醫(yī)院檢驗中心VMA操作規(guī)程

醫(yī)院檢驗中心 VMA操作規(guī)程試劑：ReagentB1MTris75ml550mReagentC0.2N醋酸鈉沖洗液l550mReagent10.2N醋酸鈉微柱緩沖液lReagent24M碳酸鉀緩沖液30mlReagent32瓶、每瓶0.4克NaIO4Reagent42瓶、每瓶2.5克Na2S2O5VMA標準1瓶樹脂柱50支另外試劑乙醇（分析純）1N乙酸：57.1ml冰醋酸+D.water至1000ml試劑準備:ReagentB.C.1.2: 如提供的使用NaIO4溶液:4%Reaent3+10mlD.water2- 8℃穩(wěn)定2周Na2S2O5溶液:10%Reagent4+25mlD.water2- 8℃穩(wěn)定2周VMA標準液:1N乙酸5ml加至VMA標準瓶中濃度為 1.2mgVMA/ml2-8℃穩(wěn)定4周,-20℃穩(wěn)定3月注意:收集標本前 3天、病人禁食香蕉、香草、巧克力、咖啡、茶及呋喃嘧啶類藥物、包括 2,5一二羥基苯甲酸和 2,5一二羥基苯乙酸。收集:干凈容器，加入 15ml20%HCl(或12ml25%HCl)作穩(wěn)定劑重要：調(diào)整標本 PH值1.5~3.5注意: 用尿液質(zhì)控必須用 0.1NHCl溶解,若用D.water 則需加10ul6NHCl/2.0ml操作步驟:在第一次操作分析前須完整仔細閱讀操作手冊讓所有試劑和標本到達室溫在非常熟練之前,所有試驗必須雙份為有良好的實驗操作,每次操作須攜帶質(zhì)控操作過程:準備標準:Tube1:standardSo:Oul(=OmgVMA/L)+2.0mlurineTube2:standardS1:25ul(=15mgVMA/L)+2.0mlurine吸2.0ml標本和質(zhì)控到標記的試管中。用試劑B調(diào)至PH大約5.5~7.5(PH指示紙)接近或超過PH7.5時會出現(xiàn)混濁,加少許1N乙酸。準備標準、質(zhì)控、標本的過濾柱。搖動柱使樹脂完全懸浮，讓樹脂下沉（避免氣泡），去帽、除滴頭，讓柱完全在架上下流。加標準、質(zhì)控、標本到相應的柱中，讓其完全流經(jīng)，去除洗出液。轉(zhuǎn)移柱子到相應試管中（16×160mm）,每柱中加10mlReagent1收集洗出液,去除過濾柱。每管準備測定和空白,測定和空白管加2.0ml洗出液。加0.2mlReagent2到每管中,混勻3~5秒。9. 每支測定管加 0.1mlReagent3, 每支空白管加0.2mlReagent4, 充分混勻。10.37℃水浴 30′11. 未冷卻測定管中直接加 0.2mlReagent4, 空白管中加0.1mlReagent3 充分混勻.測定:在360nm波長以D.water為空白測出吸光度在380nm波長以D.water為空白測出吸光度計算:△Eso(380)=Eso(380)-EBo(380)△Eso(360)=Eso.(360)-EBo(360)△Es1(380)=Es1(380)-EB1(380)△Es1(360)=Es1(360)-EB1(360)△Et(380)=Et(380)-EBt(380)△Et(360)=Et(360) -EBt(360)bNetEso=△Eso(360)-△Eso(380).NetEs1=△Es1(360)-△Es1(380)NetEt=△Et(360) - △Et(380)cCorr.Es1=Nets1-Netso.dVMAt(mg/L)=15mg/corr.Es1×NetEt.eMgVMA/24h=mgVMA/L×24h 尿量.正常范圍:mgVMA/24h:1-8mgVMA/24hVMASo:Oul 標準+2.0ml尿液S1:25ul 標準+2.0ml尿液↓用B試劑調(diào)整每管2.0ml尿液的PH:5.5-7.5,出現(xiàn)混加少許1N乙酸↓搖動使柱完全懸浮 ,脂下降(無氣泡),去帽,去滴頭↓相應標本加入柱中 ,余液用3mlD.water 沖洗加入+10mlReagentC到柱中,完全流經(jīng),去除洗出液↓移柱至相應管中 +10mlReagent1. 收集洗出液,去除柱↓每管均設(shè)定測定和空白 ,且每管加2.0ml洗出液↓“B”和“T”+0.2mlReagent2混勻3-5秒↓T BReagent3 0