應(yīng)用ADME成藥性評價與非臨床藥動學(xué)研究20131211課件

體內(nèi)藥物分析應(yīng)用1ADME早期成藥性評價與非臨床藥代動力學(xué)研究體內(nèi)藥物分析應(yīng)用1ADME早期成藥性評價Productivitytrendduring2009and2010.Theclinicalrateofsuccessisdepictedaspercentagesurvivingateachclinicalphasebasedonattritionobservedduring2009and2010.IshKhannaDrugdiscoveryinpharmaceuticalindustry:productivitychallengesandtrendsDrugDiscoveryTodayVolume17,Issues19?2020121088-1102/10.1016/j.drudis.2012.05.007Highcosthighfailure新藥發(fā)現(xiàn)、開發(fā)的風(fēng)險2NDA：newdrugapplicationIND:investigationalnewdrugProductivitytrendduring2009Shiftingparadigmindrugfailuresduringthepasttwodecades.Theclinicalphase(I-III)failureofdrugsisdividedbasedonreasonsoffailureintheyears1991(a)and2000(b).<ce:italic>Abbreviation</ce:italic>:DMPK:drug...IshKhannaDrugdiscoveryinpharmaceuticalindustry:productivitychallengesandtrendsDrugDiscoveryTodayVolume17,Issues19?2020121088-1102/10.1016/j.drudis.2012.05.007DMPK在新藥開發(fā)中的重要性新藥在臨床被淘汰的原因比較3Shiftingparadigmindrugfail早期成藥性評價早期藥效成藥性評價早期毒理成藥性評價早期ADME成藥性評價合適的半衰期較好的生物利用度（口服）靶部位濃度較高較小代謝性藥物相互作用（酶、轉(zhuǎn)運體）4早期成藥性評價早期藥效成藥性評價455AbsorptionBarriers未被吸收（nonabsorption)外排(activeefflux)腸道代謝(intestinalmetabolism)肝臟代謝(hepaticmetabolism)膽汁排泄(biliaryexcretion)藥物損失（drugloss)F:進(jìn)入體循環(huán)的藥物量fa:從小腸腸腔吸收的藥物量fg:小腸代謝后剩余的藥物量fh:肝臟代謝后剩余的藥物量6AbsorptionBarriers未被吸收（nonab小腸轉(zhuǎn)運的體外模型TranswellSystem將待考察物加入AP側(cè)，孵育后測定BL側(cè)藥物，計算PappAPBL將待考察物加入BL側(cè)，孵育后測定AP側(cè)藥物，計算PappBLAP計算PappBLAP/PappAPBL

考察給予轉(zhuǎn)運體抑制劑時（Papp/inhibitor)透過性大小的判斷依據(jù)：Papp（cm/s）<1×10-6,吸收不良1-10×10-6,中等吸收>10×10-6,吸收良好

普萘洛爾PappA→B為>5×10-6cm/s熒光黃PappA→B<1×10-6cm/s對照dQ/dt

表示單位時間內(nèi)接收室中藥物出現(xiàn)的量；A為膜面積（1.13cm2）；C0為給藥室藥物初始濃度。小腸轉(zhuǎn)運的體外模型TranswellSystem將待考察selectedhumantransportproteinsfordrugsandendogenoussubstancesMembranetransportersindrugdevelopment.NatureReviews,DrugDiscovery2010,9:215-236.8selectedhumantransportprote創(chuàng)新藥物研究中對藥物轉(zhuǎn)運體研究的要求9創(chuàng)新藥物研究中對藥物轉(zhuǎn)運體研究的要求9USFDA創(chuàng)新藥物研究中要求考察的CYPCYP1A2CYP3A4CYP2B6CYP2C8CYP2C9CYP2C19CYP2D610USFDA創(chuàng)新藥物研究中要求考察的CYPCYP1A210實例111實例111實例212XY-1XY-1在血漿中的穩(wěn)定性（37℃）大鼠iv20.0mg/kgXY-1后全血中藥物的平均濃度-時間曲線實例212XY-1XY-1在血漿中的穩(wěn)定性（37℃）大鼠iv實例313TCDMNTCDMN對腫瘤細(xì)胞毒性的IC50

很小，但口服給藥無活性？？？大鼠灌胃給藥后血漿及組織中均測不到原型藥物TCDMN，但是能測到TCDML實例313TCDMNTCDMN對腫瘤細(xì)胞毒性的IC50很小實例314TCDMN在大鼠肝微粒體（A）、空腸組織提取物（B）及血漿（C）中的水解及其產(chǎn)物（TCDML）生成的時間曲線實例314TCDMN在大鼠肝微粒體（A）、空腸組織提取物（B15TCDMN與大鼠肝微粒體、S9、腸道蛋白及血漿孵育后，TCDMN的減少及TCDML的生成（mmol/mgprotein/min）比較，數(shù)據(jù)以mean±SE,n=3iv是否可行？15TCDMN與大鼠肝微粒體、S9、腸道蛋白及血漿孵育后，T16大鼠靜注17.5mg/kgTCDMN4小時后，各組織中水解產(chǎn)物TCDML的濃度（mean±SD,n=5）大鼠靜注17.5mg/kgTCDMN后血漿中TCDML平均濃度-時間曲線，圖中數(shù)據(jù)以mean±SE表示，n=3.16大鼠靜注17.5mg/kgTCDMN4小時后，各組織ivTCDMN后腫瘤組織中原型藥物濃度很低抑瘤率仍不高171.從制劑著手進(jìn)行改進(jìn)2.與水解酶抑制劑合用ivTCDMN后腫瘤組織中原型藥物濃度很低抑瘤率仍不高放棄ivTCDMN后腫瘤組織中原型藥物濃度很低171.從制劑著18實例4CYP亞型JS-001陽性對照濃度(μM)抑制率%抑制劑濃度(μM)抑制率%

1A2118.2±0.69呋拉茶堿*furafylline0.7711.8±1.3

562.2±2.3

1068.3±0.80

2A61-毛果蕓香堿pilocarpine524.3±0.51

5-

10-

2B6**1

舍曲林sertraline5

5

10

2C8151.7±0.56槲皮素quercetin1080.7±3.0

587.6±1.4

1092.4±1.3

2C9157.1±1.8磺胺苯吡唑sulfaphenazole0.519.2±1.5

586.0±1.3

1088.8±0.46

2C19150.4±1.1努特卡酮nootkatone0.59.26±1.5

588.0±0.77

1092.0±0.25

2D6136.0±1.7奎尼丁quinidine0.473.4±0.82

571.3±1.1

1075.4±0.67

2E1124.3±2.8二乙基二硫代氨基磺酸鹽diethyldithiocarbamate2012.6±2.4

538.4±3.6

1039.7±0.63

3A4/5(testosterone)150.8±1.1酮康唑ketoconazole0.279.1±0.54

582.0±4.7

1080.8±0.76

3A4/5(midazolam)130.0±2.2酮康唑ketoconazole0.270.5±0.47

569.7±1.4

1074.8±0.63

雞尾酒探針底物法結(jié)果18實例4CYP亞型JS-001陽性對照濃度(μM)抑制率%19CYP酶（亞型/底物）HR001陽性抑制劑IC50Ki名稱IC50Ki（文獻(xiàn)）CYP1A2/非那西丁5.300.542呋拉茶堿2.500.6-0.73CYP3A4/5/咪達(dá)唑侖0.5183.02酮康唑0.02750.27CYP3A4/5/睪酮0.7140.263酮康唑0.01100.0037-0.18CYP2C8/紫杉醇1.710.135槲皮素5.851.1CYP2C9/甲苯磺丁脲0.4961.41磺胺苯吡唑0.6450.3CYP2C19/奧美拉唑1.430.703噻氯匹啶9.791.2CYP2D6/右美沙芬0.9590.522奎尼丁0.05130.027-0.4JS-001

