紅細胞免疫檢測及臨床應(yīng)用研究新進展課件

紅細胞免疫檢測及臨床應(yīng)用新進展錦州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院紅細胞免疫檢測及臨床應(yīng)用新進展錦州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院1一、紅細胞免疫基本理論一、紅細胞免疫基本理論2（一）概述血液與免疫有密切聯(lián)系。本世紀初，Landsteiner采用免疫學(xué)方法在人類紅細胞與血液混合試驗中發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型系統(tǒng)。認識到紅細胞表面存在許多能與血清中相應(yīng)抗體凝集的抗原，如Mn，P型、Rn、Lutheran、Lewis、Kell、Duffy、Kidd等。除了目前所知數(shù)十種血型抗原外，紅細胞還含有不少其它抗原，這些抗原在異常情況下，可引起對自身紅細胞免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體而導(dǎo)致紅細胞系統(tǒng)疾病，如輸血反應(yīng)、新生兒溶血癥、自身免疫溶血性貧血，藥物過敏性紅細胞溶血等。（一）概述血液與免疫有密切聯(lián)系。3由于紅細胞免疫粘附理論的發(fā)現(xiàn)以及紅細胞免疫功能研究的逐漸深入，1981年美國生殖免疫學(xué)家Siegel提出“紅細胞免疫系統(tǒng)”的概念，指出RBC是不可忽視的免疫細胞，也象白細胞一樣具有重要的免疫功能，是完整機體免疫系統(tǒng)中的一個子系統(tǒng)，是不可缺少的一個重要組成部分。這一理論提出刷新了人們對RBC的認識只停留在CO2、O2呼吸載體的概念上，開拓了免疫學(xué)的新領(lǐng)域。由于紅細胞免疫粘附理論的發(fā)現(xiàn)以及紅細胞免疫功能研究的逐漸深入4我國在紅細胞免疫研究工作始于1982年。1989年成立全國紅細胞免疫研究協(xié)作組。1993年12月又成立了全國免疫學(xué)會基礎(chǔ)免疫委員會紅細胞免疫專業(yè)學(xué)組。我國在紅細胞免疫研究工作始于1982年。5（二）紅細胞免疫發(fā)展史20世紀30年代，杜克（LH.Duke）首先發(fā)現(xiàn)錐蟲在抗血清及補體存在時，可粘附于人類RBC上。Brown和Broom：不同人的RBC對錐蟲的粘附能力高低不同。Brown本人的RBC對抗體調(diào)整過的錐蟲一直未能顯示任何反應(yīng)，但Broom的RBC卻有很強免疫粘附作用。因此他們比較了52例各種疾病患者與26例正常人的RBC粘附活性，發(fā)現(xiàn)兩例TB病患者與1例風(fēng)濕熱患者粘附能力降低。（二）紅細胞免疫發(fā)展史20世紀30年代，杜克（LH.Duk61953年：納樂遜（R.A.Nelson）觀察體內(nèi)外梅毒螺旋體，Ⅰ型肺炎雙球菌粘附于靈長類動物（人、猴、狒狒等）的紅細胞和非靈長類動物血小板上，促進吞噬現(xiàn)象。他用正常人RBC、WBC與相應(yīng)抗體致敏的Ⅰ型肺炎雙球菌進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)肺炎雙球菌可粘附于正常人RBC表面并被WBC吞噬，其吞噬率達60%，未加抗體組（4%）和未加RBC組（18%），推測RBC膜存在免疫粘附受體，免疫復(fù)合物同該受體結(jié)合可促進WBC的吞噬作用。由此命名為免疫粘附現(xiàn)象（Immnmeadhereruphenomenon）。1953年：納樂遜（R.A.Nelson）觀察體內(nèi)外梅毒螺旋71956年：Nelson又將肺炎球菌注入猿猴體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其絕大多數(shù)細菌粘附于RBC上，認為靈長類動物RBC的免疫粘附現(xiàn)象起到對血中異物的清除及細菌的固定作用，由此認為是宿主機體防御的一部分。1963年：尼雪俄考（K.Nishioka）證實紅細胞這種免疫粘附現(xiàn)象是通過人紅細胞膜C3受體來實現(xiàn)，現(xiàn)稱C3受體為第一補體受體（CcomplementReceptorTypel,CR1）。1956年：Nelson又將肺炎球菌注入猿猴體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其絕大870年代后期有關(guān)CR1的研究報道很多。1980年弗爾龍（D.T.Teavon）從紅細胞膜上分離出CR1，研究CR1的性質(zhì)：分子量19萬~25萬，多態(tài)性膜糖蛋白，CR1總數(shù)95%以上存在于RBC膜上，CR1除了存在RBC膜上，還存在于多種細胞膜上如多核WBC、單核細胞、巨噬細胞、B細胞、肥大細胞、腎小球上皮細胞。ECR1在RBC膜上呈簇狀分布。70年代后期有關(guān)CR1的研究報道很多。91981年美國生殖免疫學(xué)家西格爾（I.Sigel）在前人研究基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)（1）RBC有多種免疫功能（2）RBC可粘附胸腺細胞（3）血清中存在紅細胞免疫粘附抑制因子，預(yù)見了血清中存在紅細胞免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)。（4）RBC膜過氧化物酶活性與CR1活性有關(guān)。（5）RBC有殺傷致病原的效應(yīng)細胞樣作用—推測RBC在阻止腫瘤細胞血行轉(zhuǎn)移中有作用。綜上提出“紅細胞免疫學(xué)說”。1981年美國生殖免疫學(xué)家西格爾（I.Sigel）在前人研究101982年梅多夫（M,E,Medlf）體外證明RBC的CR1和血漿中Ⅰ因子共同作用將粘附的免疫復(fù)合物（Ic）中的C3b降介為C3dg，C3d而失去炎性。1982年郭峰證明（體外）RBC可粘附補體調(diào)理過的酵母菌，并證明SLE，腫瘤患者紅細胞免疫粘附酵母菌的能力低下，該實驗證明RBC可直接粘附補體調(diào)理過的病原體。1983年科娜康夫在猴血循環(huán)內(nèi)注入免疫復(fù)合物（IC），用同位素示蹤，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)IC很快與紅細胞結(jié)合，并迅速被運至肝、脾，在該特定環(huán)境下，巨噬細胞膜上FC段受體比RBC膜上CR1活性強，使IC從紅細胞膜上脫落而被吞噬消毀——RBC促吞噬作用。1982年梅多夫（M,E,Medlf）體外證明RBC的C111984年西格費索（A.Sigfuson）通過體外美州商陸素刺激淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗發(fā)現(xiàn)加入自身RBC可增加淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和培養(yǎng)液中IgG、IgA量。1985福斯里德（J.Forslid）在體外通過對比實驗證明紅細胞促吞噬作用與紅細胞CR1和SOD酶活性有關(guān)。1986年郭峰通過體外對比實驗證明RBC可粘附補體調(diào)整的各種腫瘤細胞，并證明腫瘤患者RBC免疫粘附腫瘤細胞的下降，發(fā)現(xiàn)RBC可直接粘附未經(jīng)補體調(diào)理過的腫瘤細胞，其機理不明。1984年西格費索（A.Sigfuson）通過體外美州商陸素121992年劉景田等證實這種直接免疫粘附的機理與紅細胞膜上CR1和腫瘤細胞膜上C3b分子有關(guān)，腫瘤細胞膜上的補體來源于荷瘤小鼠的腹水中，而荷瘤小鼠的腹水中確有少量補體物質(zhì)的存在。1986年凱斯（L.Keyes）等發(fā)現(xiàn)人自身紅細胞可增加T細胞產(chǎn)生γ-干擾素。1987年魯杰利斯（M.T.Rugeles）發(fā)現(xiàn)自身紅細胞加入外周血單個核細胞培養(yǎng)管中可增強原發(fā)性和繼發(fā)性特異抗體應(yīng)答。1987年郭峰通過體外對比實驗證明血清中還存在一種加熱（58℃30'）不滅活的紅細胞免疫粘附促進因子。1992年劉景田等證實這種直接免疫粘附的機理與紅細胞膜上CR131988年葉瑞拉（G.Yirella）通過體外抗淋巴細胞功能相關(guān)抗原—3（LFA-3）單抗或CD2單抗處理和不處理的紅細胞對促進B細胞增殖和免疫球蛋白的影響分析，認為紅細胞的這種作用是因CD58（LFA-3），CD59與T細胞的CD2分子相互作用密切相關(guān)。推測是由于RBC促進T細胞IL-2受體表達和增強對外源性IL-2應(yīng)答的敏感度所致，可能與增加B細胞生長因子或分化因子有關(guān)。表達LFA-3的紅細胞有利于激活T輔助細胞。T輔助細胞接受第一信號（加工后的抗原）刺激外，還接受第二信號——通過LFA-3/CD2相互作用。1988年葉瑞拉（G.Yirella）通過體外抗淋巴細胞功能141988年萬內(nèi)利（J.R.Yannelli）在培養(yǎng)瓶內(nèi)加RBC可促進LAK細胞的產(chǎn)量和活性，RBC數(shù)與淋巴細胞數(shù)為100：1時IL-2激活的LAK細胞活力最大。通過單抗阻斷實驗，證明這種促進作用與細胞膜上LFA-3與淋巴細胞膜CD2相互作用密切相關(guān)。1988年萬內(nèi)利（J.R.Yannelli）在培養(yǎng)瓶內(nèi)加RB151988年威瑞拉（Vireal）用單抗標(biāo)記法證明紅細胞膜有CR3。1989年郭峰發(fā)現(xiàn)RBC和淋巴細胞或粒細胞可共同圍攻粘附各種腫瘤細胞。1990年派考德（J.P.paceand）采用折痕—標(biāo)記免疫電鏡比較PMN和紅細胞的CR1形態(tài)，發(fā)現(xiàn)細胞細胞上幾乎50%的CR1量＞3單位簇狀分布，而這種簇狀分布在PMN不到15%。CR1的這種簇狀分布可使它與C3包被的IC結(jié)合位點呈多價性，連接更為牢固。1994年劉景田發(fā)現(xiàn)CR1免疫調(diào)節(jié)因子，其中包括CR1免疫調(diào)節(jié)促進因子和CR免疫調(diào)節(jié)抑制因子。對粒細胞、淋巴細胞（主要指B淋巴細胞）也有同樣的調(diào)節(jié)作用。1988年威瑞拉（Vireal）用單抗標(biāo)記法證明紅細胞膜有C16（三）紅細胞的免疫物質(zhì)免疫細胞的免疫功能是通過其免疫物質(zhì)實現(xiàn)的，紅細胞的免疫物質(zhì)主要為存在于紅細胞膜上的蛋白質(zhì)分子。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)紅細胞有許多與免疫有關(guān)的物質(zhì)如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF，SOD酶等。（三）紅細胞的免疫物質(zhì)免疫細胞的免疫功能是通過其免疫物質(zhì)實現(xiàn)17紅細胞與其它免疫細胞的比較

