液體活檢醫(yī)學(xué)課件

液體活檢在腫瘤精準(zhǔn)治療中的研究進(jìn)展

1液體活檢在腫瘤精準(zhǔn)治療中的研究進(jìn)展內(nèi)容摘要一.液體活檢1）cfDNA&ctDNA&CTC概念和最新研究進(jìn)展二.CTC/CTSC研究方法和進(jìn)展

2）液體活檢應(yīng)用和意義三.我們的研究2內(nèi)容摘要一.液體活檢1）cfDNA&ctDNA&CT液態(tài)活檢來(lái)源于腫瘤組織，存在于血液中：循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）腫瘤外泌體exosome提示腫瘤發(fā)展進(jìn)程及抗藥性等信息，指導(dǎo)個(gè)體化精準(zhǔn)治療DiazLAJr,BardelliA.LiquidBiopsies:GenotypingCirculatingTumorDNA.JClinOncol.2014;32(6):579–5863液態(tài)活檢來(lái)源于腫瘤組織，存在于血液中：DiazLAJr,cfDNAWhat:循環(huán)游離DNA，機(jī)體細(xì)胞釋放入外周血循環(huán)后發(fā)生部分降解的內(nèi)源性DNA。高度片段化，約170bp。Source:正常細(xì)胞、異常細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞），病毒DNA等State:半衰期短，動(dòng)態(tài)表達(dá)量，核小體以單個(gè)、雙聯(lián)或三聯(lián)的形式進(jìn)入血液，并逐步分解。cfDNA（cell-freeDNA）4cfDNAWhat:循環(huán)游離DNA，機(jī)體細(xì)胞釋放入外周血循ctDNAWhat:循環(huán)腫瘤DNA，是指腫瘤細(xì)胞DNA經(jīng)脫落或細(xì)胞凋亡后釋放進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。一種特征性的腫瘤生物標(biāo)記物，可以被定性、定量和追蹤。

Source:來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的cfDNA，屬于cfDNA的一種類型。不同患者的水平差異顯著，受腫瘤負(fù)荷，分期等因素的影響ctDNA（circulatingtumorDNA）5ctDNAWhat:循環(huán)腫瘤DNA，是指腫瘤細(xì)胞DNA經(jīng)脫cfDNA&ctDNAEllenHeitzer,PeterUlz,andJochenB.Geig.CirculatingTumorDNAasaLiquidBiopsyforCancer.ClinicalChemistry.2015,112–1236cfDNA&ctDNAEllenHeitzer,Pet1：CAPP-Seq（cancerpersonalizedprofilingbydeepsequencing）癌癥個(gè)體化深度測(cè)序分析方法:利用定制化的NimbleGenSeqCapEZChoiceLibrary作為”篩選器“對(duì)樣本靶向捕獲后再深度測(cè)序，靈敏度高，特異性強(qiáng)且經(jīng)濟(jì)可行。

2：利用數(shù)字錯(cuò)誤抑制（IDES）的方法和CAPP-seq（ctDNA測(cè)序方法），能夠檢測(cè)到頻率低至0.004％的突變等位基因NewmanAM,LovejoyAF,KlassDM,etal.IntegrateddigitalerrorsuppressionforimproveddetectionofcirculatingtumorDNA.NatureBiotechnology(2016)doi:10.1038/nbt.3520ctDNA-高通量測(cè)序71：CAPP-Seq（cancerpersonalizedcfDNA－片段譜系分析Deepsequencingofcirculatingcell-freeDNAyieldsadense,genome-widemapofnucleosomeoccupancythatenablesidenti?cationofitscell-typesoforigin,potentiallyenablingthenoninvasivemonitoringofabroadersetofclinicalconditionsMatthewW.Snyder,MartinKircher,AndrewJ.Hilletal.Cell-freeDNAComprisesanInVivoNucleosomeFootprintthatInformsItsTissues-Of-Origin.Cell.2016Jan14;164(1-2):57-68.8cfDNA－片段譜系分析DeepsequencingofCTCWhat：

循環(huán)腫瘤細(xì)胞，是指從實(shí)體瘤中脫離出來(lái)并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。Source:原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移灶都會(huì)釋放CTC?？蓹z測(cè)到的CTC是腫瘤細(xì)胞在循環(huán)系統(tǒng)微環(huán)境下生存競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果。CTC（circulatingtumorcells）9CTCWhat：循環(huán)腫瘤細(xì)胞，是指從實(shí)體瘤中脫離出來(lái)并進(jìn)液體活檢應(yīng)用價(jià)值（監(jiān)測(cè)腫瘤特異性突變發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)）EllenHeitzer,PeterUlz,andJochenB.Geig.CirculatingTumorDNAasaLiquidBiopsyforCancer.ClinicalChemistry.2015,112–12310液體活檢應(yīng)用價(jià)值（監(jiān)測(cè)腫瘤特異性突變發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)）Ellen液體活檢應(yīng)用價(jià)值（分析耐藥株的遺傳變異）EllenHeitzer,PeterUlz,andJochenB.Geig.CirculatingTumorDNAasaLiquidBiopsyforCancer.ClinicalChemistry.2015,112–12311液體活檢應(yīng)用價(jià)值（分析耐藥株的遺傳變異）EllenHeit

液體活檢優(yōu)勢(shì)及前景液態(tài)活檢無(wú)侵入性、可頻繁多次檢測(cè)及快速反應(yīng)能力均體現(xiàn)出發(fā)展?jié)摿薮髴?yīng)用價(jià)值。將削減無(wú)效腫瘤醫(yī)療開支、降低醫(yī)療成本。適應(yīng)癥廣泛，如乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、胃癌、食管癌等常見腫瘤均可用液態(tài)活檢技術(shù)進(jìn)行診斷與監(jiān)測(cè)。2015年美國(guó)發(fā)布的腫瘤治療計(jì)劃的四大舉措之一：“液態(tài)活檢”血漿開發(fā)新方法來(lái)評(píng)估治療反應(yīng)以及抵抗可能的耐藥性。根據(jù)中國(guó)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)，我國(guó)5年內(nèi)診斷為癌癥且仍存活的病例數(shù)約為749萬(wàn)。也是液態(tài)活檢巨大的市場(chǎng)。

