱ型（在α-碳原子位置含α-氰基）Ⅰ型化合物的基本結(jié)構(gòu)Ⅱ型化合物的基本結(jié)構(gòu)氯菊酯氯氰菊酯第六十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日目前以Ⅱ型使用較多，屬中等毒性；Ⅰ型因不含氰基，毒性低，被用作衛(wèi)生殺蟲劑，常配制成氣霧劑或電熱殺蚊劑。其它分類：構(gòu)型—順式、反式

旋光性—左旋、右旋第六十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日1.接觸機(jī)會(huì)：

生產(chǎn)、分裝、運(yùn)輸、銷售及施藥過(guò)程

二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)第七十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日經(jīng)呼吸道、皮膚及消化道吸收，迅速分布到各器官組織。主要經(jīng)肝臟代謝后，生成水溶性代謝產(chǎn)物由尿排出，少部分以原型排出。反式異構(gòu)體的代謝轉(zhuǎn)化主要靠水解反應(yīng)，順式異構(gòu)體的代謝轉(zhuǎn)化則主要靠氧化反應(yīng)?；衔锏目臻g構(gòu)型會(huì)影響擬除蟲菊酯的降解速率：反式異構(gòu)體被酯酶水解速度快，而順式異構(gòu)體被氧化酶水解的速度慢。另外含有氰基也使水解速度減慢。2.代謝過(guò)程第七十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日生物標(biāo)志物擬除蟲菊酯的原型排泄迅速，停止接觸12h后尿中即難以測(cè)出，但擬除蟲菊酯的代謝產(chǎn)物可檢測(cè)出的時(shí)間則比較長(zhǎng)。生物監(jiān)測(cè)常用尿中代謝物含量推測(cè)擬除蟲菊酯的接觸量。因?yàn)轶w內(nèi)代謝快，故只有大量接觸時(shí)才檢測(cè)血中的擬除蟲菊酯濃度。第七十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日毒性擬除蟲菊酯類農(nóng)藥一般屬中等毒或低毒類，但對(duì)魚類毒性很高，有一定的蓄積性。有些品種還具有三致作用。

Ⅰ型主要中毒癥狀：T癥候群Ⅱ型主要中毒癥狀：C癥候群擬除蟲菊酯具神經(jīng)毒性，使中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增高，毒作用機(jī)制尚未完全闡明。第七十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日三、樣品采集及保存經(jīng)口途徑的暴露或皮膚吸收：收集24h尿樣一次接觸大量擬除蟲菊酯：采集靜脈血分析。第七十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日四、尿中代謝物的GC-MS測(cè)定1.原理：尿樣①加入內(nèi)標(biāo)物2-苯氧苯酸，用②硫酸酸化后，樣本中擬除蟲菊酯代謝物經(jīng)③C18固相萃取柱萃取，用④甲醇、硫酸洗脫，然后用⑤毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。采用空白尿樣配制標(biāo)準(zhǔn)濃度系列，用內(nèi)標(biāo)法工作曲線進(jìn)行測(cè)定。

第七十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.儀器操作參考條件氣相色譜條件：進(jìn)樣口溫度為250℃。采用5%苯甲基聚硅氧烷柱(60m×0.25mm,膜厚0.25m)，保持柱前壓為145kPa（1086mmHg）。采用程序升溫。質(zhì)譜條件：采用選擇性離子檢測(cè)器對(duì)擬除蟲菊酯代謝物的質(zhì)量碎片進(jìn)行檢測(cè)。第七十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3.樣品處理和測(cè)定取適量尿樣（10ml）加入(200l)2-苯氧苯酸（2-PBA）應(yīng)用液(10mg/l)，再加入(2ml)濃)硫酸(95-97%)，在90℃（恒溫箱）加熱1h，以使結(jié)合的羧酸酸解。然后把樣本冷卻至室溫，使酸化的尿樣通過(guò)事先已制備好的C18柱，用6ml去離子水洗滌柱子，然后將柱子真空干燥5～10min。第七十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日用3ml甲醇將樣品洗脫至含有1ml98%濃硫酸的小玻璃瓶中，把洗脫液放在水浴中加熱至75℃，保溫1h，使代謝物完全衍生化。取出并冷卻到室溫后，加入2ml正己烷和3ml飽和氯化鈉溶液，蓋上蓋子，混和10min，離心5min，把1.5ml己烷提取液轉(zhuǎn)移至2ml小瓶中。加入200ul甲苯，以保住易揮發(fā)的酯類，用緩速的N2氣流使提取液體積減少至100ul。進(jìn)樣量為1ul。第七十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日各種擬除蟲菊酯類代謝物的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度范圍為0.5～200μg/L。以各個(gè)擬除蟲菊酯代謝物質(zhì)量碎片峰面積之和與內(nèi)標(biāo)物（2-苯氧苯酸）質(zhì)量碎片峰面積之和的比與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度繪制工作曲線。樣品根據(jù)各質(zhì)量碎片保留時(shí)間定性，以各質(zhì)量碎片峰面積之和定量。第七十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日4.注意事項(xiàng)1.C18固相萃取柱在通過(guò)每個(gè)尿樣后，要用水淋洗，然后必須干燥后再洗脫，以防尿樣水溶性基體對(duì)測(cè)定的干擾。2.也有使用國(guó)產(chǎn)X-5樹脂柱處理生物材料樣品、以毛細(xì)管氣相色譜儀或氣相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定生物材料中（不包括尿液）擬除蟲菊酯的方法。第八十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日第四節(jié)殺蟲脒脒類農(nóng)藥(formamidines)是廣譜殺蟲、殺螨劑。