免疫細胞紅細胞T細胞B細胞NK細胞K細胞巨噬細胞中性粒細胞細胞數(shù)/ML5.4×1092×1060.5×106

0.3×1063.66×106IgGFC受體－±＋＋＋＋＋CR1＋－＋－＋＋＋免疫粘附＋－－－－＋＋免疫功能粘附提呈抗原等細胞免疫體液免疫細胞免疫細胞免疫處理提呈抗原調(diào)理吞噬紅細胞與其它免疫細胞的比較免疫紅細胞T細胞B細胞NK細胞K181．補體受體（CR1，CR3）補體受體存在于不同種類的血細胞上，不同的血細胞所具有的補體受體不同，補體受體根據(jù)結(jié)合補體C3片段種類的不同可分為CR1，CR2、CR3三類。CR1是C3b、C4b的受體也是與紅細胞免疫粘附作用有關(guān)受體。CR2是C3d的受體，C3d是C3b裂解的終末產(chǎn)物。CR3是iC3b的受體（是C3b受I因子，H因子在CR1參與作用下形成的無活性C3b（iC3b）1．補體受體（CR1，CR3）19人類細胞上的補體受體細胞種類

補體受體類型

CR1CR2

CR3

紅細胞血小板單核-巨噬細胞嗜酸性粒細胞中性粒細胞腎小球上皮細胞B淋巴細胞

NK細胞

＋＋＋＋＋＋＋－

－－－－－－＋－

＋－＋－＋－－＋

人類細胞上的補體受體細胞種類補體受體類型CR1CR220紅細胞的補體受體主要是CR1，最近發(fā)現(xiàn)還有CR3①CR1是一種單肽鏈糖蛋白，具有明顯的多肽性，有4個同種異型，其配體是C3b、iC3b、C4b、iC4b均可結(jié)合于CR1，但C3b僅需少量即可發(fā)生免疫粘附（約60個分子/細胞），而C4b則需較大數(shù)量（＞2500個分子/細胞），才能發(fā)生反應(yīng)。iC3b也可結(jié)合于CR1，但結(jié)合程度較輕，它與CR3型受體結(jié)合能力強。②CR1活性能被胰酶、糜蛋白酶、鞣酸、甲醛、強酸、強堿所破壞，在PH6.7~7.3下最能發(fā)揮其細胞免疫粘附作用。紅細胞的補體受體主要是CR1，最近發(fā)現(xiàn)還有CR321③血細胞中CR1數(shù)量：紅細胞CR1與白細胞CR1數(shù)比例21：1，紅細胞膜上的CR1呈簇狀分布，在吞噬細胞上主要呈散在分布，每簇約含2-15個CR1，紅細胞CR1總數(shù)與簇數(shù)和每簇中CR1單體數(shù)高度相關(guān)。④CR1簇狀分布優(yōu)點：可使它與C3b包被的IC結(jié)合位點呈多價性，連接更為牢固。⑤紅細胞膜上的CR1總數(shù)比白細胞多。⑥紅細胞對粘附C3b分子的抗原（如腫瘤細胞、細菌等）的親和力顯著大于吞噬細胞，紅細胞在清除CIC致熱原中占有重要地位。CR3：可能具備對某些小抗原有吞噬，通過釋放過氧化酶對抗原加以消毀和可直接識別某些細菌有關(guān)。③血細胞中CR1數(shù)量：紅細胞CR1與白細胞CR1數(shù)比例21：222．淋巴細胞功能相關(guān)抗原-3（LFA-3）為紅細胞膜上的一種蛋白分子，是CD2的天然配體，廣泛分布于紅細胞、T淋巴細胞，B淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞，血小板等表面是由14KD和19KD二條單鏈多肽和糖基組成的糖蛋白，分子量為55-70KD。CD2為T細胞分化抗原中最早出現(xiàn)的，胸腺細胞時即出現(xiàn)，相當(dāng)于OKT系統(tǒng)中OKT11，CD4（即輔助T細胞）CD8（抑制T細胞）細胞均存在此一分化抗原。2．淋巴細胞功能相關(guān)抗原-3（LFA-3）23LFA-3作用：LFA-3與受體CD2結(jié)合后可傳遞足以誘導(dǎo)T細胞增殖，淋巴因子分泌及非MHC限制性細胞毒作用的跨膜信號，使T細胞活化，分泌IL-2，IFN-r和表達IL-2受體等，另外CD2/LFA-3在胸腺發(fā)生及T、B細胞相互作用中均起作用。因此，LFA-3與CD2作用是免疫細胞間相互協(xié)調(diào)作用，淋巴細胞活化，產(chǎn)生淋巴因子的分子基礎(chǔ)。LFA-3作用：LFA-3與受體CD2結(jié)合后可傳遞足以誘導(dǎo)T243．人類補體膜輔助因子蛋白（MCP）是紅細胞膜上功能蛋白的一種，能與CR1，DAF等基因協(xié)調(diào)完成紅細胞對補體活性的調(diào)節(jié)，是滅活C3b、C4b、iC3b的細胞表面輔助因子，可保護自身細胞免疫補體損傷。4．降介加速因子（DAF）亦稱為補體衰變加速因子，是一種糖蛋白，不同細胞膜上DAF分子量不同。DAF與紅細胞膜上MCP、CR1等多種功能蛋白共同協(xié)調(diào)完成紅細胞對補體活性的調(diào)節(jié)，使宿主細胞免受自身補體級聯(lián)放大過程中引起的損傷。DAF主要作用于Bb及C2a，而CR1主要作用于C3b片段，DAF結(jié)合C3b的能力比CR1小得多。3．人類補體膜輔助因子蛋白（MCP）255．I因子即C3b滅活因子，是一種糖蛋白。作用增加吞噬細胞對抗原的粘附，從而增強其免疫功能。與NK/K細胞上的CR3結(jié)合，發(fā)揮依賴補體的細胞毒作用（CDCC），殺滅腫瘤細胞或其它異已細胞。6．過氧化物酶在RBC免疫粘附后該酶活性增強，提高消毀抗原物質(zhì)的能力，且可將抗原決定簇提呈給T細胞，通過T細胞表面受體（TCR）激活T細胞功能。5．I因子267．過氧化物歧化酶RBC內(nèi)含有SOD（超氧化物歧化酶），該酶是一類重要的氧自由基清除酶，使O2（超氧化物陰離子自由基）變?yōu)镠2O2，O2分子，通過清除氧自由基O2，使細胞和組織免受損害，保護和增強免疫細胞的免疫功能。8．紅細胞免疫粘附抑制因子存在血清中，1981年發(fā)現(xiàn)一種糖蛋白。主要抑制紅細胞C3b受體活性，可降低紅細胞粘附攜帶IC的能力。9．紅細胞免疫粘附促進因子也存在于血清中，為一種糖蛋白，提高紅細胞C3b受體活性，故可使紅細胞免疫粘附活性增強。7．過氧化物歧化酶27（三）紅細胞的免疫功能1．紅細胞免疫粘附、攜帶及清除抗原異物的功能免疫粘附：指細菌、寄生蟲、梅毒螺旋體、胸腺細胞、腫瘤細胞等抗原物質(zhì)激活補體或這些抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合激活補體形成復(fù)合物粘附于血細胞（紅細胞、白細胞或血小板）上。紅細胞的免疫粘附作用：通過細胞膜表面的補體受體實現(xiàn)的。（三）紅細胞的免疫功能1．紅細胞免疫粘附、攜帶及清除抗原異物28抗原與抗體形成的Ab-Ab復(fù)合物（或Ag-Ab-C）形成存在，紅細胞通過其膜上CR1、CR3的免疫粘附功能將Ag異物攜帶至肝脾加以消毀的，因此紅細胞是機體清除循環(huán)系統(tǒng)液相中CIC的主要承擔(dān)者，幾乎所有的補體調(diào)理過的抗原和IC都是由紅細胞結(jié)合運至肝脾消毀的?？乖c抗體形成的Ab-Ab復(fù)合物（或Ag-Ab-C）形成存在29在肝脾血流降速時，RBC與固定巨噬細胞比例劇降為10:1—5:1時，吞噬細胞上CR1、CR3、FCR對紅細胞上IC中的C3b、iC3b總親和力大于紅細胞CR1的親和力時，微循環(huán)中的Ag-Ab-C復(fù)合物才能從RBC轉(zhuǎn)向巨噬細胞，巨噬細胞便將紅細胞免疫粘附的復(fù)合物奪下，并將其免疫粘附吞噬，紅細胞釋放回血液循系統(tǒng)，不被吞噬，繼續(xù)執(zhí)行CIC的功能。但對那些結(jié)合有特異性抗原、抗體、補體復(fù)合物的RBC被吞噬細胞吞噬、清除血行中大量潛在的致病性免疫復(fù)合物。在肝脾血流降速時，RBC與固定巨噬細胞比例劇降為10:1—530RBC通過清除血循環(huán)中的抗原異物，如細菌、病毒、癌變細胞等，在防御微生物感染，保持機體內(nèi)環(huán)境的平衡，維持自穩(wěn)機能方面有著重要意義。RBC通過清除血循環(huán)中的抗原異物，如細菌、病毒、癌變細胞等，312．紅細胞識別和儲存抗原的功能Garrey用新生兔做動物實驗，將標(biāo)記氚的牛血清白蛋白（3H-BSA）注入新生家兔腹內(nèi)，用外周血涂片及組織切片的放射顯影法觀察循環(huán)中RBC和肝血管內(nèi)的RBC，發(fā)現(xiàn)6小時后血循環(huán)中出現(xiàn)攜帶BSA的紅細胞，12h后絕大部分抗原濃集于肝臟血管內(nèi)，注入1-2天，肝血管系統(tǒng)內(nèi)外紅細胞表面聚集了大量抗原，攜帶抗原的紅細胞在肝、血循環(huán)中可持續(xù)4-6周以上。2．紅細胞識別和儲存抗原的功能32該實驗結(jié)果提示新生兔的RBC有識別和儲存異種抗原物質(zhì)的能力。同時將標(biāo)記氚的兔血清白蛋白（3H-BSA）抗原，采用同樣方法觀察，表明新生兔RBC對同種抗原亦具有識別能力和免疫耐受性。郭峰報道RBC可粘附血清調(diào)理過的酵母菌和各種腫瘤細胞。機理可認為酵母菌和腫瘤細胞可旁路激活補體粘附C3b，再與RBC上的CR1相結(jié)合而被識別。由此認為RBC能識別，儲存各種抗原。該實驗結(jié)果提示新生兔的RBC有識別和儲存異種抗原物質(zhì)的能力。333．紅細胞具有效應(yīng)細胞樣作用RBC膜表面存在過氧化物酶活性，是一種典型溶酶體酶，抗原粘附RBC可提高粘附區(qū)域過氧化物酶活性，使RBC作為效應(yīng)細胞起作用，RBC通過這種酶激活的作用，可直接殺傷病原體，消毀粘附的抗原抗體復(fù)合物，加強CIC的清除。因此認為RBC本身也有防御感染的作用。3．紅細胞具有效應(yīng)細胞樣作用344．紅細胞具有抗原提呈細胞（APC）樣作用RBC具有雙重粘附特性，既可粘附IC，又可粘附自身胸腺細胞及T細胞上，從而可以將抗原提呈給胸腺細胞及T細胞，起抗原提呈細胞（APC）樣作用，增強T細胞免疫功能，更有效地清除IC。4．紅細胞具有抗原提呈細胞（APC）樣作用355．紅細胞促進淋巴細胞的免疫功能RBC具有促進T、B淋巴細胞和體液免疫功能，擴大細胞免疫及體液免疫效應(yīng)。RBC具有雙重免疫粘附特性，即RBC不僅與Ag-Ab-C互相粘連，且可與自體的胸腺淋巴細胞和T淋巴細胞粘附，形成自身玫瑰花結(jié)，這種雙重免疫粘附，在IC與T淋巴細胞之間起著橋梁作用，使抗原與T淋巴細胞靠近，從而將抗原提呈給T淋巴細胞，增加T淋巴細胞捕捉抗原的機會，從而擴大T細胞依賴的免疫應(yīng)答。5．紅細胞促進淋巴細胞的免疫功能36T淋巴細胞在RBC作用下，能促使IL-2受體表達及γ-干擾素產(chǎn)生，抗CD2單克隆抗體可抑制RBC對T細胞產(chǎn)生干擾素的促進作用。紅細胞IFA-3與T細胞CD2的作用在促進T淋巴細胞活化及產(chǎn)生淋巴因子的分子基礎(chǔ)。紅細胞通過LAF-3/CD2以及CR1-CIC/TCR對T細胞粘附，提呈抗原，激活T細胞增殖而起抗原提呈細胞作用。紅細胞能促進B細胞增殖分化產(chǎn)生抗體和加強抗體依賴的細胞毒性（ADCC）作用。T淋巴細胞在RBC作用下，能促使IL-2受體表達及γ-干擾素37紅細胞還能增強淋巴細胞對腫瘤細胞的免疫粘附作用，直接增強NK細胞的抗腫瘤活性，且紅細胞增強NK細胞依賴于Ca2+的存在。紅細胞能顯著增加LAK細胞（Lyhphokimecativctellkilledcell）對腫瘤細胞的殺傷作用。在培養(yǎng)瓶內(nèi)加入RBC可促進LAK細胞的產(chǎn)量和活性，RBC數(shù)與淋巴細胞數(shù)為100:1時IL-2激活的LAK細胞活力最大。LAK細胞系淋巴因子激活的殺傷性淋巴細胞，對多種腫瘤細胞均有殺傷作用，是目前腫瘤過繼療法中一各很有前途的細胞。