生物顯微技術(shù)復(fù)習(xí)-2013課后答案

PAGE7附三：復(fù)習(xí)思考題1.什么叫生物制片，它分幾大類？生物制片：就是要經(jīng)過特殊手段，將所觀察的材料制成體積小而又透明的薄片，使其能在顯微鏡下直接觀察和研究。它分切片法和非切片法兩大類。2.什么叫切片法？簡述其主要過程。切片法：就是要將新鮮的材料經(jīng)過特殊的處理，用刀片切成薄片的過程?；具^程：固定→沖洗→脫水→透明→包埋→切片→染色→分化→封片。⒊什么叫非切片法？它有哪些方法？簡述其主要過程。非切片法：就要用物理或化學(xué)的方法，將生物體組織分離成單個細胞或薄片，或?qū)⒄麄€生物體進行整體封藏。非切片法包括：整體制片法、離析法、壓片法、涂片法、透明法。基本過程：固定→沖洗→整體染色→分化與退染→脫水→透明→壓片。⒋什么叫固定，固定的目的是什么？固定：就是將所要觀察的新鮮材料，從動植物體取下后立即投入某類的化學(xué)藥液中，借助化學(xué)藥品的作用使細胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)保存下來不使其改變形態(tài)和變質(zhì)的一種手續(xù)。固定的目的和作用在于：=1\*GB3①防止組織自溶和腐??；=2\*GB3②使細胞內(nèi)的各種內(nèi)含物沉淀保存下來，使其保持了與生活時相近似的形態(tài)和結(jié)構(gòu)；=3\*GB3③將各種細胞和組織成分的析光率作不同程度的改變，增強組織的析光指數(shù)，使各種染色成份更容易辨認(rèn)；且有的固定劑還有助染的作用，從而使細胞的各部位更易于染色。=4\*GB3④固定劑還兼有硬化的作用，使柔軟的組織硬化而不易變形，有利于操作。⒌簡述單純固定液乙醇、醋酸的特點。=1\*GB3①乙醇(alcohol)C2H5OH，通稱酒精。特點：殺死快、滲透力強、可使材料變硬；可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白；是還原劑。=2\*GB3②醋酸(aceticacid)CH3COOH，又稱乙酸。穿透力極強，有軟化作用，能固定核蛋白和胞質(zhì)。一般可以使細胞膨脹和收縮。⒍透明常用的透明劑有哪些？它的主要目的是什么？常用的透明劑有：二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和丁香油。透明的主要目的：包埋前的材料通過透明劑的透明，使之便于透蠟包埋；染色后的透明，目的是增加透明度，不僅可以便于觀察，而且可以溶解封藏劑，使封片均勻緊密。⒎什么叫石蠟切片法？它有哪些優(yōu)點和缺點？石蠟切片法：用石蠟包埋組織塊，再進行切片和染色的制片方法。優(yōu)點：操作比較容易，能夠切成較薄的（2~10um）連續(xù)切片。缺點：脫水與浸蠟后組織易收縮，堅硬易碎和易變脆的材料以及較大的材料塊不適合制作石蠟切片。⒏石蠟切片時石蠟帶出現(xiàn)彎曲不直，原因有哪些？如何補救？原因：蠟塊形狀不規(guī)則、蠟塊邊緣不平行并與刀刃不平行、刀鈍、刀角偏大等。補救：可修整切蠟塊使上下平行且成倒梯形，刀鈍需磨或移動刀口至銳利處。⒐石蠟切片時切片分離，不能連成帶狀，原因有哪些？如何補救？原因：可能是室溫過低、石蠟過硬、蠟邊過小或不平所致。補救：針對具體原因，室溫過低時，提高室溫，可在切片機旁加點酒精燈；或加快切片速度；若是蠟塊問題，可重新包埋。⒑石蠟切片時材料發(fā)生裂隙破碎或脫落，可能的原因及補救方法有哪些？原因：組織浸蠟不足、浸蠟溫度過高、在透明劑中時間過久已發(fā)脆，此時無法補救。⒕通過石蠟切片實驗，你認(rèn)為關(guān)鍵操作點有哪些？