殺蟲脒(chlordimeform)雙甲脒(amitraz)單甲脒(mono-formamidine)。第八十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日殺蟲脒

N′-(2-甲基-4-氯苯基)-N，N-二甲基甲脒；氯苯脒；殺螨脒；克死螨第八十二頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日一、理化特性殺蟲脒劑型分基型和鹽酸鹽型?；蜑榘咨Y(jié)晶，有氨樣氣味，是中等強(qiáng)度的堿性物質(zhì)，在強(qiáng)酸介質(zhì)中相當(dāng)穩(wěn)定，遇弱酸、弱堿易水解成對(duì)氯鄰甲苯胺。鹽酸鹽型為白色或?yàn)辄S色粉末狀結(jié)晶。第八十三頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)職業(yè)接觸，主要通過(guò)呼吸道和皮膚吸收。在生活中，大多通過(guò)消化道攝入。入體內(nèi)主要分布在肝、腎、脂肪中。在甲酰胺酶的作用下，主要降解為對(duì)氯鄰甲苯胺。殺蟲脒和對(duì)氯鄰甲苯胺主要從尿中排出，少量也可從膽汁及乳汁中排出。第八十四頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日殺蟲脒屬中等毒類，中毒癥狀以紫紺、嗜睡和出血性膀胱炎三大癥候群為其特點(diǎn)。第八十五頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日接觸殺蟲脒的正常人，最初尿中無(wú)殺蟲脒和對(duì)氯鄰甲苯胺，接觸4h后，則能普遍檢出，接觸8h到停止接觸后12h為排泄高峰。故測(cè)定尿中殺蟲脒和對(duì)氯鄰甲苯胺的含量可作為生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

第八十六頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日三、樣品采集及保存采集班后尿樣或者次日晨尿200ml，貯存于聚乙烯塑料瓶中，立即測(cè)定尿比重。尿液按100∶1比例加入鹽酸，于4℃冰箱內(nèi)可保存2周。第八十七頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日四、尿中殺蟲脒和對(duì)氯鄰甲苯胺的測(cè)定重氮-偶合分光光度法氣相色譜法高效液相色譜法第八十八頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日（一）重氮-偶合分光光度法1.原理尿中的殺蟲脒在堿性條件下水解為對(duì)氯鄰甲苯胺，對(duì)氯鄰甲苯胺經(jīng)重氮偶合反應(yīng)，生成紅色偶氮染料，于550nm波長(zhǎng)，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行分光光度測(cè)定。第八十九頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日2.樣品處理和測(cè)定第九十頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日3注意事項(xiàng)(1)個(gè)別樣品在萃取后經(jīng)飽和氯化鈉溶液洗滌仍有較多的泡沫狀物時(shí)，就不宜再進(jìn)行洗滌，可加入適量無(wú)水硫酸鈉脫水，使醚層分出。放出醚層到另一分液漏斗中，再加適量石油醚洗滌無(wú)水硫酸鈉1～2次，合并醚層，再作反萃取。第九十一頁(yè)，共九十九頁(yè)，2022年，8月28日(2)樣品置90±2℃水浴中進(jìn)行水解時(shí)，應(yīng)塞緊試管塞，以免蒸汽沖開(kāi)管塞。試管從水浴中取出后，須冷至室溫方可打開(kāi)管塞，以防待測(cè)物逸失。(3)加亞硝酸鈉溶液時(shí)不要沾污試管口，否則會(huì)因污染而產(chǎn)生混濁