開郁健脾法對脾虛大鼠血清胃泌素、尿D-木糖影響的實驗分析

開郁健脾法對脾虛大鼠血清胃泌素、尿D-木糖影響的實驗分析

【摘要】

目的

觀察具有開郁健脾功效中藥復(fù)方對脾虛大鼠體質(zhì)量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄率的影響。方法

以破氣苦降加饑飽失常的方法建立脾虛證大鼠模型,隨機分組，實驗組中藥復(fù)方煎劑灌胃，以ELISA法測定大鼠血清胃泌素,間苯三酚法測定D-木糖排泄率。結(jié)果

(1)與模型組比較，中藥復(fù)方低、中、高劑量組體質(zhì)量明顯增長(P<0.01)。(2)與模型組比較，中藥復(fù)方低、高劑量組、中劑量組尿D-木糖排泄率顯著增高(P<0.05、P<0.01)()。結(jié)論

開郁健脾中藥復(fù)方有促進胃腸吸收的作用。

【關(guān)鍵詞】

小兒厭食;血清胃泌素;尿D-木糖排泄率;開郁健脾;中藥復(fù)方小兒厭食是指小兒較長時期見食不貪、食欲不振、厭惡進食的病癥，是兒科門診常見病之一，城市兒童發(fā)病率較高，各年齡兒童均可發(fā)病，尤以1～6歲小兒多見

[1]。筆者長期跟隨導(dǎo)師出診，導(dǎo)師擅長運用開郁健脾之法治療小兒厭食，每獲良效。為探討開郁健脾法組成中藥復(fù)方的療效機理,參照曾益宏等人的方法建立大鼠脾虛模型[2]，以開郁健脾中藥復(fù)方為施加因素，探討其療效機理。Onecannotgetbloodfromastone.

1

材料與方法Self-confidenceisthefirstrequisitetohumangreatness.

1.1

動物與分組選用SD大鼠40只[雌雄各半,(180±20)g，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證：SCXK(遼)2009-2005]，將大鼠隨機分為5組，分別為正常組，模型組，中藥復(fù)方低、中、高劑量組，每組8只，分籠飼養(yǎng)，自由飲水。飼料采用標準顆粒飼料(由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗室提供)。Thereismoretroubleinhavingnothingtodothaninhavingmuchtodo.

1.2

主要試劑和儀器大鼠胃泌素試劑盒(RD公司生產(chǎn)，批號09-04)，D-木糖試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20090722)，紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，T6新世紀),全自動酶標儀(奧地利安圖公司，2010)(醫(yī)藥學(xué)/臨床醫(yī)學(xué)論文)。Athingisbiggerforbeingshared.

1.3

藥物制備(1)造模藥物制備。小承氣湯：

大黃∶厚樸∶枳實=4∶5∶3。常規(guī)煎法，然后濃縮至500

%。(2)實驗藥物制備。中藥復(fù)方：黨參12

g、白術(shù)9

g、半夏6

g、雞內(nèi)金9

g、炒麥芽9

g、山楂9

g、厚樸7

g、郁金9

g。常規(guī)煎法，然后濃縮至低劑量濃度116.7

%、中劑量濃度350

%、高劑量濃度525

%，冷凍保存。1.4

造模方法采用破氣苦降法加饑飽失常復(fù)制脾虛動物模型[3-4]，本模型是繼大黃致脾虛模型之后比較廣泛的脾虛模型[3]。各組大鼠除了正常組外每日灌飼小承氣湯50

g/kg，隔日半量進食，自由飲水，造模15

d結(jié)束，測量大鼠的體質(zhì)量，以大鼠體質(zhì)量下降10

%～15

%)為造模成功(與對照組比較)。1.5

給藥方法正常對照組與模型組自由飲水，不限制飲食，分籠飼養(yǎng)。中藥復(fù)方低劑量組、中劑量組按1

mL/100

g、每日1次灌胃，高劑量組按1

mL/100

g、每日2次灌胃，連續(xù)給藥4周。1.6

血清胃泌素測定中藥復(fù)方低、中、高劑量組在最后1次給藥后禁食24

h，正常組與模型組禁食24

h，各組均不限制飲水，術(shù)前給予各組大鼠10

%水合氯醛腹腔注射1

mL/100

g，大鼠麻醉后仰臥手術(shù)臺上，用手術(shù)剪剪開腹腔，找到腹主動脈，用注射器從腹主動脈采血2

mL，快速離心分離血清，按說明書由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)免疫室測定。Onecannotbeintwoplaceatonce.

