肺泡灌洗共識課件

肺部感染性疾病支氣管肺泡灌洗病原體檢測中國專家共識（2017年）中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會.肺部感染性疾病支氣管肺泡灌洗病原體檢測中國專家共識（20171背景20世紀(jì)60年代后期，可彎曲支氣管鏡首次應(yīng)用于臨床[1]。1974年Reynolds和Newball報道用支氣管鏡進(jìn)行支氣管肺泡灌洗術(shù)（BronchoalveolarLavage,BAL）提供了新的檢查手段[2]。隨著臨床診治及檢測水平的提高，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)從支氣管肺泡灌洗液（BALF）中可以獲取細(xì)胞學(xué)、可溶性蛋白、酶類、細(xì)胞因子、生物活性介質(zhì)等多種信息，因此BAL成為診斷某些肺疾病如支氣管肺癌、間質(zhì)性肺疾病、肺部感染性疾病的重要手段[3-7]。為規(guī)范支氣管肺泡灌洗的操作技術(shù)，中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會根據(jù)我國具體情況于2002年制定了“支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)規(guī)范（草案）”[8]。美國胸科醫(yī)師學(xué)會2012年頒布了“支氣管肺泡灌洗液的細(xì)胞學(xué)分析在間質(zhì)性肺疾病中的臨床應(yīng)用”[9]。.背景20世紀(jì)60年代后期，可彎曲支氣管鏡首2背景近年來，BALF中半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）作為非培養(yǎng)性檢測手段診斷侵襲性肺曲霉病，因其良好的敏感度和特異度，成為美國感染病學(xué)會(IDSA)和歐洲癌癥研究和治療侵襲性真菌感染協(xié)作組及美國變態(tài)反應(yīng)和感染性疾病協(xié)會制定的真菌病研究組(EORTC/MSG)推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[10-11]。為了更充分利用BALF的檢測價值、增加BALF病原體的檢出率、提高肺部感染性疾病的診治成功率，需要進(jìn)一步規(guī)范支氣管肺泡灌洗的操作流程及標(biāo)本處理，以便更好地指導(dǎo)臨床。為此中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會感染學(xué)組組織專家撰寫了“肺部感染性疾病支氣管肺泡灌洗病原體檢測中國專家共識”。.背景近年來，BALF中半乳甘露聚糖（gala3內(nèi)容目錄BAL的定義適應(yīng)癥禁忌癥操作流程標(biāo)本送檢并發(fā)癥臨床意義常見問題說明BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測.內(nèi)容目錄BAL的定義.4BAL的定義

BAL：支氣管肺泡灌洗

是指通過支氣管鏡向支氣管肺泡內(nèi)注入生理鹽水并進(jìn)行抽吸，收集肺泡表面液體（診斷性）及清除充填于肺泡內(nèi)的物質(zhì)（治療性），進(jìn)行炎癥與免疫細(xì)胞及可溶性物質(zhì)的檢查，達(dá)到明確診斷和治療目的的技術(shù)，本共識適用于診斷性BAL。.BAL的定義

BAL：支氣管肺泡灌洗.5適應(yīng)癥

1.肺部感染，特別是免疫受損患者肺部機(jī)會性感染的病原體診斷。2.肺部不明原因陰影、疑似肺部感染或需與其他疾病鑒別。.適應(yīng)癥

1.肺部感染，特別是免疫受損患者肺部機(jī)會性感染的病原6禁忌癥

1.嚴(yán)重通氣和（或）換氣功能障礙，且未采用有效呼吸支持。建立人工氣道并非禁忌證，患者可經(jīng)臨床醫(yī)生全面評估并在密切監(jiān)護(hù)下進(jìn)行。2.新近發(fā)生的急性冠狀動脈綜合征、未控制的嚴(yán)重高血壓及惡性心律失常。3.主動脈瘤和食管靜脈曲張有破裂危險。.禁忌癥

1.嚴(yán)重通氣和（或）換氣功能障礙，且未采用有效呼吸支74.不能糾正的出血傾向,如嚴(yán)重的凝血功能障礙、大咯血或消化道大出血等。出血高風(fēng)險：血小板計(jì)數(shù)<20×109/L；出血較高風(fēng)險：血小板計(jì)數(shù)20-50×109/L、凝血酶原時間（PT）或活化部分凝血活酶時間（APTT）用法定計(jì)量單位并給出中文?。?gt;1.5倍正常值。對于操作前血小板低下的患者，可考慮通過輸注血小板后進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，減少出血風(fēng)險。5.多發(fā)性肺大皰有破裂危險。

6.嚴(yán)重消耗性疾病或狀態(tài)及各種原因?qū)е碌幕颊卟荒芰己门浜稀?4.不能糾正的出血傾向,如嚴(yán)重的凝血功能障礙、大咯血或消化道8操作流程

