血液腫瘤與檢測(cè)課件

淋巴造血系統(tǒng)腫瘤及檢測(cè)1淋巴造血系統(tǒng)腫瘤及檢測(cè)1概念：

在機(jī)體各種致瘤因素的作用下，局部組織的細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長的正常調(diào)控，與正常組織相比，其增生和分化異常，導(dǎo)致克隆性增生而形成的新生物，常形成腫塊。特性：1.獲得不斷增殖的能力→相對(duì)無限制性自主性生長；2.失去正常分化成熟的能力→異常的形態(tài)、代謝和功能。腫瘤的概念淋巴造血系統(tǒng)腫瘤？2概念：腫瘤的概念淋巴造血系統(tǒng)腫瘤？2我國死亡率前十位惡性腫瘤3我國死亡率前十位惡性腫瘤3造血系統(tǒng)/組織胚胎期（中胚葉造血期）：卵黃囊、肝、脾胎兒期（肝脾造血期）：肝、脾、骨髓、胸腺、淋巴結(jié)出生后（骨髓造血期）：骨髓、淋巴結(jié)生成淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞4造血系統(tǒng)/組織胚胎期（中胚葉造血期）：卵黃囊、肝、脾4血細(xì)胞的發(fā)育與成熟造血細(xì)胞的生長發(fā)育是一個(gè)連續(xù)不斷的復(fù)雜過程，造血器官內(nèi)的各種造血細(xì)胞，按一定的規(guī)律發(fā)育成為各種成熟的血細(xì)胞，然后釋放入血循環(huán)中。

增殖分化成熟釋放5血細(xì)胞的發(fā)育與成熟造血細(xì)胞的生長發(fā)育是一個(gè)連續(xù)不斷的復(fù)雜過程造血干細(xì)胞的分化6造血干細(xì)胞的分化6淋巴造血系統(tǒng)腫瘤骨髓增生異常綜合征（MDS）白血?。ˋML、ALL、CML、CLL）淋巴瘤(HL、NHL)多發(fā)性骨髓瘤（MM）骨髓增生性疾病（MPN）(CML、ET、PV、PMF)7淋巴造血系統(tǒng)腫瘤骨髓增生異常綜合征（MDS）7骨髓增生異常綜合征（MDS）骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndromes,MDS)是起源于造血干細(xì)胞的一組異質(zhì)性髓系克隆性疾病，特點(diǎn)是髓系細(xì)胞分化及發(fā)育異常，表現(xiàn)為無效造血、難治性血細(xì)胞減少、造血功能衰竭，高風(fēng)險(xiǎn)向急性髓系白血?。ˋML）轉(zhuǎn)化。8骨髓增生異常綜合征（MDS）骨髓增生異常綜合征(myelod骨髓增生異常綜合征（MDS）9骨髓增生異常綜合征（MDS）9白血病白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病?？寺⌒园籽〖?xì)胞因?yàn)樵鲋呈Э?、分化障礙、凋亡受阻等機(jī)制在骨髓和其他造血組織中大量增殖累積，并浸潤其他組織和器官，同時(shí)正常造血受抑制。按白血病細(xì)胞的分化成熟程度及自然病程，可分為急、慢性白血病。按病變細(xì)胞系列分類，包括髓系的粒、單、紅、巨核系和淋巴系的T和B細(xì)胞系。臨床上常將白血病分為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）、急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）、慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）、慢性淋巴細(xì)胞白血病等（CLL）。10白血病白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病。克隆性白血病細(xì)胞白血?。╨eukemia）急性白血病A慢性白血病C淋巴系L髓系MAMLALLCLLCML11白血病（leukemia）急性白血病A慢性白血病C淋巴瘤淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴結(jié)和淋巴組織，其發(fā)生大多與免疫應(yīng)答過程中淋巴細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生的某種免疫細(xì)胞惡變有關(guān)，是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤。臨床上常按組織病理學(xué)改變將其分為非霍奇金淋巴瘤（NHL）和霍奇金淋巴瘤（HL）兩類12淋巴瘤淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴結(jié)和淋巴組織，其發(fā)淋巴瘤13淋巴瘤13多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤（MM）是漿細(xì)胞惡性增殖的結(jié)果。其特征為骨髓漿細(xì)胞異常增生伴有單克隆免疫球蛋白（M蛋白）過度生成，極少數(shù)患者可以是不產(chǎn)生M蛋白的未分泌型MM。14多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤（MM）是漿細(xì)胞惡性增殖的結(jié)果。14漿細(xì)胞?。ǘ喟l(fā)性骨髓瘤）15漿細(xì)胞?。ǘ喟l(fā)性骨髓瘤）15骨髓增生性疾病骨髓增生性疾病指分化相對(duì)成熟的一系或多系骨髓細(xì)胞不斷地克隆性增殖所致的一組腫瘤性疾病，也稱骨髓增殖性腫瘤（MPNs）。MPN可分為慢性粒細(xì)胞白血?。–ML），真性紅細(xì)胞增多癥（PV），原發(fā)性血小板增多癥（ET），原發(fā)性骨髓纖維化（PMF）。（是造血干細(xì)胞異?？寺《鸬某衫w維細(xì)胞反應(yīng)性增生）16骨髓增生性疾病骨髓增生性疾病指分化相對(duì)成熟的一系或多系骨髓細(xì)骨髓增生性疾病17骨髓增生性疾病17骨髓增生異常綜合征MDS白血病AML急性髓細(xì)胞白血病ALL急性淋巴細(xì)胞白血病CML慢性髓細(xì)胞白血病CLL慢性淋巴細(xì)胞白血病淋巴瘤HL霍奇金淋巴瘤NHL非霍奇金淋巴瘤多發(fā)性骨髓瘤MM骨髓增殖性腫瘤（MPN/MPD）CML慢性髓細(xì)胞白血病ET原發(fā)性血小板增多癥PV真性紅細(xì)胞增多癥PMF原發(fā)性骨髓纖維化18骨髓增生異常綜合征MDS白血病AML急性髓細(xì)胞白血病ALL急急性白血病(AML、ALL)骨髓增生異常綜合征(MDS)慢性白血病(CML、CLL)淋巴瘤(HL、NHL)多發(fā)性骨髓瘤(MM)骨髓增生性疾病(CML、PV、ET、PMF)19急性白血病(AML、ALL)慢性白血病(CML、CLL)19淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的檢測(cè)淋巴造血系統(tǒng)腫瘤精確的診斷分型是正確選用化療方案的前提。目前國際上通用的是MICM分型。細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology)：骨髓穿刺、骨髓活檢免疫學(xué)(Immunology):流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics)：染色體核型分析分子生物學(xué)(Molecular)

