《沉淀與離心部分》教學課件

《沉淀與離心部分》幻燈片本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！《沉淀與離心部分》幻燈片本課件PPT僅供大家學習使用沉淀別離：通過改變某些條件或添加某種物質(zhì)，使酶的溶解度降低，而從溶液中沉淀析出，與其它溶質(zhì)別離的技術(shù)過程。原理：根據(jù)不同物質(zhì)在溶劑中的溶解度不同而到達別離的目的。不同溶解度的產(chǎn)生是由于溶質(zhì)分子之間及溶質(zhì)與溶劑分子之間親和力的差異而引起的，溶解度的大小與溶質(zhì)和溶劑的化學性質(zhì)及構(gòu)造有關(guān)。一、沉淀分離沉淀別離：通過改變某些條件或添加某種物質(zhì)，使酶的溶解度降低，沉淀分離方法適用分子鹽析沉淀法多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化等電點沉淀法用于氨基酸、蛋白質(zhì)及其他兩性物質(zhì)的沉淀，單獨應(yīng)用較少，常與其它方法結(jié)合使用有機溶劑沉淀法多用于蛋白質(zhì)和酶、多糖、核酸以及生物小分子的分離純化復合沉淀法發(fā)展較快的新方法選擇性變性沉淀法多用于除去某些不耐熱的和在一定pH值下易變性的雜蛋白常用的幾種沉淀分離方法沉淀分離方法適用分子鹽析沉淀法多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化1、鹽析沉淀法在鹽濃度達到某一界限后，酶的溶解度隨鹽濃度升高而降低，這稱為鹽析現(xiàn)象。優(yōu)點：成本低，不需要特別昂貴的設(shè)備操作簡單、安全對許多生物活性物質(zhì)具有穩(wěn)定作用1、鹽析沉淀法在鹽濃度達到某一界限后，酶的溶解度隨鹽濃度升高〔1〕根本原理〔1〕根本原理

在蛋白質(zhì)的鹽析中，通常采用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鈉和磷酸鈉等。其中以硫酸銨最為常用?！?〕中性鹽的選擇溶解度大：硫酸銨在0℃時仍有70.6%（質(zhì)量分數(shù)）的溶解度，遠遠高于其它鹽類。鹽類0℃

20℃

80℃

100℃

硫酸銨70.675.495.3103硫酸鈉4.918.943.342.2硫酸二氫鈉1.67.893.8101幾種鹽在不同溫度下的溶解度（g/100ml水）在蛋白質(zhì)的鹽析中，通常采用的中性鹽有硫酸銨、硫別離效果好：有的提取液參加適量硫酸銨鹽析，一步就可能除去75%的雜蛋白，純度提高了4倍。不易引起變性，有穩(wěn)定酶的作用：有些酶用2-3mol/L的硫酸銨保存可達數(shù)年之久。價格廉價，廢液不污染環(huán)境別離效果好：有的提取液參加適量硫酸銨鹽析，一步就可能除去75〔3〕鹽析的操作方法最常用的是固體硫酸銨參加法。研磨硫酸銨成細粉邊攪拌邊緩慢均勻少量多次加入冰浴離心過濾加鹽速度盡量慢，避免局部硫酸銨濃度過大而造成蛋白質(zhì)變性低濃度高濃度〔3〕鹽析的操作方法最常用的是固體硫酸銨參加法。研磨硫酸銨成〔4〕鹽析的影響因素蛋白質(zhì)濃度：2.5%-3.0%〔質(zhì)量分數(shù)〕較適中，相當于25-30mg/mlpH值：常選在該酶的等電點附近溫度：對溫度敏感的酶，要求在0-4℃下操作，以防止活力喪失鹽析時注意事項：酶不同，結(jié)構(gòu)不同，所需鹽濃度不同。另外，酶的來源，雜質(zhì)等也對其有影響。鹽析后的酶含大量鹽分，要進行脫鹽處理〔4〕鹽析的影響因素蛋白質(zhì)濃度：2.5%-3.0%〔質(zhì)量分數(shù)2、有機溶劑沉淀法原理：降低水溶液的介電常數(shù)，減小溶劑的極性，從而削弱了溶劑分子與蛋白質(zhì)分子間的相互作用力，導致蛋白質(zhì)溶解度降低而沉淀。優(yōu)點：分辯能力比鹽析高沉淀不用脫鹽缺點：對某些具有生物活性的大分子容易引起變性失活，操作需在低溫下進展。2、有機溶劑沉淀法原理：降低水溶液的介電常數(shù)，減小溶劑的極性〔1〕有機溶劑的選擇和濃度計算原那么：能與水互溶常用試劑：乙醇、甲醇和丙酮〔糖、核酸等常用的是乙醇〕計算公式：V=V0(S2-S1)/(100-S2)需要加入量原溶液體積原溶液中有機溶劑的體積有機溶劑終體積加入有機溶劑的體積分數(shù)（純?nèi)芤后w積分數(shù)為100%）〔1〕有機溶劑的選擇和濃度計算原那么：能與水互溶需要加入量原〔2〕有機溶劑沉淀的影響因素溫度：多數(shù)蛋白質(zhì)在有機溶劑與水的混合液中，溶解度隨溫度降低而下降。注意！大多數(shù)酶在有機溶劑中對溫度特別敏感，溫度稍高就會引起變性?。?！樣品濃度：通常使用5-20mg/ml的蛋白質(zhì)初濃度為宜，可以得到較好的別離效果。pH值：選在等電點附件，提高分辯能力離子強度：不超過5%為宜。乙醇溶液不超過原溶液2倍體積為宜?！?〕有機溶劑沉淀的影響因素溫度：多數(shù)蛋白質(zhì)在有機溶劑與水的離心：借助離心機旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，使不同分子大小、密度的物質(zhì)別離的技術(shù)。二、離心別離1、基本原理F=mω2r

