獸藥殘留快速檢測課件

模塊三

獸藥殘留快速檢測

模塊三獸藥殘留快速檢測學(xué)習(xí)目標了解獸藥殘留所帶來的食品安全問題、獲得關(guān)于獸藥殘留的有關(guān)標準依據(jù)和檢測試劑制造商信息等；理解常見的獸藥殘留快速檢測的基本原理；掌握常見的獸藥殘留快速檢測基本方法和基本操作技能。學(xué)習(xí)目標了解獸藥殘留所帶來的食品安全問題、獲得關(guān)于獸藥殘留的獸藥和獸藥殘留的定義獸藥指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。

獸藥殘留指給畜禽使用獸藥或添加劑后，藥物以其原形及其代謝產(chǎn)物的形式蓄積或儲存在動物的細胞、組織、器官或可食性產(chǎn)品（如蛋、奶）中。

獸藥和獸藥殘留的定義獸藥指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。獸獸藥的分類抗生素、磺胺藥類、呋喃藥類、抗球蟲藥、激素藥類和驅(qū)蟲藥獸藥的分類抗生素、磺胺藥類、呋喃藥類、抗球蟲藥、激素藥類和驅(qū)5第七章收養(yǎng)第一節(jié)收養(yǎng)和收養(yǎng)法第二節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的成立第三節(jié)收養(yǎng)的效力第四節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的解除5第七章收養(yǎng)6第一節(jié)收養(yǎng)和收養(yǎng)法

一、收養(yǎng)的概念和法律特征（一）收養(yǎng)的概念收養(yǎng)，是公民（自然人）依法領(lǐng)養(yǎng)他人子女為己之子女，使本無親子關(guān)系的當事人間發(fā)生法律擬制的親子關(guān)系的民事法律行為。（二）收養(yǎng)的法律特征1．收養(yǎng)行為的身份性2．收養(yǎng)關(guān)系主體的限定性3．收養(yǎng)關(guān)系的可變性6第一節(jié)收養(yǎng)和收養(yǎng)法一、收養(yǎng)的概念和法律特征7二、收養(yǎng)制度的歷史沿革（一）古代法中的收養(yǎng)制度

收養(yǎng)制度由來已久，早在父系氏族社會就為當時的習(xí)慣所確認；進入階級社會以后，收養(yǎng)制度具有了一定的法律形式，成為不同時代、不同國家的親屬制度、家庭制度的重要組成部分。在中國古代的宗法制度下，立嗣是收養(yǎng)的一種特殊形式，立嗣的宗旨是為了承繼宗祧，它同近、現(xiàn)代的收養(yǎng)有著嚴格的區(qū)別：1、按照禮、法的規(guī)定，只有男子無后才能立嗣，同時所立者也僅限于男子；2、嗣子的地位高于他種收養(yǎng)的被收養(yǎng)人3．立嗣行為可由需立嗣者在生前進行，亦可在其死后，由配偶或其他尊長代為立嗣。4．立嗣的條件是很嚴格的。7二、收養(yǎng)制度的歷史沿革（一）古代法中的收養(yǎng)制度8（二）近、現(xiàn)代的收養(yǎng)制度（三）新中國的收養(yǎng)法制建設(shè)中華人民共和國成立后，在一個相當長的時期內(nèi)，收養(yǎng)問題是按照婚姻法中的原則規(guī)定和最高人民法院的有關(guān)司法解釋處理的。法律淵源：《中華人民共和國收養(yǎng)法》

民政部關(guān)于《中國公民收養(yǎng)子女登記辦法》，民政部關(guān)于《外國人在中華人民共和國收養(yǎng)子女登記辦法》，民政部關(guān)于《華僑以及居住在香港、澳門、臺灣地區(qū)的中國公民辦理收養(yǎng)登記的管轄以及所需要出具的證件和證明材料的規(guī)定》等，以及關(guān)于適用《中華人民共和國收養(yǎng)法》的民族自治地方的變通的或者補充的規(guī)定，最高人民法院關(guān)于適用收養(yǎng)法的司法解釋和中華人民共和國締結(jié)或參加的有關(guān)解決收養(yǎng)關(guān)系法律沖突的國際條約，8（二）近、現(xiàn)代的收養(yǎng)制度9（四）我國收養(yǎng)法的基本原則1、有利于未成年人的撫養(yǎng)和成長的原則2、保障被收養(yǎng)人和收養(yǎng)人合法權(quán)益的原則3、平等自愿的原則4、不得違背社會公德的原則5、不得違背計劃生育的法律和法規(guī)的原則9（四）我國收養(yǎng)法的基本原則10