對人肝微粒體主要CYP酶亞型抑制的IC50及Ki（μmol/L）[I]/KiPrediction[I]/Ki>1Likely1>[I]/Ki>0.1Possible0.1>[I]/KiRemote預(yù)測依據(jù)（FDA指南）19CYP酶（亞型/底物）HR001陽性抑制劑IC50Ki20CYP（底物）JS-001IC50（μmol/L）陽性對照對照藥濃度（μmol/L）抑制率%CYP1A2（非那西丁）23.4呋拉茶堿2.572.2CYP3A4（咪達(dá)唑侖）0.393酮康唑0.02567.5CYP3A4（睪酮）0.256酮康唑0.01082.0CYP2C8（紫杉醇）2.17槲皮素5.027.5CYP2C9（甲苯磺丁脲）0.420磺胺苯吡唑0.5050.8CYP2C19（奧美拉唑）18.1噻氯匹啶1047.1CYP2D6（右美沙芬）2.37奎尼丁0.05071.1JS-001對重組人CYP酶的抑制作用20CYP（底物）JS-001陽性對照對照藥濃度（μmol/實例521藥物濃度（μmol/L）Papp(×10-6cm/s)AP→BLBL→APEffluxRatioAS-001020.30±0.034.6±0.0715.440.40±0.025.1±0.0112.680.80±0.035.4±0.36.7普萘洛爾1013.611.30.83熒光黃450.16±0.08

AS-0010在培養(yǎng)21天的單層Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運實例521藥物濃度（μmol/L）Papp(×10-6cm22AS-0010在MDCK-mock及MDCK-MDR1中的積聚及Verapamil（100μmol/L）及elacridar（20μmol/L）對積聚的影響AS-0010在LLC-PK1及LLC-PK1-BCRP中的積聚及cyclosporinA（100μmol/L）及elacridar（20μmol/L）對積聚的影響22AS-0010在MDCK-mock及MDCK-MDR1中實例6-SWK-00223雄性大鼠口服SWK-002制劑Ⅰ及制劑Ⅱ后血漿中SWK-002濃度-時間變化曲線雄性大鼠靜脈注射SWK-0025mg/kg后血漿中SWK-002濃度-時間變化曲線GroupF(AUC0-t)oral/doseoral/(AUC0-t)inj/doseinj(×100%)F(AUC0-∞t)oral/doseoral/(AUC0-∞)inj/doseinj(×100%)制劑I0.8691.182制劑II1.3141.554實例6-SWK-00223雄性大鼠口服SWK-002制劑Ⅰ及實例724大鼠口服XHT-0X50mg/kg）后的血漿藥物濃度-時間曲線（mean±SD,n=4）大鼠灌胃50mg/kgXHT-0X后組織中藥物濃度實例724大鼠口服XHT-0X50mg/kg）后的血漿藥物25CYP亞型新黃酮抑制率（%）陽性對照抑制劑濃度(μM)抑制率%

1A214.8±0.96呋拉茶堿*furafylline0.7711.8±1.3

2A6-毛果蕓香堿pilocarpine524.3±0.51

2C833.9±3.5槲皮素quercetin1080.7±3.0

2C934.6±3.4磺胺苯吡唑sulfaphenazole0.519.2±1.5

2C1929.4±2.7努特卡酮nootkatone0.59.26±1.5

2D614.7±1.5奎尼丁quinidine0.473.4±0.82

2E117.6±0.67二乙基二硫代氨基磺酸鹽diethyldithiocarbamate2012.6±2.4

3A4/5(testosterone)26.9±2.1酮康唑ketoconazole0.279.1±0.54

3A4/5(midazolam)12.7±0.29酮康唑ketoconazole0.270.5±0.47

XWT-0X（10μM）及陽性抑制劑對CYP亞型的抑制（mean±SD,n=3）25CYP亞型新黃酮抑制率（%）陽性對照抑制劑濃度(μM)抑實例8-YP-12826YP128在大鼠血漿中37℃(A)的穩(wěn)定性化合物(100μmol/L)在混合的正常人肝微粒體（1.0mgprotein/mL）中孵育60min后的I相代謝消除率(mean)化合物(100μmol/L)在混合的正常人肝微粒體（1.0mgprotein/mL）中孵育4h后的II相代謝消除率(mean)實例8-YP-12826YP128在大鼠血漿中化合物(10027

大鼠灌胃67mg/kgYP128后平均血漿藥物濃度-時間曲線大鼠灌胃67mg/kgYP128后組織中YP128的濃度27大鼠灌胃67mg/kgYP128后平均血漿藥物濃度28非臨床藥代動力學(xué)研究創(chuàng)新藥物非臨床藥代動力學(xué)研究12非創(chuàng)新藥物動物生物利用度與生物等效性評價3特殊注射劑的非臨床藥代動力學(xué)研究28非臨床藥代動力學(xué)研究創(chuàng)新藥物非臨床藥代動力學(xué)研究12非創(chuàng)29化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究

技術(shù)指導(dǎo)原則藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則

(第二稿)二0一三年四月29化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究

技術(shù)指導(dǎo)原則藥物非臨床藥代30研究目的通過動物體內(nèi)、外和人體外的研究方法，揭示新藥在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律獲得新藥的基本藥代動力學(xué)參數(shù),闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄的過程和特點闡明藥效或毒性大小的基礎(chǔ)，和提供藥物對靶器官的效應(yīng)（藥效或毒性）的依據(jù)提供評價藥物制劑特性和質(zhì)量的重要依據(jù)；為設(shè)計和優(yōu)化臨床研究給藥方案提供有關(guān)信息為藥物結(jié)構(gòu)改造和設(shè)計提供結(jié)構(gòu)與動力學(xué)關(guān)系的信息30研究目的通過動物體內(nèi)、外和人體外的研究方法，揭示新藥在體31研究的基本原則非臨床藥代動力學(xué)研究，要遵循以下基本原則：試驗?zāi)康拿鞔_分析方法可靠試驗設(shè)計合理所得參數(shù)全面，滿足評價要求對試驗結(jié)果進(jìn)行綜合分析與評價具體問題具體分析31研究的基本原則非臨床藥代動力學(xué)研究，要遵循以下基本原則：32試驗設(shè)計的總體要求-1試驗藥品

應(yīng)提供受試藥物的名稱、劑型、批號、來源、純度保存條件及配制方法使用的受試藥物及劑型應(yīng)盡量與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究使用的一致研制單位應(yīng)提供質(zhì)檢報告

32試驗設(shè)計的總體要求-1試驗藥品33

試驗動物一般采用成年和健康的動物。常用動物種屬有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等。選擇動物的原則如下:首選動物：盡可能與藥效學(xué)和毒理學(xué)研究一致盡量在清醒狀態(tài)下試驗，動力學(xué)研究最好從同一動物多次采樣創(chuàng)新藥應(yīng)選用兩種或兩種以上的動物，其中一種為嚙齒類動物；另一種為非嚙齒類動物（如犬、小型豬或猴等）。其它類型的藥物，可選用一種動物，建議首選非嚙齒類動物經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類動物試驗設(shè)計的總體要求-2藥動學(xué)實驗前先進(jìn)行體外篩選，選擇與人代謝情況比較接近的動物進(jìn)行體內(nèi)藥動學(xué)實驗33試驗動物試驗設(shè)計的總體要求-2藥動學(xué)實驗前先進(jìn)行體外篩代謝穩(wěn)定性研究34代謝穩(wěn)定性研究34代謝穩(wěn)定性研究35代謝穩(wěn)定性研究3536