1、取材與固定；2、沖洗；3、脫水；4、保存；5、染色；6、透明；7、封藏。⒖試說明光圈的作用。第一，與快門一起構(gòu)成曝光組合，控制光線進入相機時的強弱第。二，與焦距和攝距一起控制景深長短。光圈越大，景深越淺。光圈越小，景深越深。第三，控制鏡頭的相差。⒗用閃光燈拍攝時，有時會產(chǎn)生“紅眼病”，試分析其產(chǎn)生的原因及解決的方法。原因：造成“紅眼病”的原因是由于當(dāng)人長時間地呆在較黑暗的環(huán)境中，瞳孔為適應(yīng)視覺需要而放大，眼睛充血，這時如果閃光燈的位置與得眼睛一般高低，被攝者又是正面對著鏡頭，瞳孔與燈處于同一直線，那么，在拍攝時，當(dāng)閃光燈的閃光透過瞳孔照在眼底時，密密麻麻的微細血管在燈光照映下顯現(xiàn)出鮮艷的紅色反射回來，在眼睛上形成“紅點”的自然現(xiàn)象，就是所謂的“紅眼”。解決方法：=1\*GB3①不要讓被攝者長時間地處于深暗的環(huán)境中。在室內(nèi)一般都可以盡量把照明燈都打開，如果環(huán)境中確實不存在較明亮的光源，可以想法再拍攝之前的短暫時間讓被攝者的眼睛經(jīng)受一下強光的刺激。=2\*GB3②適當(dāng)調(diào)整閃光燈的照射角度，或高或低，或偏或斜，注意不要讓燈與被攝者的雙眼處于同一水平線上。=3\*GB3③使用無法改變方向的內(nèi)置閃光燈時，可以讓被攝者的臉部轉(zhuǎn)動一下，不要正面朝著照相機?；蛘弑粩z者的眼神呈仰視或俯視狀，也能消除“紅眼”之弊。17．說明影響景深的三大因素。影響景深大小的因素有三點：光圈的大小、攝距的遠近及鏡頭焦距的長短。其規(guī)律如下：（光圈的大?。汗馊Υ蟆⒕吧钚?；光圈小，景深大。攝距的遠近：攝距遠、景深大；攝距近，景深小。鏡頭的焦距：焦距長、景深??；焦距短，景深大。）18．怎樣運用景深拍攝下列要求的照片？三個層次都清晰：即實實實使用小光圈，快門時間長，使用攝影架。三個層次為：虛實虛使用大光圈，中長焦鏡頭，調(diào)焦對準(zhǔn)中間的物像。兩個層次為：虛實使用大光圈，調(diào)焦對準(zhǔn)后面的物像。20．物鏡有哪些種類？并寫出每類物鏡金屬外殼上的英文標(biāo)識。按其消除色差程度不同，物鏡可分為以下幾種：=1\*GB3①半復(fù)消色差物鏡(FL)；=2\*GB3②平視場物鏡(Plan)；=3\*GB3③復(fù)消色差物鏡(APO)；=4\*GB3④消色差物鏡（ACH）21.什么叫顯微攝影？利用光學(xué)顯微攝影裝置或數(shù)碼顯微攝影裝置來拍攝顯微鏡或解剖鏡視野中所觀察到的物像的細微結(jié)構(gòu)真實的記錄下來的技術(shù)。23．顯微攝影為什么特別強調(diào)提高影像的反差？如何提高反差？因為適當(dāng)提高反差能提高照片質(zhì)量。提高措施：=1\*GB3①標(biāo)本新鮮、色彩鮮艷；=2\*GB3②光學(xué)顯微攝影需要較強的光線，但不宜過強；=3\*GB3③根據(jù)具體情況適當(dāng)升降聚光器以調(diào)整其位置；=4\*GB3④視場光闌應(yīng)比取景框稍大些，孔徑光闌要調(diào)節(jié)在物鏡數(shù)值孔徑的60%~80%之間；=5\*GB3⑤根據(jù)有色物體對光的吸收特性來選擇濾光片。24.顯微攝影時，為什么必須進行曝光補償？怎樣補償？原因：樣品的明暗、視野中的分布狀態(tài)以及視野背景的亮度，都會給自動曝光造成影響，形成不準(zhǔn)確的曝光。補償方法：根據(jù)標(biāo)本和背景情況，通過刻度盤的調(diào)節(jié)使曝光得以補償，達到準(zhǔn)確曝光。25.