當物體圍繞一中心軸做圓周運動時，運動物體就受到離心力的作用。旋轉(zhuǎn)速度越高，運動物體所受到的離心力越大。離心：借助離心機旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，使不同分子大小、密度的物2、相對離心力RCF就是實際離心力轉(zhuǎn)化為重力加速度的倍數(shù)

RCF=F離心力/F重力=mω2r/mg=ω2r/g

g為重力加速度〔980.7cm/sec2)

RCF=1.119×10-5×(r/min)2×r

2、相對離心力RCF就是實際離心力轉(zhuǎn)化為重力加速度的倍數(shù)

3、離心機的主要構(gòu)造和類型〔1〕制備性離心機分為三類：A、普通離心機最大轉(zhuǎn)速6000r/min左右，最大相對離心力近6000×g，容量為幾十毫升至幾升，別離形式是固液沉降別離，其轉(zhuǎn)速不能嚴格控制，通常不帶冷凍系統(tǒng)，于室溫下操作，用于收集易沉降的大顆粒物質(zhì)。Eg：紅細胞、酵母細胞等。3、離心機的主要構(gòu)造和類型〔1〕制備性離心機分為三類：《沉淀與離心部分》教學課件B、高速冷凍離心機最大轉(zhuǎn)速為20000-25000r/min，最大相對離心力為89000×g，最大容量可通到3L，別離形式也是固液沉降別離。一般有制冷系統(tǒng)，離心室溫度可調(diào)節(jié)和維持在0-4℃，轉(zhuǎn)速、溫度和時間都可嚴格控制。B、高速冷凍離心機一般有制冷系統(tǒng)，離心室溫度可調(diào)節(jié)和維持在0C、超速離心機轉(zhuǎn)速可達50000-80000r/min，相對離心力最大可達510000×gC、超速離心機名稱最大轉(zhuǎn)速（r/min）相對離心力（RCF）特點常速離心機60006000×g主要用于細胞、細胞碎片和培養(yǎng)基殘渣等固形物的分離。也用于酶的結(jié)晶等較大顆粒的分離。高速離心機（1～2.5）×1041×104～1×105g主要用于沉淀、細胞碎片和細胞器等的分離。超速離心機(2.5～12)×1045×105g主要用于DNA、RNA、蛋白質(zhì)等生物大分子以及細胞器、病毒等的分離純化；樣品純度的檢測；沉降系數(shù)和相對分子質(zhì)量的測定等。名稱最大轉(zhuǎn)速（r/min）相對離心力（RCF）特點常速離心機〔2〕轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子類型固定角式轉(zhuǎn)子(fixed-anglerotor)水平轉(zhuǎn)子(swing-outrotor)垂直轉(zhuǎn)子(verticalrotor)帶狀轉(zhuǎn)子(zonalrotor)連續(xù)轉(zhuǎn)子(continuousrotor)