1.7

尿D-木糖排泄率測定采用間苯三酚法[6]，最后1次給藥后，各組大鼠禁食不禁水12

h,3

%

D-木糖溶液灌胃,每只1

mL/100

g,然后收集5

h尿液(期間禁食不禁水)，記錄尿量。取尿液5

μL,測試前將尿液用蒸餾水9倍稀釋至50

μL檢測,加入間苯三酚試劑3

mL,

分別加入蒸餾水0.05

mL(

試劑空白管)，收集未服D-木糖尿液(測定空白管)0.05

mL，1.33

mmol/L

D-木糖標準應(yīng)用液0.05

mL(標準管)，測定血清0.05

mL(測定管)，各管同時放入100

℃沸水中煮沸4

min，取出立即放冰水中冷卻，混勻后，554

nm波長，水調(diào)零比色，測各管吸收光度OD值。計算公式：尿木糖(mmol/L)=(測定管OD值-測定空白管OD值)/(標準管OD值-試劑空白管OD值)×標準管濃度(1.33

mmol/L)×標本測定前稀釋倍數(shù)(10倍)。5

h尿D-木糖排泄率=尿木糖(mmol/L)×150×5

h尿量(L)×1/1000/大鼠灌D-木糖mL×3

%。Firsttry,andthentrust.

1.8

統(tǒng)計方法采用統(tǒng)計軟件SPSS11.5進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以±s表示，大鼠體質(zhì)量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄率以單因素方差分析進行統(tǒng)計分析。

論文教育信息網(wǎng)

2

結(jié)果

2.1

大鼠造模前后體質(zhì)量下降率模型組、中藥復(fù)方低、中、高劑量組與正常組比較，差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01)，體質(zhì)量下降率>10

%,造模成功。見表1。2.2

模型組與實驗組治療前后體質(zhì)量增長率比較Ausefultradeisamineofgold.

中藥復(fù)方低、中、高劑量組與模型組比較，差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01),治療后實驗組體質(zhì)量明顯增長。見表2。2.3

模型組與實驗組造模前后體質(zhì)量增長率比較論文分為專題型、論辯型、綜述型和綜合型四大類

中藥復(fù)方低、中、高劑量組與模型組比較，差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01),實驗組比模型組體質(zhì)量增加更明顯。見表3。表1

各組大鼠體質(zhì)量下降率比較表2

模型組與實驗組治療前后體質(zhì)量增長率比較表3

模型組與實驗組造模前后體質(zhì)量增長率比較

2.4

大鼠尿D-木糖排泄率測定結(jié)果中藥復(fù)方低、高劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計意義(P<0.05);中劑量組與模型組比較，差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01)。中藥復(fù)方能促進D-木糖的吸收。見表4。Deathwhenitcomeswillhavenodenial.

表4

大鼠尿D-木糖排泄率測定結(jié)果

(±s)項目正常組模型組低劑量組中劑量組高劑量組n88888排泄率(%)26.2±5.9*

16.5±5.127.5±5.6*

32.5±6.2**29.4±5.8*

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.012.5

大鼠血清胃泌素測定結(jié)果中藥復(fù)方低、中、高劑量組與模型組比較,差異無統(tǒng)計意義(P>0.05)，中藥復(fù)方對血清胃泌素?zé)o影響，見表5。Thepeacockhasfairfeathers,butfoul.

表5

大鼠血清胃泌素測定結(jié)果

(±s，pg/mL)項目正常組模型組低劑量組中劑量組高劑量組n88888胃泌素30.23±0.8030.33±0.7229.9±1.0428.9±1.3729.5±0.593

討論3.1

厭食與健脾開郁法

小兒厭食是由于小兒臟腑嬌嫩，脾常不足，若飲食不當(dāng),饑飽不勻,饑則傷胃,飽則傷脾,致使脾胃功能紊亂。小兒臟腑嬌嫩,易虛易實。如施用寒涼攻伐過度,或誤用溫燥，或攻下太過,耗傷津液,損傷脾胃,致使脾胃升降失調(diào),納化失常而厭食。小兒乳食不知自節(jié),饑飽無度，故有“乳貴有食,食貴有節(jié),飲食自倍,脾胃乃傷”之說

。兒童在生長發(fā)育過程中受到過分的溺愛，有的父母過于嬌愛孩子,滋生了任性、耍嬌等不良習(xí)慣,餐時不進,飯后零食,干擾了脾胃的正常規(guī)律。導(dǎo)師張君認為，小兒厭食發(fā)病究其原因部分是由于所欲不遂，而致肝郁，肝氣郁結(jié)，反侮脾土，脾虛小兒每每伴有肝郁，小兒厭食以肝郁脾虛為多，運用開郁健脾，每獲良效，因此以開郁健脾之法立方。黨參甘平，入脾肺，補氣健脾;郁金辛苦寒，入心、肝膽，活血行氣解郁。兩者共同為君，開郁健脾，補而不滯。白術(shù)甘苦平，入脾胃，健脾益氣，燥濕利水;雞內(nèi)金甘平，入脾胃、小腸、膀胱，運脾和胃，消食健脾;炒麥芽甘平，入脾胃、肝，消食疏肝;山楂酸甘溫，入脾胃、肝，消食化積，行氣散瘀。四者共同為臣，運脾和胃消食。半夏辛溫，入肺、脾胃，降逆止嘔，散結(jié)消痞為佐。厚樸辛、苦、溫，入脾胃、大腸、肺，燥濕化痰，下氣除滿為使。全方開郁健脾，消食化積，使脾司運化，胃司受納，脾胃調(diào)和，肝氣得疏，脾胃調(diào)和，方能知饑納食，食而得化。3.2