影響光學(xué)顯微攝影反差的因素有哪些？標(biāo)本、照明、聚光器位置、光闌、濾光片、相差、衍射等。28.顯微攝影時應(yīng)掌握哪些關(guān)鍵步驟？（1）按自動曝光控制器的“WINDING”卷片鈕2-3次，觀察膠片的計數(shù)器是否轉(zhuǎn)動；（2）選用所使用的感光度；（3）選用所使用膠片的倒易率失效的補償指數(shù)；（4）根據(jù)標(biāo)本的分布密度情況，把“EXPOSUREADJ”曝光補償刻度盤調(diào)整到適當(dāng)?shù)奈恢蒙?；?）對焦與調(diào)節(jié)孔徑光闌，將標(biāo)本對焦并調(diào)節(jié)聚光的孔徑光闌，以取得合適的反差；（6）對焦轉(zhuǎn)動調(diào)焦目鏡上的去逛度調(diào)節(jié)環(huán)，使取景框中的雙十字線達到最清晰的程度。29.相差顯微鏡的原理是什么？利用光的干涉原理，將位相差轉(zhuǎn)換成振幅差的顯微裝置。把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。30.熒光顯微鏡的原理是什么？利用光化熒光的原理。是利用一定波長的微發(fā)光對樣品進行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定的波長的熒光，從而用于對樣品結(jié)構(gòu)或組分進行定性、定位、定量觀察檢測。32.顯微攝影時怎樣進行光路合軸的調(diào)整？撥出目鏡，插入中心望遠鏡，用左手固定其外筒，一邊眼看望遠鏡，一邊用右手轉(zhuǎn)動望遠鏡內(nèi)筒使其升降，對準(zhǔn)焦點后就能看到環(huán)狀光欄的亮環(huán)和相板的黑環(huán)。此時可將望遠鏡固定，微微轉(zhuǎn)動聚光器兩側(cè)的調(diào)節(jié)鈕，使兩者完全重合。如果亮環(huán)和黑環(huán)大小不一致，可升降聚光器便之一致，如果升降聚光器仍不能矯正亮環(huán)和黑環(huán)一致的話，那就是載、蓋玻片過厚的緣故。換用不同物鏡要同時更換相對應(yīng)的環(huán)狀光欄，并重新合軸。合軸完成后，換回目鏡。33/26.顯微攝影時如何進行孔徑光闌和視場光闌的調(diào)節(jié)？①視場光闌的調(diào)節(jié)使用：1.視場光闌位于鏡座之中，其作用：一是根據(jù)物鏡的倍率給予不同直徑的光束面積，二是在顯微攝影時起著增減影像反差的作用。2.當(dāng)光擴大到一定程度，照射到標(biāo)本上的光即會有反射與不規(guī)則的散射，造成影像反差的損失。3.當(dāng)視場光闌收縮到取景框邊緣外的時候，攝影圖像的反差就會改進。4.如果視場光闌收縮得過于接近取景框，圖像的四角將被切去。因此，視場光闌應(yīng)比取景框稍大些。②孔徑光闌的調(diào)節(jié)：安裝在聚光鏡中的光闌叫孔徑光闌。它的作用是使圖像的分辨率、反差和焦深處在最佳狀態(tài)。大多數(shù)的標(biāo)本，如想得到高質(zhì)量的照片，孔徑光闌要調(diào)節(jié)在物鏡數(shù)值孔徑的60%～80%之間。35/27.談?wù)勅〉煤玫娘@微攝影照片的關(guān)鍵因素是什么？想要拍攝一張好的顯微攝影圖片，最主要的還是取決于顯微鏡以及攝影設(shè)備的成像質(zhì)量，在這些硬件設(shè)備一定的條件下，要拍攝一張滿意的顯微攝影圖像，應(yīng)該注意以下幾點：（1）調(diào)整好顯微鏡（聚光器和光源燈的調(diào)中；視場光闌對中調(diào)節(jié)；正確使用光闌）。（2）調(diào)焦：應(yīng)使用高速預(yù)覽模式進行調(diào)焦。