腸道桿菌及檢驗課件

腸道桿菌及檢驗?zāi)c道桿菌及檢驗1腸道桿菌(entericbacilli)的概念:腸桿菌科(Enterobacteriaceae)共30個屬,120個種,大多為腸道正常菌群,少數(shù)為致病菌,一局部在發(fā)生移位,或宿主免疫力低下時,可成為條件致病菌。第一節(jié)概述腸道桿菌(entericbacilli)的概念:2正常菌群致病菌埃稀菌屬變形桿菌屬克雷伯菌屬腸桿菌屬沙雷菌屬枸櫞酸菌屬致病性大腸埃稀菌志賀菌屬沙門菌屬耶爾森菌屬大腸桿菌腸外感染普通變形桿菌:腸外感染、食物中毒醫(yī)院感染EPEC.ETECEIEC.EHECEAggEC腸內(nèi)感染食物中毒A群痢疾志賀菌B群福氏志賀菌C群鮑氏志賀菌D群宋內(nèi)氏志賀菌急性菌痢慢性菌痢中毒性菌痢傷寒沙門菌甲、乙、丙鼠傷寒沙門菌豬霍亂沙門菌腸炎沙門菌腸熱癥食物中毒敗血癥小腸結(jié)腸炎耶爾森菌食物中毒鼠疫耶爾森菌鼠疫

腸道桿菌正常菌群致病菌埃稀菌屬致病性大腸埃稀菌大腸桿菌3共性:1.形態(tài)染色:均為革蘭陰性桿菌,無芽孢、有菌毛,局部有莢膜或包膜,大多有周鞭毛(除志賀菌、克雷伯、鼠疫耶爾森菌之外)。2.營養(yǎng)要求:需氧或兼性厭氧。3.生化反響:具豐富的酶,生化反響活潑,并各不相同,為鑒定的主要依據(jù)。致病性越強,生化反響能力越弱。非致病菌(除變形桿菌外)均分解乳糖產(chǎn)酸,致病菌不發(fā)酵乳糖。常用選擇培養(yǎng)基:SS(Salmonella-shigella)。共性:4EMB(Eosin-methylene-blue)MAC(MacConkey)常用生化反響培養(yǎng)基:KIAMIU定科試驗:革蘭陰性桿菌、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽復(fù)原試驗陽性4、抗原構(gòu)造:有多種抗原菌體抗原(O抗原):脂多糖,耐熱(100℃不被破壞),有屬、種特異性,又有類屬抗原和特異性抗原之分,類屬抗原可引起交叉反響,凝集為顆粒狀。H抗原鞭毛蛋白,不耐熱(60℃30min即可破壞),特異性強,凝集為絮狀。EMB(Eosin-methylene-blue5外表抗原:包繞于O抗原的外面的多糖(不耐熱),不同細菌有不同的名稱(如大腸桿菌及志賀菌的K抗原,沙門菌的Vi抗原)抗原是腸道桿菌血清學(xué)分群和分型的依據(jù)。5、遺傳變異S-R變異H-O變異耐藥性變異6、傳播途徑經(jīng)消化道—以飲食、飲水為媒介體內(nèi)感染(免疫力下降、移位),為醫(yī)院感染主要病原菌群。外表抗原:包繞于O抗原的外面的多糖(不耐熱),不同細67.致病物質(zhì):菌毛、內(nèi)毒素、腸毒素8.檢驗方法標(biāo)本:腸內(nèi)標(biāo)本:新鮮糞便腸外標(biāo)本:血液、體液、尿液等

別離培養(yǎng)血液肉湯增菌血平板別離尿液、傷口分泌物MAC別離糞便:SS、EMB別離7.致病物質(zhì):菌毛、內(nèi)毒素、腸毒素7鑒定依據(jù):革蘭染色觸媒、氧化酶、硝酸鹽復(fù)原KIA、MIU、IMViC,其他生化反響血清玻片凝集(鑒定到種、型或血清型)鑒定依據(jù):8