轉(zhuǎn)子的材質(zhì)鋁質(zhì)：較輕,耐受強度較弱,適合在較低的轉(zhuǎn)速下使用;不銹鋼：耐受強度最好,但材質(zhì)本身太重；鈦合金：耐受強度不錯,重量也比不銹鋼輕。〔2〕轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子類型A、固定角式轉(zhuǎn)子

離心管在離心機中放置的位置與旋轉(zhuǎn)軸心形成一個固定的角度,角度變化在14-40°之間。

常見的角度

20°

28°

34°

40A、固定角式轉(zhuǎn)子

離心管在離心機中放置的位置與旋角式轉(zhuǎn)子的特點重心低,轉(zhuǎn)速可較高樣品粒子穿過溶劑層的距離略大于離心管的直徑“管壁效應(yīng)〞：有一定的角度,在離心過程中撞到離心管外壁的粒子沿著管壁滑到管底形成沉淀,此效應(yīng)使最后在管底聚成的沉淀較嚴密。角式轉(zhuǎn)子的特點

設(shè)40000rpm時R1最小、3.8cmR2平均、5.9cmR3最大、8.1cmRCF值分別67,910g105,400g144,700gR1R2R3

在離心管的不同部位距旋轉(zhuǎn)中心軸的距離也不同,那么在一定的轉(zhuǎn)速下其RCF值也各不相同設(shè)40000rpm時R1R2R3在離心管的不同部位距旋轉(zhuǎn)B、水平轉(zhuǎn)子

〔1〕轉(zhuǎn)子靜止時,處在轉(zhuǎn)子中的離心管中

心線與旋轉(zhuǎn)軸平行,

〔2〕轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)加速時,離心管中心線由

行位置逐漸過渡到垂直位置,即與旋

轉(zhuǎn)軸成90°角,

〔3〕粒子的沉淀方向同旋轉(zhuǎn)半徑方向根本

一致有少量的“管壁效應(yīng)〞B、水平轉(zhuǎn)子

〔1〕轉(zhuǎn)子靜止時,處在轉(zhuǎn)子中的離心管中

《沉淀與離心部分》教學課件《沉淀與離心部分》教學課件水平轉(zhuǎn)子的特點轉(zhuǎn)子的重心位置較高樣品粒子沉降穿過溶劑層的距離大于直徑對于多種成分樣品別離特別有效常用于速率區(qū)帶離心和等密度離心水平轉(zhuǎn)子的特點3、離心方法〔1〕差速沉降離心法別離兩種以上大小，密度不同的顆粒。操作方法：別離較大顆粒別離較小顆粒適用范圍：大小、密度相差較大的顆粒優(yōu)點：操作簡單、方便缺點：別離效果差，沉淀中有雜質(zhì)，沉淀后顆粒在底部易受擠壓上清加大轉(zhuǎn)速和分離時間3、離心方法〔1〕差速沉降離心法上清加大轉(zhuǎn)速和分離時間

例用差速離心法別離已破碎的細胞各組份

已破碎的細胞

500g,10分鐘

沉淀上清液

(細胞核〕10,000g,10分鐘

沉淀上清液

(細胞膜碎片,線粒體,)100,000g,3小時

溶酶體

沉淀上清液

(核糖核蛋白體〕(可溶性成份)

例用差速離心法別離已破碎的細胞各組份

〔2〕差速區(qū)帶離心法〔密度梯度離心〕樣品在密度梯度介質(zhì)中進展離心，使沉降系數(shù)不同的顆粒相互別離的方法介質(zhì)：梯度介質(zhì)形成梯度范圍，不與樣品反響，不使樣品凝集、變性或失活。常用：蔗糖濃度：5%-60%；密度：1.02g/cm3-1.28kg/cm3〔2〕差速區(qū)帶離心法〔密度梯度離心〕操作方法：加樣離心收集小心放在梯度溶液表面不同顆粒形成若干條帶虹吸或切割離心管等方法操作方法：加樣離心收集小心放在梯度溶液表面不同顆粒形成若干條