紅細胞還能增強淋巴細胞對腫瘤細胞的免疫粘附作用，直接增強NK38因此，RBC對T、B淋巴細胞、NK、LAK細胞等的免疫功能有著重要的影響。而白細胞分泌的細胞因子（如胸腺素、IL-2、IFN-γ等）可促進紅細胞的免疫功能。因此，RBC對T、B淋巴細胞、NK、LAK細胞等的免疫功能有396．紅細胞促進吞噬細胞的吞噬功能RBC通過其表面的CR1（補體受體）與病原體與相應(yīng)抗體組成IC的連接，可促進吞噬細胞對微生物的吞噬作用。且與紅細胞表面的補體受體CR1數(shù)量與活性有關(guān)。Siegel推測RBC可阻止癌細胞在血循環(huán)中擴散。癌細胞可粘附紅細胞，易被吞噬細胞捕捉、吞噬、清除，防止癌細胞的擴散。紅細胞具有增強吞噬細胞抗腫瘤作用。6．紅細胞促進吞噬細胞的吞噬功能407．紅細胞清除陰離子的作用超氧陰離子（O2）是生物體內(nèi)主要的自由基（FR），在許多情況下，對機體是有害的，是導(dǎo)致炎癥、衰老及癌變等的原因之一。紅細胞超氧化物歧化酶（SOD）是一類重要的氧自由基清除酶，具有抗炎、抗衰及抗輻射的作用，可消除微環(huán)境中超氧化物陰離子自由基對巨噬細胞膜和淋巴細胞的破壞作用，以保護和增強吞噬功能和淋巴細胞的免疫功能，使吞噬細胞產(chǎn)生IL-1、TNF等因子的能力增強。SOD可清除微環(huán)境中的氧自由基對LAR活性的抑制，提高LAK細胞的產(chǎn)量與活性。7．紅細胞清除陰離子的作用418．紅細胞參與補體活性的調(diào)控補體系統(tǒng)通過免疫細胞上補體受體在調(diào)節(jié)細胞和體液免疫中處于樞紐地位。其中C3b分子占據(jù)重要地位。而紅細胞有CR1、I因子、DAF與血漿H因子協(xié)同，先將C3b固定，后降解為iC3b、C3b，C3dg，使細菌、腫瘤細胞打上標(biāo)記，使其更易被相應(yīng)補體受體T、B淋巴細胞、NK、LAK細胞，吞噬細胞所識別，補體系統(tǒng)經(jīng)紅細胞協(xié)調(diào)作用調(diào)控各免疫細胞的免疫反應(yīng)。8．紅細胞參與補體活性的調(diào)控429．紅細胞自身免疫調(diào)控系統(tǒng)血清中存在紅細胞免疫粘附抑制因子和促進因子，分別抑制和促進紅細胞免疫粘附活性，正常情況下這一對調(diào)節(jié)因子處于動態(tài)平衡。當(dāng)比例失調(diào)，紅細胞免疫功能低下或紊亂。9．紅細胞自身免疫調(diào)控系統(tǒng)43二、紅細胞免疫學(xué)實驗技術(shù)目前國內(nèi)外測定RBC免疫功能的方法有：花環(huán)法、放免法、酶聯(lián)法、紅細胞培養(yǎng)技術(shù)，發(fā)光法。郭峰將紅細胞免疫調(diào)節(jié)功能測定方法的研究概括為三個測定：二、紅細胞免疫學(xué)實驗技術(shù)44（1）紅細胞免疫粘附功能的測定，包括：RBC-C3b受體花環(huán)RBC-IC花環(huán)紅細胞SPA混合花環(huán)腫瘤RBC花環(huán)[直向腫瘤紅細胞花環(huán)率（DTER）、促腫瘤紅細胞花環(huán)率（ETER）、自然腫瘤紅細胞花環(huán)率（NTER）]抗IgG單克隆抗體Coomb's試驗（1）紅細胞免疫粘附功能的測定，包括：45（2）紅細胞免疫功能自身調(diào)控能力的測定。包括：血清中紅細胞免疫粘附抑制因子測定血清中紅細胞免疫粘附促進因子測定（2）紅細胞免疫功能自身調(diào)控能力的測定。包括：46（3）紅細胞對其它免疫細胞的免疫調(diào)控能力的測定紅細胞促淋巴細胞吞噬功能的形態(tài)學(xué)方法腫瘤紅細胞淋巴細胞混合花環(huán)腫瘤紅細胞粒細胞混合花環(huán)（3）紅細胞對其它免疫細胞的免疫調(diào)控能力的測定47近年來，紅細胞免疫測定法的研究有了新的進展，如：自然腫瘤紅細胞花環(huán)試驗，補體致敏酵母多糖血凝法，腫瘤細胞血凝法，紅細胞促吞噬功能發(fā)光技術(shù)，紅細胞免疫粘附混合花環(huán)試驗，紅細胞CR1PCR技術(shù)，紅細胞促NK細胞活性測定技術(shù)等。近年來，紅細胞免疫測定法的研究有了新的進展，如：48二、紅細胞免疫技術(shù)二、紅細胞免疫技術(shù)49（一）紅細胞C3b受體花環(huán)及免疫復(fù)合物花環(huán)試驗1．原理：紅細胞C3b受體花環(huán)：紅細胞膜上CR1可與C3b致敏酵母多糖粘附形成花環(huán)，花環(huán)率的高低與CR1的活性及數(shù)量有關(guān)；RBC免疫復(fù)合物（IC）花環(huán)：RBC膜粘附的IC中C3b分子可與酵母多糖粘附形成花環(huán)，花環(huán)率的高低與血清中CIC的含量有關(guān)。（一）紅細胞C3b受體花環(huán)及免疫復(fù)合物花環(huán)試驗502．方法學(xué)郭峰法：預(yù)備試驗：（1）待測RBC（肝素抗凝）懸液（指血，靜脈血均可）經(jīng)生理鹽水洗滌離心3次，（2000r／min，3-5min），按紅細胞計數(shù)方法配成1.25×107／ml使用液備用；（2）補體致敏酵母多糖凍干試劑按說明書要求溶解。用生理鹽水洗滌離心2次（水平離心），按RBC計數(shù)法計數(shù)配成1×108／ml使用液備用。2．方法學(xué)51正式試驗：取兩支試管，每管加待測RBC使用液0.075ml，第一管再加補體致敏酵母多糖使用液0.075ml，第二管再加酵母多糖使用液0.075ml，都搖勻放37oC水浴30min；取出用手腕輕輕搖勻，加生理鹽水0.15ml；混勻后再加0.25%戊二醛0.05ml，輕輕混勻；取1／3量水平涂片，吹干，加甲醇固定加少許瑞氏液，再加瑞氏緩沖液（PH6.4），用鹽水或自來水少許沖洗加鹽水后高倍顯微鏡計數(shù)。一個紅細胞結(jié)上2個或2個以上酵母菌為一朵花環(huán)。計數(shù)200個RBC，算出百分率。第一管為RBC－C3b受體花環(huán)率，第二管為RBC-IC花環(huán)率。正式試驗：取兩支試管，每管加待測RBC使用液0.075ml52劉景田法（l）補體致敏YS酵母凍干試劑和補體未致敏YS酵母凍干試劑按說明書要求溶解、洗滌，配制濃度為l×108／ml。（2）紅細胞懸液制備取未梢血或肝素抗凝血1滴加入2ml生理鹽水洗兩次，每次2000r／min－3min，配成1.25×107／ml濃度。劉景田法53（3）操作取上述致敏酵母菌懸液與未致敏酵母菌懸液各50μl加入2支康氏試管，各加紅細胞懸液50μl，混勻，37℃水浴30min，取出加0.25％戊二醛1滴，輕輕混勻，室溫5—10min，水平抹片，低溫干燥，瑞氏染色，濕片鏡檢，以一個紅細胞上結(jié)合兩個或兩個以上酵母菌為陽性細胞，計200個紅細胞求陽性率。（3）操作54計數(shù)（血細胞計數(shù)儀）1.25×107/ml洗兩次（RBC.ICR）RBC懸液50μl+未致敏菌50μl(RBC.C3b.RR)RBC懸液50μl+致敏菌50μl37℃孵育30min固定5—10min水平抹片低溫干燥染色、鏡檢、計數(shù)RBC.IC陽性花環(huán)率（%）RBC.C3bR陽性花環(huán)率（%）末梢血1滴+2ml生理鹽水實驗程序計數(shù)（血細胞計數(shù)儀）1.25×107/ml洗兩次（RBC.I553．注意事項：（1）計數(shù)要準確，RBC與酵母菌比例要適合；（2）酵母菌要分散不能自凝，要充分吹打分散，水浴時加蓋，避免水進入RBC破壞；（3）戊二醛加入前后都應(yīng)輕輕混勻，避免假花環(huán)出現(xiàn)；（4）涂片要均勻、簿，高倍鏡下一個視野大約10個RBC為妥；（5）各實驗室要建立自己的正常值。3．注意事項：564．意義：作為RBC免疫粘附功能的指標(biāo)。二項都低下判為原發(fā)性紅細胞免疫功能低下，為RBC膜C3b受體受到破壞和影響所致;如果RBC－C3b受體花環(huán)率降低而RBC—IC花環(huán)率升高，為繼發(fā)性紅細胞免疫功能低下，是由于CIC增加，RBC粘附IC過多引起；如兩項都升高，為紅細胞免疫功能亢進與紊亂。該兩項試驗可作為臨床上免疫性疾病的輔診、判斷預(yù)后、療效觀察等指標(biāo)使用；可做為器官移植，疾病發(fā)病機理與藥物篩選紅細胞免疫指標(biāo)使用；可做為中醫(yī)中藥免疫學(xué)研究指標(biāo)使用。4．意義：57（二）紅細胞SPA混合花環(huán)試驗1．原理葡萄球菌A蛋白（SPA）能與紅細胞膜粘附IC中IgGFc段相結(jié)合，而C3b致敏酵母菌能與紅細胞膜上未粘附IC的C3b受體結(jié)合，各自形成花環(huán)。（二）紅細胞SPA混合花環(huán)試驗582．方法學(xué)在試管內(nèi)加入洗過3次待測紅細胞懸液（1.25×107／ml）0.05ml，補體致敏酵母菌懸液（1×108/ml）0.05ml混合，放37℃水浴30min；再加0.05mlSPA菌體懸液（洗過一次后按紅細胞計數(shù)法6.25×108／ml），混勻，37℃水浴30min；取出水平涂片、瑞氏染色、油鏡觀察，RBC結(jié)上2個以上酵母菌為RBC－C3b受體花環(huán)（酵母菌花環(huán)）；結(jié)上10個以上SPA菌體為RBC-IC花環(huán)（SPA菌體花環(huán)）；結(jié)上10個SPA菌體和2個酵母菌以上為混合花環(huán)，未結(jié)合上SPA菌體與酵母菌為裸體紅細胞。計數(shù)200個RBC，算出各自花環(huán)率。RBC為紅色，酵母菌為蘭色，SPA菌體為小的淺蘭色。2．方法學(xué)593．注意事項基本同RBC－C3b受體花環(huán)與RBC—IC花環(huán)。另需注意的是染色要適當(dāng)，不能太深；同時注意區(qū)別紅細胞棘突變型與SPA菌體的區(qū)別（如SLE患者有棘狀紅細胞出現(xiàn)），酶標(biāo)SPA或SPA純蛋白可代替SPA菌體。3．注意事項604．意義基本同RBC－C3b受體花環(huán)與RBC—IC花環(huán)。但該試驗同時顯示四種免疫功能狀態(tài)不同的紅細胞，按程度不同，將RBC分為四種亞群：4．意義61（1）SPA菌體花環(huán)為已全被IC或抗RBC抗體粘附的紅細胞亞群；（2）酵母菌花環(huán)為未粘附IC或抗RBC抗體的紅細胞亞群；（3）混合花環(huán)為部分粘附IC或有少許抗RBC抗體，并C3b受體有空位的紅細胞亞群；（4）裸體紅細胞為未粘附IC或抗體，并且C3b受體活性低（不能粘附補體致敏酵母茵）的紅細胞亞群。（1）SPA菌體花環(huán)為已全被IC或抗RBC抗體粘附的紅細胞亞62此實驗做為科研方法深入研究各種免疫性疾病的免疫學(xué)發(fā)病機理更有價值。該試驗的成功也證明紅細胞按免疫功能狀況不同，可分為亞群，結(jié)合Coomb`s試驗使用可能更有價值。在資料不斷積累過程中會進一步開拓該試驗的實用價值，對自身免疫溶血性貧血發(fā)病機理新的解釋會進一步深化。此實驗做為科研方法深入研究各種免疫性疾病的免疫學(xué)發(fā)病機理更有63（三）血清中紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子活性的測定1．原理血清中存在促進與抑制紅細胞免疫功能的兩種物質(zhì)，即紅細胞免疫促進因子（RFER）與抑制因子（RFIR），前者耐熱（58℃30min不被滅活），后者不耐熱（58℃30min滅活）而設(shè)計紅細胞C3b受體花環(huán)促進與抑制試驗。