第二節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的成立一、收養(yǎng)關(guān)系成立的條件收養(yǎng)行為是民事法律行為的特定種類，收養(yǎng)成立的實質(zhì)要件既要符合民法中有關(guān)民事法律行為的一般規(guī)定，又要符合收養(yǎng)法中有關(guān)收養(yǎng)行為的專門規(guī)定。（一）被收養(yǎng)人的條件我國《收養(yǎng)法》第4條規(guī)定，下列不滿14周歲的未成年人可以被收養(yǎng)：1、喪失父母的孤兒2、查找不到父母的棄嬰和兒童3、生父母有特殊困難無力撫養(yǎng)的子女10第二節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的成立一、收養(yǎng)關(guān)系成立的條件11（二）送養(yǎng)人的條件我國《收養(yǎng)人》第5條規(guī)定，下列公民、組織可以作為送養(yǎng)人:1、孤兒的監(jiān)護人2、社會福利機構(gòu)3、有特殊困難無力撫養(yǎng)子女的生父母關(guān)于以生父母為送養(yǎng)人的問題，我國《收養(yǎng)法》中還有下列相關(guān)規(guī)定：第一，《收養(yǎng)法》第10條第1款規(guī)定：“生父母送養(yǎng)子女，須雙方共同送養(yǎng)。生父母一方不明或者查找不到的可以單方送養(yǎng)。”第二，《收養(yǎng)法》第18條規(guī)定：“配偶一方死亡，另一方送養(yǎng)未成年子女的，死亡一方的父母有優(yōu)先撫養(yǎng)的權(quán)利?！蔽覈妒震B(yǎng)法》還規(guī)定：“未成年人的父母均不具備完全民事行為能力的，該未成年人的監(jiān)護人不得將其送養(yǎng)，但父母對該未成年人有嚴重危害可能的除外。”（第12條）11（二）送養(yǎng)人的條件12(三）收養(yǎng)人的條件我國《收養(yǎng)法》第6條規(guī)定，收養(yǎng)人應(yīng)當同時具備下列條件：1、無子女2、有撫養(yǎng)教育被收養(yǎng)人的能力3、未患有在醫(yī)學(xué)上認為不應(yīng)當收養(yǎng)子女的疾病4．年滿30周歲關(guān)于收養(yǎng)人方面的條件，我國《收養(yǎng)法》中還有下列幾項規(guī)定。第一，《收養(yǎng)法》第9條規(guī)定：“無配偶的男性收養(yǎng)女性的，收養(yǎng)人與被收養(yǎng)人的年齡應(yīng)當相差40周歲以上。”第二，《收養(yǎng)法》第10條第2款規(guī)定：“有配偶者收養(yǎng)子女，須夫妻共同收養(yǎng)。”此外，《收養(yǎng)法》還對收養(yǎng)人作了只能收養(yǎng)一名子女的數(shù)量限制（第8條）。12(三）收養(yǎng)人的條件13（四）當事人的收養(yǎng)合意1、收養(yǎng)人收養(yǎng)與送養(yǎng)人送養(yǎng)須雙方自愿2、收養(yǎng)年滿10周歲以上的未成年人還應(yīng)征得被收養(yǎng)人的同意13（四）當事人的收養(yǎng)合意14（五）在法定情形下放寬收養(yǎng)條件的特別規(guī)定1、關(guān)于收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女的規(guī)定《收養(yǎng)法》第7條第1款指出：“收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女，可以不受本法第4條第3項、第5條第3項、第9條和被收養(yǎng)人不滿14周歲的限制。”按此規(guī)定，在收養(yǎng)兄弟姊妹的子女、堂兄弟姊妹的子女、表兄弟姊妹的子女時，條件放寬之處有四：第一，其生父母無特殊困難、有撫養(yǎng)能力的子女，亦可為被收養(yǎng)人。第二，無特殊困難、有撫養(yǎng)能力的生父母，亦可為送養(yǎng)人。第三，無配偶的男性收養(yǎng)女性，不受收養(yǎng)人與被收養(yǎng)人間須有40周歲以上年齡差的限制。第四，可以收養(yǎng)年滿14周歲的未成年人。《收養(yǎng)法》第7條第2款還指出：“華僑收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女，還可以不受收養(yǎng)人無子女的限制?！?4（五）在法定情形下放寬收養(yǎng)條件的特別規(guī)定152、關(guān)于收養(yǎng)孤兒，殘疾兒童或者查找不到生父母的棄嬰和兒童《收養(yǎng)法》第8條第2款指出：“收養(yǎng)孤兒、殘疾兒童或者社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰和兒童、可以不受收養(yǎng)人無子女和收養(yǎng)一名的限制。”按此規(guī)定，有子女的公民亦可收養(yǎng)孤兒、殘疾兒童或者社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰和兒童，收養(yǎng)一名或數(shù)名均可。3、關(guān)于繼父母收養(yǎng)繼子女的規(guī)定《收養(yǎng)法》第14條指出：“繼父或者繼母經(jīng)繼子女的生父母同意，可以收養(yǎng)繼子女，并可以不受本法第4條第3項、第5條第3項、第6條和被收養(yǎng)人不滿14周歲以及收養(yǎng)一名的限制?！卑创艘?guī)定，繼子女的生父母即使無特殊困難，有撫養(yǎng)能力，繼父或者繼母即使已有子女，欠缺撫養(yǎng)教育的能力，患有在醫(yī)學(xué)上認為不應(yīng)當收養(yǎng)子女的疾病，不滿30周歲，繼子女即使是已滿14周歲的未成年人，仍得成立此種收養(yǎng)關(guān)系，而且可以收養(yǎng)一名或數(shù)名。152、關(guān)于收養(yǎng)孤兒，殘疾兒童或者查找不到生父母的棄嬰和兒童16二、收養(yǎng)關(guān)系成立的程序（一）收養(yǎng)登記1、辦理收養(yǎng)登記的機關(guān)辦理收養(yǎng)登記的法定機關(guān)，是縣級以上人民政府的民政部門。按照被收養(yǎng)人情況的不同，又可分為：（1）收養(yǎng)社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰、兒童和孤兒的，在社會福利機構(gòu)所在地的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。（2）收養(yǎng)非社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰和兒童的，在棄嬰和兒童發(fā)現(xiàn)地的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。（3）收養(yǎng)生父母有特殊困難無力撫養(yǎng)的子女或者由監(jiān)護人監(jiān)護的孤兒的，在被收養(yǎng)人生父母或者監(jiān)護人常住戶口所在地（組織作監(jiān)護人的，在該組織所在地）的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。（4）收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女，以及繼父或者繼母收養(yǎng)繼子女的，在被收養(yǎng)人生父或者生母常住戶口所在地的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。16二、收養(yǎng)關(guān)系成立的程序（一）收養(yǎng)登記172、收養(yǎng)登記的具體程序（1）申請首先，夫妻共同收養(yǎng)子女者，一方如果不能親自到收養(yǎng)登記機關(guān)的，應(yīng)當書面委托另一方辦理登記手續(xù)，委托書應(yīng)當經(jīng)過村民委員會或者居民委員會證明或者經(jīng)過公證。其次，送養(yǎng)人為公民的，須送養(yǎng)人親自到收養(yǎng)登記機關(guān)辦理收養(yǎng)登記。送養(yǎng)人為社會福利機構(gòu)的，須由其負責人或委托代理人到收養(yǎng)登記機關(guān)辦理收養(yǎng)登記，最后，被收養(yǎng)人是年滿10周歲以上的未成年人的，亦必須親自到收養(yǎng)登記機關(guān)。申請收養(yǎng)登記時，收養(yǎng)人應(yīng)當向收養(yǎng)登記機關(guān)提交收養(yǎng)申請書。收養(yǎng)申請書應(yīng)包括如下內(nèi)容：第一，收養(yǎng)人情況；第二，送養(yǎng)人情況；第三，被收養(yǎng)人情況；第四，收養(yǎng)的目的；第五，收養(yǎng)人作出的不虐待、不遺棄被收養(yǎng)人和撫育被收養(yǎng)人健康成長的保證。172、收養(yǎng)登記的具體程序18（2）審查收養(yǎng)登記機關(guān)收到收養(yǎng)登記申請書及有關(guān)材料后，應(yīng)當自次日起30日內(nèi)進行審查。審查的主要內(nèi)容包括：第一，收養(yǎng)申請人是否符合法律所規(guī)定的收養(yǎng)人條件以及其收養(yǎng)的目的是否正當。第二，被收養(yǎng)人是否符合法律所規(guī)定的被收養(yǎng)人條件。第三，送養(yǎng)人是否符合法律所規(guī)定的送養(yǎng)人條件。第四，當事人申請收養(yǎng)的意思表示是否真實。（3）登記經(jīng)過審查后，收養(yǎng)登記機關(guān)對申請人證件齊全有效、符合收養(yǎng)法規(guī)定的收養(yǎng)條件的，應(yīng)為其辦理收養(yǎng)登記，發(fā)給收養(yǎng)證。收養(yǎng)關(guān)系自登記之日起成立。對不符合收養(yǎng)法規(guī)定條件的，不予登記，并對當事人說明理由。收養(yǎng)查找不到生父母的棄嬰、兒童的，收養(yǎng)登記機關(guān)應(yīng)當在登記前公告查找其生父母；自公告之日起滿60日，棄嬰、兒童的生父母或者其他監(jiān)護人未認領(lǐng)的，視為查找不到生父母的棄嬰、兒童。公告期間不計算在登記辦理期限內(nèi)。18（2）審查19（二）收養(yǎng)協(xié)議和收養(yǎng)公證收養(yǎng)協(xié)議和收養(yǎng)公證并不是收養(yǎng)的法定形式要件，而是由當事人自主選擇的。1、收養(yǎng)協(xié)議收養(yǎng)協(xié)議，是收養(yǎng)關(guān)系當事人之間，依照法律規(guī)定的條件訂立的，關(guān)于同意成立收養(yǎng)關(guān)系的協(xié)議。訂立收養(yǎng)協(xié)議應(yīng)當符合如下法律要求：（1）訂立收養(yǎng)協(xié)議的當事人即收養(yǎng)人、被收養(yǎng)人與送養(yǎng)人均須符合收養(yǎng)法規(guī)定的收養(yǎng)成立的條件。（2）收養(yǎng)協(xié)議的主要條款，應(yīng)當包括收養(yǎng)人、送養(yǎng)人和被收養(yǎng)人的基本情況，收養(yǎng)的目的，收養(yǎng)人不虐待、不遺棄被收養(yǎng)人和撫育被收養(yǎng)人健康成長的保證，以及雙方要求訂入的其他內(nèi)容。（3）收養(yǎng)協(xié)議的形式，應(yīng)當為書面協(xié)議。19（二）收養(yǎng)協(xié)議和收養(yǎng)公證獸藥殘留帶來的食品安全問題Textinhere多寶魚瘦肉精獸藥殘留帶來的食品安全問題Textinhere多寶魚瘦肉項目一獸藥殘留快速檢測原理一、微生物法快速檢測獸藥殘留微生物法檢測動物性食品中抗菌藥物殘留的原理是根據(jù)抗菌藥物對微生物生理功能、代謝的抑制作用，來定性或定量確定樣品中藥物殘留。一般選用不同的菌株和培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)基中加入某些成分，利用抗菌藥物對不同菌株敏感性的差異，以及影響藥物活性的特定成分和培養(yǎng)條件來推斷受檢藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。優(yōu)點：單個試劑盒分析樣品數(shù)量大，操作便捷，靈敏度高以及對調(diào)價要求低，適用于養(yǎng)殖場和食品加工車間使用。1、平皿法2、生化檢測法項目一獸藥殘留快速檢測原理一、微生物法快速檢測獸藥殘留1、二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留基于抗原抗體特異性反應(yīng)的檢測原理。分為：放射免疫分析熒光免疫分析酶免疫分析發(fā)光免疫分析膠體金免疫分析儀器免疫分析無標記免疫分析二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留內(nèi)容主要包括：檢測對象的選擇檢測對象結(jié)構(gòu)分析和免疫半抗原的合成人工結(jié)合抗原的制備與鑒定抗體的制備檢測方法的確立與方法評價其中2,3是免疫學(xué)方法建立的關(guān)鍵和技術(shù)難點二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留檢測方法的確立包括以下：（1）膠體金免疫色譜實驗測定法（2）酶聯(lián)免疫吸附測定法（3）放射免疫及熒光免疫測定法（4）生物感應(yīng)器二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留項目二獸藥殘留檢測卡和試劑盒一、鹽酸克倫特羅檢測卡1適用范圍