3劑量選擇

試驗劑量動物體內(nèi)藥代動力學(xué)研究應(yīng)設(shè)置至少三個劑量組，其高劑量最好接近最大耐受劑量，中、小劑量根據(jù)動物有效劑量的上下限范圍選取。主要考察在所試劑量范圍內(nèi)，藥物的體內(nèi)的動力學(xué)過程是屬于線性還是非線性，以所得結(jié)果有利于解釋藥效學(xué)和毒理學(xué)研究中的發(fā)現(xiàn)，并為新藥的進(jìn)一步開發(fā)和研究提供信息盡可能與臨床用藥一致給藥途徑試驗設(shè)計的總體要求-3363劑量選擇試驗劑量盡可能與臨床用藥一致37研究項目內(nèi)容血藥濃度-時間曲線藥物的吸收藥物的分布藥物的排泄（物質(zhì)平衡）藥物與血漿蛋白的結(jié)合藥物的生物轉(zhuǎn)化對藥物代謝酶活性的影響藥代動力學(xué)與毒代動力學(xué)37研究項目內(nèi)容血藥濃度-時間曲線381血藥濃度-時間曲線

受試動物數(shù)?以血藥濃度-時間曲線的每個時間點有不少于6個數(shù)據(jù)為限計算所需動物數(shù)。最好從同一動物多次取樣。如由多只動物的數(shù)據(jù)共同構(gòu)成一條血藥濃度-時間曲線，應(yīng)相應(yīng)增加動物數(shù)，以反映個體差異對試驗結(jié)果的影響。?建議受試動物采用雌雄各半，如發(fā)現(xiàn)動力學(xué)存在明顯的性別差異，應(yīng)增加動物數(shù)以便認(rèn)識試驗藥物的藥代動力學(xué)的性別差異。?單一性別用藥，可選擇與臨床用藥一致的性別381血藥濃度-時間曲線受試動物數(shù)39

給藥前需采血作為為空白樣品給藥后的一個完整的血藥濃度-時間曲線，采樣時間點的設(shè)計應(yīng)兼顧藥物的吸收相、平衡相（或峰濃度附近）和消除相一般在吸收相至少需要2-3個采樣點，平衡相在峰濃度附近至少需要3個采樣點，消除相需要4-6個采樣點。對于吸收快的藥物，應(yīng)盡量避免第一個點是Cmax整個采樣時間至少應(yīng)持續(xù)到3-5個半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為Cmax的1/10-1/20正式試驗前，選擇2-3只動物進(jìn)行預(yù)試驗以確定合理的采血點

采樣點的確定口服給藥：一般在給藥前應(yīng)禁食12小時以上，以排除食物對藥物吸收的影響。在試驗中應(yīng)注意根據(jù)具體情況統(tǒng)一給藥后禁食時間，以避免由此帶來的數(shù)據(jù)波動及食物的影響39給藥前需采血作為為空白樣品采樣點的確定口服給藥：一般40

藥代動力學(xué)參數(shù)的估算將試驗中測得的各受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)分別進(jìn)行藥代動力學(xué)參數(shù)的估算，求得受試物的主要藥代動力學(xué)參數(shù)。靜脈注射給藥，應(yīng)提供t1/2（消除半衰期）、Vd（表觀分布容積）、AUC（血藥濃度-時間曲線下面積）、CL或CL/f（清除率）等參數(shù)值；血管外給藥，除提供上述參數(shù)外,尚應(yīng)提供Cmax和Tmax等參數(shù)，以反映藥物吸收的規(guī)律。提供一些統(tǒng)計矩參數(shù)，如:MRT、AUC(0-t)和AUC(0-∞)等，對于描述藥物藥代動力學(xué)特征的描述也有意義

一般需要AUC(0-t)≥80%AUC(0-∞)40藥代動力學(xué)參數(shù)的估算將試驗中測得的各受試動物的血藥濃41應(yīng)提供的數(shù)據(jù)單次給藥

各個（和各組）受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)（列表）及曲線和其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。各個（和各組）受試動物的主要藥代動力學(xué)參數(shù)及平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。對受試物單次給藥非臨床藥代動力學(xué)的規(guī)律和特點進(jìn)行討論和評價。多次給藥各個（和各組）受試動物首次給藥后的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)及曲線和主要藥代動力學(xué)參數(shù)各個（和各組）受試動物的3次穩(wěn)態(tài)谷濃度數(shù)據(jù)及平均值、標(biāo)準(zhǔn)差各個（和各組）受試動物血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)和曲線，及其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和曲線比較首次與末次給藥的血藥濃度-時間曲線和有關(guān)參數(shù)各個（和各組）平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度及標(biāo)準(zhǔn)差41應(yīng)提供的數(shù)據(jù)單次給藥42大鼠灌胃不同劑量的菊花提取物后后血漿中Luteolin及Apigenin的濃度-時間曲線中國藥學(xué)雜志，2011,46(3)：214-218.42大鼠灌胃不同劑量的菊花提取物后后血漿中Luteolin及432藥物的吸收對于經(jīng)口給藥的新藥，應(yīng)進(jìn)行整體動物試驗，盡可能同時進(jìn)行血管內(nèi)給藥的試驗，提供絕對生物利用度如有必要，可進(jìn)行體外吸收模型（如Caco-2細(xì)胞模型）、在體或離體腸道吸收試驗以闡述藥物吸收特性對于其它血管外給藥的藥物及某些改變劑型的藥物，應(yīng)根據(jù)立題目的，盡可能提供絕對生物利用度432藥物的吸收對于經(jīng)口給藥的新藥，應(yīng)進(jìn)行整體動物試驗，443藥物的分布選用大鼠或小鼠做組織分布試驗較為方便選擇一個劑量（一般有效劑量）給藥后，至少測定藥物在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的濃度，以了解藥物在體內(nèi)的主要分布組織特別注意藥物濃度高、蓄積時間長的組織和器官，以及在藥效或毒性靶器官的分布（如對造血系統(tǒng)有影響的藥物，應(yīng)考察在骨髓的分布）參考血藥濃度-時間曲線的變化趨勢，選擇至少3個時間點分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布若某組織的藥物濃度較高，應(yīng)增加觀測點，進(jìn)一步研究該組織中藥物消除的情況每個時間點，至少應(yīng)有5個動物的數(shù)據(jù)抗腫瘤藥物的組織分布研究中，藥物在腫瘤組織內(nèi)的分布研究也十分必要443藥物的分布選用大鼠或小鼠做組織分布試驗較為方便抗腫45

做組織分布試驗，必須注意取樣的代表性和一致性同位素標(biāo)記物的組織分布試驗，應(yīng)提供標(biāo)記藥物的放化純度、標(biāo)記率（比活性）、標(biāo)記位置、給藥劑量等參數(shù)；提供放射性測定所采用的詳細(xì)方法，如分析儀器、本底計數(shù)、計數(shù)效率、校正因子、樣品制備過程等；提供采用放射性示蹤生物學(xué)試驗的詳細(xì)過程，以及對生物樣品測定時對放射性衰變所進(jìn)行的校正方程等盡可能提供給藥后不同時相的整體放射自顯影圖像45做組織分布試驗，必須注意取樣的代表性和一致性464藥物的排泄尿和糞的藥物排泄：一般采用小鼠或大鼠，將動物放入代謝籠內(nèi)，選定一個有效劑量給藥后，按一定的時間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，測定藥物濃度糞樣品按一定比例制成勻漿，記錄總體積，取部分樣品進(jìn)行藥物含量測定計算藥物經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量，直至收集到的樣品測定不到藥物為止每個時間點至少有5只動物的試驗數(shù)據(jù)注意：收集過程中需考慮是否采用一定措施以免藥物或代謝物降解464藥物的排泄尿和糞的藥物排泄：一般采用小鼠或大鼠，將47