（三）血清中紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子活性的測定642．方法學(xué)郭峰等法促進與抑制試驗兩種方法可同時操作：取三支試管，第一、二支試管加入待測新鮮血清各0.075ml。第一管放58℃水浴30min。第二管放室溫，第三管加入0.075ml生理鹽水；然后每管再加入洗過3次的正常人0型紅細胞懸液（1.25×107／ml）0.05Inl混勻，放37.℃水浴30min；再加補體致敏酵母菌懸液（1×108／ml）0.05ml混勻，放37℃水浴30min，加7滴生理鹽水混勻，再加2滴0.25％戊二醛混勻．2．方法學(xué)65從各管中取出約1／3細胞懸液水平涂片、吹干，加甲醇固定后，用瑞氏液染色。紅細胞呈紅色，酵母菌呈蘭色。血清滅活管涂片高倍鏡下計數(shù)二種花環(huán)標(biāo)準，一種是紅細胞結(jié)上2個或2個以上酵母菌為一朵花環(huán)（計算促進率使用）；一種是結(jié)上3個或3個以上酵母菌為一朵花環(huán)（計算抑制率使用）。從各管中取出約1／3細胞懸液水平涂片、吹干，加甲醇固定后，66血清未滅活管涂片高倍鏡計數(shù)，紅細胞結(jié)上三個或三個以上酵母菌為一朵花環(huán)（計算抑制率使用）。生理鹽水管涂片高倍鏡計數(shù)，紅細胞結(jié)上2個或2個以上酵母菌為一朵花環(huán)。每管涂片都計數(shù)200個紅細胞，按各自標(biāo)準，算出花環(huán)率。按不同公式求出促進率與抑制率，以此標(biāo)準代表血清中紅細胞免疫促進因子和紅細胞免疫抑制因子活性。血清未滅活管涂片高倍鏡計數(shù)，紅細胞結(jié)上三個或三個以上酵母菌為6758℃滅活血清組花環(huán)率RBC—C3bRR抑制率（RFER）=58℃滅活血清組花環(huán)率—未滅活血清組花環(huán)率RBC—C3bRR促進率（RFER）58℃滅活血清組花環(huán)率—生理鹽水組花環(huán)率生理鹽水組花環(huán)率=58℃滅活血清組花環(huán)率RBC—C3bRR抑制率（RFER）=68劉景田等法：一步法紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子測定1．材料1.1補體致敏Ys酵母凍干試劑：按說明書要求溶解、洗滌，配制濃度為1×108／ml1.2電子血細胞計數(shù)儀：山東三聯(lián)電子公司產(chǎn)品，型號DXJ—2。1.3生物顯微鏡：日本產(chǎn)，型號CH—B145－T。1.4電熱恒溫水浴鍋：江蘇省張家港醫(yī)療器械廠，型號HH.S。1.5標(biāo)本來源：為臨床確診的住院患者，其中食道癌24例，胃癌12例，肝癌9例，肺癌6例，膀胱癌11例。劉景田等法：一步法紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子測定692．方法與結(jié)果2.l改郭峰原方法的兩步法為一步法按郭峰原法處理血清，分別加入滅活管（58℃30min）和未滅活管（室溫）各0.075ml，第三管加入生理鹽水0.075ml，然后依次加人洗過三次的正常人O型RBC懸液1.25×107/ml），和補體致敏Ys酵母菌懸液使用液(1×108／ml)各0.05ml混勻，置37℃水浴30min，其余步驟按郭峰法操作，并與郭峰原法對照，其結(jié)果如下：2．方法與結(jié)果70表2-1一步法與兩步法檢測結(jié)果對比（X土s）％例數(shù)兩步法一步法PRFERREIRE/I626262116.8±21.7153.8±622.1±0.5114.8±20.156.3±6.92.0±0.4＞0.05＞0.05＞0.05表2-1一步法與兩步法檢測結(jié)果對比（X土s）％例數(shù)兩步71從上表可以看出，（1）用一步法對52例惡性腫瘤患者紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子的檢測結(jié)果與兩步法（原方法）檢測結(jié)果基本相一致，二者無顯著性差異（P＞0．05），說明將血清、O型RBC和補體致敏Ys酵母菌三者依次加人進行一次孵育與三者分別加入進行兩次孵育所得結(jié)果是一樣的，說明一步法是可行的，能夠代替兩步法。（2）惡性腫瘤患者血清中RFER明顯下降（對照組18.9±28.3），RFIR明顯上升（對照組34.8±4.6），與惡性腫瘤患者紅細胞免疫功能低下是一致的。從上表可以看出，（1）用一步法對52例惡性腫瘤患者紅細胞免疫72血清中紅細免疫促進因子與紅細胞免疫抑制因子在血清中的含量，可用其RFER與RFIR的比值來表示，值的大小可反映血清中調(diào)節(jié)因子的變化規(guī)律，同時亦能間接反映紅細胞的免疫功能。其比值愈大，血清中紅細胞免疫促進因子含量愈高，其抑制因子含量愈低，紅細胞免疫功能就愈強；反之，比值愈小，血清中紅細胞免疫促進因子含量愈低，抑制因子含量愈高，紅細胞免疫功能愈弱。上表中RFER／RFIR的比值明顯減少（正常對照為5.7±1.2），與惡性腫瘤患者血清中紅細胞免疫促進因子下降、抑制因子上升、紅細胞免疫功能低下相一致。可見，測定患者血清中RFER與RFIR的比值在臨床上有著重要意義。血清中紅細免疫促進因子與紅細胞免疫抑制因子在血清中的含量，可732.2統(tǒng)一了陽性花環(huán)的判定標(biāo)準，改原方法中一個紅細胞上結(jié)合2個或2個以上酵母菌（計算促進率使用）以及結(jié)合3個或3個以上酵母斷計算抑制率使用）為一朵陽性花環(huán)，一律改為一個紅細胞上結(jié)合2個或2個以上酵母菌為一朵陽性花環(huán)（計算促進率與抑制率都按這個標(biāo)準）．這樣的優(yōu)點是：（1）程序簡便，節(jié)約時間和人力；（2）實驗結(jié)果比較精細、準確，不易出現(xiàn)較大的誤差。2.2統(tǒng)一了陽性花環(huán)的判定標(biāo)準，改原方法中一個紅細胞上結(jié)合2742.3改室溫為37℃，使實驗結(jié)果穩(wěn)定，不易受室溫變化的影響，結(jié)果可靠?？傊?，在目前血清紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子還不能提純，直接測定其含量還比較困難的情況下，采用郭峰創(chuàng)建的RFER與RFIR的測定方法，是反映紅細胞自我調(diào)節(jié)功能的重要指標(biāo)。該法在郭峰原法的基礎(chǔ)上進行了改良，建立了RFERR與RFIR一步測定法，有利于推廣應(yīng)用。2.3改室溫為37℃，使實驗結(jié)果穩(wěn)定，不易受室溫變化的影響，753．注意事項基本同紅細胞C3b受體花環(huán)試驗。另外對血清滅活溫度的控制（保持58℃），作用時間（固定半小時）很重要。正常人O型紅細胞要肝素抗凝新鮮血，強調(diào)研究組與實驗組標(biāo)本同批化驗，用同批補體致敏酵母菌。3．注意事項764．意義為紅細胞免疫自身調(diào)控機理研究提供簡便有效的手段；對藥物作用免疫學(xué)機理和疾病發(fā)病機理研究以及對機體紅細胞免疫功能變化分析都有其重要價值。4．意義77（四）血清中CRI免疫調(diào)節(jié)因子測定1981年，美國學(xué)者Siegel發(fā)現(xiàn)血清中存在紅細胞免疫粘附抑制因子，并認為血清中存在紅細胞免疫自我調(diào)控系統(tǒng)。1988年，郭峰發(fā)現(xiàn)血清中還存在紅細胞免疫粘附促進因子。1994年，劉景田等在Siegel和郭峰研究的基礎(chǔ)在，發(fā)現(xiàn)血清中的調(diào)節(jié)因子不僅對紅細胞上的CRI，有調(diào)節(jié)作用，而且對粒細胞(淋巴細胞主要指B淋巴細胞)上的CRI；也有同樣的調(diào)節(jié)作用，并且調(diào)節(jié)幅度基本一致，故將血清中的調(diào)節(jié)因子稱為CRI免疫調(diào)節(jié)因子，其中具有正調(diào)節(jié)作用者稱為CRI免疫調(diào)節(jié)促進因子，具有負調(diào)節(jié)作用者稱為CRI免疫調(diào)節(jié)抑制因于。（四）血清中CRI免疫調(diào)節(jié)因子測定1981年，美國學(xué)者S78同時在比較三種細胞的基礎(chǔ)上，選擇能長期保存、體積較大、敏感性高的粒細胞作為血清中CRI免疫調(diào)節(jié)因子測定實驗用的被調(diào)節(jié)細胞，并以高效價補體致敏的酵母菌作靶細胞。其測定結(jié)果為血清中CR1免疫調(diào)節(jié)因于對粒細胞、紅細胞等的免疫一調(diào)節(jié)作用，該結(jié)果既能反映血清中調(diào)節(jié)因子對粒細胞上CRI的調(diào)節(jié)作用，也能夠反映對紅細胞上CR1的調(diào)節(jié)作用，故此實驗方法可用于血清中紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子的測定。同時在比較三種細胞的基礎(chǔ)上，選擇能長期保存、體積較大、敏感性79一．材料HBSS—H（無酚紅Hank`s平衡鹽溶液）；小牛血清；生理鹽水；凍干被調(diào)節(jié)細胞及凍干高效價補體致敏Ys酵母試劑（陜西省人民醫(yī)院免疫研究室生產(chǎn)）；生物顯微鏡；小型離心機；普通冰箱等。一．材料80二．預(yù)備試驗：（1）被調(diào)節(jié)細胞懸液制備：取凍干被調(diào)節(jié)細胞1支，用含1％小牛血清的HBSS一H液洗2次，每次2000r／min離心8min，用HBSS—H恢復(fù)體積0.35ml使其濃度為1x107／ml細胞懸液備用。（2）補體致敏（高效價）Ys酵母茵懸液制備：取凍干高效價補體致敏Ys酵母試劑1支，用生理鹽水洗2次，恢復(fù)體積0.35ml，使其濃度為6X107／ml懸液備用。二．預(yù)備試驗：81正式試驗：取58℃滅活及末滅活血清各0.lml，加入滅活管與末滅活管，另設(shè)對照管加生理鹽水0.lml，每管分別加被調(diào)節(jié)細胞懸液10μl混勻，37℃30min孵育，取出后用含1％小牛血清HBSS—H洗2次，棄去上清液，再加高效價補體致敏酵母菌懸液10μl，混勻，37℃30min孵育，混勻，加0.25％戊二醛1滴，混勻，置室溫5—10min，水平抹片，自然干燥，瑞氏染色，高倍鏡檢，以被調(diào)節(jié)細胞上結(jié)合3個以上酵母菌為一朵陽性花環(huán)，計數(shù)200個被調(diào)節(jié)細胞，求陽性花環(huán)率，按下列公式計算CR1免疫調(diào)節(jié)促進因子對C3bRR的促進率和CR1免疫調(diào)節(jié)抑制因子對C3bRR的抑制率。正式試驗：8258℃滅活管花環(huán)率—鹽水對照管花環(huán)率對照管花環(huán)率促進率=×100%58℃滅活管花環(huán)率—未滅活管花環(huán)率58℃滅活管花環(huán)率抑制率=×100%58℃滅活管花環(huán)率—鹽水對照管花環(huán)率對照管花環(huán)率促進率=×183表2-2操作程序滅活管末滅活管對照組58℃滅活血清（ml）未滅活血清（ml）生理鹽水（ml）被調(diào)節(jié)細胞（ml）0.1//0.01/0.1/0.01//0.10.01混勻，37℃30min孵育，洗2次