此方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟和豬尿液中鹽酸克倫特羅含量的檢測。項目二獸藥殘留檢測卡和試劑盒一、鹽酸克倫特羅檢測卡2檢測原理

本試劑運用抗原抗體的特異反應(yīng)以及側(cè)向?qū)游龊湍z體金技術(shù)進行樣品中克倫特羅分子的快速定性檢測。用BSA(牛血清白蛋白)偶聯(lián)的克倫特羅分子與膠體金顆粒結(jié)合后，包被在醋酸纖維素膜上；在硝酸纖維素膜上將克倫特羅抗體和BSA抗體分別包被在檢測區(qū)（T）和質(zhì)控區(qū)（C）。當樣本加到加樣孔后，樣本中的克倫特羅分子與克倫特羅-BSA-膠體金偶聯(lián)物一起層析泳動到檢測區(qū)競爭與克倫特羅抗體結(jié)合，剩余的克倫特羅-BSA-膠體金繼續(xù)泳動到質(zhì)控區(qū)與抗體結(jié)合。因此，當樣本中的克倫特羅濃度超過一定量后，膠體金偶聯(lián)物就不能與克倫特羅抗體結(jié)合，此時檢測區(qū)不出現(xiàn)紫紅色線條；當樣本中克倫特羅濃度低于一定值或樣本中沒有克倫特羅時，膠體金偶聯(lián)物就與克倫特羅抗體結(jié)合，從而在檢測區(qū)顯示出一條紫紅色線條；而無論樣本中是否含有克倫特羅分子，質(zhì)控區(qū)都會出現(xiàn)紫紅色線條，以示檢測有效。2檢測原理3主要儀器