12液體活檢優(yōu)勢(shì)及前景液態(tài)活檢無(wú)侵入性、可頻繁多次檢測(cè)及快速反CTC研究概況1）CTC與轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2）CTC異質(zhì)性與腫瘤治療3）CTC應(yīng)用和意義4）CTC研究方法13CTC研究概況1）CTC與轉(zhuǎn)移的關(guān)系13CTCs(circulatingtumorcells,CTCs)

Ashworth早在1896年就提出了循環(huán)腫瘤細(xì)胞的概念。侵入循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞，大部分由于機(jī)體的免疫識(shí)別、機(jī)械殺傷及自身凋亡在短期內(nèi)死亡，只有極少數(shù)存活下來(lái)，在適于自身存活和增殖的器官或組織形成轉(zhuǎn)移灶。14CTCs(circulatingtumorcellCTC與腫瘤轉(zhuǎn)移SimonAJoosse,TobiasMGorges,andKlausPantel.Biology,detection,andclinicalimplicationsofcirculatingtumorcells.EMBOMolMed.2015;7(1):1–11.15CTC與腫瘤轉(zhuǎn)移SimonAJoosse,TobiasBrouwerA,DeLaereB,PeetersD,etal.consequencesofheterogeneityinthecirculatingtumorcellcompartment.Oncotarget.2016Mar9.doi:10.18632/oncotarget.8015.CTC異質(zhì)性16BrouwerA,DeLaereB,PeetersCTC應(yīng)用和意義CTCs腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)腫瘤治療CTCs數(shù)量改變反映了腫瘤細(xì)胞對(duì)各種治療方案的敏感性和有效性，為個(gè)體化治療提供依據(jù)。監(jiān)測(cè)早期轉(zhuǎn)移乳腺癌、前列腺癌結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌多種腫瘤監(jiān)測(cè)CTCs基因表達(dá)／突變，找到藥物敏感的靶點(diǎn)，指導(dǎo)個(gè)體化治療17CTC應(yīng)用和意義CTCs腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)腫瘤治療CTCs數(shù)量改變CTC優(yōu)化治療方案2014年GoldKorn，接受多西他賽聯(lián)合阿曲生坦治療的轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌患者，基線循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC數(shù)量可預(yù)測(cè)預(yù)后，3周時(shí)CTC升高提示總生存較差，有望作為重新指導(dǎo)和優(yōu)化治療的較好指標(biāo)。GoldkornA，ElyB，QuinnDI，etal．CirculatingTumocellcountsarePrognosticofoverallsurvivalinSWOGS0421：aPhaseIIITrialofdocetaxelwithorwithoutatrasentanForMetastaticcastrationresistantprostatecancer.JClinOncol201432(11)：1136-1142．2012年Bian,乳癌患者在接受化療（白蛋白結(jié)合型紫杉醇+卡培他濱+曲妥珠單抗）前后CTC變化。治療前：CTC

3，HER-2+；1療程：

CTC0。6療程：病理學(xué)CR。證實(shí)CTC值在乳腺癌治療早期發(fā)生顯著變化，能夠準(zhǔn)確預(yù)示療效，能夠科學(xué)指導(dǎo)選擇治療方案。BianL，WangT，LiuY，etal．Evaluationoftreatmentresponseforbreastcancer：areweEnteringtheeraof”biologicalCompleteremission”?．ChinJCancerRes．2012，24：403-407．18CTC優(yōu)化治療方案2014年GoldKorn，接受多CTCs的研究方法RamdaneHarouaka,ZhigangKang,Si-YangZheng,LiangCao.Circulatingtumorcells:Advancesinisolationandanalysis,andchallengesforclinicalapplications.Pharmacology&Therapeutics.2014;141:209–221.19CTCs的研究方法RamdaneHarouaka,Zh研究方法（1）-CellSearchCellSearch系統(tǒng)是唯一經(jīng)FDA批準(zhǔn)進(jìn)入臨床應(yīng)用的CTCs檢測(cè)方案。原理：EpCAM抗體標(biāo)識(shí)的微磁珠從全血中捕獲細(xì)胞，用免疫熒光識(shí)EpCAM+CK+CD45?進(jìn)行磁性分離。CTCEpCAMCKCD45DAPI20研究方法（1）-CellSearchCellSearch系CellSearch

數(shù)據(jù)解讀:1.7.5ML外周血判斷閾值：轉(zhuǎn)移性乳腺癌CTCs≥5

細(xì)胞前列腺癌CTCs≥5細(xì)胞結(jié)腸癌：CTCs≥3細(xì)胞表明預(yù)后不良3.目前FDA只批準(zhǔn)用于以上三種腫瘤21CellSearch數(shù)據(jù)解讀:21CTCs的研究方法（2）-基因芯片22CTCs的研究方法（2）-基因芯片22CTCs的研究方法（3）-測(cè)序

XiaohuiNia,MingleiZhuo,ZheSua，etal.Reproduciblecopynumbervariationpatternsamongsinglecirculatingtumorcellsoflungcancerpatients.PNA,2013,52(110)21083-21088.23CTCs的研究方法（3）-測(cè)序

XiaohuiNia,MXiaohuiNia,MingleiZhuo,ZheSua，etal.Reproduciblecopynumbervariationpatternsamongsinglecirculatingtumorcellsoflungcancerpatients.PNA,2013,52(110)21083-21088.24XiaohuiNia,MingleiZhuo,ZheRamdaneHarouaka,ZhigangKang,Si-YangZheng,LiangCao.Circulatingtumorcells:Advancesinisolationandanalysis,andchallengesforclinicalapplications.Pharmacology&Therapeutics.2014;141:209–221.CTCs的分離方法（1）25RamdaneHarouaka,ZhigangKanCTCs的分離方法（2）-體外培養(yǎng)MinYu,AdityaBardia,NicolaAceto,etal.Exvivocultureofcirculatingbreasttumorcellsforindividualizedtestingofdrugsusceptibility.Science.2014;345(6193):216–220.PapanicolaoustainingforunculturedprimaryRepresentativeimagesofnonadherentCTCimmunofluorescentstaining：CK：red；Ki67：yellow；CD45：green；DAPI：blue.26CTCs的分離方法（2）-體外培養(yǎng)MinYu,AditCTSC研究概況1）CTSC定義

