生物顯微技術(shù)復(fù)習(xí)-2013課后答案

PAGE7附三：復(fù)習(xí)思考題1.什么叫生物制片，它分幾大類？生物制片：就是要經(jīng)過(guò)特殊手段，將所觀察的材料制成體積小而又透明的薄片，使其能在顯微鏡下直接觀察和研究。它分切片法和非切片法兩大類。2.什么叫切片法？簡(jiǎn)述其主要過(guò)程。切片法：就是要將新鮮的材料經(jīng)過(guò)特殊的處理，用刀片切成薄片的過(guò)程?；具^(guò)程：固定→沖洗→脫水→透明→包埋→切片→染色→分化→封片。⒊什么叫非切片法？它有哪些方法？簡(jiǎn)述其主要過(guò)程。非切片法：就要用物理或化學(xué)的方法，將生物體組織分離成單個(gè)細(xì)胞或薄片，或?qū)⒄麄€(gè)生物體進(jìn)行整體封藏。非切片法包括：整體制片法、離析法、壓片法、涂片法、透明法?；具^(guò)程：固定→沖洗→整體染色→分化與退染→脫水→透明→壓片。⒋什么叫固定，固定的目的是什么？固定：就是將所要觀察的新鮮材料，從動(dòng)植物體取下后立即投入某類的化學(xué)藥液中，借助化學(xué)藥品的作用使細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)保存下來(lái)不使其改變形態(tài)和變質(zhì)的一種手續(xù)。固定的目的和作用在于：=1\*GB3①防止組織自溶和腐??；=2\*GB3②使細(xì)胞內(nèi)的各種內(nèi)含物沉淀保存下來(lái)，使其保持了與生活時(shí)相近似的形態(tài)和結(jié)構(gòu)；=3\*GB3③將各種細(xì)胞和組織成分的析光率作不同程度的改變，增強(qiáng)組織的析光指數(shù)，使各種染色成份更容易辨認(rèn)；且有的固定劑還有助染的作用，從而使細(xì)胞的各部位更易于染色。=4\*GB3④固定劑還兼有硬化的作用，使柔軟的組織硬化而不易變形，有利于操作。⒌簡(jiǎn)述單純固定液乙醇、醋酸的特點(diǎn)。=1\*GB3①乙醇(alcohol)C2H5OH，通稱酒精。特點(diǎn)：殺死快、滲透力強(qiáng)、可使材料變硬；可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白；是還原劑。=2\*GB3②醋酸(aceticacid)CH3COOH，又稱乙酸。穿透力極強(qiáng)，有軟化作用，能固定核蛋白和胞質(zhì)。一般可以使細(xì)胞膨脹和收縮。⒍透明常用的透明劑有哪些？它的主要目的是什么？常用的透明劑有：二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和丁香油。透明的主要目的：包埋前的材料通過(guò)透明劑的透明，使之便于透蠟包埋；染色后的透明，目的是增加透明度，不僅可以便于觀察，而且可以溶解封藏劑，使封片均勻緊密。⒎什么叫石蠟切片法？它有哪些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？石蠟切片法：用石蠟包埋組織塊，再進(jìn)行切片和染色的制片方法。優(yōu)點(diǎn)：操作比較容易，能夠切成較薄的（2~10um）連續(xù)切片。缺點(diǎn)：脫水與浸蠟后組織易收縮，堅(jiān)硬易碎和易變脆的材料以及較大的材料塊不適合制作石蠟切片。⒏石蠟切片時(shí)石蠟帶出現(xiàn)彎曲不直，原因有哪些？如何補(bǔ)救？原因：蠟塊形狀不規(guī)則、蠟塊邊緣不平行并與刀刃不平行、刀鈍、刀角偏大等。