食品加工機，低速離心機，電子秤（精度0.1克），250ul單道微量移液器（移液槍）。4材料與試劑

克倫特羅膠體金法檢測卡，檢測試劑A（3%三氯乙酸溶液），檢測試劑B（0.1N氫氧化鈉溶液），pH試紙（1-14），剪刀，10ml試管（或離心管），一次性塑料吸管、一次性手套等。3主要儀器5操作步驟（1）從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1小時內(nèi)應(yīng)盡快地使用；（2）將肉或內(nèi)臟樣本用剪刀剪成碎條后放入食品加工機中用一字刀粉碎，秤取5g粉碎樣本置于試管中，加入5毫升檢測試劑A。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10分鐘；（3）用離心機離心裝有浸泡液和樣本的試管2分鐘（3000rpm），用移液槍移取250μl上清液轉(zhuǎn)移入2ml檢測管中，加入極少量檢測試劑B，調(diào)整pH值至7左右；（4）將鹽酸克倫特羅檢測卡片置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔內(nèi)；（5）等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在5分鐘時讀取。5操作步驟6結(jié)果判定陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)；陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)；無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或檢測卡已變質(zhì)損壞，應(yīng)重新測試1次，如仍為此現(xiàn)象，應(yīng)更換檢測卡或聯(lián)系供應(yīng)廠家；陽性結(jié)果表明鹽酸克倫特羅含量在閾值以上，陰性結(jié)果表明鹽酸克倫特羅含量在閾值以下。6結(jié)果判定7靈敏度

靈敏度（閾值）：根據(jù)每種檢測卡控制濃度而定，鹽酸克倫特羅有3ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、30ng/ml和50ng/ml等控制規(guī)格，判斷前請向供應(yīng)廠家咨詢控制閾值。7靈敏度8注意事項（1）肉及內(nèi)臟中脂肪會導(dǎo)致假陽性結(jié)果，取樣時請?zhí)蕹庋劭梢姷闹?；?）鹽酸克倫特羅檢測卡應(yīng)在常溫下使用，不用對剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉直接進行檢測；8注意事項二、克倫特羅ELISA試劑盒檢測1適用范圍

此方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟、豬尿液及飼料中鹽酸克倫特羅含量的檢測。二、克倫特羅ELISA試劑盒檢測二、使用單位需自備的設(shè)備及試劑

1、設(shè)備：┅┅微孔板酶標儀450nm/630nm┅┅振蕩器┅┅離心機┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅聚苯乙烯離心管：10ml、50ml┅┅微量移液器：單道20l～200l、100l～1000l二、使用單位需自備的設(shè)備及試劑試劑：┅┅甲醇(分析純)┅┅氫氧化鈉(分析純)┅┅濃鹽酸┅┅蒸餾水試劑：三、提供的材料與試劑

1、96孔酶標板×1塊2、標準品×6瓶：(1ml/瓶）

0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb3、高濃度標準品：100ppb（1ml/瓶）4、克倫特羅酶標物…………6ml5、克倫特羅抗試劑…………9ml6、底物液A液………6ml7、底物液B液………6ml8、終止液…………6ml9、濃縮洗滌液(10×)……40ml10、克倫特羅濃縮樣品稀釋液(2×)…………40ml三、提供的材料與試劑四、溶液的配制

配液1:樣品稀釋液用去離子水將克倫特羅濃縮樣品稀釋液(2×)按1:1體積比進行稀釋，即：1份克倫特羅濃縮樣品稀釋液(2×)+1份去離子水；用于提取樣本的稀釋，樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個月。配液2:洗滌工作液用去離子水將濃縮洗滌液(10×)按1:9體積比進行稀釋，即：1份濃縮洗滌液(10×)+9份去離子水；用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月。配液3:1M氫氧化鈉溶液稱取4.0g氫氧化鈉加去離子水混勻溶解定容至100ml。配液4:0.1M鹽酸溶液量取0.83ml濃鹽酸加去離子水混勻定容至100ml配液5：25%甲醇溶液將25ml無水甲醇加入到75ml去離子水中并充分混勻配液6：組織樣本提取液

80ml25%甲醇溶液加20ml0.1M鹽酸四、溶液的配制五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知：（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結(jié)果。（c）未處理的樣本需冷凍保存。（d）處理后的樣本可在2-8℃避光保存24h。（一）組織（帶有低脂肪的肉、肝）----稱取2.0±0.05g勻漿樣本至50ml聚苯乙烯離心管中；----加入6ml組織樣本提取液，用振蕩器振蕩搖；----4000r/min離心5min；----取1ml上清液,加入10μl1M氫氧化鈉溶液混勻（混勻后測定pH值，大約為8）；----4000r/min離心5min；----取上清液20l用于分析。五、樣本前處理步驟獸藥殘留快速檢測課件（二）尿液----取20l清亮尿樣直接測定（如尿樣渾濁須經(jīng)過濾或3000g以上，15℃離心10min直至清亮），暫不使用的樣本需冷凍保存。（三）飼料前處理方法----用均質(zhì)器均質(zhì)飼料樣本；----稱取1±0.05g均質(zhì)樣本至50ml離心管中，加0.1MHCL溶液10ml，用振蕩器劇烈振蕩5min，4000r/min以上離心5min；----取1ml上清液,加入1M氫氧化鈉溶液混勻（大約40μl~70μl，混勻以后測定pH值，大約為8）；----4000r/min離心5min；---將上清液用樣品稀釋液五倍稀釋（即：1份上清液+4份稀釋后的樣品稀釋液）并充分混勻----取20l用于分析。（二）尿液六、檢測步驟測定前應(yīng)須知：1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。六、檢測步驟操作步驟：

1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。3、洗滌工作液在使用前也需回溫。4、編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。5、加標準品/樣本：加標準品/樣本20l/孔到對應(yīng)的微孔中，再加入克倫特羅酶標物50l/孔，再加入克倫特羅抗試劑80ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。操作步驟：`

6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液200l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。8、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。`6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作七、檢測方法靈敏度、準確度、精密度試劑盒靈敏度：0.1ppb樣本最低檢測限：組織樣品………0.3ppb尿液樣品………0.1ppb飼料樣品……5ppb七、檢測方法靈敏度、準確度、精密度八、注意事項

1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。3、每加一種試劑前需將其搖勻。4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。八、注意事項

6、儲存條件保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應(yīng)時間。9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。6、儲存條件九、貯藏條件及保存期

貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。九、貯藏條件及保存期ThankYou!ThankYou!

