HPLC的實際應(yīng)用課件

周茜2014.10.31高效液相色譜（HPLC）在實際樣品分析中的應(yīng)用復(fù)雜基質(zhì)中抗生素殘留分析

環(huán)境水樣中全氟羧酸類化合物分析4123完整的HPLC方法建立3復(fù)雜基質(zhì)中抗生素殘留分析研究背景研究思路研究結(jié)果1濫用抗生素后果江蘇省范圍內(nèi)145個集約化養(yǎng)殖場81個雞糞樣品中，金霉素檢出率為42.2%，最大濃度達71.17mgkg-1；土霉素的檢出率為15.6%，最大濃度為16.64mgkg-1；強力霉素的檢出率為23.4%，最大濃度為26.05mgkg-1；上海黃浦江養(yǎng)豬場的養(yǎng)殖污水及污水貯流池連通的農(nóng)田灌溉渠中均檢出抗生素，2種四環(huán)素抗生素總量為294.0~376.1μgL-1；

長期施用動物排泄物的表層土壤中，土霉素和四環(huán)素的最大殘留量高達32.3和26.4mg/kg。我國養(yǎng)殖業(yè)抗生素年排放3-4萬噸，再利用后導(dǎo)致水體、農(nóng)田、土壤和植物富集建立高效、準確的抗生素分析方法我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)年消耗抗生素9.7萬噸

四環(huán)素類66％，大環(huán)內(nèi)酯類12％，青霉素類9％，其余抗生素為12％常用的四環(huán)素類有土霉素（OTC）、四環(huán)素（TC）、金霉素（CTC）、強力霉素（DC）R1R2R3pKa1pKa2pKa3OTCHOHOH3.37.39.1CTCClOHH3.37.89.6TCHOHH3.37.69.3DCHHOH3.17.79.3含四環(huán)素樣品測定存在的兩大難題1、基體干擾嚴重四環(huán)素和蛋白質(zhì)鍵合模式Z.X.Chietal./Biomacromolecules12(2011)203–209U.Anandetal./J.Phys.Chem.B115(2011)6312–6320四環(huán)素對蛋白質(zhì)熒光的影響2、某些基質(zhì)中四環(huán)素濃度低MRLs：肌肉組織100ug

L-1；肝臟300ug

L-1；雞蛋200ug

L-1研究思路1、消除樣品中蛋白質(zhì)干擾2、找尋樣品富集凈化技術(shù)檢測痕量組分復(fù)雜的體系將待測組分與母體或基體分離濃縮痕量的被測組分一個完整的固相萃取步驟包括固相萃取柱的預(yù)處理、上樣、洗去干擾物質(zhì)、分析物洗脫四個步驟。超聲酶解處理后，不同濃度蛋白質(zhì)溶液中TCs回收率超聲酶解法能快速破壞蛋白質(zhì)與四環(huán)素類抗生素的作用力，實現(xiàn)樣品中四環(huán)素類抗生素的準確測定On-lineSPE：萃取和分離檢測是同時進行的兩個過程，人工操作減少，有機試劑消耗量少。Off-lineSPE：萃取和分離檢測是分開進行的兩個過程，需要經(jīng)過富集、洗脫、濃縮、定容等多個步驟才能完成，有耗時、溶劑消耗量大等缺點。Off-lineSPEvsOn-lineSPE在線固相萃取（On-lineSPE）

常規(guī)液相四元梯度泵雙三元液相二個并聯(lián)的三元梯度泵在線固相萃取步驟樣品基質(zhì)的完全餾出時間：tM分析物開始餾出時間：tG分析物的洗脫時間：tA閥切換上樣溶劑洗脫溶劑

環(huán)境水樣中全氟羧酸類化合物分析2研究背景研究思路研究結(jié)果PFCs(perfluorinatedcarboxylicacids)主要性質(zhì)

分子中與碳相連的氫被氟取代的一類有機化合物

通式為F-(CF2)n-COOH

用途：泡沫滅火劑的添加劑、電子元件助焊劑、紡織品服裝防水、金屬酸洗緩蝕劑和防腐抑制劑耐熱性、耐化學(xué)品性、紫外穩(wěn)定性，是目前最難降解的有機污染物之一環(huán)境殘留PFCs暴露水平

環(huán)境水中最主要PFCs類污染物為PFOA和PFOS海水中濃度一般在pg

L-1-ngL-1地表水中濃度一般在ngL-1-mgL-1地下水中的濃度則為μgL-1在污水處理廠污水的濃度范圍一般在ngL-1-mgL-1eg.某氟化工廠未經(jīng)過處理的污水中PFOA含量可高達559-1449mgL-1HoriHetal.EnvironmentalScience&Technology,2004,38(22):6118PFCs檢測方法測定方法檢測器優(yōu)點缺點HPLCMS（四級桿/飛行時間）定性能力強，靈敏度高儀器昂貴，基質(zhì)效應(yīng)嚴重電導(dǎo)檢測器檢出限低線性范圍廣不能梯度洗脫，不適于復(fù)雜基質(zhì)熒光檢測器靈敏度高干擾多，需衍生GC電子捕獲檢測器選擇性強靈敏度高需衍生氫火焰離子化檢測器選擇性好需衍生，檢出限較高MS定性能力強，靈敏度高需衍生CAD工作原理定量原則：A=aMbA：峰面積；M：化合物質(zhì)量分數(shù)，a，b:數(shù)值取決于分析物和色譜條件取對數(shù)后：logA=blogM+loga①HPLC洗脫液入口②氮氣入口③霧化室④廢液管⑤干燥管⑥Corona電極⑦碰撞室⑧離子阱⑨采集器⑩靜電計3.1了解目標物性質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)存在形式理化性質(zhì)耐受