第二節(jié)埃希菌屬

埃希菌屬(Escherichia)大腸埃希菌(E.coli)蟑螂埃希菌(E.blattae)格森埃希菌(E.fergusonii)赫爾曼埃希菌(E.hermannii)傷口埃希菌(E.vulneris)分布及種類:第二節(jié)埃希菌屬埃希菌屬(Escheric9一、生物學(xué)性狀(一)形態(tài)染色:革蘭陰性短桿菌、大多有周鞭毛,菌毛,少數(shù)有微莢膜。(二)培養(yǎng)特性普通平板:中等大小,圓形凸起,光滑灰白色。血平板:某些菌株呈β溶血SS、MAC平板:分解乳糖產(chǎn)酸呈粉紅色菌落EBM:蘭紫色菌落,有金屬光澤液體培養(yǎng)基:混濁生長一、生物學(xué)性狀(一)形態(tài)染色:革蘭陰性短桿菌、大多有周鞭毛,10SS大腸埃希菌SS大腸埃希菌11中國藍產(chǎn)氣腸桿菌中國藍產(chǎn)氣腸桿菌12(三)生化反響分解葡、乳、麥、甘,產(chǎn)酸產(chǎn)氣,蔗糖因株而易IMViC:++——,脲酶:—腸內(nèi)感染菌株:不發(fā)酵/緩慢發(fā)酵乳糖,KIA,MAC中可產(chǎn)堿。(四)抗原構(gòu)造:有O、H和K三種O抗原是血清學(xué)分型的根底,約170種。H抗原大于56種血清型的表示式:O:K:H,如:O111:K58:H2;O157:H7(三)生化反響13(五)抵抗力:自然界水中存活數(shù)周或數(shù)月。膽鹽、煌綠可抑制其生長,對氯霉素、鏈、慶大酶素敏感。易產(chǎn)生耐藥性:出現(xiàn)了產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase:ESBLs)菌株,那么對第三代頭孢菌素(頭孢噻肟、頭孢他定、頭孢哌酮、頭孢曲松等)耐藥。產(chǎn)ESBLs的革蘭陰性菌除了大腸埃希菌之外,常見的還有陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、弗勞地枸櫞酸菌、銅綠假單孢菌(五)抵抗力:14(一)致病物質(zhì):K抗原菌毛ETEC的菌毛稱定植因子(CFA)毒素:括內(nèi)毒素和外毒素(腸毒素)腸毒素不耐熱腸毒素(heatlabiletoxin,LT),65℃30min可破壞耐熱腸毒素(heatstabletoxin,ST)(二)所致疾病1、時機感染:移位到腸外組織、器官,引起化膿性感染,如泌尿系統(tǒng)感染、膽囊炎、腹膜炎等。2、腸內(nèi)感染:腹瀉(輕微腹瀉—霍亂樣腹瀉)二、致病性(一)致病物質(zhì):不耐熱腸毒素(heatlabileto15腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌(entertoxigenicEcoli,ETEC)腸致病型大腸埃希菌(enteropathogenicE.coli,EPEC)腸侵襲型大腸埃希菌(enteroinvasiveE.coli,EIEC)腸出血型大腸埃希菌(enterohemorrhagicEHEC)腸聚集型大腸埃希菌(enteroaggrehativeEcoliEAggEC)致病性大腸桿菌:腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌(entertoxigenicEc16引起腹瀉的大腸桿菌種類及主要特征菌株侵襲部位疾病與病癥致冰機制旅行者腹瀉,嬰幼兒腹瀉,水樣,伴惡心嘔吐、腹痛、脫水、低熱腸毒素致大量分泌液體、電解質(zhì)嬰幼兒腹瀉,水樣或粘液便,發(fā)熱,惡心嘔吐粘附、破壞上皮細胞志賀樣腹瀉,水樣致膿血便,含紅、白細胞、黏液,發(fā)熱腹痛侵襲和破壞腸粘膜上皮細胞出血性結(jié)腸炎,水樣便以血便,劇烈腹痛,低熱,HUS等溶原性噬菌體編碼SLT-I或II中斷腸黏膜上皮細胞蛋白質(zhì)合成嬰兒腹瀉,持續(xù)水樣便,嘔吐,低熱,脫水聚集性黏附上皮細胞,阻斷液體吸收小腸小腸結(jié)腸結(jié)腸小腸ETECEPECEIECEHECFAggEC引起腹瀉的大腸桿菌種類及主要特征菌株侵襲部位17

三、微生物學(xué)檢驗

(一)標(biāo)本采集(二)檢驗程序及方法三、微生物學(xué)檢驗18

麥康凱瓊脂蛋白胨20g氯化鈉5g瓊脂20-25g蒸餾水1000ml乳糖10g1%中性紅水溶液5ml膽鹽5g(或牛膽酸鈉4g與去氧膽酸鈉1g)麥康凱瓊脂19肉膏湯瓊脂(pH7.4)100ml乳糖1g1%中國藍水溶液(滅菌)