模塊三

獸藥殘留快速檢測

模塊三獸藥殘留快速檢測學(xué)習(xí)目標了解獸藥殘留所帶來的食品安全問題、獲得關(guān)于獸藥殘留的有關(guān)標準依據(jù)和檢測試劑制造商信息等；理解常見的獸藥殘留快速檢測的基本原理；掌握常見的獸藥殘留快速檢測基本方法和基本操作技能。學(xué)習(xí)目標了解獸藥殘留所帶來的食品安全問題、獲得關(guān)于獸藥殘留的獸藥和獸藥殘留的定義獸藥指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。

獸藥殘留指給畜禽使用獸藥或添加劑后，藥物以其原形及其代謝產(chǎn)物的形式蓄積或儲存在動物的細胞、組織、器官或可食性產(chǎn)品（如蛋、奶）中。

獸藥和獸藥殘留的定義獸藥指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。獸獸藥的分類抗生素、磺胺藥類、呋喃藥類、抗球蟲藥、激素藥類和驅(qū)蟲藥獸藥的分類抗生素、磺胺藥類、呋喃藥類、抗球蟲藥、激素藥類和驅(qū)52第七章收養(yǎng)第一節(jié)收養(yǎng)和收養(yǎng)法第二節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的成立第三節(jié)收養(yǎng)的效力第四節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的解除5第七章收養(yǎng)53第一節(jié)收養(yǎng)和收養(yǎng)法

一、收養(yǎng)的概念和法律特征（一）收養(yǎng)的概念收養(yǎng)，是公民（自然人）依法領(lǐng)養(yǎng)他人子女為己之子女，使本無親子關(guān)系的當事人間發(fā)生法律擬制的親子關(guān)系的民事法律行為。（二）收養(yǎng)的法律特征1．收養(yǎng)行為的身份性2．收養(yǎng)關(guān)系主體的限定性3．收養(yǎng)關(guān)系的可變性6第一節(jié)收養(yǎng)和收養(yǎng)法一、收養(yǎng)的概念和法律特征54二、收養(yǎng)制度的歷史沿革（一）古代法中的收養(yǎng)制度

收養(yǎng)制度由來已久，早在父系氏族社會就為當時的習(xí)慣所確認；進入階級社會以后，收養(yǎng)制度具有了一定的法律形式，成為不同時代、不同國家的親屬制度、家庭制度的重要組成部分。在中國古代的宗法制度下，立嗣是收養(yǎng)的一種特殊形式，立嗣的宗旨是為了承繼宗祧，它同近、現(xiàn)代的收養(yǎng)有著嚴格的區(qū)別：1、按照禮、法的規(guī)定，只有男子無后才能立嗣，同時所立者也僅限于男子；2、嗣子的地位高于他種收養(yǎng)的被收養(yǎng)人3．立嗣行為可由需立嗣者在生前進行，亦可在其死后，由配偶或其他尊長代為立嗣。4．立嗣的條件是很嚴格的。7二、收養(yǎng)制度的歷史沿革（一）古代法中的收養(yǎng)制度55（二）近、現(xiàn)代的收養(yǎng)制度（三）新中國的收養(yǎng)法制建設(shè)中華人民共和國成立后，在一個相當長的時期內(nèi)，收養(yǎng)問題是按照婚姻法中的原則規(guī)定和最高人民法院的有關(guān)司法解釋處理的。法律淵源：《中華人民共和國收養(yǎng)法》

民政部關(guān)于《中國公民收養(yǎng)子女登記辦法》，民政部關(guān)于《外國人在中華人民共和國收養(yǎng)子女登記辦法》，民政部關(guān)于《華僑以及居住在香港、澳門、臺灣地區(qū)的中國公民辦理收養(yǎng)登記的管轄以及所需要出具的證件和證明材料的規(guī)定》等，以及關(guān)于適用《中華人民共和國收養(yǎng)法》的民族自治地方的變通的或者補充的規(guī)定，最高人民法院關(guān)于適用收養(yǎng)法的司法解釋和中華人民共和國締結(jié)或參加的有關(guān)解決收養(yǎng)關(guān)系法律沖突的國際條約，8（二）近、現(xiàn)代的收養(yǎng)制度56（四）我國收養(yǎng)法的基本原則1、有利于未成年人的撫養(yǎng)和成長的原則2、保障被收養(yǎng)人和收養(yǎng)人合法權(quán)益的原則3、平等自愿的原則4、不得違背社會公德的原則5、不得違背計劃生育的法律和法規(guī)的原則9（四）我國收養(yǎng)法的基本原則57