2）CSC,CTC,CTSC三者關(guān)系

3）CTSC研究進(jìn)展4）CTSC研究難點(diǎn)和未來(lái)方向27CTSC研究概況1）CTSC定義27CTSC背景介紹循環(huán)腫瘤干細(xì)胞（circulatingtumorstemcells,CTSCs）：CTCs中具有干細(xì)胞特性，即自我更新及分化潛能的一小群細(xì)胞。作為標(biāo)志物CTSC具有更重要的臨床價(jià)值。EMT可使CTCs獲得干細(xì)胞特性，而具有藥物耐受性和高侵襲性。CTSC已在包括肝癌，乳腺癌，胃癌，結(jié)直腸癌等多種腫瘤中被證實(shí)。28CTSC背景介紹循環(huán)腫瘤干細(xì)胞（circulatingtCSC,CTC,CTSC（腫瘤轉(zhuǎn)移等級(jí)結(jié)構(gòu)圖）YangMH,ImraliA,HeeschenC.Circulatingcancerstemcells:theimportancetoselect.ChinJCancerRes.2015Oct;27(5):437-49.29CSC,CTC,CTSC（腫瘤轉(zhuǎn)移等級(jí)結(jié)構(gòu)圖）YangMarkersforCTSCYangMH,ImraliA,HeeschenC.Circulatingcancerstemcells:theimportancetoselect.ChinJCancerRes.2015Oct;27(5):437-49.30MarkersforCTSCYangMH,Imral乳腺癌CTSC研究進(jìn)展學(xué)者們采用不同的表面標(biāo)志物組合來(lái)定義CTSC：Epcam/CK/CD44／CD24；Epcam/CK/ALDH1／CD24Epcam/CK/Vimentin/Fibernectin；Epcam/CK/TWISTI/Akt2PDKaEpcam/Muc1/HER2Kasimir—BauerS，Hoffmann0，WallwienerD，eta1．ExpressionOfstemcellandepithelial—mesenchymaltransitionmarkersinPrimarybreastcancerPatientsWithcirculatingtumorcells[J]．BreastCancerRes，2012，14(1)：R15．BaccelliI，SchneeweissA，RiethdorfS，eta1．Identificationofapopulationofbloodcirculatingtumorcellsfrombreastcancerpatientsthatinitiatesmetastasisinaxenografiassay[J]．NatBiotechnol，2013，31(6)：539．544．31乳腺癌CTSC研究進(jìn)展學(xué)者們采用不同的表面標(biāo)志物組合來(lái)定義C乳腺癌CTSC研究進(jìn)展YuM．BardiaA，WittnerBS．eta1．CirculatingbreasttumorcellsExhibitdynamicchangesInEpithelialandmesenehymaleompostion[J]．Science，2013，339(6119)：580-584．

EPCAMlowMEThighCD47highCD44high32乳腺癌CTSC研究進(jìn)展YuM．BardiaA，Wittn

2013年上海復(fù)旦大學(xué)附屬肝癌研究所樊嘉及周儉研究組通過研究123例肝癌患者CTCs相關(guān)腫瘤干細(xì)胞免表標(biāo)記物，包括CD133、ABCG2、CD90、β-catenin、E-cadherin以及Vimentin。2013年Liu等鑒于ICAM-1可能是肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物，也采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了肝癌血樣，發(fā)現(xiàn)部分病例可檢出CD45-ICAM-1+細(xì)胞，這樣的細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外成球和體內(nèi)致瘤能力。Y.F.,etal.,Circulatingstemcell-likeepithelialcelladhesionmolecule-positivetumorcellsindicatepoorprognosisofhepatocellularcarcinomaaftercurativeresection.Hepatology,2013.57(4):p.1458-68。LiuS,LiN,YuX,etal.Expressionofintercellularadhesionmolecule1byhepatocellularcarcinomastemcellsandcirculatingtumorcells[J].Gastroenterology,2013,144(5):1031-1041肝癌CTSCs研究進(jìn)展332013年上海復(fù)旦大學(xué)附屬肝癌研究所樊嘉及周儉研究我們的研究

1)CSCandmiRNA2)CTCandCTSC34我們的研究

1)CSCandmiRNA34項(xiàng)目研究基礎(chǔ)—前期基金支持1.2014年福建省衛(wèi)教聯(lián)合項(xiàng)目：結(jié)直腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的分子機(jī)制研究（WKJ-FJ-14）2.2012年福建省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目:《循環(huán)腫瘤細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞在惡性腫瘤個(gè)體化治療中的應(yīng)用研究》（2012Y0017）；3.2012年福建省衛(wèi)生廳青年課題:《結(jié)直腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其上皮間質(zhì)變標(biāo)志物的定量檢測(cè)》（2012-2-13）；4.2012年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《miR-148家族-靶蛋白網(wǎng)絡(luò)在肝癌干細(xì)胞中調(diào)控機(jī)制研究》（2012J05138）；

5.2011年福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題:《乳腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）及其單細(xì)胞多基因檢測(cè)的臨床意義》（2011-CX-16）；6.2011年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其耐藥基因表達(dá)水平在晚期乳腺癌化療敏感性中的應(yīng)用研究》（2011J01141）35項(xiàng)目研究基礎(chǔ)—前期基金支持1.2014年福建省衛(wèi)教聯(lián)合項(xiàng)目

－基金支持8.2009年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《靶向乳腺癌干細(xì)胞的樹

突狀瘤苗抗腫瘤的研究》(2009J01118)9.2008年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《miRNA靶向肝癌SP、NSP

細(xì)胞基因差異表達(dá)的研究》（2008J0077）7.2016年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目：《miR-194調(diào)控肝癌干細(xì)

胞的靶基因和LncRNA鑒定》（2016J01436）36－基金支持8.2009年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《靶向MoFlo超高速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)稀有細(xì)胞檢測(cè)的靈敏度高分選速度快

研究基礎(chǔ)設(shè)備37MoFlo超高速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)稀有細(xì)胞檢測(cè)的靈敏度高分選速CSC-Sidepopulation(SP)assayItisgenerallyacceptedthatSPcellspossessstemcellcharacteristics.Critical:

OptimizeHoechst33342stainingproceduretoachieveaconsistentandtumorigenicSPsubtypeasSPapproachisbasedonthefunctionalpropertyofCSCstoexcludeHoechst-33342-dyeviaABCtransporters.SPNSP38CSC-Sidepopulation(SP)assay-MoFloanalysisandsorting39-MoFloanalysisandsorting39-SphereformationassayFloatingsphereswereformedbySPcells,whilenonebyNSPcellsHep-3BPLC/PRF/5Huh-740-SphereformationassayFloatin實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-TumorsformedinNOD/SCIDmicePLC/PRF/5Huh-7Hep-3BWeek12;1×103cells;SP:bluearrow;NSP:redarrow.41實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-TumorsformedinNOD/SCIDmiRNAprofilingresultbyRT-qPCRmiRNAIDSP/NSPFoldchangesP<0.05miR-9-3miR-9*-2.41miR-23b-2.12miR-27b-2.35miR-96-2.8miR-151-3p-2.65miR-151-5p-2.57miR-183*-2.23miR-183-3.16miR-194-2.03miR-146a-3.44miR-148b-3.14miR-340-3p-2.85miR-421-2.32miRNAIDSP/NSPFoldchangesP<0.05

miR-135b*-3.55miR-489-3.28miR-15a-2.79miR-21-2.67miR-22-2.5miR-365-2.47miR-450a-5p-2.46miR-7a-2.44miR-26b-2.28miR-125a-5p-2.27miR-25-2.22miR-126-3p-2.15miR-182-2.14Atotalof370miRNAspecieswereanalyzedinPLC/PRF/5SPandNSPcells,27miRNAswereidentifiedasdifferentiallyexpressed,allofwhichweredown-regulatedinSP.42miRNAprofilingresultbyRT-q實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b在SP中低表達(dá)43實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b在SP中低表達(dá)43實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)--miR-148b改變SP比例44實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)--miR-148b改變SP比例44實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)--miR-148b改變?cè)鲋撑c耐藥45實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)--miR-148b改變?cè)鲋撑c耐藥45實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b改變遷移侵襲與血管生成46實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b改變遷移侵襲與血管生成46實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b過表達(dá)抑制腫瘤生成47實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b過表達(dá)抑制腫瘤生成47實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b沉默促進(jìn)腫瘤生成48實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)-miR-148b沉默促進(jìn)腫瘤生成48研究方案——CTC/CTSC49研究方案——CTC/CTSC49研究方案——分選流程50研究方案——分選流程50已完成200例鼻咽癌患者CTC檢測(cè)，100例乳腺癌患者CTC檢測(cè)，100例肺癌患者CTC檢測(cè)，150例直腸癌患者CTC/CTSC檢測(cè)，具備完善的CTC檢測(cè)技術(shù)流程。在研項(xiàng)目：150例初診未治腸癌患者，跟蹤其全病程臨床資料并抽取各階段血樣，分析患者各個(gè)時(shí)期CTCs/CTSCs數(shù)值，以PSF為觀察點(diǎn)，評(píng)估CTCs/CTSCs數(shù)值與臨床分期、預(yù)后、治療方案及療效等情況的相關(guān)性，尤其是手術(shù)配合細(xì)胞治療的療效觀察，開發(fā)CTC/CTSC在療效評(píng)估中的應(yīng)用。研究數(shù)據(jù)51已完成200例鼻咽癌患者CTC檢測(cè)，100例乳腺癌患者CTC入組初診未治腸癌患者150例跟蹤患者全程臨床資料并抽取各階段血樣（TIL組：根治術(shù)前、術(shù)后第一次細(xì)胞治療后、細(xì)胞治療2個(gè)周期后、細(xì)胞治療3個(gè)周期后……對(duì)照組：根治術(shù)前、術(shù)后7天、術(shù)后1月，術(shù)后2月……每月一次

）利用Moflo對(duì)CTCs/CTSCs計(jì)數(shù)患者各個(gè)時(shí)期CTCs/CTSCs數(shù)值與臨床分期、預(yù)后、治療方案及療效等情況相關(guān)性以PSF為觀察點(diǎn)，評(píng)估手術(shù)配合細(xì)胞治療的療效觀察52入組初診未治腸癌患者150例利用Moflo對(duì)CTCs/CTS難點(diǎn)和關(guān)鍵技術(shù)CTC/CTSC研究難點(diǎn)稀有性：僅占PBMC的1/106活性：難以保持細(xì)胞活性進(jìn)行后續(xù)研究單細(xì)胞性：細(xì)胞稀少難以進(jìn)行后續(xù)研究分選精度可達(dá)到1/106可保持分選后細(xì)胞的活性進(jìn)行單細(xì)胞水平RNA提取和預(yù)擴(kuò)增，保證下游基因表達(dá)譜分析的質(zhì)量MoFlo超高速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)REPLI-gWTASingleCellKit本項(xiàng)目關(guān)鍵技術(shù)53難點(diǎn)和關(guān)鍵技術(shù)CTC/CTSC研究難點(diǎn)稀有性：僅占PBMC的流式分析CTC敏感性專一性檢測(cè)研究數(shù)據(jù)54流式分析CTC敏感性專一性檢測(cè)研究數(shù)據(jù)54研究數(shù)據(jù)CTCs的畫門模式55研究數(shù)據(jù)CTCs的畫門模式55研究數(shù)據(jù)CTSCs的畫門模式56研究數(shù)據(jù)CTSCs的畫門模式56CTCs的檢測(cè)研究數(shù)據(jù)57CTCs的檢測(cè)研究數(shù)據(jù)57研究數(shù)據(jù)CTSCs的檢測(cè)58研究數(shù)據(jù)CTSCs的檢測(cè)58首診初治結(jié)直腸癌患者CTC/CTSC檢測(cè)分析結(jié)果PatientCharacteristicsNumber(%)CTC、CTSC(CD44+)p-value