1%玫瑰紅酸乙醇溶液1ml

[注]1.中國藍與玫瑰紅酸在酸堿溶液中的反響(見表);此培養(yǎng)基pH約為7.4,制好后應(yīng)呈淡紫紅色。過堿呈藍色,均不適用。指示劑酸性堿性中國藍藍色微藍至無色玫瑰紅酸黃色紅色2.玫瑰紅酸能抑制革蘭氏陽性細菌的生長,但對大腸桿菌沒有抑制作用,故糞便標(biāo)本接種量不宜太多。3.多數(shù)腸道致病菌不分解乳糖,其菌落為透明或半透明、淡紅色;大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸,形成大而渾濁的藍色的菌落。4.中國藍水溶液需煮沸或高壓滅菌分鐘后應(yīng)用;玫瑰紅酸是乙醇溶液,無需滅菌,但加熱應(yīng)避開火焰。中國藍瓊脂肉膏湯瓊脂(pH7.4)1020MAC不長MAC不長21

伊紅美藍瓊脂(EMB瓊脂)肉膏湯瓊脂(pH7.4)100ml乳糖1g2%伊紅水溶液(滅菌)2ml0.5%美藍水溶液(滅菌)1ml

伊紅美藍瓊脂(EMB瓊脂)22

配方一配方二配方三配方四牛肉膏5

5牛心浸液

1000

肉膏液

850

胨57.5（胨）

5乳糖10151010膽鹽10（粗制）10（透析）150（ml）（牛膽汁）

8.5（混合）硫代硫酸鈉125118.5枸櫞酸鈉1215118.5枸櫞酸鐵0.5

1枸櫞酸鐵銨

14

磷酸氫二鈉

54

瓊脂25182013.5煌綠0.33

0.331.0

0.33中性紅22.5377025水1000

1000

SS瓊脂(四種配方

)

配方一配方二配方三23

蛋白胨10g葡萄糖1g氯化鈉5g乳糖10g牛肉膏3g硫代硫酸鈉瓊脂16g硫酸亞鐵水1000ml0.4%酚紅6ml

雙糖鐵培養(yǎng)基雙糖鐵培養(yǎng)基24腸道桿菌及檢驗課件25血液肉糖增菌血平板別離膿汁、痰、分泌物、尿糞便、直腸拭子MAC、EMB別離37℃18~24H可疑菌落涂、染、檢腸道外感染腸道感染初步鑒定菌落特征、革蘭染色KIA、MIU最終鑒定:系統(tǒng)生化反響報告ETEC生化反響腸毒素測定EPECEIECEHEC血清玻片凝集血液肉糖增菌血平板別離膿汁、痰、分泌物、尿糞便、直腸26大腸埃希菌的初步鑒定KIAMIU斜面底層產(chǎn)氣H2S動力吲哚脲酶MVPC觸媒氧化酶硝酸鹽AA+/-—+/-+—+——+—+KA——++—+——+—+KA———+—+——+—+

KA+—+/-+—+——+—+

大腸埃希菌的初步鑒定KIA27腸道桿菌及檢驗課件28腸道桿菌及檢驗課件29腸道桿菌及檢驗課件30MACMAC31MACMAC32EMBEMB33腸道桿菌及檢驗課件34腸道桿菌及檢驗課件35

腸道桿菌及檢驗?zāi)c道桿菌及檢驗36腸道桿菌(entericbacilli)的概念:腸桿菌科(Enterobacteriaceae)共30個屬,120個種,大多為腸道正常菌群,少數(shù)為致病菌,一局部在發(fā)生移位,或宿主免疫力低下時,可成為條件致病菌。第一節(jié)概述腸道桿菌(entericbacilli)的概念:37正常菌群致病菌埃稀菌屬變形桿菌屬克雷伯菌屬腸桿菌屬沙雷菌屬枸櫞酸菌屬致病性大腸埃稀菌志賀菌屬沙門菌屬耶爾森菌屬大腸桿菌腸外感染普通變形桿菌:腸外感染、食物中毒醫(yī)院感染EPEC.ETECEIEC.EHECEAggEC腸內(nèi)感染食物中毒A群痢疾志賀菌B群福氏志賀菌C群鮑氏志賀菌D群宋內(nèi)氏志賀菌急性菌痢慢性菌痢中毒性菌痢傷寒沙門菌甲、乙、丙鼠傷寒沙門菌豬霍亂沙門菌腸炎沙門菌腸熱癥食物中毒敗血癥小腸結(jié)腸炎耶爾森菌食物中毒鼠疫耶爾森菌鼠疫