應(yīng)采集給藥前尿及糞樣，并參考預(yù)試驗的結(jié)果，設(shè)計給藥后收集樣品的時間點，包括藥物從尿或糞中開始排泄、排泄高峰及排泄基本結(jié)束的全過程膽汁排泄：一般用大鼠在乙醚麻醉下作膽管插管引流，待動物清醒后給藥，并以合適的時間間隔分段收集膽汁（總時長一般不超過三天），進(jìn)行藥物測定記錄藥物自糞、尿、膽汁排出的速度及總排出量（占總給藥量的百分比），提供物質(zhì)平衡的數(shù)據(jù)47應(yīng)采集給藥前尿及糞樣，并參考預(yù)試驗的結(jié)果，設(shè)計給藥后收48排泄研究實例-1GlycineATPCoAKidney如何在尿液中發(fā)現(xiàn)p-FBA，p-FHA？48排泄研究實例-1GlycineATPKidney如何在尿49排泄研究Cumulativeexcretionofp-FHAandbothmetabolitesinurineafterivadministrationoffluorapacin(12.5mg/kg)inrats(n=6,meanmean±S.E.)Meancumulativeexcretionofmetabolitesequivalentsinbileafterivadministrationoffluorapacin(12.5mg/kg)inrats(n=6,meanmean±S.E.)49排泄研究Cumulativeexcretionof排泄研究實例-250應(yīng)用LC-MS檢測到的糞便+尿液總排泄率<50%是否有簡便、快捷的方法考察排泄率？排泄研究實例-250應(yīng)用LC-MS檢測到的糞便+尿液總排515藥物與血漿蛋白的結(jié)合研究藥物與血漿蛋白結(jié)合試驗可采用多種方法，如平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、光譜法等根據(jù)藥物的理化性質(zhì)及試驗室條件，可選擇使用一種方法進(jìn)行至少3個濃度（包括有效濃度）的血漿蛋白結(jié)合試驗每個濃度至少重復(fù)試驗三次，以了解藥物的血漿蛋白結(jié)合率是否有濃度依賴性。515藥物與血漿蛋白的結(jié)合研究藥物與血漿蛋白結(jié)合試驗可采52

一般情況下，只有游離型藥物才能通過脂膜向組織擴(kuò)散，被腎小管濾過或被肝臟代謝，因此藥物與蛋白的結(jié)合會明顯影響藥物分布與消除的動力學(xué)過程并降低藥物在靶部位的作用強(qiáng)度建議根據(jù)藥理毒理研究所采用的動物種屬，進(jìn)行動物與人血漿蛋白結(jié)合率比較試驗，以預(yù)測和解釋動物與人在藥效和毒性反應(yīng)方面的相關(guān)性對蛋白結(jié)合率高于90%以上的藥物，建議開展體外藥物競爭結(jié)合試驗，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結(jié)合率藥物，考察對所研究藥物蛋白結(jié)合率的影響52一般情況下，只有游離型藥物才能通過脂膜向組織擴(kuò)散，被腎536藥物的生物轉(zhuǎn)化對于創(chuàng)新性的藥物，尚需了解在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化情況，包括轉(zhuǎn)化類型、主要轉(zhuǎn)化途徑及其可能涉及的代謝酶對于新的前體藥物,除對其代謝途徑和主要活性代謝物結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究外,尚應(yīng)對原形藥和活性代謝物進(jìn)行系統(tǒng)的藥代動力學(xué)研究;對主要在體內(nèi)以代謝消除為主的藥物(原形藥排泄<50%)，生物轉(zhuǎn)化研究則可分為兩個階段：臨床前可先采用色譜方法或放射性核素標(biāo)記方法分析和分離可能存在的代謝產(chǎn)物，并用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法初步推測其結(jié)構(gòu);如果II期臨床研究提示其在有效性和安全性方面有開發(fā)前景，在申報生產(chǎn)前進(jìn)一步研究并闡明主要代謝產(chǎn)物的可能代謝途徑、結(jié)構(gòu)及代謝酶。但當(dāng)多種跡象提示可能存在有較強(qiáng)活性的代謝產(chǎn)物時，應(yīng)盡早開展活性代謝產(chǎn)物的研究，以確定開展代謝產(chǎn)物動力學(xué)試驗的必要性536藥物的生物轉(zhuǎn)化對于創(chuàng)新性的藥物，尚需了解在體內(nèi)的生吉非替尼代謝產(chǎn)物及主要代謝酶的確定雞尾酒探針底物法體外篩選吉非替尼對主要CYP酶的抑制作用吉非替尼對CYP2D6底物美托洛爾藥代動力學(xué)的影響CYP3A4抑制劑和誘導(dǎo)劑對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響54抗腫瘤藥吉非替尼的代謝及藥物-藥物相互作用研究吉非替尼對藥物代謝酶的影響吉非替尼代謝產(chǎn)物及主要代謝酶的確定54抗腫瘤藥吉非替尼的代謝551.吉非替尼代謝產(chǎn)物及主要代謝酶的確定14C-吉非替尼與人肝微粒體及重組CYP3A4孵育后的代表性HPLC圖譜生成數(shù)個一相代謝產(chǎn)物CYP3A4為參與吉非替尼代謝的主要CYP酶結(jié)論551.吉非替尼代謝產(chǎn)物及主要代謝酶的確定14C-吉非替尼與562.雞尾酒探針底物法體外篩選吉非替尼對主要CYP酶的抑制作用吉非替尼（μmol/L）非那西丁O-脫乙基化(CYP1A2)甲苯磺丁脲4′-羥基化(CYP2C9)S-美芬妥因4-羥基化(CYP2C19)右美沙芬O-脫甲基化(CYP2D6)睪酮6β-羥基化(CYP3A4)0.00410610089991080.0210599781091080.1111210083811040.569810183891042.24108101808710511.210591765793吉非替尼對人肝微粒體主要CYP酶活性的影響注：表中數(shù)據(jù)為未加吉非替尼時的酶活性的百分比臨床應(yīng)用中，吉非替尼在人體的血藥濃度小于11.2μmol/L，為患者以250mg/d進(jìn)行治療時穩(wěn)態(tài)濃度的10倍引起代謝性藥物相互作用的可能性不大562.雞尾酒探針底物法體外篩選吉非替尼對主要CYP酶的抑573.吉非替尼對CYP2D6底物美托洛爾藥代動力學(xué)的影響腫瘤患者單獨及與吉非替尼合用美托洛爾（CYP2D6底物）時，美托洛爾的血藥濃度-時間曲線結(jié)論：吉非替尼與CYP2D6底物藥物合用時，對合用藥物未產(chǎn)生顯著的藥代動力學(xué)影響573.吉非替尼對CYP2D6底物美托洛爾藥代動力學(xué)的影響腫584-1CYP3A4誘導(dǎo)劑對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響單用及與利福平(CYP3A4誘導(dǎo)劑）合用時，健康志愿者口服500mg吉非替尼后的平均血藥濃度-時間曲線參數(shù)統(tǒng)計方法吉非替尼（口服500mg）單用與利福平合用AUC0-∞(ng.h/mL)Gmean(RSD%)5044(88)840(71)Cmax(ng/mL)Gmean(RSD%)167.5(53)58.8(68)Tmax(h)中位數(shù)（范圍）3.0(3.0-7.0)3.0(1.0-5.0)t1/2β(h)平均值(SD)31(14)21(8)單用及與利福平合用時，健康志愿者口服500mg吉非替尼后的藥代動力學(xué)參數(shù)584-1CYP3A4誘導(dǎo)劑對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響單用594-2CYP3A4抑制劑對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響