:FISH、突變分析（PCR、片段分析、基因測(cè)序）20淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的檢測(cè)淋巴造血系統(tǒng)腫瘤精確的診斷分型是正確選細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology)通過骨髓細(xì)胞學(xué)可以了解骨髓中各種細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞形態(tài)、有無異常細(xì)胞等，從而協(xié)助診斷疾病、療效觀察、判斷預(yù)后。骨髓穿刺：采取骨髓液骨髓活檢：特制的穿刺針取一小塊骨髓組織21細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology)通過骨髓細(xì)胞學(xué)可以了解骨髓免疫學(xué)(Immunology)

根據(jù)不同種類的細(xì)胞以及細(xì)胞在不同分化階段表達(dá)的抗原差異，通過免疫學(xué)方法識(shí)別抗原從而檢測(cè)細(xì)胞類型及數(shù)量。粒細(xì)胞成熟過程。22免疫學(xué)(Immunology)

根據(jù)不同種類的細(xì)胞以及細(xì)胞在2323流式細(xì)胞術(shù)利用細(xì)胞特異抗原，通過流式細(xì)胞儀對(duì)血細(xì)胞種類、數(shù)量等特征進(jìn)行分析，從而協(xié)助診斷疾病。24流式細(xì)胞術(shù)利用細(xì)胞特異抗原，通過流式細(xì)胞儀對(duì)血細(xì)胞種類、數(shù)量細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics)：染色體核型分析t(9;22)(q32;q23.2)inCML25細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics)：染色體核型分析t(9分子生物學(xué)(Molecular)2R2G陰性細(xì)胞1R1G2F陽性細(xì)胞FISH（熒光原位雜交技術(shù)）,是利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交，檢測(cè)基因變異情況。BCR/ABL融合，典型的陽性細(xì)胞信號(hào)模式為1R1G2F，由于斷裂點(diǎn)位置不同,以及基因缺失，還可能出現(xiàn)其它陽性信號(hào)模式。26分子生物學(xué)(Molecular)2R2G陰性細(xì)胞1R1G2分子生物學(xué)(Molecular)檢測(cè)方法：