第二節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的成立一、收養(yǎng)關(guān)系成立的條件收養(yǎng)行為是民事法律行為的特定種類，收養(yǎng)成立的實質(zhì)要件既要符合民法中有關(guān)民事法律行為的一般規(guī)定，又要符合收養(yǎng)法中有關(guān)收養(yǎng)行為的專門規(guī)定。（一）被收養(yǎng)人的條件我國《收養(yǎng)法》第4條規(guī)定，下列不滿14周歲的未成年人可以被收養(yǎng)：1、喪失父母的孤兒2、查找不到父母的棄嬰和兒童3、生父母有特殊困難無力撫養(yǎng)的子女10第二節(jié)收養(yǎng)關(guān)系的成立一、收養(yǎng)關(guān)系成立的條件58（二）送養(yǎng)人的條件我國《收養(yǎng)人》第5條規(guī)定，下列公民、組織可以作為送養(yǎng)人:1、孤兒的監(jiān)護人2、社會福利機構(gòu)3、有特殊困難無力撫養(yǎng)子女的生父母關(guān)于以生父母為送養(yǎng)人的問題，我國《收養(yǎng)法》中還有下列相關(guān)規(guī)定：第一，《收養(yǎng)法》第10條第1款規(guī)定：“生父母送養(yǎng)子女，須雙方共同送養(yǎng)。生父母一方不明或者查找不到的可以單方送養(yǎng)?！钡诙妒震B(yǎng)法》第18條規(guī)定：“配偶一方死亡，另一方送養(yǎng)未成年子女的，死亡一方的父母有優(yōu)先撫養(yǎng)的權(quán)利。”我國《收養(yǎng)法》還規(guī)定：“未成年人的父母均不具備完全民事行為能力的，該未成年人的監(jiān)護人不得將其送養(yǎng)，但父母對該未成年人有嚴重危害可能的除外?！保ǖ?2條）11（二）送養(yǎng)人的條件59(三）收養(yǎng)人的條件我國《收養(yǎng)法》第6條規(guī)定，收養(yǎng)人應(yīng)當同時具備下列條件：1、無子女2、有撫養(yǎng)教育被收養(yǎng)人的能力3、未患有在醫(yī)學(xué)上認為不應(yīng)當收養(yǎng)子女的疾病4．年滿30周歲關(guān)于收養(yǎng)人方面的條件，我國《收養(yǎng)法》中還有下列幾項規(guī)定。第一，《收養(yǎng)法》第9條規(guī)定：“無配偶的男性收養(yǎng)女性的，收養(yǎng)人與被收養(yǎng)人的年齡應(yīng)當相差40周歲以上?！钡诙妒震B(yǎng)法》第10條第2款規(guī)定：“有配偶者收養(yǎng)子女，須夫妻共同收養(yǎng)?！贝送猓妒震B(yǎng)法》還對收養(yǎng)人作了只能收養(yǎng)一名子女的數(shù)量限制（第8條）。12(三）收養(yǎng)人的條件60（四）當事人的收養(yǎng)合意1、收養(yǎng)人收養(yǎng)與送養(yǎng)人送養(yǎng)須雙方自愿2、收養(yǎng)年滿10周歲以上的未成年人還應(yīng)征得被收養(yǎng)人的同意13（四）當事人的收養(yǎng)合意61（五）在法定情形下放寬收養(yǎng)條件的特別規(guī)定1、關(guān)于收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女的規(guī)定《收養(yǎng)法》第7條第1款指出：“收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女，可以不受本法第4條第3項、第5條第3項、第9條和被收養(yǎng)人不滿14周歲的限制?！卑创艘?guī)定，在收養(yǎng)兄弟姊妹的子女、堂兄弟姊妹的子女、表兄弟姊妹的子女時，條件放寬之處有四：第一，其生父母無特殊困難、有撫養(yǎng)能力的子女，亦可為被收養(yǎng)人。第二，無特殊困難、有撫養(yǎng)能力的生父母，亦可為送養(yǎng)人。第三，無配偶的男性收養(yǎng)女性，不受收養(yǎng)人與被收養(yǎng)人間須有40周歲以上年齡差的限制。第四，可以收養(yǎng)年滿14周歲的未成年人。《收養(yǎng)法》第7條第2款還指出：“華僑收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女，還可以不受收養(yǎng)人無子女的限制?！?4（五）在法定情形下放寬收養(yǎng)條件的特別規(guī)定622、關(guān)于收養(yǎng)孤兒，殘疾兒童或者查找不到生父母的棄嬰和兒童《收養(yǎng)法》第8條第2款指出：“收養(yǎng)孤兒、殘疾兒童或者社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰和兒童、可以不受收養(yǎng)人無子女和收養(yǎng)一名的限制?！卑创艘?guī)定，有子女的公民亦可收養(yǎng)孤兒、殘疾兒童或者社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰和兒童，收養(yǎng)一名或數(shù)名均可。3、關(guān)于繼父母收養(yǎng)繼子女的規(guī)定《收養(yǎng)法》第14條指出：“繼父或者繼母經(jīng)繼子女的生父母同意，可以收養(yǎng)繼子女，并可以不受本法第4條第3項、第5條第3項、第6條和被收養(yǎng)人不滿14周歲以及收養(yǎng)一名的限制?！卑创艘?guī)定，繼子女的生父母即使無特殊困難，有撫養(yǎng)能力，繼父或者繼母即使已有子女，欠缺撫養(yǎng)教育的能力，患有在醫(yī)學(xué)上認為不應(yīng)當收養(yǎng)子女的疾病，不滿30周歲，繼子女即使是已滿14周歲的未成年人，仍得成立此種收養(yǎng)關(guān)系，而且可以收養(yǎng)一名或數(shù)名。152、關(guān)于收養(yǎng)孤兒，殘疾兒童或者查找不到生父母的棄嬰和兒童63二、收養(yǎng)關(guān)系成立的程序（一）收養(yǎng)登記1、辦理收養(yǎng)登記的機關(guān)辦理收養(yǎng)登記的法定機關(guān)，是縣級以上人民政府的民政部門。按照被收養(yǎng)人情況的不同，又可分為：（1）收養(yǎng)社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰、兒童和孤兒的，在社會福利機構(gòu)所在地的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。（2）收養(yǎng)非社會福利機構(gòu)撫養(yǎng)的查找不到生父母的棄嬰和兒童的，在棄嬰和兒童發(fā)現(xiàn)地的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。