補體致酵母菌（ml）0.010.010.01混勻，37℃30min孵育，加0.25%戊二醛1滴，水平抹片，自然干燥，瑞氏染色，高倍鏡，求陽性率表2-2操作程序滅活管末滅活管對照組58℃滅活血清（ml84三．被調(diào)節(jié)細胞的比較表2-3被調(diào)節(jié)細胞的比較O型RBC粒細胞大小瑞氏染色鏡下觀察敏感度保存方法、時間6-9μm，平均7.2μm紅色片子厚，底色暗，不易辨別低在4℃ACD保存液中可保持三天，不能經(jīng)冷凍干燥保存10—13μm紫紅色底色干凈，清晰易辨別高加細胞膜穩(wěn)定劑在4℃可保存5天，經(jīng)冷凍干燥活性可保存一年以上三．被調(diào)節(jié)細胞的比較表2-3被調(diào)節(jié)細胞的比較O型RBC85四．臨床應(yīng)用采用上述試劑和實驗方法，對60例健康人、30例乙肝患者（HBsAg、HBeAg和抗—HBc陽性患者）、30例惡性腫瘤（肺癌9例、胃癌14例、肝癌7例）、17例骨折患者、11例急性腎炎，共148例患者的血清標(biāo)本進行檢測，其結(jié)果如下表：四．臨床應(yīng)用86表2-4不同人群CR1免疫調(diào)節(jié)團子檢測結(jié)果（X士S）％*與對照組相比，P＜0.05；**與對照組相比，P＜0.1n促進率抑制率乙肝患者惡性腫瘤創(chuàng)傷（骨折）組急性腎炎健康獻血員303017116074.1±17.4**72.05±15.8**96.6±18.2**157.0±32.6*144.1±28.161.4±14.3**68.5±16.8**56.2±12.2**25.1±7.1*31.95±6.7表2-4不同人群CR1免疫調(diào)節(jié)團子檢測結(jié)果（X士S）％*與87從上表可以看出，惡性腫瘤、乙肝患者和創(chuàng)傷（骨折）患者紅細胞免疫調(diào)節(jié)功能與健康人比較，其促進率明顯下降（p<0.05），抑制率明顯升高（p<0.05），急性腎炎患者促進率升高而抑制率下降（P＜0.05），與國內(nèi)外報道基本一致，說明用粒細胞作被調(diào)節(jié)細胞來檢測血清中的調(diào)節(jié)因子對紅細胞上CR；的調(diào)節(jié)作用是完全可行的。從上表可以看出，惡性腫瘤、乙肝患者和創(chuàng)傷（骨折）患者紅細胞免88五．注意事項1．凍干試劑用少量鹽水反復(fù)沖洗干凈，離心時防止細胞丟失，恢復(fù)體積后計數(shù)。2．溶解后未用的試劑，被調(diào)節(jié)細胞置4℃冰箱四天內(nèi)效價不變，高效價補體致敏酵母試劑置冰盒內(nèi)一周內(nèi)效價不變。3．其它注意事項同紅細胞C3b受體花環(huán)試額六．意義：同紅細胞免疫調(diào)節(jié)因子測定。五．注意事項89國外有關(guān)紅細胞CR1研究