RQ-PCR,

Sanger測(cè)序、二代基因測(cè)序、片段分析檢測(cè)項(xiàng)目：

融合基因篩查、基因表達(dá)檢測(cè)、基因序列突變檢測(cè)27分子生物學(xué)(Molecular)檢測(cè)方法：27定性分析做什么？融合基因篩查怎么做？BloodSampleRNAcDNARNAExtractionRTQRT-PCR28定性分析BloodRNAcDNARNAExtractio定量分析做什么？融合基因基因表達(dá)怎么做？BloodSampleRNAcDNARNAExtractionRTQRT-PCR29定量分析BloodRNAcDNARNAExtractio擴(kuò)增曲線圖：橫坐標(biāo)：擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（Cycle）；縱坐標(biāo)：熒光強(qiáng)度每個(gè)循環(huán)進(jìn)行一次熒光信號(hào)的收集熒光基團(tuán)熒光檢測(cè)元件30擴(kuò)增曲線圖：熒光基團(tuán)熒光檢測(cè)元件30突變分析基因突變點(diǎn)突變置換插入缺失多點(diǎn)突變重排插入缺失Sanger測(cè)序、SNE片段分析31突變分析基因突變點(diǎn)突變置換插入缺失多點(diǎn)突變重排插入缺失Sanger測(cè)序確定一條染色體片斷上的堿基順序。Sanger法：在PCR時(shí)加入熒光標(biāo)記的復(fù)制終止劑，比如ddA,ddT,ddC,ddG（相應(yīng)于4種堿基）ddX的兩個(gè)作用：可以當(dāng)作正常堿基參與復(fù)制一旦鏈入DNA中，其后就不能再繼續(xù)連接它們具有共同的起始點(diǎn)，但終止在不同的的核苷酸上誰終止，堿基就是誰32Sanger測(cè)序確定一條染色體片斷上的堿基順序。323333SNE

(TPMT分型)34SNE(TPMT分型)34片段分析技術(shù)基礎(chǔ)：熒光標(biāo)記的引物片段分析=分離熒光標(biāo)記的片段并檢測(cè)其相對(duì)大小熒光標(biāo)記的DNA片段電泳數(shù)據(jù)分析35片段分析技術(shù)基礎(chǔ)：熒光標(biāo)記的引物熒光標(biāo)記的DNA片段電泳數(shù)據(jù)淋巴造血系統(tǒng)腫瘤檢測(cè)36淋巴造血系統(tǒng)腫瘤檢測(cè)36MPN送檢診斷流程37MPN送檢診斷流程37總結(jié)：1.發(fā)生：基因→增生和分化異?！鷶?shù)量及形態(tài)、代謝、功能的異常2.分類：3.檢測(cè):MICM淋巴系髓系A(chǔ)LLCLLAMLCMLMDSMPNHL、NHL、MM原始及早幼細(xì)胞相對(duì)成熟細(xì)胞38總結(jié)：1.發(fā)生：基因→增生和分化異常→數(shù)量及形態(tài)、代謝、功能謝謝！39謝謝！39淋巴造血系統(tǒng)腫瘤及檢測(cè)40淋巴造血系統(tǒng)腫瘤及檢測(cè)1概念：

在機(jī)體各種致瘤因素的作用下，局部組織的細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長的正常調(diào)控，與正常組織相比，其增生和分化異常，導(dǎo)致克隆性增生而形成的新生物，常形成腫塊。特性：1.獲得不斷增殖的能力→相對(duì)無限制性自主性生長；2.失去正常分化成熟的能力→異常的形態(tài)、代謝和功能。腫瘤的概念淋巴造血系統(tǒng)腫瘤？41概念：腫瘤的概念淋巴造血系統(tǒng)腫瘤？2我國死亡率前十位惡性腫瘤42我國死亡率前十位惡性腫瘤3造血系統(tǒng)/組織胚胎期（中胚葉造血期）：卵黃囊、肝、脾胎兒期（肝脾造血期）：肝、脾、骨髓、胸腺、淋巴結(jié)出生后（骨髓造血期）：骨髓、淋巴結(jié)生成淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞43造血系統(tǒng)/組織胚胎期（中胚葉造血期）：卵黃囊、肝、脾4血細(xì)胞的發(fā)育與成熟造血細(xì)胞的生長發(fā)育是一個(gè)連續(xù)不斷的復(fù)雜過程，造血器官內(nèi)的各種造血細(xì)胞，按一定的規(guī)律發(fā)育成為各種成熟的血細(xì)胞，然后釋放入血循環(huán)中。

