分析方法驗(yàn)證

ValidationofAnalyticalMethod分析方法驗(yàn)證1精選課件內(nèi)容分析方法驗(yàn)證的法規(guī)要求ICH、USP、ChP和EP中的方法驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證的要求分析方法驗(yàn)證步驟分析方法驗(yàn)證成功的前提分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn)含量分析方法驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)和方法傳送2精選課件分析方法驗(yàn)證的法規(guī)要求中國(guó)GMP(2010)、中國(guó)藥典非常關(guān)注驗(yàn)證的過(guò)程,分析方法驗(yàn)證不完善是常見(jiàn)的問(wèn)題。藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分析方法必須驗(yàn)證藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法必須進(jìn)行驗(yàn)證。ICHQ2(R1)ValidationofAnalyticalProceduresEUGMPVolume4Analyticalmethodshallbevalidated,alltestingoperationsdescribedinthemarketingauthorisationshouldbecarriedoutaccordingtotheapprovedmethod.FDAcGMP[21CFR211.]Testmethod,whichareusedforassessingcomplianceofpharmaceuticalarticleswithestablishedspecifications,mustmeetproperstandardsofaccuracyandreliability.3精選課件分析方法驗(yàn)證的法規(guī)要求中國(guó)GMP(2010)對(duì)分析方法驗(yàn)證規(guī)定：符合下列情形之一的，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：采用新的檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法需變更的采用中國(guó)藥典未收載的檢驗(yàn)方法法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)，以保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠2010版藥典中分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則(附錄XIXA)只規(guī)定了項(xiàng)目和基本方法而沒(méi)有合格標(biāo)準(zhǔn),ICH和USP類(lèi)似4精選課件ICH、USP、CP和EP中的方法驗(yàn)證ICHQ2(R1)：ValidationofanalyticalProcedures:TextandMethodology--2005/11 ICHQ2A：TextonValidationofAnalyticalProcedure (ParentGuideline)--1994/10 ICHQ2B:ValidationofAnalyticalProcedures:Methodology(DevelopedtocomplementtheParentguideline)--1996/11USP<1225>ValidationofCompendialProcedures中國(guó)藥典附錄XIXA藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則EuropeanDirectoratefortheQualityofMedicines&HealthCare [PA/PH/OMCL(05)47DEF]ValidationofAnalyticalProcedures–2005/065精選課件分析方法驗(yàn)證的要求目的：證明所用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)定量或限度檢查，原料或制劑中有效成分含量測(cè)定制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑）的測(cè)定溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測(cè)試方法6精選課件分析方法驗(yàn)證的要求驗(yàn)證內(nèi)容：準(zhǔn)確度精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專(zhuān)屬性檢測(cè)限定量限線性范圍耐用性7精選課件準(zhǔn)確度Accuracy準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用回收率%表示。測(cè)定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。數(shù)據(jù)要求：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高、中、低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。8精選課件準(zhǔn)確度Accuracy回收試驗(yàn)空白+已知量A的對(duì)照品測(cè)定,測(cè)定值為M加樣回收試驗(yàn)已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M9精選課件準(zhǔn)確度Accuracy含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度原料藥可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較制劑可用含己知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定，即采用在空白輔料中加入原料藥對(duì)照品的方法；如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果10精選課件精密度Precision精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)偏差SD：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD：11精選課件精密度Precision重復(fù)性(repeatability)：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)中間精密度(IntermediatePrecision)：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度(三人三機(jī))重現(xiàn)性(reproducibility)：不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度數(shù)據(jù)要求：需報(bào)告SD，RSD和置信區(qū)間。12精選課件專(zhuān)屬性Specificity專(zhuān)屬性指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專(zhuān)屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾程度的度量通常是通過(guò)分析含有加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測(cè)試結(jié)果之差即專(zhuān)屬性13精選課件專(zhuān)屬性Specificity鑒別反應(yīng)---應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定---色譜法和其他方法，應(yīng)附代表性圖譜，亦說(shuō)明專(zhuān)屬性。圖中應(yīng)標(biāo)明各組份的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于含量測(cè)定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)試結(jié)果是否受干擾；對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間是否得到分離；反之則需用其他方法進(jìn)行比較。色譜峰純度試驗(yàn)（二極管陣列，質(zhì)譜）14精選課件檢測(cè)限D(zhuǎn)etectionLimit,LOD檢測(cè)限是指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量。它是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無(wú)需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。非儀器分析目視法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量信噪比法:用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限標(biāo)準(zhǔn)差法： ①測(cè)定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差σb； ②將σb乘以三倍； ③在工作曲線上求出3σb相對(duì)應(yīng)的濃度Xb；即為檢出限；