<3≧3Age(years)0.157≦6025(50.0)1015>6025(50.0)1312Sex0.205female20(40.0)1010man30(60.0)1317Tumorsize(cm)0.189<526(52.0)1313≧524(48.0)1014TNMstage0.072I5(10.0)41II11(22.0)92III29(58.0)218IV5(10.0)14Tstage0.118T12(4.0)11T25(10.0)50T34(8.0)31T439(78.0)2613RLNM0.032N017(34.0)143N121(42.0)1011N212(24.0)102M(metastasis)0.024M045(90.0)3411M15(10.0)14研究數(shù)據(jù)59首診初治結(jié)直腸癌患者CTC/CTSC檢測(cè)分析結(jié)果Patien結(jié)直腸癌患者轉(zhuǎn)移后化療期間CTC/CTSC變化跟蹤研究數(shù)據(jù)60結(jié)直腸癌患者轉(zhuǎn)移后化療期間CTC/CTSC變化跟蹤研究數(shù)據(jù)6CTC分選分選白細(xì)胞對(duì)照：DAPI+/CD45-/Epcam-分選CTC細(xì)胞：DAPI+/CD45-/Epcam+61CTC分選分選CTC細(xì)胞：DAPI+/CD45-/Epcam實(shí)驗(yàn)方案62實(shí)驗(yàn)方案62研究數(shù)據(jù)-表達(dá)譜芯片聚類圖腫瘤組織正常組織CTC細(xì)胞白細(xì)胞對(duì)照63研究數(shù)據(jù)-表達(dá)譜芯片聚類圖腫瘤組織正常組織CTC實(shí)驗(yàn)方法CNV區(qū)域中CN與基因表達(dá)的相關(guān)分析圖表達(dá)譜芯片比較基因組雜交64實(shí)驗(yàn)方法CNV區(qū)域中CN與基因表達(dá)的相關(guān)分析圖表達(dá)譜芯片近年發(fā)表文章QinyingLiu,YangmeiXu,Shenghong,etal.miRNA-148bsuppresseshepaticcancerstemcellbytargetingneuropilin1.BioscienceReports,2015;35(4).XuYM,XieYQ,WangXR,etal.IdentificationofcancerstemcellsfromhepetocellularcarcinomacelllinesandtheirrelatedmicroRNAs.OncolRep.2013.30:2056-62.龔福生，黃偉煒，劉健,等.乳腺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義.中華腫瘤防治雜志,2015,22(13):1009-1013.Identificationofperioperativecirculatingtumorcellsandpotentialbiomarkersofcirculatingtumorstemcellsincolorectalcancerpatientsbyflowcytometry.待發(fā)表袁婕鄭秋紅徐鷺英，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鼻咽癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞及臨床相關(guān)性分析第八屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第十三屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文，2014.6.ZhengQH,etal.FloatingcellswithstemcellpropertiesingastriccelllineSGC-7901.Tumori.2011.97:393-399.7.ZhengQH,XuYM,WeiZQ,etal.Isolationandpurificationofcancerstem-likecellsfromcelllinePLC/PRF-5.ChineseTumorBiologicalTherapyJournal,2011,18(2):126-132.8.LaiL,CuiC,JinJ,etal.Mouseembryonicstemcell-derivedthymicepithelialcellprogenitorsenhanceT-cellreconstitutionafterallogeneicbonemarrowtransplantation.Blood.2011.118(12):3410-3418.65近年發(fā)表文章QinyingLiu,YangmeiXu,近年發(fā)表文章ChenG,WangL,LuJ,etal.OpticalDiagnosisforLungCancerUsingMultiphotonImaging.Scanning.2013.doi:10.1002/sca.21076.YanJ,TanC,GuF,etal.SorafenibdelaysrecurrenceandmetastasisafterlivertransplantationinaratmodelofhepatocellularcarcinomawithhighexpressionofpERK.LiverTranspl.2013.doi:10.1002/lt.23619.ChenL,ZhangWW,ZhengQH,etal.AculeatusquinonesA-D,novelmetabolitesfromthemarine-derivedfungusAspergillusaculeatus.Heterocycles.2013.Publishedonline.ZhengQF,WangJJ,YingMG,etal.Omentoplastyinpreventinganastomoticleakageofoesophagogastrostomyfollowingradicaloesophagectomywiththree-fieldlymphadenectomy.EurJCardiothoracSurg.2013.43(2):274-8.ChenY,ZhengX,ChenG,etal.ImmunoassayforLMP1innasopharyngealtissuebasedonsurface-enhancedRamanscattering.IntJNanomedicine.2012.7:73-82.YanJ,ZhuoS,ChenG,etal.Preclinicalstudyofusingmultiphotonmicroscopytodiagnoselivercanceranddifferentiatebenignandmalignantliverlesions.JBiomedOpt.2012.17(2):026004.7.ZhuoS,YanJ,ChenG,etal.Label-freeimagingofbasementmembranesdifferentiatesnormal,precancerous,andcancerouscolonictissuesbysecond-harmonicgenerationmicroscopy.PLoSOne.2012.7(6):e38655.8.YingM,ZhuoS,ChenG,etal.Real-timenoninvasiveopticaldiagnosisforcolorectalcancerusingmultiphotonmicroscopy.Scanning.2012.34(3):181-5.66近年發(fā)表文章66未來(lái)發(fā)展方向1.高新技術(shù)已逐漸滲入CTCs/CTSCs的分離與分析，新研發(fā)的技術(shù)設(shè)備功能更強(qiáng)，性能與檢測(cè)效果逐步提高。2.單細(xì)胞全基因測(cè)序技術(shù)及單細(xì)胞基因組學(xué)可解決血液CTCs/CTSCs數(shù)量稀少的難題，能檢測(cè)更多藥效相關(guān)基因及分析耐藥機(jī)制，為CTCs/CTSCs的分子分型及靶向藥物治療提供更準(zhǔn)確的信息。67未來(lái)發(fā)展方向1.高新技術(shù)已逐漸滲入CTCs/CTSCs的分結(jié)語(yǔ)謝謝！液體活檢，腫瘤精準(zhǔn)治療的寵兒?。。?8結(jié)語(yǔ)謝謝！液體活檢，腫瘤精準(zhǔn)治療的寵兒?。。?8CSCsandmiRNAsTakahashiR.,etal.,Front.Genet.201469CSCsandmiRNAsTakahashiR.,e2013年Campos等對(duì)33例（0～Ⅲ期）非轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌患者和9名健康人，通過進(jìn)行CK表達(dá)、17號(hào)染色體及HER2基因水平分析，同時(shí)分析CTC的表型和基因型，結(jié)果表明：原發(fā)灶無(wú)HER2蛋白表達(dá)，卻有63.33%的CTC出現(xiàn)HER2蛋白過表達(dá)。全面CTC分析可以為腫瘤個(gè)體化治療提供更多疾病信息。CamposM,LuqueR,JiménezJ,etal.Simultaneousphenotypicandgeneticcharacterizationofsinglecirculatingtumorcellsfromcoloncancerpatients[J].HistolHistopathol,2013,28(11):1439-1450.CTC與腫瘤個(gè)體化治療70CamposM,LuqueR,JiménezJ,研究難點(diǎn)CTC/CTSC研究難點(diǎn)稀有性：僅占PBMC的1/106或者更少活性：難以保持細(xì)胞活性進(jìn)行后續(xù)研究單細(xì)胞性：細(xì)胞稀少難以進(jìn)行后續(xù)研究71研究難點(diǎn)CTC/CTSC研究難點(diǎn)稀有性：僅占PBMC的1/1研究數(shù)據(jù)-表達(dá)譜芯片散點(diǎn)圖