的幾種測定方法國外有關(guān)紅細胞CR1研究

的幾種測定方法90紅細胞的免疫粘附作用是通過細胞膜上的I型補體受體（CR1；或C3b受體）來實現(xiàn)的。目前國內(nèi)外對CR1的研究很多?，F(xiàn)將國外有關(guān)紅細胞CR1研究的幾種實驗方法介紹如下：紅細胞的免疫粘附作用是通過細胞膜上的I型補體受體（CR1；或91（l）紅細胞-紅細胞花環(huán)試驗(RedCell－RedCellRosette):即Siegel首次提出的標(biāo)準RICA試驗。人紅細胞采用EDTA抗凝血．綿羊紅細胞予先用成人血清在21℃作用60分鐘。所有細胞均用改良Hanks液洗三遍配成所需濃度。試驗時在試管中加入2％的人紅細胞0.1ml，2％的抗體予處理過的綿羊紅細胞0.1ml，再加0.010—0.025ml1：5稀釋的人臍血清作補體來源。（l）紅細胞-紅細胞花環(huán)試驗(RedCell－RedCe92混合后即取一滴置載玻片上，上加蓋片，室溫（20—23℃）作用20分鐘，相差顯微鏡下隨機計數(shù)100個人紅細胞，以粘附至少一個羊紅細胞為陽性，算出百分率。由于人紅細胞平均直徑7－8μm，而羊紅細胞只有4－5μm，兩者相差近一半，故鏡下不難區(qū)別?；旌虾蠹慈∫坏沃幂d玻片上，上加蓋片，室溫（20—23℃）作用93（2）免疫粘附血凝試驗（immuneadherencehaemagglutinationIAHA）：用人混合血清經(jīng)鹽析和二乙胺乙基纖維素層析得到人IgG。-70℃保存。用時溶于磷酸緩沖液，65℃加熱30分鐘，冰水冷卻，15000g離心15分鐘。取上清為人聚合丙種球蛋白（AHG）。在U型微滴定板上將AHG系列倍比稀釋（原始濃度100μg／ml）每孔25μl，再加等量補體，37℃作用45分鐘，加入二硫基蘇糖醇溶液固定。（2）免疫粘附血凝試驗（immuneadherenceh94然后將待測紅細胞用EDTA-GVB配成2×108／ml，取25μl加入各孔，置24℃下60分鐘后觀察結(jié)果。IgG聚合后暴露出C3b結(jié)合點與補體C3b結(jié)合，加入蘇糖醇固定使C3b不被降解，可與紅細胞表面C3b受體結(jié)合而致紅細胞凝集。以發(fā)生血凝的AHG的最高稀釋度的倒數(shù)為IAHA的效價，表示C3b受體的活性，此法敏感性與特異性均高。然后將待測紅細胞用EDTA-GVB配成2×108／ml，取95（3）血吸附法（Haemadorptiontechnique，HA）：待測紅細胞用PBS洗三遍，3000xg離心作成集塊，液氮速凍，切成6-8μm厚的切片，置蓋玻片上。用兔抗羊紅IgM抗體致敏羊紅細胞、加血清37℃作用10分種，形成抗原抗體補體復(fù)合物，洗過二遍用GVB配成1％的懸液作指示細胞。（3）血吸附法（Haemadorptiontechniqu96在微培養(yǎng)載片的凹孔中加滿指示細胞，蓋上覆有紅細胞切片的蓋片，使切片正好位凹孔中央，顛倒載片使指示細胞下沉到紅細胞切片上，室溫置30分鐘再倒回來，使未結(jié)合的指示細胞離開玻片。結(jié)果判定以待測紅細胞緊密結(jié)合一層指示細胞為3+，部分覆蓋指示細胞為2+，散在結(jié)合為+，沒有血吸附現(xiàn)象-，該法比血凝法更敏感。在微培養(yǎng)載片的凹孔中加滿指示細胞，蓋上覆有紅細胞切片的蓋片，97（4）放射免疫測定法（Radiohomunoassay，RIA：根據(jù)放射性同位素標(biāo)記部位不同有幾種方法。放射碘標(biāo)記抗人IgG抗體法：將一定濃度的待測紅細胞、AHG和人補體置37℃共同作用30分鐘，使AHG通過補體C3b結(jié)合到紅細胞膜C3b受體上，洗滌過后再加入碘標(biāo)記的兔抗人IgG，4℃作用30分鐘，使碘標(biāo)抗體結(jié)合到AHG上，然后將紅細胞洗過，測其放射性，結(jié)果用待測紅細胞吸收的放射碘標(biāo)記抗人IgG量與正常人紅細胞吸收量之比的平均值表示。（4）放射免疫測定法（Radiohomunoassay，RI98放射碘標(biāo)記F（ab`）2法：靜脈抗凝血紅細胞0℃下洗過配成一定濃度，加人125碘標(biāo)記的非免疫F（ab`）2或125碘標(biāo)記的抗C3b受體F（ab`）2，20℃作用60分鐘，各取0.075ml加入含0.3ml鄰苯二甲酸二丁酯的微量離心管中，8000g離心30秒，切斷離心管，管中沉淀和上清液分別含結(jié)合與未結(jié)合的抗體。抗C3b受體的F（ab`）2結(jié)合量減去非免疫F（ab`）2結(jié)合量，得出特異結(jié)合量，按Scatchard法算出每個紅細胞抗原飽和量。放射碘標(biāo)記F（ab`）2法：靜脈抗凝血紅細胞0℃下洗過配成一99放射碘標(biāo)記二聚體C3b法：將一定濃度的紅細胞與125碘標(biāo)記的二聚體C3b單獨或加0.2mg非標(biāo)記的抗C3b受體F（ab`）2，0℃共育20分鐘，再用上述微量沉淀法分離開結(jié)合與未結(jié)合的配體，未加抗體管的結(jié)合量減去加人抗C3b受體F（ab`）2管的結(jié)合量，則為特異結(jié)合量，再按scatchard法計算出紅細胞結(jié)合C3b的量。放射碘標(biāo)記二聚體C3b法：將一定濃度的紅細胞與125碘標(biāo)記100放射碘標(biāo)記抗人C3b受體單抗法：用純化人紅細胞CR1免疫小鼠取鼠脾細胞與漿細胞瘤細胞融合，生產(chǎn)抗CR1的單克隆抗體。用125碘標(biāo)記單抗加待測紅細胞37℃作用30分鐘，取50μl加入微量離心管，8000g離心30秒，切去頂部，于r計數(shù)器內(nèi)測定放射量，算出紅細胞表面受體數(shù)?；?qū)⒓t細胞溶解后取二個稀釋度的提取物加入包被C3b的塑料板孔內(nèi)。37℃作用2小時，洗過后加125碘標(biāo)記的抗CR1單抗，置室溫1小時，洗過后切開，γ計數(shù)儀測放射量，再由純化CR1所作的標(biāo)準曲線中，求得紅細胞提取物的受體量。該法特異性強。放射碘標(biāo)記抗人C3b受體單抗法：用純化人紅細胞CR1免疫小鼠101（5）間接血凝法（indirectheamagglutinationtechwue，IHA）：用PBS將鼠抗CR1單克隆抗體對倍稀釋加入等量5％待測紅細胞懸液，4℃作用1小時，然后將微滴定板傾斜使其近乎垂直約10分鐘。未凝集的紅細胞則象淚滴一樣地流出來，而凝集的紅細胞則粘附在孔底，結(jié)果以能引起凝集的抗CR1抗體的最高稀釋度表示。該法避免了一般單抗法放射標(biāo)記的過程。（5）間接血凝法（indirectheamagglutin102（6）酶聯(lián)免疫吸附試驗（Empme－LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）：取100μlPLL(聚-L-溶素)加入平底聚苯乙烯96孔微滴定板的各孔中，20℃下孵育30分鐘，翻過板來倒空，用吸水紙反復(fù)吸凈。待測紅細胞用PBS洗過三遍配成懸液，取100μl同時加人四孔中（每孔約5×106個細胞），室溫置30分鐘。再加0.l％的戊二醛PBS溶液100μl，22℃放置30分鐘。棄去戊二醛，加200μlPBS，3分鐘后倒空，吸水紙吸，重復(fù)洗三遍。（6）酶聯(lián)免疫吸附試驗（Empme－LinkedImmun103再加1％小牛血清250μl22℃作用60分鐘，洗三遍將未結(jié)合血清沖掉。然后取100μlPBSl:100稀釋的鼠抗人C3b受體單克隆抗體加人各孔，22℃孵育60分鐘，洗三次，堿性磷酸酶結(jié)合的兔抗鼠IgG，用PBSl:100稀釋，取100μl加入各孔，22℃孵育60分鐘，再洗三次．最后將200μl新配制的底物溶液加人各孔反應(yīng)60分鐘，每孔取150μl反應(yīng)產(chǎn)物置另一板的相應(yīng)孔中，在405um測吸光度。該法不需要同位素標(biāo)記，也避免了大試管ELISA法底物使紅細胞溶解的缺點。再加1％小牛血清250μl22℃作用60分鐘，洗三遍將未結(jié)104（7）流式細胞儀測定法（Folwcytometricassay，F(xiàn)CA）：待測紅細胞用1%小牛血清磷酸鹽緩沖液（PBC．FCS）洗三遍，然后再配成0.5．1.5x108／ml的懸液。取10μl加鼠抗人單克隆抗體50μl（5.5ug／ml）冰育40分鐘。再用2ml的PBC.FCS洗兩遍，加熒光素異硫氰酸鹽（FITC）標(biāo)記的兔抗鼠免疫球蛋白（F234）30μl（l／20稀釋），或者加1／50稀釋的（FITC）標(biāo)記的兔抗大鼠免疫球蛋白（F234）30μl冰浴30分種，洗二遍。（7）流式細胞儀測定法（Folwcytometricass105用0.5％的多聚甲醛鹽水溶液800μl將紅細胞重新混懸及固定。鼠抗人CD8、鼠抗人生長激素、正常鼠血清或二級抗體可單獨用作對照．用流式細胞儀檢測24小時內(nèi)標(biāo)記的紅細胞2000個。紅細胞CR1水平用中位熒光頻道（MFCN）表示。該法結(jié)果精確。用0.5％的多聚甲醛鹽水溶液800μl將紅細胞重新混懸及固106（8）除上述方法外，還可根據(jù)紅細胞膜上C3b受體在血清I因子滅活C3b時起輔因子的作用采用酶活性測定法（Enzymicassay，EA）：將人C3b分離出來用125碘標(biāo)記，加入固定濃度的I因子，再加人待測紅細胞或紅細胞膜的提取物，37℃下共同作用一段時間，中止反應(yīng)后，用SDS聚丙烯酸胺凝膠電泳，用放射照相術(shù)觀察凝膠上碘標(biāo)蛋白的裂解圖像，然后將凝膠切成小條測其放射性。通過測量C3b的α鏈位置上放射性與凝膠總放射活性之比，可得出C3b降解的程度，從而推斷紅細胞膜上C3b受體的活性。（8）除上述方法外，還可根據(jù)紅細胞膜上C3b受體在血清I因子107紅細胞免疫在臨床應(yīng)用的研究