腸道桿菌正常菌群致病菌埃稀菌屬致病性大腸埃稀菌大腸桿菌38共性:1.形態(tài)染色:均為革蘭陰性桿菌,無芽孢、有菌毛,局部有莢膜或包膜,大多有周鞭毛(除志賀菌、克雷伯、鼠疫耶爾森菌之外)。2.營養(yǎng)要求:需氧或兼性厭氧。3.生化反響:具豐富的酶,生化反響活潑,并各不相同,為鑒定的主要依據(jù)。致病性越強,生化反響能力越弱。非致病菌(除變形桿菌外)均分解乳糖產(chǎn)酸,致病菌不發(fā)酵乳糖。常用選擇培養(yǎng)基:SS(Salmonella-shigella)。共性:39EMB(Eosin-methylene-blue)MAC(MacConkey)常用生化反響培養(yǎng)基:KIAMIU定科試驗:革蘭陰性桿菌、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽復(fù)原試驗陽性4、抗原構(gòu)造:有多種抗原菌體抗原(O抗原):脂多糖,耐熱(100℃不被破壞),有屬、種特異性,又有類屬抗原和特異性抗原之分,類屬抗原可引起交叉反響,凝集為顆粒狀。H抗原鞭毛蛋白,不耐熱(60℃30min即可破壞),特異性強,凝集為絮狀。EMB(Eosin-methylene-blue40外表抗原:包繞于O抗原的外面的多糖(不耐熱),不同細菌有不同的名稱(如大腸桿菌及志賀菌的K抗原,沙門菌的Vi抗原)抗原是腸道桿菌血清學(xué)分群和分型的依據(jù)。5、遺傳變異S-R變異H-O變異耐藥性變異6、傳播途徑經(jīng)消化道—以飲食、飲水為媒介體內(nèi)感染(免疫力下降、移位),為醫(yī)院感染主要病原菌群。外表抗原:包繞于O抗原的外面的多糖(不耐熱),不同細417.致病物質(zhì):菌毛、內(nèi)毒素、腸毒素8.檢驗方法標(biāo)本:腸內(nèi)標(biāo)本:新鮮糞便腸外標(biāo)本:血液、體液、尿液等

別離培養(yǎng)血液肉湯增菌血平板別離尿液、傷口分泌物MAC別離糞便:SS、EMB別離7.致病物質(zhì):菌毛、內(nèi)毒素、腸毒素42鑒定依據(jù):革蘭染色觸媒、氧化酶、硝酸鹽復(fù)原KIA、MIU、IMViC,其他生化反響血清玻片凝集(鑒定到種、型或血清型)鑒定依據(jù):43