正常組織腫瘤組織CTC細(xì)胞白細(xì)胞對(duì)照72研究數(shù)據(jù)-表達(dá)譜芯片散點(diǎn)圖

正常組織腫瘤組織CTC細(xì)胞白細(xì)胞乳腺癌CTSC研究進(jìn)展2013年Yu，侵襲性強(qiáng)的乳腺癌類型，以間質(zhì)性表型CTCs為主；而病情惡化的患者的間質(zhì)型CTCs計(jì)數(shù)明顯增多。在CTCs動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)中，初始對(duì)相應(yīng)靶向藥物療效較好，CTCs數(shù)量明顯降低并以上皮型為主；經(jīng)7個(gè)月治療后出現(xiàn)了耐藥性及病情進(jìn)展，間質(zhì)CTCs升高?；颊逤TCs、EMT干細(xì)胞特性與藥物療效或耐藥情況密切相關(guān)。YuM．BardiaA，WittnerBS．eta1．CirculatingbreasttumorcellsExhibitdynamicchangesInEpithelialandmesenehymaleompostion[J]．Science，2013，339(6119)：580-584．73乳腺癌CTSC研究進(jìn)展2013年Yu，侵襲性強(qiáng)的乳腺癌類型液體活檢在腫瘤精準(zhǔn)治療中的研究進(jìn)展

74液體活檢在腫瘤精準(zhǔn)治療中的研究進(jìn)展內(nèi)容摘要一.液體活檢1）cfDNA&ctDNA&CTC概念和最新研究進(jìn)展二.CTC/CTSC研究方法和進(jìn)展

2）液體活檢應(yīng)用和意義三.我們的研究75內(nèi)容摘要一.液體活檢1）cfDNA&ctDNA&CT液態(tài)活檢來(lái)源于腫瘤組織，存在于血液中：循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）腫瘤外泌體exosome提示腫瘤發(fā)展進(jìn)程及抗藥性等信息，指導(dǎo)個(gè)體化精準(zhǔn)治療DiazLAJr,BardelliA.LiquidBiopsies:GenotypingCirculatingTumorDNA.JClinOncol.2014;32(6):579–58676液態(tài)活檢來(lái)源于腫瘤組織，存在于血液中：DiazLAJr,cfDNAWhat:循環(huán)游離DNA，機(jī)體細(xì)胞釋放入外周血循環(huán)后發(fā)生部分降解的內(nèi)源性DNA。高度片段化，約170bp。Source:正常細(xì)胞、異常細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞），病毒DNA等State:半衰期短，動(dòng)態(tài)表達(dá)量，核小體以單個(gè)、雙聯(lián)或三聯(lián)的形式進(jìn)入血液，并逐步分解。cfDNA（cell-freeDNA）77cfDNAWhat:循環(huán)游離DNA，機(jī)體細(xì)胞釋放入外周血循ctDNAWhat:循環(huán)腫瘤DNA，是指腫瘤細(xì)胞DNA經(jīng)脫落或細(xì)胞凋亡后釋放進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。一種特征性的腫瘤生物標(biāo)記物，可以被定性、定量和追蹤。

Source:來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的cfDNA，屬于cfDNA的一種類型。不同患者的水平差異顯著，受腫瘤負(fù)荷，分期等因素的影響ctDNA（circulatingtumorDNA）78ctDNAWhat:循環(huán)腫瘤DNA，是指腫瘤細(xì)胞DNA經(jīng)脫cfDNA&ctDNAEllenHeitzer,PeterUlz,andJochenB.Geig.CirculatingTumorDNAasaLiquidBiopsyforCancer.ClinicalChemistry.2015,112–12379cfDNA&ctDNAEllenHeitzer,Pet1：CAPP-Seq（cancerpersonalizedprofilingbydeepsequencing）癌癥個(gè)體化深度測(cè)序分析方法:利用定制化的NimbleGenSeqCapEZChoiceLibrary作為”篩選器“對(duì)樣本靶向捕獲后再深度測(cè)序，靈敏度高，特異性強(qiáng)且經(jīng)濟(jì)可行。

2：利用數(shù)字錯(cuò)誤抑制（IDES）的方法和CAPP-seq（ctDNA測(cè)序方法），能夠檢測(cè)到頻率低至0.004％的突變等位基因NewmanAM,LovejoyAF,KlassDM,etal.IntegrateddigitalerrorsuppressionforimproveddetectionofcirculatingtumorDNA.NatureBiotechnology(2016)doi:10.1038/nbt.3520ctDNA-高通量測(cè)序801：CAPP-Seq（cancerpersonalizedcfDNA－片段譜系分析Deepsequencingofcirculatingcell-freeDNAyieldsadense,genome-widemapofnucleosomeoccupancythatenablesidenti?cationofitscell-typesoforigin,potentiallyenablingthenoninvasivemonitoringofabroadersetofclinicalconditionsMatthewW.Snyder,MartinKircher,AndrewJ.Hilletal.Cell-freeDNAComprisesanInVivoNucleosomeFootprintthatInformsItsTissues-Of-Origin.Cell.2016Jan14;164(1-2):57-68.81cfDNA－片段譜系分析DeepsequencingofCTCWhat：

循環(huán)腫瘤細(xì)胞，是指從實(shí)體瘤中脫離出來(lái)并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。Source:原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移灶都會(huì)釋放CTC?？蓹z測(cè)到的CTC是腫瘤細(xì)胞在循環(huán)系統(tǒng)微環(huán)境下生存競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果。CTC（circulatingtumorcells）82CTCWhat：循環(huán)腫瘤細(xì)胞，是指從實(shí)體瘤中脫離出來(lái)并進(jìn)液體活檢應(yīng)用價(jià)值（監(jiān)測(cè)腫瘤特異性突變發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)）EllenHeitzer,PeterUlz,andJochenB.Geig.CirculatingTumorDNAasaLiquidBiopsyforCancer.ClinicalChemistry.2015,112–12383液體活檢應(yīng)用價(jià)值（監(jiān)測(cè)腫瘤特異性突變發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)）Ellen液體活檢應(yīng)用價(jià)值（分析耐藥株的遺傳變異）EllenHeitzer,PeterUlz,andJochenB.Geig.CirculatingTumorDNAasaLiquidBiopsyforCancer.ClinicalChemistry.2015,112–12384液體活檢應(yīng)用價(jià)值（分析耐藥株的遺傳變異）EllenHeit