紅細胞免疫在臨床應(yīng)用的研究108紅細胞免疫發(fā)展的顯著特點，就是人們在重視紅細胞免疫基礎(chǔ)理論和實驗方法研究的同時，也重視了臨床應(yīng)用的研究，將紅細胞免疫與臨床各科疾病緊密地結(jié)合起來。從目前已報導(dǎo)的資料來看，臨床上大部分和紅細胞免疫功能有關(guān)。如自身免疫性疾病、腫瘤、傳染病、變態(tài)反應(yīng)病、老年病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等，以及外傷、創(chuàng)傷、感染、溫度、血液庫存時間等因素均可導(dǎo)致紅細胞免疫功能的變化。郭峰將臨床疾病紅細胞免疫功能的變化分為三個類型：紅細胞免疫發(fā)展的顯著特點，就是人們在重視紅細胞免疫基礎(chǔ)理論和109（1）代償性紅細胞免疫功能缺陷或繼發(fā)性紅細胞免疫功能缺陷：其表現(xiàn)為紅細胞C3b受體花環(huán)率下降，紅細胞免疫復(fù)合物花環(huán)率升高，血清中紅細胞免疫促進因子（RFER）含量下降（或變化不顯著），紅細胞免疫抑制因子（RFIR）含量升高，腫瘤紅細胞花環(huán)率（NTER、DTER、ETER、ATER）一般都有下降，如腫瘤、傳染病等患者的紅細胞免疫功能表現(xiàn)。（1）代償性紅細胞免疫功能缺陷或繼發(fā)性紅細胞免疫功能缺陷：110（2）失代償紅細胞免疫功能缺陷或原發(fā)性紅細胞免疫功能缺陷：其表現(xiàn)為紅細胞C3b受體花環(huán)率和紅細胞免疫復(fù)合物花環(huán)率均下降，如少數(shù)SLE、PNH、慢性化膿性骨髓炎等患者的紅細胞免疫功能表現(xiàn)。（2）失代償紅細胞免疫功能缺陷或原發(fā)性紅細胞免疫功能缺陷：111（3）紅細胞免疫功能紊亂與亢進：其表現(xiàn)為紅細胞C3b受體花環(huán)率升高，紅細胞免疫復(fù)合物花環(huán)率亦升高或變化不顯著。如硬皮病、原發(fā)性癲癇、銀屑病等患者的紅細胞免疫功能表現(xiàn)。（3）紅細胞免疫功能紊亂與亢進：112臨床疾病紅細胞免疫的研究，在疾病發(fā)病機理的探討、療效觀察、判斷預(yù)后和診斷上都有重要價值，尤其在普查、篩選、早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤方面有重要意義。在治療上，應(yīng)用胸腺素、轉(zhuǎn)移因子、IL-2、γ-干擾素以及多糖類中藥等都可提高紅細胞免疫功能，促進機體恢復(fù)正常。制備LAK細胞有意將紅細胞加入，可提高LAK細胞的產(chǎn)量和活性。從細胞中提取SOD酶，制成商品已應(yīng)用于抗衰老，增強機體免疫功能上。臨床疾病紅細胞免疫的研究，在疾病發(fā)病機理的探討、療效觀察、判113謝謝！謝謝！114紅細胞免疫檢測及臨床應(yīng)用新進展錦州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院紅細胞免疫檢測及臨床應(yīng)用新進展錦州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院115一、紅細胞免疫基本理論一、紅細胞免疫基本理論116（一）概述血液與免疫有密切聯(lián)系。本世紀初，Landsteiner采用免疫學(xué)方法在人類紅細胞與血液混合試驗中發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型系統(tǒng)。認識到紅細胞表面存在許多能與血清中相應(yīng)抗體凝集的抗原，如Mn，P型、Rn、Lutheran、Lewis、Kell、Duffy、Kidd等。除了目前所知數(shù)十種血型抗原外，紅細胞還含有不少其它抗原，這些抗原在異常情況下，可引起對自身紅細胞免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體而導(dǎo)致紅細胞系統(tǒng)疾病，如輸血反應(yīng)、新生兒溶血癥、自身免疫溶血性貧血，藥物過敏性紅細胞溶血等。（一）概述血液與免疫有密切聯(lián)系。117由于紅細胞免疫粘附理論的發(fā)現(xiàn)以及紅細胞免疫功能研究的逐漸深入，1981年美國生殖免疫學(xué)家Siegel提出“紅細胞免疫系統(tǒng)”的概念，指出RBC是不可忽視的免疫細胞，也象白細胞一樣具有重要的免疫功能，是完整機體免疫系統(tǒng)中的一個子系統(tǒng)，是不可缺少的一個重要組成部分。這一理論提出刷新了人們對RBC的認識只停留在CO2、O2呼吸載體的概念上，開拓了免疫學(xué)的新領(lǐng)域。由于紅細胞免疫粘附理論的發(fā)現(xiàn)以及紅細胞免疫功能研究的逐漸深入118我國在紅細胞免疫研究工作始于1982年。1989年成立全國紅細胞免疫研究協(xié)作組。1993年12月又成立了全國免疫學(xué)會基礎(chǔ)免疫委員會紅細胞免疫專業(yè)學(xué)組。我國在紅細胞免疫研究工作始于1982年。119（二）紅細胞免疫發(fā)展史20世紀30年代，杜克（LH.Duke）首先發(fā)現(xiàn)錐蟲在抗血清及補體存在時，可粘附于人類RBC上。Brown和Broom：不同人的RBC對錐蟲的粘附能力高低不同。Brown本人的RBC對抗體調(diào)整過的錐蟲一直未能顯示任何反應(yīng)，但Broom的RBC卻有很強免疫粘附作用。因此他們比較了52例各種疾病患者與26例正常人的RBC粘附活性，發(fā)現(xiàn)兩例TB病患者與1例風(fēng)濕熱患者粘附能力降低。（二）紅細胞免疫發(fā)展史20世紀30年代，杜克（LH.Duk1201953年：納樂遜（R.A.Nelson）觀察體內(nèi)外梅毒螺旋體，Ⅰ型肺炎雙球菌粘附于靈長類動物（人、猴、狒狒等）的紅細胞和非靈長類動物血小板上，促進吞噬現(xiàn)象。他用正常人RBC、WBC與相應(yīng)抗體致敏的Ⅰ型肺炎雙球菌進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)肺炎雙球菌可粘附于正常人RBC表面并被WBC吞噬，其吞噬率達60%，未加抗體組（4%）和未加RBC組（18%），推測RBC膜存在免疫粘附受體，免疫復(fù)合物同該受體結(jié)合可促進WBC的吞噬作用。由此命名為免疫粘附現(xiàn)象（Immnmeadhereruphenomenon）。1953年：納樂遜（R.A.Nelson）觀察體內(nèi)外梅毒螺旋1211956年：Nelson又將肺炎球菌注入猿猴體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其絕大多數(shù)細菌粘附于RBC上，認為靈長類動物RBC的免疫粘附現(xiàn)象起到對血中異物的清除及細菌的固定作用，由此認為是宿主機體防御的一部分。1963年：尼雪俄考（K.Nishioka）證實紅細胞這種免疫粘附現(xiàn)象是通過人紅細胞膜C3受體來實現(xiàn)，現(xiàn)稱C3受體為第一補體受體（CcomplementReceptorTypel,CR1）。1956年：Nelson又將肺炎球菌注入猿猴體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其絕大12270年代后期有關(guān)CR1的研究報道很多。1980年弗爾龍（D.T.Teavon）從紅細胞膜上分離出CR1，研究CR1的性質(zhì)：分子量19萬~25萬，多態(tài)性膜糖蛋白，CR1總數(shù)95%以上存在于RBC膜上，CR1除了存在RBC膜上，還存在于多種細胞膜上如多核WBC、單核細胞、巨噬細胞、B細胞、肥大細胞、腎小球上皮細胞。ECR1在RBC膜上呈簇狀分布。70年代后期有關(guān)CR1的研究報道很多。1231981年美國生殖免疫學(xué)家西格爾（I.Sigel）在前人研究基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)（1）RBC有多種免疫功能（2）RBC可粘附胸腺細胞（3）血清中存在紅細胞免疫粘附抑制因子，預(yù)見了血清中存在紅細胞免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)。（4）RBC膜過氧化物酶活性與CR1活性有關(guān)。（5）RBC有殺傷致病原的效應(yīng)細胞樣作用—推測RBC在阻止腫瘤細胞血行轉(zhuǎn)移中有作用。綜上提出“紅細胞免疫學(xué)說”。1981年美國生殖免疫學(xué)家西格爾（I.Sigel）在前人研究1241982年梅多夫（M,E,Medlf）體外證明RBC的CR1和血漿中Ⅰ因子共同作用將粘附的免疫復(fù)合物（Ic）中的C3b降介為C3dg，C3d而失去炎性。1982年郭峰證明（體外）RBC可粘附補體調(diào)理過的酵母菌，并證明SLE，腫瘤患者紅細胞免疫粘附酵母菌的能力低下，該實驗證明RBC可直接粘附補體調(diào)理過的病原體。1983年科娜康夫在猴血循環(huán)內(nèi)注入免疫復(fù)合物（IC），用同位素示蹤，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)IC很快與紅細胞結(jié)合，并迅速被運至肝、脾，在該特定環(huán)境下，巨噬細胞膜上FC段受體比RBC膜上CR1活性強，使IC從紅細胞膜上脫落而被吞噬消毀——RBC促吞噬作用。1982年梅多夫（M,E,Medlf）體外證明RBC的C1251984年西格費索（A.Sigfuson）通過體外美州商陸素刺激淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗發(fā)現(xiàn)加入自身RBC可增加淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和培養(yǎng)液中IgG、IgA量。1985福斯里德（J.Forslid）在體外通過對比實驗證明紅細胞促吞噬作用與紅細胞CR1和SOD酶活性有關(guān)。1986年郭峰通過體外對比實驗證明RBC可粘附補體調(diào)整的各種腫瘤細胞，并證明腫瘤患者RBC免疫粘附腫瘤細胞的下降，發(fā)現(xiàn)RBC可直接粘附未經(jīng)補體調(diào)理過的腫瘤細胞，其機理不明。1984年西格費索（A.Sigfuson）通過體外美州商陸素1261992年劉景田等證實這種直接免疫粘附的機理與紅細胞膜上CR1和腫瘤細胞膜上C3b分子有關(guān)，腫瘤細胞膜上的補體來源于荷瘤小鼠的腹水中，而荷瘤小鼠的腹水中確有少量補體物質(zhì)的存在。1986年凱斯（L.Keyes）等發(fā)現(xiàn)人自身紅細胞可增加T細胞產(chǎn)生γ-干擾素。1987年魯杰利斯（M.T.Rugeles）發(fā)現(xiàn)自身紅細胞加入外周血單個核細胞培養(yǎng)管中可增強原發(fā)性和繼發(fā)性特異抗體應(yīng)答。1987年郭峰通過體外對比實驗證明血清中還存在一種加熱（58℃30'）不滅活的紅細胞免疫粘附促進因子。1992年劉景田等證實這種直接免疫粘附的機理與紅細胞膜上CR1271988年葉瑞拉（G.Yirella）通過體外抗淋巴細胞功能相關(guān)抗原—3（LFA-3）單抗或CD2單抗處理和不處理的紅細胞對促進B細胞增殖和免疫球蛋白的影響分析，認為紅細胞的這種作用是因CD58（LFA-3），CD59與T細胞的CD2分子相互作用密切相關(guān)。推測是由于RBC促進T細胞IL-2受體表達和增強對外源性IL-2應(yīng)答的敏感度所致，可能與增加B細胞生長因子或分化因子有關(guān)。表達LFA-3的紅細胞有利于激活T輔助細胞。T輔助細胞接受第一信號（加工后的抗原）刺激外，還接受第二信號——通過LFA-3/CD2相互作用。1988年葉瑞拉（G.Yirella）通過體外抗淋巴細胞功能1281988年萬內(nèi)利（J.R.Yannelli）在培養(yǎng)瓶內(nèi)加RBC可促進LAK細胞的產(chǎn)量和活性，RBC數(shù)與淋巴細胞數(shù)為100：1時IL-2激活的LAK細胞活力最大。通過單抗阻斷實驗，證明這種促進作用與細胞膜上LFA-3與淋巴細胞膜CD2相互作用密切相關(guān)。1988年萬內(nèi)利（J.R.Yannelli）在培養(yǎng)瓶內(nèi)加RB1291988年威瑞拉（Vireal）用單抗標(biāo)記法證明紅細胞膜有CR3。1989年郭峰發(fā)現(xiàn)RBC和淋巴細胞或粒細胞可共同圍攻粘附各種腫瘤細胞。1990年派考德（J.P.paceand）采用折痕—標(biāo)記免疫電鏡比較PMN和紅細胞的CR1形態(tài)，發(fā)現(xiàn)細胞細胞上幾乎50%的CR1量＞3單位簇狀分布，而這種簇狀分布在PMN不到15%。CR1的這種簇狀分布可使它與C3包被的IC結(jié)合位點呈多價性，連接更為牢固。1994年劉景田發(fā)現(xiàn)CR1免疫調(diào)節(jié)因子，其中包括CR1免疫調(diào)節(jié)促進因子和CR免疫調(diào)節(jié)抑制因子。對粒細胞、淋巴細胞（主要指B淋巴細胞）也有同樣的調(diào)節(jié)作用。1988年威瑞拉（Vireal）用單抗標(biāo)記法證明紅細胞膜有C130（三）紅細胞的免疫物質(zhì)免疫細胞的免疫功能是通過其免疫物質(zhì)實現(xiàn)的，紅細胞的免疫物質(zhì)主要為存在于紅細胞膜上的蛋白質(zhì)分子?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)紅細胞有許多與免疫有關(guān)的物質(zhì)如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF，SOD酶等。（三）紅細胞的免疫物質(zhì)免疫細胞的免疫功能是通過其免疫物質(zhì)實現(xiàn)131紅細胞與其它免疫細胞的比較