（3）收養(yǎng)生父母有特殊困難無力撫養(yǎng)的子女或者由監(jiān)護人監(jiān)護的孤兒的，在被收養(yǎng)人生父母或者監(jiān)護人常住戶口所在地（組織作監(jiān)護人的，在該組織所在地）的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。（4）收養(yǎng)三代以內(nèi)同輩旁系血親的子女，以及繼父或者繼母收養(yǎng)繼子女的，在被收養(yǎng)人生父或者生母常住戶口所在地的收養(yǎng)登記機關(guān)辦理登記。16二、收養(yǎng)關(guān)系成立的程序（一）收養(yǎng)登記642、收養(yǎng)登記的具體程序（1）申請首先，夫妻共同收養(yǎng)子女者，一方如果不能親自到收養(yǎng)登記機關(guān)的，應(yīng)當書面委托另一方辦理登記手續(xù)，委托書應(yīng)當經(jīng)過村民委員會或者居民委員會證明或者經(jīng)過公證。其次，送養(yǎng)人為公民的，須送養(yǎng)人親自到收養(yǎng)登記機關(guān)辦理收養(yǎng)登記。送養(yǎng)人為社會福利機構(gòu)的，須由其負責人或委托代理人到收養(yǎng)登記機關(guān)辦理收養(yǎng)登記，最后，被收養(yǎng)人是年滿10周歲以上的未成年人的，亦必須親自到收養(yǎng)登記機關(guān)。申請收養(yǎng)登記時，收養(yǎng)人應(yīng)當向收養(yǎng)登記機關(guān)提交收養(yǎng)申請書。收養(yǎng)申請書應(yīng)包括如下內(nèi)容：第一，收養(yǎng)人情況；第二，送養(yǎng)人情況；第三，被收養(yǎng)人情況；第四，收養(yǎng)的目的；第五，收養(yǎng)人作出的不虐待、不遺棄被收養(yǎng)人和撫育被收養(yǎng)人健康成長的保證。172、收養(yǎng)登記的具體程序65（2）審查收養(yǎng)登記機關(guān)收到收養(yǎng)登記申請書及有關(guān)材料后，應(yīng)當自次日起30日內(nèi)進行審查。審查的主要內(nèi)容包括：第一，收養(yǎng)申請人是否符合法律所規(guī)定的收養(yǎng)人條件以及其收養(yǎng)的目的是否正當。第二，被收養(yǎng)人是否符合法律所規(guī)定的被收養(yǎng)人條件。第三，送養(yǎng)人是否符合法律所規(guī)定的送養(yǎng)人條件。第四，當事人申請收養(yǎng)的意思表示是否真實。（3）登記經(jīng)過審查后，收養(yǎng)登記機關(guān)對申請人證件齊全有效、符合收養(yǎng)法規(guī)定的收養(yǎng)條件的，應(yīng)為其辦理收養(yǎng)登記，發(fā)給收養(yǎng)證。收養(yǎng)關(guān)系自登記之日起成立。對不符合收養(yǎng)法規(guī)定條件的，不予登記，并對當事人說明理由。收養(yǎng)查找不到生父母的棄嬰、兒童的，收養(yǎng)登記機關(guān)應(yīng)當在登記前公告查找其生父母；自公告之日起滿60日，棄嬰、兒童的生父母或者其他監(jiān)護人未認領(lǐng)的，視為查找不到生父母的棄嬰、兒童。公告期間不計算在登記辦理期限內(nèi)。18（2）審查66（二）收養(yǎng)協(xié)議和收養(yǎng)公證收養(yǎng)協(xié)議和收養(yǎng)公證并不是收養(yǎng)的法定形式要件，而是由當事人自主選擇的。1、收養(yǎng)協(xié)議收養(yǎng)協(xié)議，是收養(yǎng)關(guān)系當事人之間，依照法律規(guī)定的條件訂立的，關(guān)于同意成立收養(yǎng)關(guān)系的協(xié)議。訂立收養(yǎng)協(xié)議應(yīng)當符合如下法律要求：（1）訂立收養(yǎng)協(xié)議的當事人即收養(yǎng)人、被收養(yǎng)人與送養(yǎng)人均須符合收養(yǎng)法規(guī)定的收養(yǎng)成立的條件。（2）收養(yǎng)協(xié)議的主要條款，應(yīng)當包括收養(yǎng)人、送養(yǎng)人和被收養(yǎng)人的基本情況，收養(yǎng)的目的，收養(yǎng)人不虐待、不遺棄被收養(yǎng)人和撫育被收養(yǎng)人健康成長的保證，以及雙方要求訂入的其他內(nèi)容。（3）收養(yǎng)協(xié)議的形式，應(yīng)當為書面協(xié)議。19（二）收養(yǎng)協(xié)議和收養(yǎng)公證獸藥殘留帶來的食品安全問題Textinhere多寶魚瘦肉精獸藥殘留帶來的食品安全問題Textinhere多寶魚瘦肉項目一獸藥殘留快速檢測原理一、微生物法快速檢測獸藥殘留微生物法檢測動物性食品中抗菌藥物殘留的原理是根據(jù)抗菌藥物對微生物生理功能、代謝的抑制作用，來定性或定量確定樣品中藥物殘留。一般選用不同的菌株和培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)基中加入某些成分，利用抗菌藥物對不同菌株敏感性的差異，以及影響藥物活性的特定成分和培養(yǎng)條件來推斷受檢藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。優(yōu)點：單個試劑盒分析樣品數(shù)量大，操作便捷，靈敏度高以及對調(diào)價要求低，適用于養(yǎng)殖場和食品加工車間使用。1、平皿法2、生化檢測法項目一獸藥殘留快速檢測原理一、微生物法快速檢測獸藥殘留1、二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留基于抗原抗體特異性反應(yīng)的檢測原理。分為：放射免疫分析熒光免疫分析酶免疫分析發(fā)光免疫分析膠體金免疫分析儀器免疫分析無標記免疫分析二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留內(nèi)容主要包括：檢測對象的選擇檢測對象結(jié)構(gòu)分析和免疫半抗原的合成人工結(jié)合抗原的制備與鑒定抗體的制備檢測方法的確立與方法評價其中2,3是免疫學(xué)方法建立的關(guān)鍵和技術(shù)難點二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留檢測方法的確立包括以下：（1）膠體金免疫色譜實驗測定法（2）酶聯(lián)免疫吸附測定法（3）放射免疫及熒光免疫測定法（4）生物感應(yīng)器二、免疫學(xué)方法快速檢測獸藥殘留項目二獸藥殘留檢測卡和試劑盒一、鹽酸克倫特羅檢測卡1適用范圍