④將求得的對(duì)應(yīng)濃度值加上空白值（空白值為0則不加）即得檢出限。15精選課件定量限QuantitationLimit,LOQ定量限是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求非儀器分析目視法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低濃度或量信噪比法：一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定方法的實(shí)際測(cè)定下限16精選課件線性Linearity線性是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性在分析方法的范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià)。線性關(guān)系應(yīng)以信號(hào)對(duì)被分析物的濃度或含量作圖，根據(jù)圖形是否呈線性進(jìn)行評(píng)價(jià)，再用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率（Slope）來(lái)表示。必要時(shí)可對(duì)響應(yīng)信號(hào)進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距（是檢定的可能偏差）、回歸斜率及方差等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖17精選課件范圍Range范圍是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測(cè)定范圍為80%-120%；制劑含量均勻度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)報(bào)告值到限度的120%；溶出度應(yīng)為測(cè)定范圍的±20%，如規(guī)定了限度范圍，應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%，例如緩釋片1h<20%,7h>70%,則驗(yàn)證范圍定為0-90%。18精選課件耐用性Robustness耐用性又稱(chēng)粗放度，是指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度;如果方法易受到分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明。典型的變動(dòng)包括：分析溶液的穩(wěn)定性用不同時(shí)間段的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液與新制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的對(duì)比結(jié)果來(lái)分析溶液的穩(wěn)定性提取時(shí)間19精選課件耐用性Robustness液相色譜的典型變動(dòng)：流動(dòng)相PH（±0.5)流動(dòng)相組成(有機(jī)相±5%）色譜柱（同一廠家的三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）溫度（20-25C)和流速(±10%）檢測(cè)波長(zhǎng)(±5nm)氣相色譜的典型變動(dòng)：色譜柱（同一廠家的三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）溫度流速20精選課件檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié)中國(guó)藥典要求鑒別雜質(zhì)定量測(cè)定雜質(zhì)限度測(cè)定含量溶出度等準(zhǔn)確度XOXOO精密度-重復(fù)性XOXOO精密度-中間精密度XOXOO專(zhuān)屬性O(shè)OOOO檢測(cè)限XXOXX定量限XOXXX線性XOXOO范圍XOXOO耐用性O(shè)OOOO中國(guó)藥典21精選課件檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容總結(jié)鑒別CatIV雜質(zhì)定量測(cè)定CatII雜質(zhì)限度測(cè)定CatII含量CatI溶出度等CatIII準(zhǔn)確度XO*O*精密度XOXOO專(zhuān)屬性O(shè)OOO*檢測(cè)限XXOX*定量限XOXX*線性XOXO*范圍XO*O*USP注：*根據(jù)具體情況予以驗(yàn)證22精選課件分析方法驗(yàn)證步驟預(yù)驗(yàn)證驗(yàn)證方案的制定驗(yàn)證目的、背景設(shè)備設(shè)施、試劑、對(duì)照品、樣品信息待驗(yàn)證的方法、項(xiàng)目、可接受標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施人員及培訓(xùn)參考文獻(xiàn)驗(yàn)證的實(shí)施收集完整的驗(yàn)證過(guò)程記錄和原始圖譜數(shù)據(jù)和記錄復(fù)核驗(yàn)證結(jié)果評(píng)估驗(yàn)證報(bào)告根據(jù)驗(yàn)證報(bào)告制訂檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)23精選課件分析方法驗(yàn)證成功的前提1經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的驗(yàn)證實(shí)施人員2儀器已經(jīng)驗(yàn)證確認(rèn)、校準(zhǔn)并在校準(zhǔn)有效期內(nèi)3可靠穩(wěn)定的對(duì)照品（建議使用法定機(jī)構(gòu)提供的）可靠穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)試劑24精選課件分析方法驗(yàn)證注意要點(diǎn)預(yù)驗(yàn)證預(yù)驗(yàn)證是指在正式驗(yàn)證前進(jìn)行的試驗(yàn)，目的是收集證據(jù)，以初步證實(shí)該檢驗(yàn)方法可以達(dá)到預(yù)期要求，同時(shí)確定各個(gè)項(xiàng)目的可接受標(biāo)準(zhǔn)。空白樣空白樣是指根據(jù)樣品的特性、配方和工藝過(guò)程，制備除了不含被測(cè)物外其他組成與樣品完全一致的模擬樣品。取樣效率取樣效率僅用于清潔驗(yàn)證所用檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證，是指用棉簽或特定溶劑從設(shè)備表面獲取的被測(cè)物的量與設(shè)備表面被測(cè)物的實(shí)際含量接近的程度，以回收率%表示。25精選課件含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度

各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間 9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。精密度

1）重復(fù)性：6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

2）中間精密度：12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。專(zhuān)屬性

空白對(duì)照應(yīng)無(wú)干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。檢測(cè)限

主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。定量限

主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。26精選課件含量測(cè)定方法驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)線性

回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的2％以?xún)?nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。耐用性

主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。系統(tǒng)適應(yīng)性

主峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

27精選課件分析方法確認(rèn)方法確認(rèn)是一種簡(jiǎn)化了的方法驗(yàn)證，目的是為了確認(rèn)藥典方法或其他已經(jīng)驗(yàn)證的方法是否適用于實(shí)際使用環(huán)境。各國(guó)藥典和行業(yè)法規(guī)收載的檢驗(yàn)方法從外部引入的已經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法以往老產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法，原廠無(wú)力或無(wú)法進(jìn)行方法傳送方法確認(rèn)一般應(yīng)進(jìn)行準(zhǔn)確度、重復(fù)性、專(zhuān)屬性測(cè)試。USP<1226>VerificationofCompendialProcedures28精選課件分析方法傳送分析方法傳送（轉(zhuǎn)移）是指一方將已經(jīng)驗(yàn)證的方法傳送（轉(zhuǎn)移）給另一方的過(guò)程。方法傳送主要進(jìn)行不同實(shí)驗(yàn)室在一定時(shí)限內(nèi)對(duì)同一份樣品的重現(xiàn)性測(cè)試的結(jié)果比對(duì)。29精選課件微生物分析方法驗(yàn)證微生物方法驗(yàn)證內(nèi)容：無(wú)菌制劑微生物檢測(cè)方法驗(yàn)證非無(wú)菌制劑微生物檢測(cè)方法驗(yàn)證防腐劑效能試驗(yàn)方法驗(yàn)證消毒劑效力測(cè)試方