液體活檢優(yōu)勢(shì)及前景液態(tài)活檢無(wú)侵入性、可頻繁多次檢測(cè)及快速反應(yīng)能力均體現(xiàn)出發(fā)展?jié)摿薮髴?yīng)用價(jià)值。將削減無(wú)效腫瘤醫(yī)療開支、降低醫(yī)療成本。適應(yīng)癥廣泛，如乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、胃癌、食管癌等常見腫瘤均可用液態(tài)活檢技術(shù)進(jìn)行診斷與監(jiān)測(cè)。2015年美國(guó)發(fā)布的腫瘤治療計(jì)劃的四大舉措之一：“液態(tài)活檢”血漿開發(fā)新方法來(lái)評(píng)估治療反應(yīng)以及抵抗可能的耐藥性。根據(jù)中國(guó)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)，我國(guó)5年內(nèi)診斷為癌癥且仍存活的病例數(shù)約為749萬(wàn)。也是液態(tài)活檢巨大的市場(chǎng)。

85液體活檢優(yōu)勢(shì)及前景液態(tài)活檢無(wú)侵入性、可頻繁多次檢測(cè)及快速反CTC研究概況1）CTC與轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2）CTC異質(zhì)性與腫瘤治療3）CTC應(yīng)用和意義4）CTC研究方法86CTC研究概況1）CTC與轉(zhuǎn)移的關(guān)系13CTCs(circulatingtumorcells,CTCs)

Ashworth早在1896年就提出了循環(huán)腫瘤細(xì)胞的概念。侵入循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞，大部分由于機(jī)體的免疫識(shí)別、機(jī)械殺傷及自身凋亡在短期內(nèi)死亡，只有極少數(shù)存活下來(lái)，在適于自身存活和增殖的器官或組織形成轉(zhuǎn)移灶。87CTCs(circulatingtumorcellCTC與腫瘤轉(zhuǎn)移SimonAJoosse,TobiasMGorges,andKlausPantel.Biology,detection,andclinicalimplicationsofcirculatingtumorcells.EMBOMolMed.2015;7(1):1–11.88CTC與腫瘤轉(zhuǎn)移SimonAJoosse,TobiasBrouwerA,DeLaereB,PeetersD,etal.consequencesofheterogeneityinthecirculatingtumorcellcompartment.Oncotarget.2016Mar9.doi:10.18632/oncotarget.8015.CTC異質(zhì)性89BrouwerA,DeLaereB,PeetersCTC應(yīng)用和意義CTCs腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)腫瘤治療CTCs數(shù)量改變反映了腫瘤細(xì)胞對(duì)各種治療方案的敏感性和有效性，為個(gè)體化治療提供依據(jù)。監(jiān)測(cè)早期轉(zhuǎn)移乳腺癌、前列腺癌結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌多種腫瘤監(jiān)測(cè)CTCs基因表達(dá)／突變，找到藥物敏感的靶點(diǎn)，指導(dǎo)個(gè)體化治療90CTC應(yīng)用和意義CTCs腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)腫瘤治療CTCs數(shù)量改變CTC優(yōu)化治療方案2014年GoldKorn，接受多西他賽聯(lián)合阿曲生坦治療的轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌患者，基線循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC數(shù)量可預(yù)測(cè)預(yù)后，3周時(shí)CTC升高提示總生存較差，有望作為重新指導(dǎo)和優(yōu)化治療的較好指標(biāo)。GoldkornA，ElyB，QuinnDI，etal．CirculatingTumocellcountsarePrognosticofoverallsurvivalinSWOGS0421：aPhaseIIITrialofdocetaxelwithorwithoutatrasentanForMetastaticcastrationresistantprostatecancer.JClinOncol201432(11)：1136-1142．2012年Bian,乳癌患者在接受化療（白蛋白結(jié)合型紫杉醇+卡培他濱+曲妥珠單抗）前后CTC變化。治療前：CTC

3，HER-2+；1療程：

CTC0。6療程：病理學(xué)CR。證實(shí)CTC值在乳腺癌治療早期發(fā)生顯著變化，能夠準(zhǔn)確預(yù)示療效，能夠科學(xué)指導(dǎo)選擇治療方案。BianL，WangT，LiuY，etal．Evaluationoftreatmentresponseforbreastcancer：areweEnteringtheeraof”biologicalCompleteremission”?．ChinJCancerRes．2012，24：403-407．91CTC優(yōu)化治療方案2014年GoldKorn，接受多CTCs的研究方法RamdaneHarouaka,ZhigangKang,Si-YangZheng,LiangCao.Circulatingtumorcells:Advancesinisolationandanalysis,andchallengesforclinicalapplications.Pharmacology&Therapeutics.2014;141:209–221.92CTCs的研究方法RamdaneHarouaka,Zh研究方法（1）-CellSearchCellSearch系統(tǒng)是唯一經(jīng)FDA批準(zhǔn)進(jìn)入臨床應(yīng)用的CTCs檢測(cè)方案。原理：EpCAM抗體標(biāo)識(shí)的微磁珠從全血中捕獲細(xì)胞，用免疫熒光識(shí)EpCAM+CK+CD45?進(jìn)行磁性分離。CTCEpCAMCKCD45DAPI93研究方法（1）-CellSearchCellSearch系CellSearch

數(shù)據(jù)解讀:1.7.5ML外周血判斷閾值：轉(zhuǎn)移性乳腺癌CTCs≥5

細(xì)胞前列腺癌CTCs≥5細(xì)胞結(jié)腸癌：CTCs≥3細(xì)胞表明預(yù)后不良3.目前FDA只批準(zhǔn)用于以上三種腫瘤94CellSearch數(shù)據(jù)解讀:21CTCs的研究方法（2）-基因芯片95CTCs的研究方法（2）-基因芯片22CTCs的研究方法（3）-測(cè)序

XiaohuiNia,MingleiZhuo,ZheSua，etal.Reproduciblecopynumbervariationpatternsamongsinglecirculatingtumorcellsoflungcancerpatients.PNA,2013,52(110)21083-21088.96CTCs的研究方法（3）-測(cè)序