增殖分化成熟釋放44血細(xì)胞的發(fā)育與成熟造血細(xì)胞的生長發(fā)育是一個(gè)連續(xù)不斷的復(fù)雜過程造血干細(xì)胞的分化45造血干細(xì)胞的分化6淋巴造血系統(tǒng)腫瘤骨髓增生異常綜合征（MDS）白血?。ˋML、ALL、CML、CLL）淋巴瘤(HL、NHL)多發(fā)性骨髓瘤（MM）骨髓增生性疾?。∕PN）(CML、ET、PV、PMF)46淋巴造血系統(tǒng)腫瘤骨髓增生異常綜合征（MDS）7骨髓增生異常綜合征（MDS）骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndromes,MDS)是起源于造血干細(xì)胞的一組異質(zhì)性髓系克隆性疾病，特點(diǎn)是髓系細(xì)胞分化及發(fā)育異常，表現(xiàn)為無效造血、難治性血細(xì)胞減少、造血功能衰竭，高風(fēng)險(xiǎn)向急性髓系白血?。ˋML）轉(zhuǎn)化。47骨髓增生異常綜合征（MDS）骨髓增生異常綜合征(myelod骨髓增生異常綜合征（MDS）48骨髓增生異常綜合征（MDS）9白血病白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病?？寺⌒园籽〖?xì)胞因?yàn)樵鲋呈Э?、分化障礙、凋亡受阻等機(jī)制在骨髓和其他造血組織中大量增殖累積，并浸潤其他組織和器官，同時(shí)正常造血受抑制。按白血病細(xì)胞的分化成熟程度及自然病程，可分為急、慢性白血病。按病變細(xì)胞系列分類，包括髓系的粒、單、紅、巨核系和淋巴系的T和B細(xì)胞系。臨床上常將白血病分為急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）、急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）、慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）、慢性淋巴細(xì)胞白血病等（CLL）。49白血病白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病?？寺⌒园籽〖?xì)胞白血病（leukemia）急性白血病A慢性白血病C淋巴系L髓系MAMLALLCLLCML50白血?。╨eukemia）急性白血病A慢性白血病C淋巴瘤淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴結(jié)和淋巴組織，其發(fā)生大多與免疫應(yīng)答過程中淋巴細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生的某種免疫細(xì)胞惡變有關(guān)，是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤。臨床上常按組織病理學(xué)改變將其分為非霍奇金淋巴瘤（NHL）和霍奇金淋巴瘤（HL）兩類51淋巴瘤淋巴瘤（lymphoma）起源于淋巴結(jié)和淋巴組織，其發(fā)淋巴瘤52淋巴瘤13多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤（MM）是漿細(xì)胞惡性增殖的結(jié)果。其特征為骨髓漿細(xì)胞異常增生伴有單克隆免疫球蛋白（M蛋白）過度生成，極少數(shù)患者可以是不產(chǎn)生M蛋白的未分泌型MM。53多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤（MM）是漿細(xì)胞惡性增殖的結(jié)果。14漿細(xì)胞?。ǘ喟l(fā)性骨髓瘤）54漿細(xì)胞?。ǘ喟l(fā)性骨髓瘤）15骨髓增生性疾病骨髓增生性疾病指分化相對(duì)成熟的一系或多系骨髓細(xì)胞不斷地克隆性增殖所致的一組腫瘤性疾病，也稱骨髓增殖性腫瘤（MPNs）。MPN可分為慢性粒細(xì)胞白血病（CML），真性紅細(xì)胞增多癥（PV），原發(fā)性血小板增多癥（ET），原發(fā)性骨髓纖維化（PMF）。（是造血干細(xì)胞異常克隆而引起的成纖維細(xì)胞反應(yīng)性增生）55骨髓增生性疾病骨髓增生性疾病指分化相對(duì)成熟的一系或多系骨髓細(xì)骨髓增生性疾病56骨髓增生性疾病17骨髓增生異常綜合征MDS白血病AML急性髓細(xì)胞白血病ALL急性淋巴細(xì)胞白血病CML慢性髓細(xì)胞白血病CLL慢性淋巴細(xì)胞白血病淋巴瘤HL霍奇金淋巴瘤NHL非霍奇金淋巴瘤多發(fā)性骨髓瘤MM骨髓增殖性腫瘤（MPN/MPD）CML慢性髓細(xì)胞白血病ET原發(fā)性血小板增多癥PV真性紅細(xì)胞增多癥PMF原發(fā)性骨髓纖維化57骨髓增生異常綜合征MDS白血病AML急性髓細(xì)胞白血病ALL急急性白血病(AML、ALL)骨髓增生異常綜合征(MDS)慢性白血病(CML、CLL)淋巴瘤(HL、NHL)多發(fā)性骨髓瘤(MM)骨髓增生性疾病(CML、PV、ET、PMF)58急性白血病(AML、ALL)慢性白血病(CML、CLL)19淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的檢測(cè)淋巴造血系統(tǒng)腫瘤精確的診斷分型是正確選用化療方案的前提。目前國際上通用的是MICM分型。細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology)：骨髓穿刺、骨髓活檢免疫學(xué)(Immunology):流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics)：染色體核型分析分子生物學(xué)(Molecular)