免疫細胞紅細胞T細胞B細胞NK細胞K細胞巨噬細胞中性粒細胞細胞數(shù)/ML5.4×1092×1060.5×106

0.3×1063.66×106IgGFC受體－±＋＋＋＋＋CR1＋－＋－＋＋＋免疫粘附＋－－－－＋＋免疫功能粘附提呈抗原等細胞免疫體液免疫細胞免疫細胞免疫處理提呈抗原調(diào)理吞噬紅細胞與其它免疫細胞的比較免疫紅細胞T細胞B細胞NK細胞K1321．補體受體（CR1，CR3）補體受體存在于不同種類的血細胞上，不同的血細胞所具有的補體受體不同，補體受體根據(jù)結(jié)合補體C3片段種類的不同可分為CR1，CR2、CR3三類。CR1是C3b、C4b的受體也是與紅細胞免疫粘附作用有關(guān)受體。CR2是C3d的受體，C3d是C3b裂解的終末產(chǎn)物。CR3是iC3b的受體（是C3b受I因子，H因子在CR1參與作用下形成的無活性C3b（iC3b）1．補體受體（CR1，CR3）133人類細胞上的補體受體細胞種類

補體受體類型

CR1CR2

CR3

紅細胞血小板單核-巨噬細胞嗜酸性粒細胞中性粒細胞腎小球上皮細胞B淋巴細胞

NK細胞

＋＋＋＋＋＋＋－

－－－－－－＋－

＋－＋－＋－－＋