XiaohuiNia,MXiaohuiNia,MingleiZhuo,ZheSua，etal.Reproduciblecopynumbervariationpatternsamongsinglecirculatingtumorcellsoflungcancerpatients.PNA,2013,52(110)21083-21088.97XiaohuiNia,MingleiZhuo,ZheRamdaneHarouaka,ZhigangKang,Si-YangZheng,LiangCao.Circulatingtumorcells:Advancesinisolationandanalysis,andchallengesforclinicalapplications.Pharmacology&Therapeutics.2014;141:209–221.CTCs的分離方法（1）98RamdaneHarouaka,ZhigangKanCTCs的分離方法（2）-體外培養(yǎng)MinYu,AdityaBardia,NicolaAceto,etal.Exvivocultureofcirculatingbreasttumorcellsforindividualizedtestingofdrugsusceptibility.Science.2014;345(6193):216–220.PapanicolaoustainingforunculturedprimaryRepresentativeimagesofnonadherentCTCimmunofluorescentstaining：CK：red；Ki67：yellow；CD45：green；DAPI：blue.99CTCs的分離方法（2）-體外培養(yǎng)MinYu,AditCTSC研究概況1）CTSC定義

2）CSC,CTC,CTSC三者關(guān)系

3）CTSC研究進(jìn)展4）CTSC研究難點(diǎn)和未來(lái)方向100CTSC研究概況1）CTSC定義27CTSC背景介紹循環(huán)腫瘤干細(xì)胞（circulatingtumorstemcells,CTSCs）：CTCs中具有干細(xì)胞特性，即自我更新及分化潛能的一小群細(xì)胞。作為標(biāo)志物CTSC具有更重要的臨床價(jià)值。EMT可使CTCs獲得干細(xì)胞特性，而具有藥物耐受性和高侵襲性。CTSC已在包括肝癌，乳腺癌，胃癌，結(jié)直腸癌等多種腫瘤中被證實(shí)。101CTSC背景介紹循環(huán)腫瘤干細(xì)胞（circulatingtCSC,CTC,CTSC（腫瘤轉(zhuǎn)移等級(jí)結(jié)構(gòu)圖）YangMH,ImraliA,HeeschenC.Circulatingcancerstemcells:theimportancetoselect.ChinJCancerRes.2015Oct;27(5):437-49.102CSC,CTC,CTSC（腫瘤轉(zhuǎn)移等級(jí)結(jié)構(gòu)圖）YangMarkersforCTSCYangMH,ImraliA,HeeschenC.Circulatingcancerstemcells:theimportancetoselect.ChinJCancerRes.2015Oct;27(5):437-49.103MarkersforCTSCYangMH,Imral乳腺癌CTSC研究進(jìn)展學(xué)者們采用不同的表面標(biāo)志物組合來(lái)定義CTSC：Epcam/CK/CD44／CD24；Epcam/CK/ALDH1／CD24Epcam/CK/Vimentin/Fibernectin；Epcam/CK/TWISTI/Akt2PDKaEpcam/Muc1/HER2Kasimir—BauerS，Hoffmann0，WallwienerD，eta1．ExpressionOfstemcellandepithelial—mesenchymaltransitionmarkersinPrimarybreastcancerPatientsWithcirculatingtumorcells[J]．BreastCancerRes，2012，14(1)：R15．BaccelliI，SchneeweissA，RiethdorfS，eta1．Identificationofapopulationofbloodcirculatingtumorcellsfrombreastcancerpatientsthatinitiatesmetastasisinaxenografiassay[J]．NatBiotechnol，2013，31(6)：539．544．104乳腺癌CTSC研究進(jìn)展學(xué)者們采用不同的表面標(biāo)志物組合來(lái)定義C乳腺癌CTSC研究進(jìn)展YuM．BardiaA，WittnerBS．eta1．CirculatingbreasttumorcellsExhibitdynamicchangesInEpithelialandmesenehymaleompostion[J]．Science，2013，339(6119)：580-584．

EPCAMlowMEThighCD47highCD44high105乳腺癌CTSC研究進(jìn)展YuM．BardiaA，Wittn

2013年上海復(fù)旦大學(xué)附屬肝癌研究所樊嘉及周儉研究組通過研究123例肝癌患者CTCs相關(guān)腫瘤干細(xì)胞免表標(biāo)記物，包括CD133、ABCG2、CD90、β-catenin、E-cadherin以及Vimentin。2013年Liu等鑒于ICAM-1可能是肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物，也采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了肝癌血樣，發(fā)現(xiàn)部分病例可檢出CD45-ICAM-1+細(xì)胞，這樣的細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外成球和體內(nèi)致瘤能力。Y.F.,etal.,Circulatingstemcell-likeepithelialcelladhesionmolecule-positivetumorcellsindicatepoorprognosisofhepatocellularcarcinomaaftercurativeresection.Hepatology,2013.57(4):p.1458-68。LiuS,LiN,YuX,etal.Expressionofintercellularadhesionmolecule1byhepatocellularcarcinomastemcellsandcirculatingtumorcells[J].Gastroenterology,2013,144(5):1031-1041肝癌CTSCs研究進(jìn)展1062013年上海復(fù)旦大學(xué)附屬肝癌研究所樊嘉及周儉研究我們的研究

1)CSCandmiRNA2)CTCandCTSC107我們的研究

1)CSCandmiRNA34項(xiàng)目研究基礎(chǔ)—前期基金支持1.2014年福建省衛(wèi)教聯(lián)合項(xiàng)目：結(jié)直腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的分子機(jī)制研究（WKJ-FJ-14）2.2012年福建省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目:《循環(huán)腫瘤細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞在惡性腫瘤個(gè)體化治療中的應(yīng)用研究》（2012Y0017）；3.2012年福建省衛(wèi)生廳青年課題:《結(jié)直腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其上皮間質(zhì)變標(biāo)志物的定量檢測(cè)》（2012-2-13）；4.2012年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《miR-148家族-靶蛋白網(wǎng)絡(luò)在肝癌干細(xì)胞中調(diào)控機(jī)制研究》（2012J05138）；

5.2011年福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題:《乳腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）及其單細(xì)胞多基因檢測(cè)的臨床意義》（2011-CX-16）；6.2011年福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目:《循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其耐藥基因表達(dá)水平在晚期乳腺癌化療敏感性中的應(yīng)用研究》（2011J01141）108項(xiàng)目研究基礎(chǔ)—前期基金支持1.2014年福建省衛(wèi)教聯(lián)合項(xiàng)目

－基金支持8.2009年福建省自