補(bǔ)救：可修整切蠟塊使上下平行且成倒梯形，刀鈍需磨或移動(dòng)刀口至銳利處。⒐石蠟切片時(shí)切片分離，不能連成帶狀，原因有哪些？如何補(bǔ)救？原因：可能是室溫過(guò)低、石蠟過(guò)硬、蠟邊過(guò)小或不平所致。補(bǔ)救：針對(duì)具體原因，室溫過(guò)低時(shí)，提高室溫，可在切片機(jī)旁加點(diǎn)酒精燈；或加快切片速度；若是蠟塊問(wèn)題，可重新包埋。⒑石蠟切片時(shí)材料發(fā)生裂隙破碎或脫落，可能的原因及補(bǔ)救方法有哪些？原因：組織浸蠟不足、浸蠟溫度過(guò)高、在透明劑中時(shí)間過(guò)久已發(fā)脆，此時(shí)無(wú)法補(bǔ)救。⒕通過(guò)石蠟切片實(shí)驗(yàn)，你認(rèn)為關(guān)鍵操作點(diǎn)有哪些？1、取材與固定；2、沖洗；3、脫水；4、保存；5、染色；6、透明；7、封藏。⒖試說(shuō)明光圈的作用。第一，與快門(mén)一起構(gòu)成曝光組合，控制光線進(jìn)入相機(jī)時(shí)的強(qiáng)弱第。二，與焦距和攝距一起控制景深長(zhǎng)短。光圈越大，景深越淺。光圈越小，景深越深。第三，控制鏡頭的相差。⒗用閃光燈拍攝時(shí)，有時(shí)會(huì)產(chǎn)生“紅眼病”，試分析其產(chǎn)生的原因及解決的方法。原因：造成“紅眼病”的原因是由于當(dāng)人長(zhǎng)時(shí)間地呆在較黑暗的環(huán)境中，瞳孔為適應(yīng)視覺(jué)需要而放大，眼睛充血，這時(shí)如果閃光燈的位置與得眼睛一般高低，被攝者又是正面對(duì)著鏡頭，瞳孔與燈處于同一直線，那么，在拍攝時(shí)，當(dāng)閃光燈的閃光透過(guò)瞳孔照在眼底時(shí)，密密麻麻的微細(xì)血管在燈光照映下顯現(xiàn)出鮮艷的紅色反射回來(lái)，在眼睛上形成“紅點(diǎn)”的自然現(xiàn)象，就是所謂的“紅眼”。解決方法：=1\*GB3①不要讓被攝者長(zhǎng)時(shí)間地處于深暗的環(huán)境中。在室內(nèi)一般都可以盡量把照明燈都打開(kāi)，如果環(huán)境中確實(shí)不存在較明亮的光源，可以想法再拍攝之前的短暫時(shí)間讓被攝者的眼睛經(jīng)受一下強(qiáng)光的刺激。=2\*GB3②適當(dāng)調(diào)整閃光燈的照射角度，或高或低，或偏或斜，注意不要讓燈與被攝者的雙眼處于同一水平線上。=3\*GB3③使用無(wú)法改變方向的內(nèi)置閃光燈時(shí)，可以讓被攝者的臉部轉(zhuǎn)動(dòng)一下，不要正面朝著照相機(jī)?；蛘弑粩z者的眼神呈仰視或俯視狀，也能消除“紅眼”之弊。17．說(shuō)明影響景深的三大因素。影響景深大小的因素有三點(diǎn)：光圈的大小、攝距的遠(yuǎn)近及鏡頭焦距的長(zhǎng)短。其規(guī)律如下：（光圈的大?。汗馊Υ?、景深??；光圈小，景深大。攝距的遠(yuǎn)近：攝距遠(yuǎn)、景深大；攝距近，景深小。鏡頭的焦距：焦距長(zhǎng)、景深??；焦距短，景深大。）18．怎樣運(yùn)用景深拍攝下列要求的照片？三個(gè)層次都清晰：即實(shí)實(shí)實(shí)使用小光圈，快門(mén)時(shí)間長(zhǎng)，使用攝影架。三個(gè)層次為：虛實(shí)虛使用大光圈，中長(zhǎng)焦鏡頭，調(diào)焦對(duì)準(zhǔn)中間的物像。兩個(gè)層次為：虛實(shí)使用大光圈，調(diào)焦對(duì)準(zhǔn)后面的物像。