〔3〕等密度離心別離密度不同的顆粒，在離心力作用下上浮或下沉。常用介質(zhì)：銫鹽。如CsCl、Cs2SO4等操作方法：混勻樣品與介質(zhì)離心分離〔3〕等密度離心混勻樣品與介質(zhì)離心分離《沉淀與離心部分》教學課件4、離心機操作本卷須知必須事先在天平上精細的平衡離心管和其內(nèi)容物。依據(jù)不同離心液體選擇不同離心管，每次檢查轉(zhuǎn)頭低于室溫離心時，要先將轉(zhuǎn)頭預冷離心過程中不得隨意離開了解轉(zhuǎn)頭最高離心轉(zhuǎn)速和使用積累限時。4、離心機操作本卷須知必須事先在天平上精細的平衡離心管和其內(nèi)《沉淀與離心部分》幻燈片本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學習使用學習完請自行刪除，謝謝！《沉淀與離心部分》幻燈片本課件PPT僅供大家學習使用沉淀別離：通過改變某些條件或添加某種物質(zhì)，使酶的溶解度降低，而從溶液中沉淀析出，與其它溶質(zhì)別離的技術(shù)過程。原理：根據(jù)不同物質(zhì)在溶劑中的溶解度不同而到達別離的目的。不同溶解度的產(chǎn)生是由于溶質(zhì)分子之間及溶質(zhì)與溶劑分子之間親和力的差異而引起的，溶解度的大小與溶質(zhì)和溶劑的化學性質(zhì)及構(gòu)造有關(guān)。一、沉淀分離沉淀別離：通過改變某些條件或添加某種物質(zhì)，使酶的溶解度降低，沉淀分離方法適用分子鹽析沉淀法多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化等電點沉淀法用于氨基酸、蛋白質(zhì)及其他兩性物質(zhì)的沉淀，單獨應(yīng)用較少，常與其它方法結(jié)合使用有機溶劑沉淀法多用于蛋白質(zhì)和酶、多糖、核酸以及生物小分子的分離純化復合沉淀法發(fā)展較快的新方法選擇性變性沉淀法多用于除去某些不耐熱的和在一定pH值下易變性的雜蛋白常用的幾種沉淀分離方法沉淀分離方法適用分子鹽析沉淀法多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化1、鹽析沉淀法在鹽濃度達到某一界限后，酶的溶解度隨鹽濃度升高而降低，這稱為鹽析現(xiàn)象。優(yōu)點：成本低，不需要特別昂貴的設(shè)備操作簡單、安全對許多生物活性物質(zhì)具有穩(wěn)定作用1、鹽析沉淀法在鹽濃度達到某一界限后，酶的溶解度隨鹽濃度升高〔1〕根本原理〔1〕根本原理

在蛋白質(zhì)的鹽析中，通常采用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鉀、硫酸鎂、氯化鈉和磷酸鈉等。其中以硫酸銨最為常用?！?〕中性鹽的選擇溶解度大：硫酸銨在0℃時仍有70.6%（質(zhì)量分數(shù)）的溶解度，遠遠高于其它鹽類。鹽類0℃