此方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟和豬尿液中鹽酸克倫特羅含量的檢測。項目二獸藥殘留檢測卡和試劑盒一、鹽酸克倫特羅檢測卡2檢測原理

本試劑運用抗原抗體的特異反應(yīng)以及側(cè)向?qū)游龊湍z體金技術(shù)進行樣品中克倫特羅分子的快速定性檢測。用BSA(牛血清白蛋白)偶聯(lián)的克倫特羅分子與膠體金顆粒結(jié)合后，包被在醋酸纖維素膜上；在硝酸纖維素膜上將克倫特羅抗體和BSA抗體分別包被在檢測區(qū)（T）和質(zhì)控區(qū)（C）。當樣本加到加樣孔后，樣本中的克倫特羅分子與克倫特羅-BSA-膠體金偶聯(lián)物一起層析泳動到檢測區(qū)競爭與克倫特羅抗體結(jié)合，剩余的克倫特羅-BSA-膠體金繼續(xù)泳動到質(zhì)控區(qū)與抗體結(jié)合。因此，當樣本中的克倫特羅濃度超過一定量后，膠體金偶聯(lián)物就不能與克倫特羅抗體結(jié)合，此時檢測區(qū)不出現(xiàn)紫紅色線條；當樣本中克倫特羅濃度低于一定值或樣本中沒有克倫特羅時，膠體金偶聯(lián)物就與克倫特羅抗體結(jié)合，從而在檢測區(qū)顯示出一條紫紅色線條；而無論樣本中是否含有克倫特羅分子，質(zhì)控區(qū)都會出現(xiàn)紫紅色線條，以示檢測有效。2檢測原理3主要儀器

食品加工機，低速離心機，電子秤（精度0.1克），250ul單道微量移液器（移液槍）。4材料與試劑

克倫特羅膠體金法檢測卡，檢測試劑A（3%三氯乙酸溶液），檢測試劑B（0.1N氫氧化鈉溶液），pH試紙（1-14），剪刀，10ml試管（或離心管），一次性塑料吸管、一次性手套等。3主要儀器5操作步驟（1）從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1小時內(nèi)應(yīng)盡快地使用；（2）將肉或內(nèi)臟樣本用剪刀剪成碎條后放入食品加工機中用一字刀粉碎，秤取5g粉碎樣本置于試管中，加入5毫升檢測試劑A。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10分鐘；（3）用離心機離心裝有浸泡液和樣本的試管2分鐘（3000rpm），用移液槍移取250μl上清液轉(zhuǎn)移入2ml檢測管中，加入極少量檢測試劑B，調(diào)整pH值至7左右；（4）將鹽酸克倫特羅檢測卡片置于干凈平坦的臺面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處理液于加樣孔內(nèi)；（5）等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在5分鐘時讀取。5操作步驟6結(jié)果判定陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)；陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)；無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或檢測卡已變質(zhì)損壞，應(yīng)重新測試1次，如仍為此現(xiàn)象，應(yīng)更換檢測卡或聯(lián)系供應(yīng)廠家；陽性結(jié)果表明鹽酸克倫特羅含量在閾值以上，陰性結(jié)果表明鹽酸克倫特羅含量在閾值以下。6結(jié)果判定7靈敏度

靈敏度（閾值）：根據(jù)每種檢測卡控制濃度而定，鹽酸克倫特羅有3ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、30ng/ml和50ng/ml等控制規(guī)格，判斷前請向供應(yīng)廠家咨詢控制閾值。7靈敏度8注意事項（1）肉及內(nèi)臟中脂肪會導(dǎo)致假陽性結(jié)果，取樣時請?zhí)蕹庋劭梢姷闹?；?）鹽酸克倫特羅檢測卡應(yīng)在常溫下使用，不用對剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉直接進行檢測；8注意事項二、克倫特羅ELISA試劑盒檢測1適用范圍

此方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟、豬尿液及飼料中鹽酸克倫特羅含量的檢測。二、克倫特羅ELISA試劑盒檢測二、使用單位需自備的設(shè)備及試劑

1、設(shè)備：┅┅微孔板酶標儀450nm/630nm┅┅振蕩器┅┅離心機┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅聚苯乙烯離心管：10ml、50ml┅┅微量移液器：單道20l～200l、100l～1000l二、使用單位需自備的設(shè)備及試劑試劑：┅┅甲醇(分析純)┅┅氫氧化鈉(分析純)┅┅濃鹽酸┅┅蒸餾水試劑：三、提供的材料與試劑

1、96孔酶標板×1塊2、標準品×6瓶：(1ml/瓶）

0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb3、高濃度標準品：100ppb（1ml/瓶）4、克倫特羅酶標物…………6ml5、克倫特羅抗試劑…………9ml6、底物液A液………6ml7、底物液B液………6ml8、終止液…………6ml9、濃縮洗滌液(10×)……40ml10、克倫特羅濃縮樣品稀釋液(2×)…………40ml三、提供的材料與試劑四、溶液的配制

配液1:樣品稀釋液用去離子水將克倫特羅濃縮樣品稀釋液(2×)按1:1體積比進行稀釋，即：1份克倫特羅濃縮樣品稀釋液(2×)+1份去離子水；用于提取樣本的稀釋，樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個月。配液2:洗滌工作液用去離子水將濃縮洗滌液(10×)按1:9體積比進行稀釋，即：1份濃縮洗滌液(10×)+9份去離子水；用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月。配液3:1M氫氧化鈉溶液稱取4.0g氫氧化鈉加去離子水混勻溶解定容至100ml。配液4:0.1M鹽酸溶液量取0.83ml濃鹽酸加去離子水混勻定容至100ml配液5：25%甲醇溶液將25ml無水甲醇加入到75ml去離子水中并充分混勻配液6：組織樣本提取液

80ml25%甲醇溶液加20ml0.1M鹽酸四、溶液的配制五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知：（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結(jié)果。（c）未處理的樣本需冷凍保存。（d）處理后的樣本可在2-8℃避光保存24h。（一）組織（帶有低脂肪的肉、肝）----稱取2.0±0.05g勻漿樣本至50ml聚苯乙烯離心管中；----加入6ml組織樣本提取液，用振蕩器振蕩搖；----4000r/min離心5min；----取1ml上清液,加入10μl1M氫氧化鈉溶液混勻（混勻后測定pH值，大約為8）；----4000r/min離心5min；----取上清液20l用于分析。五、樣本前處理步驟獸藥殘留快