吉非替尼單用及與伊曲康唑合用時的平均血藥濃度-時間曲線參數(shù)統(tǒng)計方法吉非替尼（口服250mg）吉非替尼（口服500mg）單用（n=24）合用（n=24）單用（n=23）合用（n=24）AUC0-∞（ng.h/mL）Gmean(CV%)2968(45)5348(54)6921(30)10919(44)Cmax(ng/mL)Gmean(CV%)103.3(39)155.8(43)227.8(61)301.8(56)Tmax(h)中位數(shù)（范圍）5.0(3.0-7.0)5.0(3.0-7.0)5.0(3.0-24.2)5.0(3.0-7.0)t1/2β(h)平均值(SD)31(10)38(11)35(8)43(12)吉非替尼單用及與伊曲康唑合用時的藥代動力學(xué)參數(shù)594-2CYP3A4抑制劑對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響60關(guān)于藥物制劑的藥代研究劑型特征、具體制劑所使用的輔料、制備工藝等也是重要的影響因素。制劑研究時，必須結(jié)合藥代動力學(xué)研究結(jié)果，利用或避開藥物的某些性質(zhì)藥物的理化性質(zhì)包括溶解度、油水分配系數(shù)、酸堿度、粒度、晶型、滲透性以及藥物在胃腸道中的穩(wěn)定性等，劑型因素包括劑型、輔料和制備工藝以及不同劑型制劑的給藥途徑等新的給藥系統(tǒng)在不斷發(fā)展，如脂質(zhì)體、納米給藥系統(tǒng)、透皮給藥系統(tǒng)、局部定位給藥系統(tǒng)、脈沖給藥系統(tǒng)等。研究者可根據(jù)不同的用藥需要，結(jié)合藥物及其制劑的特點，制訂合理、可行的藥代動力學(xué)研究方案對于新的復(fù)方制劑，應(yīng)通過復(fù)方與單藥藥代動力學(xué)的比較，研究其相互作用，以考察組方的合理性60關(guān)于藥物制劑的藥代研究劑型特征、具體制劑所使用的輔料、制61關(guān)于多次給藥的藥代研究

對于臨床需長期給藥且有蓄積傾向的藥物，應(yīng)考慮進(jìn)行多次給藥的藥代動力學(xué)研究多次給藥試驗時,一般可選用一個劑量(有效劑量)。根據(jù)單次給藥藥代試驗結(jié)果求得的消除半衰期(t1/2)并參考藥效學(xué)數(shù)據(jù),確定藥物劑量、給藥間隔和給藥天數(shù)61關(guān)于多次給藥的藥代研究對于臨床需長期給藥且有蓄積傾向的62多次給藥后的特定組織分布

以下情況可考慮進(jìn)行多次給藥后的特定組織的藥物濃度研究：藥物/代謝物在組織中的半衰期明顯超過其血漿消除半衰期，并超過毒性研究給藥間隔的兩倍在短期毒性研究、單次給藥的組織分布研究或其它藥理學(xué)研究中觀察到未預(yù)料的，而且對安全性評價有重要意義的組織病理學(xué)改變定位靶向釋放的藥物62多次給藥后的特定組織分布以下情況可考慮進(jìn)行多次給藥后63關(guān)于體外藥代動力學(xué)研究在進(jìn)行藥代動力學(xué)研究時，除了體內(nèi)研究外，還可配合體外研究，如觀察動物和人肝等組織勻漿、細(xì)胞懸液、微粒體或灌流器官對藥物的代謝作用體外研究代謝途徑和動力學(xué)特點比較方便，節(jié)省動物，可以獲得更多的信息，例如分析代謝模式、代謝酶對藥物作用的動力學(xué)參數(shù)、藥物及其代謝物與蛋白、DNA等靶分子的親和力等63關(guān)于體外藥代動力學(xué)研究在進(jìn)行藥代動力學(xué)研究時，除了體內(nèi)研64關(guān)于改變酸根、晶型的藥物對于改變酸根、晶型的藥物，應(yīng)根據(jù)藥物的特點、改變的具體情況和立題依據(jù)，考慮是否應(yīng)進(jìn)行與改變前藥物比較的藥代動力學(xué)研究考察其生物利用度的變化64關(guān)于改變酸根、晶型的藥物對于改變酸根、晶型的藥物，應(yīng)根據(jù)65關(guān)于手性藥物的藥代研究對映異構(gòu)體具有幾乎相同的物理性質(zhì)（旋光性除外）和化學(xué)性質(zhì)（在手性環(huán)境中除外），通常需要特殊的手性技術(shù)對它們進(jìn)行鑒定、表征、分離和測定，但生物系統(tǒng)常常很容易區(qū)分它們（手性環(huán)境）手性可能導(dǎo)致不同的藥代動力學(xué)性質(zhì)（吸收、分布、代謝、排泄），以及藥理學(xué)、毒理學(xué)效應(yīng)的量或質(zhì)的區(qū)別消旋體及2個對映體可看成不同的3個化學(xué)實體65關(guān)于手性藥物的藥代研究66

為評價單一對映體或?qū)τ丑w混合物的藥代動力學(xué)，研究者應(yīng)在藥物開發(fā)前期，建立適用于體內(nèi)樣品對映體選擇性分析的定量方法，估計對映體之間相互轉(zhuǎn)化的可能性以及各自的吸收、分布、代謝和排泄如果外消旋體已經(jīng)上市，研究者希望開發(fā)單一對映體，則應(yīng)測定該對映體轉(zhuǎn)化為另一對映體的程度是否顯著，以及該對映體單獨用藥是否與其作為外消旋體組分時的藥代動力學(xué)性質(zhì)一致為檢測對映異構(gòu)體在體內(nèi)的相互轉(zhuǎn)化和處置，應(yīng)獲得單一對映體在動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)曲線，并與其后在臨床I期試驗中獲得的藥代動力學(xué)曲線相比較

66為評價單一對映體或?qū)τ丑w混合物的藥代動力學(xué)，研究者應(yīng)在67生物等效性研究67生物等效性研究68基本概念-1生物等效性（BE）：是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義通常意義的BE研究是指用BA研究方法，以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點指標(biāo)，根據(jù)預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究在藥代動力學(xué)方法確實不可行時,也可以考慮以臨床綜合療效、藥效學(xué)指標(biāo)或體外試驗指標(biāo)等進(jìn)行比較性研究，但需充分證實所采用的方法具有科學(xué)性和可行性68基本概念-1生物等效性（BE）：是指藥學(xué)等效制劑或可替換69BA和BE均是評價制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)BA強(qiáng)調(diào)反映藥物活性成分到達(dá)體內(nèi)循環(huán)的相對量和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定用藥方案(如給藥劑量和給藥間隔)的重要依據(jù)之一BE重點在于以預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷后研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用的依據(jù)69BA和BE均是評價制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)70BA和BE研究在藥品研發(fā)的不同階段有不同作用：在新藥研究階段，為了確定新藥處方、工藝合理性，通常需要比較改變上述因素后制劑是否能達(dá)到預(yù)期的生物利用度；開發(fā)了新劑型，要對擬上市劑型進(jìn)行生物利用度研究以確定劑型的合理性，通過與原劑型比較的BA研究來確定新劑型的給藥劑量，也可通過BE研究來證實新劑型與原劑型是否等效；在臨床試驗過程中，可通過BE研究來驗證同一藥物的不同時期產(chǎn)品的前后一致性，如：早期和晚期的臨床試驗用藥品，臨床試驗用藥品（尤其是用于確定劑量的試驗藥）和擬上市藥品等。在仿制生產(chǎn)已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品時，可通過BE研究來證明仿制產(chǎn)品與原創(chuàng)藥是否具有生物等效性，是否可與原創(chuàng)藥替換使用。藥品批準(zhǔn)上市后，如處方組成成分、比例以及工藝等出現(xiàn)一定程度的變更時，研究者需要根據(jù)產(chǎn)品變化的程度來確定是否進(jìn)行BE研究，以考察變更后和變更前產(chǎn)品是否具有生物等效性。以提高生物利用度為目的研發(fā)的新制劑，需要進(jìn)行BA研究，了解變更前后生物利用度的變化70BA和BE研究在藥品研發(fā)的不同階段有不同作用：71基本概念-2藥學(xué)等效性(Pharmaceuticalequivalence)：如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則可以認(rèn)為他們是藥學(xué)等效的。藥學(xué)等效不一定意味著生物等效，因為輔料的不同或生產(chǎn)工藝差異等可能會導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的改變治療等效性(Therapeuticequivalence)：如果兩制劑含有相同活性成分，且臨床上顯示具有相同的安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。如果兩制劑中所用輔料本身并不會導(dǎo)致有效性和安全性問題，生物等效性研究是證實兩制劑治療等效性最合適的辦法。如果藥物吸收速度與臨床療效無關(guān),吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同（如某一化合物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效71基本概念-2藥學(xué)等效性(Pharmaceutical72生物等效性研究方案設(shè)計（動物）實驗動物：通常為Beagle犬，6只（或適當(dāng)增加）給藥次數(shù)：通常單次給藥？實驗設(shè)計：雙周期雙交叉試驗設(shè)計方案，獲得受試制劑在Beagle犬體內(nèi)的藥動學(xué)特征，與參比制劑比較進(jìn)行相對生物利用度計算及生物等效性評價給藥間隔：至少10個半衰期如果是緩釋制劑，還要考察其藥動學(xué)特征是否符合緩釋制劑要求參考指南（SFDA）化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則72生物等效性研究方案設(shè)計（動物）實驗動物：通常為Beagl737374生物等效性研究方法體內(nèi)和體外研究方法體內(nèi)方法（按方法的優(yōu)先考慮程度從高到低）藥代動力學(xué)研究方法藥效動力學(xué)研究方法臨床比較試驗方法體外研究方法