20℃

80℃

100℃

硫酸銨70.675.495.3103硫酸鈉4.918.943.342.2硫酸二氫鈉1.67.893.8101幾種鹽在不同溫度下的溶解度（g/100ml水）在蛋白質(zhì)的鹽析中，通常采用的中性鹽有硫酸銨、硫別離效果好：有的提取液參加適量硫酸銨鹽析，一步就可能除去75%的雜蛋白，純度提高了4倍。不易引起變性，有穩(wěn)定酶的作用：有些酶用2-3mol/L的硫酸銨保存可達數(shù)年之久。價格廉價，廢液不污染環(huán)境別離效果好：有的提取液參加適量硫酸銨鹽析，一步就可能除去75〔3〕鹽析的操作方法最常用的是固體硫酸銨參加法。研磨硫酸銨成細粉邊攪拌邊緩慢均勻少量多次加入冰浴離心過濾加鹽速度盡量慢，避免局部硫酸銨濃度過大而造成蛋白質(zhì)變性低濃度高濃度〔3〕鹽析的操作方法最常用的是固體硫酸銨參加法。研磨硫酸銨成〔4〕鹽析的影響因素蛋白質(zhì)濃度：2.5%-3.0%〔質(zhì)量分數(shù)〕較適中，相當于25-30mg/mlpH值：常選在該酶的等電點附近溫度：對溫度敏感的酶，要求在0-4℃下操作，以防止活力喪失鹽析時注意事項：酶不同，結(jié)構(gòu)不同，所需鹽濃度不同。另外，酶的來源，雜質(zhì)等也對其有影響。鹽析后的酶含大量鹽分，要進行脫鹽處理〔4〕鹽析的影響因素蛋白質(zhì)濃度：2.5%-3.0%〔質(zhì)量分數(shù)2、有機溶劑沉淀法原理：降低水溶液的介電常數(shù)，減小溶劑的極性，從而削弱了溶劑分子與蛋白質(zhì)分子間的相互作用力，導致蛋白質(zhì)溶解度降低而沉淀。優(yōu)點：分辯能力比鹽析高沉淀不用脫鹽缺點：對某些具有生物活性的大分子容易引起變性失活，操作需在低溫下進展。2、有機溶劑沉淀法原理：降低水溶液的介電常數(shù)，減小溶劑的極性〔1〕有機溶劑的選擇和濃度計算原那么：能與水互溶常用試劑：乙醇、甲醇和丙酮〔糖、核酸等常用的是乙醇〕計算公式：V=V0(S2-S1)/(100-S2)需要加入量原溶液體積原溶液中有機溶劑的體積有機溶劑終體積加入有機溶劑的體積分數(shù)（純?nèi)芤后w積分數(shù)為100%）〔1〕有機溶劑的選擇和濃度計算原那么：能與水互溶需要加入量原〔2〕有機溶劑沉淀的影響因素溫度：多數(shù)蛋白質(zhì)在有機溶劑與水的混合液中，溶解度隨溫度降低而下降。注意！大多數(shù)酶在有機溶劑中對溫度特別敏感，溫度稍高就會引起變性?。?！樣品濃度：通常使用5-20mg/ml的蛋白質(zhì)初濃度為宜，可以得到較好的別離效果。pH值：選在等電點附件，提高分辯能力離子強度：不超過5%為宜。乙醇溶液不超過原溶液2倍體積為宜?！?〕有機溶劑沉淀的影響因素溫度：多數(shù)蛋白質(zhì)在有機溶劑與水的離心：借助離心機旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，使不同分子大小、密度的物質(zhì)別離的技術(shù)。二、離心別離1、基本原理F=mω2r

當物體圍繞一中心軸做圓周運動時，運動物體就受到離心力的作用。旋轉(zhuǎn)速度越高，運動物體所受到的離心力越大。離心：借助離心機旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，使不同分子大小、密度的物2、相對離心力RCF就是實際離心力轉(zhuǎn)化為重力加速度的倍數(shù)

RCF=F離心力/F重力=mω2r/mg=ω2r/g

g為重力加速度〔980.7cm/sec2)

RCF=1.119×10-5×(r/min)2×r

2、相對離心力RCF就是實際離心力轉(zhuǎn)化為重力加速度的倍數(shù)

