醫(yī)院PCR實驗室室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序

醫(yī)院PCR實驗室室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的隨時認(rèn)識并控制實驗室檢測的精巧度變化。合用范圍核酸擴(kuò)增熒光定量檢測實驗室，此中包含使用RocheLightCycler定量PCR儀的實驗室。操作人XXX操作步驟4.1自制血清質(zhì)量控制品a）自制的質(zhì)量控制血清來自臨床采集的已知HBV陽性血清，每采集到一份凍存于－20℃。b）預(yù)約室內(nèi)質(zhì)控品靶值為1×106copies/ml,總量20ml，計算各份血清的混淆量。c）室溫下復(fù)融質(zhì)控血清，按比率混淆血清，充分混勻。d）用0.5ml離心管盛裝質(zhì)控血清，每管100μl，分裝100管，節(jié)余血清依據(jù)荒棄物辦理及生物防備操作程序辦理。e）每10管質(zhì)控品裝一小袋，可分紅10小袋。1小袋置于－20℃冰箱，其余9小袋置于－80℃超低溫冰箱，用完1小袋，就從－80℃轉(zhuǎn)移1小袋質(zhì)控品到－20℃冰箱備用。4.2測定及計算

RCV取準(zhǔn)備用于下一階段室內(nèi)常例室內(nèi)質(zhì)量控制的血清，

每日隨病人標(biāo)本測定一管，

20天后計算各項目的測定結(jié)果的

X、s和

CV。此處的

CV即

RCV。RCV的計算公式以下：此中X為RCV測定中所得20份結(jié)果的均值?！票硎究偤?。n表示結(jié)果的份數(shù)（或天數(shù)）。此中各符號所代表的含義與X計算公式同樣。n-1為自由度。計算也能夠使用下邊的公式此中∑X2為各檢測結(jié)果平方值之總和。(∑X)2為各檢測結(jié)果之和的平方。4.3繪制RCV圖a）計算X+2s、X－2s、X+3s、X－3s并在縱坐標(biāo)上標(biāo)出的X、X+2s、X－2s、X+3s、X－3s的地點(diǎn)，并將其詳盡數(shù)值標(biāo)在左邊標(biāo)尺上。b）用紅筆劃出X±2s線，用藍(lán)筆劃出X±3s線，即成為一張“空圖”。此中每一小格代表實質(zhì)檢測數(shù)值的1/10。還應(yīng)填齊圖紙上方的各項，如：試驗項目，質(zhì)控血清根源及批號，起止日期，主要儀器等。還應(yīng)填上RCV中測定中所得的X、s、CV。測定過程中的特別狀況，應(yīng)在備注欄內(nèi)記錄。c）在圖紙下方“日期”、“測定值”、和“操作者”欄內(nèi)按原始記錄填入相應(yīng)內(nèi)容，邊填寫邊查對。注意數(shù)據(jù)次序應(yīng)嚴(yán)格按實質(zhì)操作狀況，不得顛倒。日期一欄內(nèi)，應(yīng)填寫實質(zhì)日期。未做測定的節(jié)假日，禮拜天在圖上留出空格似更加合理，因為這樣能夠真切反應(yīng)狀況，便于分析偏差原由。d）畫出每個檢測值所對應(yīng)的圖點(diǎn)。每個圖點(diǎn)在圖上的橫坐標(biāo)為其日期（或序號），而縱坐標(biāo)（即與相距的小格數(shù)量）可按下式計算。每個點(diǎn)的縱坐標(biāo)＝該點(diǎn)對應(yīng)的檢測值－靶值(X)圖中每個小格所代表的檢測數(shù)值e）計算結(jié)果為正數(shù)，則點(diǎn)在X軸上方，反之，則在X軸下方。各點(diǎn)畫在圖上后，用直線將各點(diǎn)次序連結(jié)，以便于觀察。4.4室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法描點(diǎn)a）圖中X線為靶線，X±2s為警示線，X±3s為失控線。關(guān)于同一批號的質(zhì)控血清無論使用幾個月，其空圖均不變化。只需將圖紙上方“起止日期”項填入每個月的實質(zhì)起止日期即可。b）每日將該批號質(zhì)控血清按相關(guān)規(guī)定程序復(fù)融伴同病人的標(biāo)本同時檢測。將日期、檢測結(jié)果和操作者照實記錄在圖下方的相應(yīng)地點(diǎn)，并按前面的方法畫出圖上的對應(yīng)點(diǎn)，用直線將該點(diǎn)與前一天的點(diǎn)連結(jié)。c）月尾計算當(dāng)月所有質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X、s和CV，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。圖形分析a）假如在X±3s線之外，則為失控，應(yīng)立刻報告相關(guān)負(fù)責(zé)人，快速查找原由。必需時復(fù)測標(biāo)本，此后方可發(fā)出報告，并將失控狀況、查找過程及辦理結(jié)果等詳盡記錄。b）假如在X±2s線之外，或出現(xiàn)連續(xù)6點(diǎn)以上在一側(cè)等規(guī)律變化，均應(yīng)實時向相關(guān)負(fù)責(zé)人反應(yīng)，并踴躍查找原由。但當(dāng)日的查驗結(jié)果一般能夠發(fā)出。經(jīng)過察看圖形的規(guī)律性變化進(jìn)行偏差分析，除去誤差根源a）曲線漂移：提示有系統(tǒng)偏差，正確度發(fā)生了一致性的向上或向下改變。這類變化常常是因為一個新的狀況惹起的。如改換不同樣批號試劑，啟用新批號的質(zhì)控血清、操作人員的變換等。在找原由時，應(yīng)要點(diǎn)注意“漂移”前后發(fā)生了那些改動的要素。b）趨向性變化：向下或向上的趨向性變化表示檢測的準(zhǔn)確度發(fā)生了逐漸地變化。這類變化常常是因為一個逐漸改變的要素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價的降低等。c）連續(xù)多點(diǎn)散布在靶值一側(cè)：當(dāng)前，一般以為質(zhì)控血清的檢測結(jié)果連續(xù)6天以上出此刻靶值同一側(cè)，則應(yīng)快速查找原由，爭取趕快使之答復(fù)環(huán)繞在靶值隨機(jī)散布的狀態(tài)。因為依據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理，由純隨機(jī)偏差造成的這類狀況的可能性很小。連續(xù)

6天以上出此刻靶值同一側(cè)可能性小于

1.5％。所以凡出現(xiàn)連續(xù)

6天以上出此刻靶值同一側(cè)者均有可能存在非隨機(jī)偏差要素。如結(jié)果與靶值偏離其實不太大，不會給臨床使用帶來太大影響時，一般化驗報告能夠照舊填發(fā)。d）其余規(guī)律變化：（周期性等）經(jīng)過圖形的資料比較進(jìn)行偏差分析，除去偏差根源a）每個月的月尾將該月的所有質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X和s與該批測定的X和s進(jìn)行比較。假如X發(fā)生了變化，說明正確度發(fā)生了變化提示有非隨機(jī)偏差存在。假如當(dāng)月s不同樣側(cè)表示檢測的精巧度發(fā)生了變化。b）將使用同一批號質(zhì)控血清的CT值的X和s按月份列出。假如X逐在月上漲，應(yīng)試慮保留不妥造成的試劑效價降低或質(zhì)控血清自己出現(xiàn)降解。假如各月份X基本一致而s逐月加大，則主要提示常例工作的精巧度降落，應(yīng)要點(diǎn)從操作、管理上找原由。c）在數(shù)年中，把每個月的CV和失控規(guī)律列成表，可用作檢測質(zhì)量的歷史性回首及趨向分析。5．本S