一般不提倡用體外的方法來確定生物等效性，因為體外并不能完全代替體內(nèi)行為，但在某些情況下，如能提供充分依據(jù)，也可以采用體外的方法來證實生物等效性74生物等效性研究方法體內(nèi)和體外研究方法75生物等效性研究需報告的參數(shù)藥物濃度-時間曲線（Concentration-Timecurve,C-T）來反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動態(tài)過程。藥動學(xué)參數(shù)AUC、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、F＝AUCT／AUCR×100％統(tǒng)計比較上述參數(shù)，判斷兩制劑是否生物等效對于多次給藥的BA和BE研究，提供受試制劑和參比制劑的三次谷濃度數(shù)據(jù)（Cmin），達(dá)穩(wěn)態(tài)后的AUCss、Css-max、Css-min、Tss-max、t1/2

、F等參數(shù)。當(dāng)受試制劑與參比制劑劑量相等時，F(xiàn)值按下式計算：F＝AUCssT／AUCssR×100％（式中AUCssT

和AUCssR分別為T（test)和R(reference)穩(wěn)態(tài)條件下的AUC）75生物等效性研究需報告的參數(shù)藥物濃度-時間曲線（Conce76等效判斷普遍采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行顯著性檢驗，然后用雙單側(cè)t檢驗和計算90％置信區(qū)間的統(tǒng)計分析方法來評價和判斷藥物間的生物等效性等效判斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的AUC0→t

在參比制劑的80％-125％范圍，受試制劑的Cmax在參比制劑的70％-143％范圍。根據(jù)雙單側(cè)檢驗的統(tǒng)計量，同時求得（1－2α）%置信區(qū)間，如在規(guī)定范圍內(nèi)，即可有1－2α的概率判斷兩藥生物等效必要時，應(yīng)對Tmax

經(jīng)非參數(shù)法檢驗，如無差異，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效76等效判斷普遍采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析77由其他給藥途徑改為注射途徑的藥物由口服等其他給藥途徑改為注射給藥時，由于藥物暴露、組織分布的改變或新的代謝產(chǎn)物和/或雜質(zhì)的產(chǎn)生，可能帶來新的安全性擔(dān)憂。因此在原給藥途徑下的有效性、安全性和藥代動力學(xué)特征明確的前提下，首先應(yīng)進(jìn)行注射給藥與原給藥途徑比較的藥代動力學(xué)研究，根據(jù)不同給藥途徑藥代動力學(xué)特征的變化情況，結(jié)合原給藥途徑已有的安全性信息，合理設(shè)計與原給藥途徑比較的毒理試驗（包括毒代動力學(xué)試驗）。在試驗過程中注意考察是否產(chǎn)生了新的毒性靶器官、毒性反應(yīng)的程度是否增加、是否可恢復(fù)及其與給藥劑量或暴露量的關(guān)系77由其他給藥途徑改為注射途徑的藥物由口服等其他給藥途徑改為78特殊注射劑非臨床藥物動力學(xué)研究-1特殊注射劑：指制劑因素可能影響藥物體內(nèi)藥代動力學(xué)行為（吸收、組織分布、消除）的制劑，例如脂質(zhì)體、微球、微乳等。國內(nèi)未上市的特殊注射劑因特殊的注射劑可能導(dǎo)致體內(nèi)的藥代動力學(xué)行為較普通劑型發(fā)生重大改變，此類藥品無論國外上市與否，一般應(yīng)按照未在國內(nèi)外上市的藥物研發(fā)的一般原則進(jìn)行臨床試驗，以充分評價其安全有效性。如國內(nèi)已有普通注射劑上市，應(yīng)關(guān)注二者在藥代動力學(xué)、耐受性等方面的差別，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行系統(tǒng)的臨床研究評價特殊注射劑的安全有效性78特殊注射劑非臨床藥物動力學(xué)研究-1特殊注射劑：指制劑因素國內(nèi)已上市的特殊注射劑一般認(rèn)為，特殊的注射劑需通過規(guī)范的工藝過程和方法進(jìn)行產(chǎn)品的質(zhì)量控制。因此，盡管國內(nèi)已有同類產(chǎn)品上市，此類品種也應(yīng)結(jié)合其臨床前研究基礎(chǔ)以及上市產(chǎn)品的安全有效性信息，需要進(jìn)行必要的臨床試驗來驗證其療效和安全性。首先應(yīng)進(jìn)行與上市產(chǎn)品的藥代動力學(xué)比較研究，如二者藥代動力學(xué)行為基本一致，可僅進(jìn)行驗證性臨床試驗以確證其療效和安全性；反之則應(yīng)按照未在國內(nèi)外上市的藥物研發(fā)的一般原則進(jìn)行臨床試驗79特殊注射劑非臨床藥物動力學(xué)研究-2國內(nèi)已上市的特殊注射劑79特殊注射劑非臨床藥物動力學(xué)研究-280藥動學(xué)研究中幾個名詞基質(zhì)效應(yīng):由于樣品中存在干擾物質(zhì),對響應(yīng)造成的直接或間接的影響標(biāo)準(zhǔn)樣品(StandardSample)：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度質(zhì)控樣品（QualityControlSample）：質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的效能和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。一般配制高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品分析批（Analyticalrun/batch）：包括待測樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和質(zhì)控樣品的完整系列。由于儀器性能的改善和自動進(jìn)樣器的使用，一天內(nèi)可以完成幾個分析批，一個分析批也可以持續(xù)幾天完成，但連續(xù)測量不宜超過3天80藥動學(xué)研究中幾個名詞基質(zhì)效應(yīng):由于樣品中存在干擾物質(zhì),對81方案設(shè)計生物樣品中內(nèi)源性（可結(jié)合研究課題）

