臨床血液學檢驗技術(shù)-實驗課仁濟-09異常骨髓片

《臨床血液學檢驗》

實驗九、異常骨髓片檢驗（三）血液學檢驗教研室

貧血骨髓片的檢驗上次實驗情況

以小組為單位，觀察貧血的骨髓涂片，并做Fe、

NAP及PAS染色講解Fe、NAP及PAS染色，實驗課目的要求、注意事項布置及實驗報告內(nèi)容

學生匯報結(jié)果，教師講解

（一）上次實驗情況

（二）小組看片并做細胞化學染色

觀察貧血骨髓片

做Fe染色并觀察

做NAP染色并觀察做PAS染色并觀察

（三）講解貧血的細胞化學染色結(jié)合《骨髓檢查教學課件》等講解Fe染色結(jié)合《骨髓檢查教學課件》等講解NAP染色

結(jié)合《骨髓檢查教學課件》等

講解PAS染色Fe染色步驟及原理:細胞：紅色復染陽性：藍色亞鐵氰化鐵（普魯士藍）骨髓Fe3+固定亞鐵氰化鉀鹽酸酸性亞鐵氰化鉀滴加在血膜上中性紅滴加在血膜上1min沖洗20min沖洗細胞外鐵晾干鏡檢細胞內(nèi)鐵鐵染色試劑等：酸性亞鐵氰化鉀

200g/L亞鐵氰化鉀（用蒸餾水配制）5ml

濃鹽酸1ml細胞外鐵：細胞內(nèi)鐵:骨髓小粒中、晚幼紅細胞細胞外鐵：

分型特點（-）無顆粒（+）有少數(shù)鐵顆?；蚺家婅F小珠（++）有較多的鐵顆粒或小珠（+++）有很多的鐵顆粒、小珠和少數(shù)小塊狀（++++）有極多鐵顆粒、小珠，并有很多小塊細胞內(nèi)鐵：

分型鐵顆粒Ⅰ型鐵顆粒1～2顆Ⅱ型鐵顆粒3～5顆Ⅲ型鐵顆粒6～10顆或粗大顆粒1～4顆Ⅳ型鐵顆粒＞10顆或粗大顆粒≥5顆環(huán)鐵鐵顆粒5顆以上，圍繞核周三分之一以上

FE染色的注意事項選擇有骨髓小粒的涂片進行鐵染色加濃鹽酸要緩慢地加入并同時搖動試管觀察細胞外鐵時，應在復染前觀察骨髓小粒。可在復染一半血膜后，細胞內(nèi)鐵和細胞外鐵一同觀察。環(huán)境中的污染鐵常干擾結(jié)果觀察，尤其是細胞內(nèi)鐵，有時使內(nèi)鐵無法觀察。要注意兩者的鑒別觀察內(nèi)鐵時應注意調(diào)節(jié)微調(diào)

NAP染色步驟及原理:60s37℃45min10min晾干鏡檢沖洗沖洗沖洗固定液滴加在血膜上工作液滴加在血膜上甲基綠滴加在血膜上含萘酚底物細胞NAP釋放萘酚固紫B固定細胞：綠色復染陽性：紅色

NAP染色試劑：固定液（保存在4。C冰箱）二甲基甲酰胺（溶解底物）底物0.05M緩沖液（pH９.４-９.６）重氮鹽（固紫B）10g/L甲基綠（自備）工作液NAP染色的結(jié)果判斷：分級分值特點（-）0分胞質(zhì)呈淡藍色，無陽性染色顆粒（+）1分胞質(zhì)呈均勻淡紅色，無顆粒或含少量顆粒，但不超過胞質(zhì)1/4（++）2分全部胞質(zhì)中均勻紅色或出現(xiàn)較粗的紅色顆粒，不超過胞質(zhì)1/2（+++）3分胞質(zhì)中基本充滿紅色顆粒，但顆粒之間有空隙（++++）4分全部胞質(zhì)中充滿粗大紅色顆?；虺首霞t色，顆?；狙谏w胞核NAP染色的結(jié)果報告：數(shù)100個NUE結(jié)果：NAP陽性率為90%，200分（-）10個0×10＝0分（+）20個1×20＝20分（++）40個2×40＝80分（+++）20個3×20＝60分（++++）10個4×10＝40分陽性率90%200分

NAP染色的注意事項用新鮮的血片（一周之內(nèi)）。固定等時，務(wù)必要辨認涂片的正反面染色每一步驟加試劑時，務(wù)必覆蓋整個血膜，并要放置在水平的位置。沖洗時不應將反應液倒掉后沖洗染色前要做記號，以免出現(xiàn)差錯要有陽性對照：其他片子或同一片中的其他細胞現(xiàn)假設(shè)該病人NAP陽性率為85%，積分為213分PAS染色步驟及原理:晾干鏡檢固定液滴加在血膜上HIO4滴加在血膜上雪夫氏液滴加在血膜上美蘭滴加在血膜上5min15min（37℃）20min沖洗沖洗沖洗2min沖洗陽性：紅色復染固定細胞：藍色HIO4細胞糖類雙醛基無色品紅有色品紅

PAS染色試劑：固定液：95%乙醇

10g/LHIO4

雪夫氏液（Schiff）：主要由堿性品紅和偏重亞硫酸鈉組成復染液：10g/L美蘭

PAS染色的注意事項通過觀察中性成熟粒細胞的陽性情況可得知本次染色是否成功觀察各系細胞陽性情況PAS染色所用的骨髓片可以是陳舊的片子

細胞化學染色常規(guī)注意事項要有陽性對照：其他片子或同一片中的其他細胞。固定前務(wù)必要辨認涂片的正反面。細胞化學染色中的每一步驟中，加試劑時務(wù)必要覆蓋整個血膜，并要放置在水平的位置。沖洗時不應將反應液倒掉后沖洗，以免雜質(zhì)沉積。染色前要做記號，以免出現(xiàn)差錯。

（四）目的要求掌握：常見紅系疾病的骨髓象特點。掌握：鐵染色及NAP染色。熟悉：貧血患者的骨髓診斷過程及PAS染色（尤其是原理及臨床