第二節(jié)埃希菌屬

埃希菌屬(Escherichia)大腸埃希菌(E.coli)蟑螂埃希菌(E.blattae)格森埃希菌(E.fergusonii)赫爾曼埃希菌(E.hermannii)傷口埃希菌(E.vulneris)分布及種類:第二節(jié)埃希菌屬埃希菌屬(Escheric44一、生物學(xué)性狀(一)形態(tài)染色:革蘭陰性短桿菌、大多有周鞭毛,菌毛,少數(shù)有微莢膜。(二)培養(yǎng)特性普通平板:中等大小,圓形凸起,光滑灰白色。血平板:某些菌株呈β溶血SS、MAC平板:分解乳糖產(chǎn)酸呈粉紅色菌落EBM:蘭紫色菌落,有金屬光澤液體培養(yǎng)基:混濁生長一、生物學(xué)性狀(一)形態(tài)染色:革蘭陰性短桿菌、大多有周鞭毛,45SS大腸埃希菌SS大腸埃希菌46中國藍產(chǎn)氣腸桿菌中國藍產(chǎn)氣腸桿菌47(三)生化反響分解葡、乳、麥、甘,產(chǎn)酸產(chǎn)氣,蔗糖因株而易IMViC:++——,脲酶:—腸內(nèi)感染菌株:不發(fā)酵/緩慢發(fā)酵乳糖,KIA,MAC中可產(chǎn)堿。(四)抗原構(gòu)造:有O、H和K三種O抗原是血清學(xué)分型的根底,約170種。H抗原大于56種血清型的表示式:O:K:H,如:O111:K58:H2;O157:H7(三)生化反響48(五)抵抗力:自然界水中存活數(shù)周或數(shù)月。膽鹽、煌綠可抑制其生長,對氯霉素、鏈、慶大酶素敏感。易產(chǎn)生耐藥性:出現(xiàn)了產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase:ESBLs)菌株,那么對第三代頭孢菌素(頭孢噻肟、頭孢他定、頭孢哌酮、頭孢曲松等)耐藥。產(chǎn)ESBLs的革蘭陰性菌除了大腸埃希菌之外,常見的還有陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、弗勞地枸櫞酸菌、銅綠假單孢菌(五)抵抗力:49(一)致病物質(zhì):K抗原菌毛ETEC的菌毛稱定植因子(CFA)毒素:括內(nèi)毒素和外毒素(腸毒素)腸毒素不耐熱腸毒素(heatlabiletoxin,LT),65℃30min可破壞耐熱腸毒素(heatstabletoxin,ST)(二)所致疾病1、時機感染:移位到腸外組織、器官,引起化膿性感染,如泌尿系統(tǒng)感染、膽囊炎、腹膜炎等。2、腸內(nèi)感染:腹瀉(輕微腹瀉—霍亂樣腹瀉)二、致病性(一)致病物質(zhì):不耐熱腸毒素(heatlabileto50腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌(entertoxigenicEcoli,ETEC)腸致病型大腸埃希菌(enteropathogenicE.coli,EPEC)腸侵襲型大腸埃希菌(enteroinvasiveE.coli,EIEC)腸出血型大腸埃希菌(enterohemorrhagicEHEC)腸聚集型大腸埃希菌(enteroaggrehativeEcoliEAggEC)致病性大腸桿菌:腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌(entertoxigenicEc51引起腹瀉的大腸桿菌種類及主要特征菌株侵襲部位疾病與病癥致冰機制旅行者腹瀉,嬰幼兒腹瀉,水樣,伴惡心嘔吐、腹痛、脫水、低熱腸毒素致大量分泌液體、電解質(zhì)嬰幼兒腹瀉,水樣或粘液便,發(fā)熱,惡心嘔吐粘附、破壞上皮細胞志賀樣腹瀉,水樣致膿血便,含紅、白細胞、黏液,發(fā)熱腹痛侵襲和破壞腸粘膜上皮細胞出血性結(jié)腸炎,水樣便以血便,劇烈腹痛,低熱,HUS等溶原性噬菌體編碼SLT-I或II中斷腸黏膜上皮細胞蛋白質(zhì)合成嬰兒腹瀉,持續(xù)水樣便,嘔吐,低熱,脫水聚集性黏附上皮細胞,阻斷液體吸收小腸小腸結(jié)腸結(jié)腸小腸ETECEPECEIECEHECFAggEC引起腹瀉的大腸桿菌種類及主要特征菌株侵襲部位52

三、微生物學(xué)檢驗

(一)標(biāo)本采集(二)檢驗程序及方法三、微生物學(xué)檢驗53

麥康凱瓊脂蛋白胨20g氯化鈉5g瓊脂20-25g蒸餾水1000ml乳糖10g1%中性紅水溶液5ml膽鹽5g(或牛膽酸鈉4g與去氧膽酸鈉1g)麥康凱瓊脂54肉膏湯瓊脂(pH7.4)100ml乳糖1g1%中國藍水溶液(滅菌)

1%玫瑰紅酸乙醇溶液1ml

[注]1.中國藍與玫瑰紅酸在酸堿溶液中的反響(見表);此培養(yǎng)基pH約為7.4,制好后應(yīng)呈淡紫紅色。過堿呈藍色,均不適用。指示劑酸性堿性中國藍藍色微藍至無色玫瑰紅酸黃色紅色2.玫瑰紅酸能抑制革蘭氏陽性細菌的生長,但對大腸桿菌沒有抑制作用,故糞便標(biāo)本接種量不宜太多。3.多數(shù)腸道致病菌不分解乳糖,其菌落為透明或半透明、淡紅色;大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸,形成大而渾濁的藍色的菌落。4.中國藍水溶液需煮沸或高壓滅菌分鐘后應(yīng)用;玫瑰紅酸是乙醇溶液,無需滅菌,但加熱應(yīng)避開火焰。中國藍瓊脂肉膏湯瓊脂(pH7.4)1055MAC不長MAC不長56

伊紅美藍瓊脂(EMB瓊脂)肉膏湯瓊脂(pH7.4)100ml乳糖1g2%伊紅水溶液(滅菌)2ml0.5%美藍水溶液(滅菌)1ml

伊紅美藍瓊脂(EMB瓊脂)57

配方一配方二配方三配方四牛肉膏5

5牛心浸液

1000

肉膏液

850

胨57.5（胨）

5乳糖10151010膽鹽10（粗制）10（透析）150（ml）（牛膽汁）

8.5（混合）硫代硫酸鈉125118.5枸櫞酸鈉1215118.5枸櫞酸鐵0.5

1枸櫞酸鐵銨

14

磷酸氫二鈉

54

瓊脂25182013.5煌綠0.33

0.331.0

0.33中