物質(zhì)測定方法的建立手性新藥臨床前藥代動力學(xué)研究方案設(shè)計（包括血藥濃度測定方法的建立）

結(jié)合你研究的藥物，設(shè)計其臨床前藥代動力學(xué)研究方案尿液排泄糞便排泄膽汁排泄血漿藥物動力學(xué)按創(chuàng)新藥物要求設(shè)計（應(yīng)包含方法學(xué)驗證部分）81方案設(shè)計生物樣品中內(nèi)源性（可結(jié)合研究課題）物質(zhì)測定方法82PPT匯報及考試安排1月7日前發(fā)至hdjiang@1月8,9日PPT匯報（每人演講8分鐘，提問3分鐘）1月8日：1-16；1月9日：17-28；1月9日：8:00-8:30開卷考試82PPT匯報及考試安排1月7日前發(fā)至hdjiang@體內(nèi)藥物分析應(yīng)用83ADME早期成藥性評價與非臨床藥代動力學(xué)研究體內(nèi)藥物分析應(yīng)用1ADME早期成藥性評價Productivitytrendduring2009and2010.Theclinicalrateofsuccessisdepictedaspercentagesurvivingateachclinicalphasebasedonattritionobservedduring2009and2010.IshKhannaDrugdiscoveryinpharmaceuticalindustry:productivitychallengesandtrendsDrugDiscoveryTodayVolume17,Issues19?2020121088-1102/10.1016/j.drudis.2012.05.007Highcosthighfailure新藥發(fā)現(xiàn)、開發(fā)的風(fēng)險84NDA：newdrugapplicationIND:investigationalnewdrugProductivitytrendduring2009Shiftingparadigmindrugfailuresduringthepasttwodecades.Theclinicalphase(I-III)failureofdrugsisdividedbasedonreasonsoffailureintheyears1991(a)and2000(b).<ce:italic>Abbreviation</ce:italic>:DMPK:drug...IshKhannaDrugdiscoveryinpharmaceuticalindustry:productivitychallengesandtrendsDrugDiscoveryTodayVolume17,Issues19?2020121088-1102/10.1016/j.drudis.2012.05.007DMPK在新藥開發(fā)中的重要性新藥在臨床被淘汰的原因比較85Shiftingparadigmindrugfail早期成藥性評價早期藥效成藥性評價早期毒理成藥性評價早期ADME成藥性評價合適的半衰期較好的生物利用度（口服）靶部位濃度較高較小代謝性藥物相互作用（酶、轉(zhuǎn)運體）86早期成藥性評價早期藥效成藥性評價4875AbsorptionBarriers未被吸收（nonabsorption)外排(activeefflux)腸道代謝(intestinalmetabolism)肝臟代謝(hepaticmetabolism)膽汁排泄(biliaryexcretion)藥物損失（drugloss)F:進(jìn)入體循環(huán)的藥物量fa:從小腸腸腔吸收的藥物量fg:小腸代謝后剩余的藥物量fh:肝臟代謝后剩余的藥物量88AbsorptionBarriers未被吸收（nonab小腸轉(zhuǎn)運的體外模型TranswellSystem將待考察物加入AP側(cè)，孵育后測定BL側(cè)藥物，計算PappAPBL將待考察物加入BL側(cè)，孵育后測定AP側(cè)藥物，計算PappBLAP計算PappBLAP/PappAPBL

考察給予轉(zhuǎn)運體抑制劑時（Papp/inhibitor)透過性大小的判斷依據(jù)：Papp（cm/s）<1×10-6,吸收不良1-10×10-6,中等吸收>10×10-6,吸收良好

普萘洛爾PappA→B為>5×10-6cm/s熒光黃PappA→B<1×10-6cm/s對照dQ/dt

表示單位時間內(nèi)接收室中藥物出現(xiàn)的量；A為膜面積（1.13cm2）；C0為給藥室藥物初始濃度。小腸轉(zhuǎn)運的體外模型TranswellSystem將待考察selectedhumantransportproteinsfordrugsandendogenoussubstancesMembranetransportersindrugdevelopment.NatureReviews,DrugDiscovery2010,9:215-236.90selectedhumantransportprote創(chuàng)新藥物研究中對藥物轉(zhuǎn)運體研究的要求91創(chuàng)新藥物研究中對藥物轉(zhuǎn)運體研究的要求9USFDA創(chuàng)新藥物研究中要求考察的CYPCYP1A2CYP3A4CYP2B6CYP2C8CYP2C9CYP2C19CYP2D692USFDA創(chuàng)新藥物研究中要求考察的CYPCYP1A210實例193實例111實例294XY-1XY-1在血漿中的穩(wěn)定性（37℃）大鼠iv20.0mg/kgXY-1后全血中藥物的平均濃度-時間曲線實例212XY-1XY-1在血漿中的穩(wěn)定性（37℃）大鼠iv實例395TCDMNTCDMN對腫瘤細(xì)胞毒性的IC50

很小，但口服給藥無活性？？？大鼠灌胃給藥后血漿及組織中均測不到原型藥物TCDMN，但是能測到TCDML實例313TCDMNTCDMN對腫瘤細(xì)胞毒性的IC50很小實例396TCDMN在大鼠肝微粒體（A）、空腸組織提取物（B）及血漿（C）中的水解及其產(chǎn)物（TCDML）生成的時間曲線實例314TCDMN在大鼠肝微粒體（A）、空腸組織提取物（B97TCDMN與大鼠肝微粒體、S9、腸道蛋白及血漿孵育后，TCDMN的減少及TCDML的生成（mmol/mgprotein/min）比較，數(shù)據(jù)以mean±SE,n=3iv是否可行？15TCDMN與大鼠肝微粒體、S9、腸道蛋白及血漿孵育后，T98大鼠靜注17.5mg/kgTCDMN4小時后，各組織中水解產(chǎn)物TCDML的濃度（mean±SD,n=5）大鼠靜注17.5mg/kgTCDMN后血漿中TCDML平均濃度-時間曲線，圖中數(shù)據(jù)以mean±SE表示，n=3.16大鼠靜注17.5mg/kgTCDMN4小時后，各組織ivTCDMN后腫瘤組織中原型藥物濃度很低抑瘤率仍不高991.從制劑著手進(jìn)行改進(jìn)2.與水解酶抑制劑合用ivTCDMN后腫瘤組織中原型藥物濃度很低抑瘤率仍不高放棄ivTCDMN后腫瘤組織中原型藥物濃度很低171.從制劑著100實例4CYP亞型JS-001陽性對照濃度(μM)抑制率%抑制劑濃度(μM)抑制率%

1A2118.2±0.69呋拉茶堿*furafylline0.7711.8±1.3

562.2±2.3

1068.3±0.80

2A61-毛果蕓香堿pilocarpine524.3±0.51

5-

10-

2B6**1

舍曲林sertraline5

5

10

2C8151.7±0.56槲皮素quercetin1080.7±3.0

587.6±1.4

1092.4±1.3

2C9157.1±1.8磺胺苯吡唑sulfaphenazole0.519.2±1.5

586.0±1.3

1088.8±0.46

2C19150.4±1.1努特卡酮nootkatone0.59.26±1.5

588.0±0.77

1092.0±0.25

2D6136.0±1.7奎尼丁quinidine0.473.4±0.82

571.3±1.1

1075.4±0.67

2E1124.3±2.8二乙基二硫代氨基磺酸鹽diethyldithiocarbamate2012.6±2.4

538.4±3.6

1039.7±0.63

3A4/5(testosterone)150.8±1.1酮康唑ketoconazole0.279.1±0.54

582.0±4.7

1080.8±0.76

3A4/5(midazolam)130.0±2.2酮康唑ketoconazole0.270.5±0.47

569.7±1.4

1074.8±0.63

雞尾酒探針底物法結(jié)果18實例4CYP亞型JS-001陽性對照濃度(μM)抑制率%101CYP酶（亞型/底物）HR001陽性抑制劑IC50Ki名稱IC50Ki（文獻(xiàn)）CYP1A2/非那西丁5.300.542呋拉茶堿2.500.6-0.73CYP3A4/5/咪達(dá)唑侖0.5183.02酮康唑0.02750.27CYP3A4/5/睪酮0.7140.263酮康唑0.01100.0037-0.18CYP2C8/紫杉醇1.710.135槲皮素5.851.1CYP2C9/甲苯磺丁脲0.4961.41磺胺苯吡唑0.6450.3CYP2C19/奧美拉唑1.430.703噻氯匹啶9.791.2CYP2D6/右美沙芬0.9590.522奎尼丁0.05130.027-0.4JS-001