20．物鏡有哪些種類？并寫(xiě)出每類物鏡金屬外殼上的英文標(biāo)識(shí)。按其消除色差程度不同，物鏡可分為以下幾種：=1\*GB3①半復(fù)消色差物鏡(FL)；=2\*GB3②平視場(chǎng)物鏡(Plan)；=3\*GB3③復(fù)消色差物鏡(APO)；=4\*GB3④消色差物鏡（ACH）21.什么叫顯微攝影？利用光學(xué)顯微攝影裝置或數(shù)碼顯微攝影裝置來(lái)拍攝顯微鏡或解剖鏡視野中所觀察到的物像的細(xì)微結(jié)構(gòu)真實(shí)的記錄下來(lái)的技術(shù)。23．顯微攝影為什么特別強(qiáng)調(diào)提高影像的反差？如何提高反差？因?yàn)檫m當(dāng)提高反差能提高照片質(zhì)量。提高措施：=1\*GB3①標(biāo)本新鮮、色彩鮮艷；=2\*GB3②光學(xué)顯微攝影需要較強(qiáng)的光線，但不宜過(guò)強(qiáng)；=3\*GB3③根據(jù)具體情況適當(dāng)升降聚光器以調(diào)整其位置；=4\*GB3④視場(chǎng)光闌應(yīng)比取景框稍大些，孔徑光闌要調(diào)節(jié)在物鏡數(shù)值孔徑的60%~80%之間；=5\*GB3⑤根據(jù)有色物體對(duì)光的吸收特性來(lái)選擇濾光片。24.顯微攝影時(shí)，為什么必須進(jìn)行曝光補(bǔ)償？怎樣補(bǔ)償？原因：樣品的明暗、視野中的分布狀態(tài)以及視野背景的亮度，都會(huì)給自動(dòng)曝光造成影響，形成不準(zhǔn)確的曝光。補(bǔ)償方法：根據(jù)標(biāo)本和背景情況，通過(guò)刻度盤(pán)的調(diào)節(jié)使曝光得以補(bǔ)償，達(dá)到準(zhǔn)確曝光。25.影響光學(xué)顯微攝影反差的因素有哪些？標(biāo)本、照明、聚光器位置、光闌、濾光片、相差、衍射等。28.顯微攝影時(shí)應(yīng)掌握哪些關(guān)鍵步驟？（1）按自動(dòng)曝光控制器的“WINDING”卷片鈕2-3次，觀察膠片的計(jì)數(shù)器是否轉(zhuǎn)動(dòng)；（2）選用所使用的感光度；（3）選用所使用膠片的倒易率失效的補(bǔ)償指數(shù)；（4）根據(jù)標(biāo)本的分布密度情況，把“EXPOSUREADJ”曝光補(bǔ)償刻度盤(pán)調(diào)整到適當(dāng)?shù)奈恢蒙?；?）對(duì)焦與調(diào)節(jié)孔徑光闌，將標(biāo)本對(duì)焦并調(diào)節(jié)聚光的孔徑光闌，以取得合適的反差；（6）對(duì)焦轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)焦目鏡上的去逛度調(diào)節(jié)環(huán)，使取景框中的雙十字線達(dá)到最清晰的程度。29.相差顯微鏡的原理是什么？利用光的干涉原理，將位相差轉(zhuǎn)換成振幅差的顯微裝置。把透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見(jiàn)。30.熒光顯微鏡的原理是什么？利用光化熒光的原理。是利用一定波長(zhǎng)的微發(fā)光對(duì)樣品進(jìn)行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定的波長(zhǎng)的熒光，從而用于對(duì)樣品結(jié)構(gòu)或組分進(jìn)行定性、定位、定量觀察檢測(cè)。