模型建立與選擇查閱近幾年小兒厭食動物模型，對此研究的比較少，主要是運用高脂、高蛋白飲食喂食幼鼠[7]，造成小兒厭食的動物模型。本實驗選擇破氣苦降加饑飽失常的方法建立脾虛證大鼠模型,該模型是繼大黃所致脾虛模型之后比較廣泛的模型，也是比較公認的模型。雖然它不如大黃所建立的脾虛模型常見，但是臨床上小兒厭食出現(xiàn)泄瀉的比較少，出現(xiàn)肝郁脾虛的比較多，與所選擇動物模型比較接近。3.3

健脾開郁中藥復(fù)方對體質(zhì)量的影響小承氣湯與隔日半量飲食相結(jié)合對大鼠進行造模，比較第1

d與第15

d的大鼠體質(zhì)量變化，模型組與正常組比較體質(zhì)量下降率大于10

%,模型組，中藥復(fù)方低、中、高劑量組與正常組比較差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01),說明造模成功。經(jīng)過開郁健脾中藥復(fù)方治療4周后，比較第43

d與第1

d大鼠體質(zhì)量增長率，結(jié)果表明，中藥復(fù)方低、中、高劑量組與模型組比較差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01)。說明經(jīng)過具有開郁健脾作用的中藥復(fù)方治療后，大鼠體質(zhì)量與造模前大鼠體質(zhì)量比較明顯增長，模型組增長緩慢，中藥復(fù)方能促進大鼠體質(zhì)量增長。尤其以最后1周治療組大鼠體質(zhì)量增長最快，治療第1周治療組大鼠體質(zhì)量增加不明顯，因此脾虛大鼠需要經(jīng)過一段時間的治療才能達到滿意的效果,短時間療效不令人滿意。模型組與實驗組造模前后體質(zhì)量增長率比較，結(jié)果表明，中藥復(fù)方低、中、高劑量組與模型組比較差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01)，說明中藥復(fù)方能夠促進脾虛大鼠體質(zhì)量增長,治療脾虛大鼠。低、中、高劑量組組間比較P>0.05,說明中藥復(fù)方各劑量組大鼠體質(zhì)量增長無明顯的差異。論文分為專題型、論辯型、綜述型和綜合型四大類

3.4

健脾開郁中藥復(fù)方對大鼠尿D-木糖排泄率、血清胃泌素影響造模大鼠脾氣虛弱，脾失健運，脾不能運化水谷精微，物質(zhì)代謝障礙表現(xiàn)在糖代謝方面，則會出現(xiàn)D-木糖吸收低下?？诜﨑-木糖后一定時間內(nèi)血和尿中D-木糖含量基本上可反映小腸吸收功能狀況[8]。D-木糖口服吸收易化擴散，需消耗能量，與細胞膜表面的Na+|K+|ATP酶有關(guān)。有研究顯示[9],脾虛的時候Na+|K+|ATP酶活性降低,小腸黏膜具有吸收功能的絨毛壽命、長度變短,數(shù)量減少,從而導(dǎo)致D-木糖吸收降低。尿D-木糖排泄率作為脾虛證診斷及療效評價的客觀指標[10],本實驗與這樣的觀點相符。結(jié)果表明，中藥復(fù)方低、高劑量組大鼠與模型組大鼠比較差異有統(tǒng)計意義(P<0.05),中劑量組與模型組比較差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01),中藥復(fù)方能夠促進D-木糖吸收,提高尿D-木糖排泄率，促進小腸的吸收功能。治療后,各治療組與正常組比較尿D-木糖排泄率無明顯差異(P>0.05),提示治療后尿D-木糖排泄率已恢復(fù)正常水平。中藥復(fù)方低、中、高劑量組之間組間比較差異也無統(tǒng)計意義(P>0.05),說明無明顯的量效關(guān)系。血清胃泌素是胃腸道主要的激素之一[11]，由G細胞分泌,以胃竇部最多,其次是胃底、十二指腸、空腸等處,促進胃黏膜和壁細胞的增長以及胃腸道的蠕動。結(jié)果顯示，中藥復(fù)方低、中、高劑量組大鼠與模型組大鼠比較差異無統(tǒng)計意義(P>0.05),說明中藥復(fù)方對脾虛大鼠血清胃泌素影響很小，具有開郁健脾中藥復(fù)方治療脾虛不是通過血清胃泌素實現(xiàn)的。Childrenandfoolscannotlie.

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