對人肝微粒體主要CYP酶亞型抑制的IC50及Ki（μmol/L）[I]/KiPrediction[I]/Ki>1Likely1>[I]/Ki>0.1Possible0.1>[I]/KiRemote預(yù)測依據(jù)（FDA指南）19CYP酶（亞型/底物）HR001陽性抑制劑IC50Ki102CYP（底物）JS-001IC50（μmol/L）陽性對照對照藥濃度（μmol/L）抑制率%CYP1A2（非那西?。?3.4呋拉茶堿2.572.2CYP3A4（咪達(dá)唑侖）0.393酮康唑0.02567.5CYP3A4（睪酮）0.256酮康唑0.01082.0CYP2C8（紫杉醇）2.17槲皮素5.027.5CYP2C9（甲苯磺丁脲）0.420磺胺苯吡唑0.5050.8CYP2C19（奧美拉唑）18.1噻氯匹啶1047.1CYP2D6（右美沙芬）2.37奎尼丁0.05071.1JS-001對重組人CYP酶的抑制作用20CYP（底物）JS-001陽性對照對照藥濃度（μmol/實例5103藥物濃度（μmol/L）Papp(×10-6cm/s)AP→BLBL→APEffluxRatioAS-001020.30±0.034.6±0.0715.440.40±0.025.1±0.0112.680.80±0.035.4±0.36.7普萘洛爾1013.611.30.83熒光黃450.16±0.08

AS-0010在培養(yǎng)21天的單層Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運實例521藥物濃度（μmol/L）Papp(×10-6cm104AS-0010在MDCK-mock及MDCK-MDR1中的積聚及Verapamil（100μmol/L）及elacridar（20μmol/L）對積聚的影響AS-0010在LLC-PK1及LLC-PK1-BCRP中的積聚及cyclosporinA（100μmol/L）及elacridar（20μmol/L）對積聚的影響22AS-0010在MDCK-mock及MDCK-MDR1中實例6-SWK-002105雄性大鼠口服SWK-002制劑Ⅰ及制劑Ⅱ后血漿中SWK-002濃度-時間變化曲線雄性大鼠靜脈注射SWK-0025mg/kg后血漿中SWK-002濃度-時間變化曲線GroupF(AUC0-t)oral/doseoral/(AUC0-t)inj/doseinj(×100%)F(AUC0-∞t)oral/doseoral/(AUC0-∞)inj/doseinj(×100%)制劑I0.8691.182制劑II1.3141.554實例6-SWK-00223雄性大鼠口服SWK-002制劑Ⅰ及實例7106大鼠口服XHT-0X50mg/kg）后的血漿藥物濃度-時間曲線（mean±SD,n=4）大鼠灌胃50mg/kgXHT-0X后組織中藥物濃度實例724大鼠口服XHT-0X50mg/kg）后的血漿藥物107CYP亞型新黃酮抑制率（%）陽性對照抑制劑濃度(μM)抑制率%

1A214.8±0.96呋拉茶堿*furafylline0.7711.8±1.3

2A6-毛果蕓香堿pilocarpine524.3±0.51

2C833.9±3.5槲皮素quercetin1080.7±3.0

2C934.6±3.4磺胺苯吡唑sulfaphenazole0.519.2±1.5

2C1929.4±2.7努特卡酮nootkatone0.59.26±1.5

2D614.7±1.5奎尼丁quinidine0.473.4±0.82

2E117.6±0.67二乙基二硫代氨基磺酸鹽diethyldithiocarbamate2012.6±2.4

3A4/5(testosterone)26.9±2.1酮康唑ketoconazole0.279.1±0.54

3A4/5(midazolam)12.7±0.29酮康唑ketoconazole0.270.5±0.47

XWT-0X（10μM）及陽性抑制劑對CYP亞型的抑制（mean±SD,n=3）25CYP亞型新黃酮抑制率（%）陽性對照抑制劑濃度(μM)抑實例8-YP-128108YP128在大鼠血漿中37℃(A)的穩(wěn)定性化合物(100μmol/L)在混合的正常人肝微粒體（1.0mgprotein/mL）中孵育60min后的I相代謝消除率(mean)化合物(100μmol/L)在混合的正常人肝微粒體（1.0mgprotein/mL）中孵育4h后的II相代謝消除率(mean)實例8-YP-12826YP128在大鼠血漿中化合物(100109

大鼠灌胃67mg/kgYP128后平均血漿藥物濃度-時間曲線大鼠灌胃67mg/kgYP128后組織中YP128的濃度27大鼠灌胃67mg/kgYP128后平均血漿藥物濃度110非臨床藥代動力學(xué)研究創(chuàng)新藥物非臨床藥代動力學(xué)研究12非創(chuàng)新藥物動物生物利用度與生物等效性評價3特殊注射劑的非臨床藥代動力學(xué)研究28非臨床藥代動力學(xué)研究創(chuàng)新藥物非臨床藥代動力學(xué)研究12非創(chuàng)111化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究

技術(shù)指導(dǎo)原則藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則

(第二稿)二0一三年四月29化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究

技術(shù)指導(dǎo)原則藥物非臨床藥代112研究目的通過動物體內(nèi)、外和人體外的研究方法，揭示新藥在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律獲得新藥的基本藥代動力學(xué)參數(shù),闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄的過程和特點闡明藥效或毒性大小的基礎(chǔ)，和提供藥物對靶器官的效應(yīng)（藥效或毒性）的依據(jù)提供評價藥物制劑特性和質(zhì)量的重要依據(jù)；為設(shè)計和優(yōu)化臨床研究給藥方案提供有關(guān)信息為藥物結(jié)構(gòu)改造和設(shè)計提供結(jié)構(gòu)與動力學(xué)關(guān)系的信息30研究目的通過動物體內(nèi)、外和人體外的研究方法，揭示新藥在體113研究的基本原則非臨床藥代動力學(xué)研究，要遵循以下基本原則：試驗?zāi)康拿鞔_分析方法可靠試驗設(shè)計合理所得參數(shù)全面，滿足評價要求對試驗結(jié)果進(jìn)行綜合分析與評價具體問題具體分析31研究的基本原則非臨床藥代動力學(xué)研究，要遵循以下基本原則：114試驗設(shè)計的總體要求-1試驗藥品

應(yīng)提供受試藥物的名稱、劑型、批號、來源、純度保存條件及配制方法使用的受試藥物及劑型應(yīng)盡量與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究使用的一致研制單位應(yīng)提供質(zhì)檢報告

32試驗設(shè)計的總體要求-1試驗藥品115

試驗動物一般采用成年和健康的動物。常用動物種屬有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等。選擇動物的原則如下:首選動物：盡可能與藥效學(xué)和毒理學(xué)研究一致盡量在清醒狀態(tài)下試驗，動力學(xué)研究最好從同一動物多次采樣創(chuàng)新藥應(yīng)選用兩種或兩種以上的動物，其中一種為嚙齒類動物；另一種為非嚙齒類動物（如犬、小型豬或猴等）。其它類型的藥物，可選用一種動物，建議首選非嚙齒類動物經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類動物試驗設(shè)計的總體要求-2藥動學(xué)實驗前先進(jìn)行體外篩選，選擇與人代謝情況比較接近的動物進(jìn)行體內(nèi)藥動學(xué)實驗33試驗動物試驗設(shè)計的總體要求-2藥動學(xué)實驗前先進(jìn)行體外篩代謝穩(wěn)定性研究116代謝穩(wěn)定性研究34代謝穩(wěn)定性研究117代謝穩(wěn)定性研究35118

3劑量選擇

試驗劑量動物體內(nèi)藥代動力學(xué)研究應(yīng)設(shè)置至少三個劑量組，其高劑量最好接近最大耐受劑量，中、小劑量根據(jù)動物有效劑量的上下限范圍選取。主要考察在所試劑量范圍內(nèi)，藥物的體內(nèi)的動力學(xué)過程是屬于線性還是非線性，以所得結(jié)果有利于解釋藥效學(xué)和毒理學(xué)研究中的發(fā)現(xiàn)，并為新藥的進(jìn)一步開發(fā)和研究提供信息盡可能與臨床用藥一致