32.顯微攝影時(shí)怎樣進(jìn)行光路合軸的調(diào)整？撥出目鏡，插入中心望遠(yuǎn)鏡，用左手固定其外筒，一邊眼看望遠(yuǎn)鏡，一邊用右手轉(zhuǎn)動(dòng)望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其升降，對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)后就能看到環(huán)狀光欄的亮環(huán)和相板的黑環(huán)。此時(shí)可將望遠(yuǎn)鏡固定，微微轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器兩側(cè)的調(diào)節(jié)鈕，使兩者完全重合。如果亮環(huán)和黑環(huán)大小不一致，可升降聚光器便之一致，如果升降聚光器仍不能矯正亮環(huán)和黑環(huán)一致的話，那就是載、蓋玻片過(guò)厚的緣故。換用不同物鏡要同時(shí)更換相對(duì)應(yīng)的環(huán)狀光欄，并重新合軸。合軸完成后，換回目鏡。33/26.顯微攝影時(shí)如何進(jìn)行孔徑光闌和視場(chǎng)光闌的調(diào)節(jié)？①視場(chǎng)光闌的調(diào)節(jié)使用：1.視場(chǎng)光闌位于鏡座之中，其作用：一是根據(jù)物鏡的倍率給予不同直徑的光束面積，二是在顯微攝影時(shí)起著增減影像反差的作用。2.當(dāng)光擴(kuò)大到一定程度，照射到標(biāo)本上的光即會(huì)有反射與不規(guī)則的散射，造成影像反差的損失。3.當(dāng)視場(chǎng)光闌收縮到取景框邊緣外的時(shí)候，攝影圖像的反差就會(huì)改進(jìn)。4.如果視場(chǎng)光闌收縮得過(guò)于接近取景框，圖像的四角將被切去。因此，視場(chǎng)光闌應(yīng)比取景框稍大些。②孔徑光闌的調(diào)節(jié)：安裝在聚光鏡中的光闌叫孔徑光闌。它的作用是使圖像的分辨率、反差和焦深處在最佳狀態(tài)。大多數(shù)的標(biāo)本，如想得到高質(zhì)量的照片，孔徑光闌要調(diào)節(jié)在物鏡數(shù)值孔徑的60%～80%之間。35/27.談?wù)勅〉煤玫娘@微攝影照片的關(guān)鍵因素是什么？想要拍攝一張好的顯微攝影圖片，最主要的還是取決于顯微鏡以及攝影設(shè)備的成像質(zhì)量，在這些硬件設(shè)備一定的條件下，要拍攝一張滿意的顯微攝影圖像，應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：（1）調(diào)整好顯微鏡（聚光器和光源燈的調(diào)中；視場(chǎng)光闌對(duì)中調(diào)節(jié)；正確使用光闌）。（2）調(diào)焦：應(yīng)使用高速預(yù)覽模式進(jìn)行調(diào)焦。（3）制作清晰的標(biāo)本片，其中組織切片應(yīng)厚薄適度，染色片不應(yīng)有多余的染料。（4）選擇性能優(yōu)良干凈的載玻片和蓋玻片。（5）使用高性能的物鏡（最好用復(fù)消色差的平場(chǎng)物鏡）和聚光器。（6）調(diào)節(jié)好孔徑光闌。（7）拍攝時(shí)應(yīng)準(zhǔn)確地聚焦和選擇合理的曝光時(shí)間。（8）適當(dāng)控制背景噪聲。（9）合理選擇設(shè)備參數(shù)。（10）正確的沖印方法。36．什么叫CCD?