（3）制作清晰的標(biāo)本片，其中組織切片應(yīng)厚薄適度，染色片不應(yīng)有多余的染料。（4）選擇性能優(yōu)良干凈的載玻片和蓋玻片。（5）使用高性能的物鏡（最好用復(fù)消色差的平場物鏡）和聚光器。（6）調(diào)節(jié)好孔徑光闌。（7）拍攝時應(yīng)準(zhǔn)確地聚焦和選擇合理的曝光時間。（8）適當(dāng)控制背景噪聲。（9）合理選擇設(shè)備參數(shù)。（10）正確的沖印方法。36．什么叫CCD?數(shù)碼圖片的常用格式有哪些？CCD(ChargeCoupledDevice)，即“電荷耦合器件”，是一種感光半導(dǎo)體芯片，用于捕捉圖形，廣泛運用于掃描儀、復(fù)印機以及無膠片相機等設(shè)備。常用格式：TIFF、JPEG、BMP、TGA、RAW。37．與傳統(tǒng)顯微攝影相比，數(shù)碼攝影有哪些優(yōu)點？無需膠卷拍攝，不用沖洗和暗房設(shè)備，數(shù)碼攝影是采用CCD進行“感光”，采用存儲器儲存圖像，通過打印機打印出照片。優(yōu)點：拍到的畫像及時可見；可立即刪除掉拍攝失敗的照片；畫像不會劣化；用電腦等存儲、加工簡單。缺點：耗電；比銀鹽相機畫質(zhì)略差；價格相對較貴；會出現(xiàn)近似色。38．?dāng)?shù)碼照片的基本調(diào)節(jié)主要包括哪些？可以任意改變整體或局部的亮度調(diào)節(jié)、對比度調(diào)節(jié)、飽和度調(diào)節(jié)、色相調(diào)節(jié)；此外還可以將影像重新分割、重組、修改、更換背景、調(diào)整顏色；也可以隨意插入各種文稿。39．生物圖像電子素材的獲取途徑有哪些？電子素材有何基本要求？獲取途徑：=1\*GB3①數(shù)碼相機采集圖片；=2\*GB3②掃描儀采集圖片；=3\*GB3③軟件制作圖片；=4\*GB3④其他來源，可以通過視頻設(shè)備捕捉來自攝像機的圖像，也可從網(wǎng)站上下載圖片作為電子素材。對電子圖片素材的要求：作為圖版的電子圖像應(yīng)當(dāng)符合或滿足科技期刊對其格式、圖版尺寸和分辨率等方面的要求，方能用于圖版的制作。40.簡述生物圖版的基本要求。（1）選擇代表性的有突出特征的圖片。（2）統(tǒng)一圖片的格式和分辨率，一般分辨率不低于300×300像素/平方英寸。（3）注明標(biāo)尺或放大倍數(shù)。（4）按照一定順序科學(xué)排列，并進行編號。（5）將不同的圖像組合在一個圖版中時，可以采用緊貼、留縫或照片照片間加線條框的方法。（6）添加圖版標(biāo)注，如用箭頭或線條指出關(guān)鍵部位以及進行文字注釋等。41.簡述生物電子圖版的制作過程和方法。（1）圖版文檔的建立（確定文檔名稱、尺寸、分辨率、模式和背景）；（2）選擇圖片素材；（3）編輯圖片素材（統(tǒng)一圖像的分辨率、色調(diào)、對比度、亮度等，對圖片進行適當(dāng)?shù)男揎棧?；?）協(xié)調(diào)整體布局、編排圖版（彩排圖版，裁剪圖片，編排圖版）。⒒染料有哪兩大類？各舉2-3例。①天然染料：地衣紅、洋紅、蘇木精②人工染料：鹼性染料，例：番紅、結(jié)晶紫、染細胞核；中性染料，例:固綠、曙紅⒓什么叫壓碎法？將材料放在載玻片上，蓋上蓋玻片，然后輕壓蓋玻片，使材料壓散成為適于顯微鏡觀察的薄層。⒔什么叫解離法？為了觀察某種組織單個細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，常用一些化學(xué)藥劑或酶將細胞之間的中層物質(zhì)溶解，使其彼此分離的方法。31.