3、離心機的主要構(gòu)造和類型〔1〕制備性離心機分為三類：A、普通離心機最大轉(zhuǎn)速6000r/min左右，最大相對離心力近6000×g，容量為幾十毫升至幾升，別離形式是固液沉降別離，其轉(zhuǎn)速不能嚴格控制，通常不帶冷凍系統(tǒng)，于室溫下操作，用于收集易沉降的大顆粒物質(zhì)。Eg：紅細胞、酵母細胞等。3、離心機的主要構(gòu)造和類型〔1〕制備性離心機分為三類：《沉淀與離心部分》教學課件B、高速冷凍離心機最大轉(zhuǎn)速為20000-25000r/min，最大相對離心力為89000×g，最大容量可通到3L，別離形式也是固液沉降別離。一般有制冷系統(tǒng)，離心室溫度可調(diào)節(jié)和維持在0-4℃，轉(zhuǎn)速、溫度和時間都可嚴格控制。B、高速冷凍離心機一般有制冷系統(tǒng)，離心室溫度可調(diào)節(jié)和維持在0C、超速離心機轉(zhuǎn)速可達50000-80000r/min，相對離心力最大可達510000×gC、超速離心機名稱最大轉(zhuǎn)速（r/min）相對離心力（RCF）特點常速離心機60006000×g主要用于細胞、細胞碎片和培養(yǎng)基殘渣等固形物的分離。也用于酶的結(jié)晶等較大顆粒的分離。高速離心機（1～2.5）×1041×104～1×105g主要用于沉淀、細胞碎片和細胞器等的分離。超速離心機(2.5～12)×1045×105g主要用于DNA、RNA、蛋白質(zhì)等生物大分子以及細胞器、病毒等的分離純化；樣品純度的檢測；沉降系數(shù)和相對分子質(zhì)量的測定等。名稱最大轉(zhuǎn)速（r/min）相對離心力（RCF）特點常速離心機〔2〕轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子類型固定角式轉(zhuǎn)子(fixed-anglerotor)水平轉(zhuǎn)子(swing-outrotor)垂直轉(zhuǎn)子(verticalrotor)帶狀轉(zhuǎn)子(zonalrotor)連續(xù)轉(zhuǎn)子(continuousrotor)

轉(zhuǎn)子的材質(zhì)鋁質(zhì)：較輕,耐受強度較弱,適合在較低的轉(zhuǎn)速下使用;不銹鋼：耐受強度最好,但材質(zhì)本身太重；鈦合金：耐受強度不錯,重量也比不銹鋼輕?！?〕轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子類型A、固定角式轉(zhuǎn)子

離心管在離心機中放置的位置與旋轉(zhuǎn)軸心形成一個固定的角度,角度變化在14-40°之間。

常見的角度

20°

28°

34°

40A、固定角式轉(zhuǎn)子

離心管在離心機中放置的位置與旋角式轉(zhuǎn)子的特點重心低,轉(zhuǎn)速可較高樣品粒子穿過溶劑層的距離略大于離心管的直徑“管壁效應(yīng)〞：有一定的角度,在離心過程中撞到離心管外壁的粒子沿著管壁滑到管底形成沉淀,此效應(yīng)使最后在管底聚成的沉淀較嚴密。角式轉(zhuǎn)子的特點

設(shè)40000rpm時R1最小、3.8cmR2平均、5.9cmR3最大、8.1cmRCF值分別67,910g105,400g144,700gR1R2R3

在離心管的不同部位距旋轉(zhuǎn)中心軸的距離也不同,那么在一定的轉(zhuǎn)速下其RCF值也各不相同設(shè)40000rpm時R1R2R3在離心管的不同部位距旋轉(zhuǎn)B、水平轉(zhuǎn)子

〔1〕轉(zhuǎn)子靜止時,處在轉(zhuǎn)子中的離心管中

心線與旋轉(zhuǎn)軸平行,

〔2〕轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)加速時,離心管中心線由

行位置逐漸過渡到垂直位置,即與旋

轉(zhuǎn)軸成90°角,

〔3〕粒子的沉淀方向同旋轉(zhuǎn)半徑方向根本

一致有少量的“管壁效應(yīng)〞B、水平轉(zhuǎn)子

〔1〕轉(zhuǎn)子靜止時,處在轉(zhuǎn)子中的離心管中

《沉淀與離心部分》教學課件《沉淀與離心部分》教學課件水平轉(zhuǎn)子的特點轉(zhuǎn)子的重心位置較高樣品粒子沉降穿過溶劑層的距離大于直徑對于多種成分樣品別離特別有效常用于速率區(qū)帶離心和等密度離心水平轉(zhuǎn)子的特點3、離心方法〔1〕差速沉降離心法別離兩種以上大小，密度不同的顆粒。操作方法：別離較大顆粒別離較小顆粒適用范圍：大小、密度相差較大的顆粒優(yōu)點：操作簡單、方便缺點：別離