數(shù)碼圖片的常用格式有哪些？CCD(ChargeCoupledDevice)，即“電荷耦合器件”，是一種感光半導(dǎo)體芯片，用于捕捉圖形，廣泛運(yùn)用于掃描儀、復(fù)印機(jī)以及無(wú)膠片相機(jī)等設(shè)備。常用格式：TIFF、JPEG、BMP、TGA、RAW。37．與傳統(tǒng)顯微攝影相比，數(shù)碼攝影有哪些優(yōu)點(diǎn)？無(wú)需膠卷拍攝，不用沖洗和暗房設(shè)備，數(shù)碼攝影是采用CCD進(jìn)行“感光”，采用存儲(chǔ)器儲(chǔ)存圖像，通過(guò)打印機(jī)打印出照片。優(yōu)點(diǎn)：拍到的畫(huà)像及時(shí)可見(jiàn)；可立即刪除掉拍攝失敗的照片；畫(huà)像不會(huì)劣化；用電腦等存儲(chǔ)、加工簡(jiǎn)單。缺點(diǎn)：耗電；比銀鹽相機(jī)畫(huà)質(zhì)略差；價(jià)格相對(duì)較貴；會(huì)出現(xiàn)近似色。38．?dāng)?shù)碼照片的基本調(diào)節(jié)主要包括哪些？可以任意改變整體或局部的亮度調(diào)節(jié)、對(duì)比度調(diào)節(jié)、飽和度調(diào)節(jié)、色相調(diào)節(jié)；此外還可以將影像重新分割、重組、修改、更換背景、調(diào)整顏色；也可以隨意插入各種文稿。39．生物圖像電子素材的獲取途徑有哪些？電子素材有何基本要求？獲取途徑：=1\*GB3①數(shù)碼相機(jī)采集圖片；=2\*GB3②掃描儀采集圖片；=3\*GB3③軟件制作圖片；=4\*GB3④其他來(lái)源，可以通過(guò)視頻設(shè)備捕捉來(lái)自攝像機(jī)的圖像，也可從網(wǎng)站上下載圖片作為電子素材。對(duì)電子圖片素材的要求：作為圖版的電子圖像應(yīng)當(dāng)符合或滿足科技期刊對(duì)其格式、圖版尺寸和分辨率等方面的要求，方能用于圖版的制作。40.簡(jiǎn)述生物圖版的基本要求。（1）選擇代表性的有突出特征的圖片。（2）統(tǒng)一圖片的格式和分辨率，一般分辨率不低于300×300像素/平方英寸。（3）注明標(biāo)尺或放大倍數(shù)。（4）按照一定順序科學(xué)排列，并進(jìn)行編號(hào)。（5）將不同的圖像組合在一個(gè)圖版中時(shí)，可以采用緊貼、留縫或照片照片間加線條框的方法。（6）添加圖版標(biāo)注，如用箭頭或線條指出關(guān)鍵部位以及進(jìn)行文字注釋等。41.簡(jiǎn)述生物電子圖版的制作過(guò)程和方法。（1）圖版文檔的建立（確定文檔名稱、尺寸、分辨率、模式和背景）；（2）選擇圖片素材；（3）編輯圖片素材（統(tǒng)一圖像的分辨率、色調(diào)、對(duì)比度、亮度等，對(duì)圖片進(jìn)行適當(dāng)?shù)男揎棧?；?）協(xié)調(diào)整體布局、編排圖版（彩排圖版，裁剪圖片，編排圖版）。⒒染料有哪兩大類？各舉2-3例。①天然染料：地衣紅、洋紅、蘇木精②人工染料：鹼性染料，例：番紅、結(jié)晶紫、染細(xì)胞核；中性染料，例:固綠、曙紅⒓什么叫壓碎法？將材料放在載玻片上，蓋上蓋玻片，然后輕壓蓋玻片，使材料壓散成為適于顯微鏡觀察的薄層。⒔什么叫解離法？為了觀察某種組織單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，常用一些化學(xué)藥劑或酶將細(xì)胞之間的中層物質(zhì)溶解，使其彼此分離的方法。31.