:FISH、突變分析（PCR、片段分析、基因測(cè)序）59淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的檢測(cè)淋巴造血系統(tǒng)腫瘤精確的診斷分型是正確選細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology)通過骨髓細(xì)胞學(xué)可以了解骨髓中各種細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞形態(tài)、有無異常細(xì)胞等，從而協(xié)助診斷疾病、療效觀察、判斷預(yù)后。骨髓穿刺：采取骨髓液骨髓活檢：特制的穿刺針取一小塊骨髓組織60細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphology)通過骨髓細(xì)胞學(xué)可以了解骨髓免疫學(xué)(Immunology)

根據(jù)不同種類的細(xì)胞以及細(xì)胞在不同分化階段表達(dá)的抗原差異，通過免疫學(xué)方法識(shí)別抗原從而檢測(cè)細(xì)胞類型及數(shù)量。粒細(xì)胞成熟過程。61免疫學(xué)(Immunology)

根據(jù)不同種類的細(xì)胞以及細(xì)胞在6223流式細(xì)胞術(shù)利用細(xì)胞特異抗原，通過流式細(xì)胞儀對(duì)血細(xì)胞種類、數(shù)量等特征進(jìn)行分析，從而協(xié)助診斷疾病。63流式細(xì)胞術(shù)利用細(xì)胞特異抗原，通過流式細(xì)胞儀對(duì)血細(xì)胞種類、數(shù)量細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics)：染色體核型分析t(9;22)(q32;q23.2)inCML64細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogenetics)：染色體核型分析t(9分子生物學(xué)(Molecular)2R2G陰性細(xì)胞1R1G2F陽性細(xì)胞FISH（熒光原位雜交技術(shù)）,是利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交，檢測(cè)基因變異情況。BCR/ABL融合，典型的陽性細(xì)胞信號(hào)模式為1R1G2F，由于斷裂點(diǎn)位置不同,以及基因缺失，還可能出現(xiàn)其它陽性信號(hào)模式。65分子生物學(xué)(Molecular)2R2G陰性細(xì)胞1R1G2分子生物學(xué)(Molecular)檢測(cè)方法：

RQ-PCR,

Sanger測(cè)序、二代基因測(cè)序、片段分析檢測(cè)項(xiàng)目：

融合基因篩查、基因表達(dá)檢測(cè)、基因序列突變檢測(cè)66分子生物學(xué)(Molecular)檢測(cè)方法：27定性分析做什么？融合基因篩查怎么做？BloodSampleRNAcDNARNAExtractionRTQRT-PCR67定性分析BloodRNAcDNARNAExtractio定量分析做什么？融合基因基因表達(dá)怎么