（一）術(shù)前準(zhǔn)備（二）灌洗操作

(三)注意事項(xiàng).操作流程

（一）術(shù)前準(zhǔn)備.9操作流程——術(shù)前準(zhǔn)備

支氣管肺泡灌洗操作前需要進(jìn)行常規(guī)的臨床狀態(tài)評估，排除出血等風(fēng)險，嚴(yán)格對照支氣管鏡檢查的適應(yīng)證及禁忌證；在支氣管鏡常規(guī)氣道檢查后且在活檢、刷檢前進(jìn)行支氣管肺泡灌洗。局部麻醉劑為2%利多卡因。有條件開展靜脈復(fù)合麻醉的醫(yī)院，應(yīng)盡量在靜脈復(fù)合麻醉下進(jìn)行，以獲得支氣管鏡嵌頓較好、增加BALF回吸收量的效果，但需嚴(yán)格篩選患者，術(shù)前應(yīng)評估有否靜脈麻醉的禁忌證，年老體弱及心、肺、肝、腎等重要臟器功能不全的患者應(yīng)慎用。術(shù)中應(yīng)常規(guī)進(jìn)行心電及脈搏血氧飽和度（SPO2）監(jiān)測。.操作流程——術(shù)前準(zhǔn)備

支氣管肺泡灌洗操作前10操作流程——灌洗操作1.部位選擇：病變局限者選擇病變段；彌漫性病變者選擇右肺中葉或左上葉舌段[12-13]。2.局部麻醉：在灌洗的肺段經(jīng)活檢孔注入2%利多卡因1~2ml，行灌洗肺段局部麻醉。靜脈復(fù)合麻醉的患者如仍有強(qiáng)烈的氣道反應(yīng)，同樣可注入2%利多卡因1~2ml。3.注入生理鹽水：支氣管鏡頂端嵌頓在目標(biāo)支氣管段或亞段開口后，經(jīng)操作孔道快速注入37℃或室溫滅菌生理鹽水，總量為60~120ml，分次注入（每次20-~50ml）。.操作流程——灌洗操作1.部位選擇：病變局限者選擇病變段；彌漫114.負(fù)壓吸引：注入生理鹽水后，立即用合適的負(fù)壓（一般推薦低于100mmHg）吸引獲取BALF，總回收率≥30%為宜。5.BALF收集：用于病原學(xué)分析的標(biāo)本需用無菌容器收集；細(xì)胞學(xué)分析需選擇塑料容器或硅化的玻璃容器以減少細(xì)胞的黏附。如考慮為大氣道疾病時，建議第1管回吸收液單獨(dú)處理；非大氣道疾病時，可將所有標(biāo)本混合后分送。.4.負(fù)壓吸引：注入生理鹽水后，立即用合適的負(fù)壓（一般推薦低于12操作流程——灌洗操作1.支氣管肺泡灌洗時支氣管鏡頂端要緊密嵌頓于段或亞段支氣管開口，防止大氣道分泌物混入或灌洗液外溢。2.灌洗液一般可從支氣管鏡操作孔道直接注入，也可先置入導(dǎo)管再從導(dǎo)管注入進(jìn)行遠(yuǎn)端肺泡灌洗，可減少灌洗液的反流，且灌洗量可適當(dāng)增多；也可置入前端帶氣囊的導(dǎo)管，灌洗時將氣囊充氣并緊密嵌頓于段或亞段支氣管開口，進(jìn)行保護(hù)性支氣管肺泡灌洗。.操作流程——灌洗操作1.支氣管肺泡灌洗時支氣管鏡頂端要緊密嵌133.灌洗過程中，麻醉要充分，咳嗽反射必須得到充分抑制，防止因劇烈咳嗽引起的支氣管黏膜損傷出血，影響B(tài)ALF的回吸收量和檢測結(jié)果。4.回吸收時注意負(fù)壓不宜過大，一般推薦低于100mmHg，也可根據(jù)情況進(jìn)行調(diào)整，以吸引時支氣管腔不塌陷為宜。.3.灌洗過程中，麻醉要充分，咳嗽反射必須得到充分抑制，防止因14標(biāo)本送檢用無菌容器收集BALF標(biāo)本，送檢量一般需要10~20ml（≥5ml），貼好標(biāo)本信息標(biāo)簽，應(yīng)在室溫2h內(nèi)送至微生物實(shí)驗(yàn)室。若延遲送檢，可將標(biāo)本放置于2～8℃保存，并在報告中說明并提示可能對培養(yǎng)結(jié)果造成的影響。標(biāo)本送檢及保存條件見表1[14]，如下。.標(biāo)本送檢用無菌容器收集BALF標(biāo)本，送檢量一15標(biāo)本送檢及保存條件檢測目的轉(zhuǎn)運(yùn)條件保存條件檢測方法細(xì)菌無菌容器，室溫，≤2h

4℃，≤24h

革蘭染色定量培養(yǎng)奴卡菌革蘭染色，弱抗酸染色，培養(yǎng)軍團(tuán)菌培養(yǎng)（BCYE營養(yǎng)培養(yǎng)基、GVPC及MWY篩選培養(yǎng)基）[15]，核酸檢測，抗原檢測（DFA）[15]真菌無菌容器，室溫，≤2h

4℃，≤24h

KOH壓片、熒光白染色，真菌培養(yǎng)曲霉KOH壓片或熒光白染色，真菌培養(yǎng)，半乳甘露聚糖抗原試驗(yàn)（GM）[16-18]肺孢子菌六胺銀染色，核酸檢測[19]，抗原檢測[20-21]隱球菌墨汁染色，真菌培養(yǎng)，隱球菌莢膜多糖抗原[22]分枝桿菌無菌容器，室溫，≤2h4℃，≤24h涂片抗酸染色(萋-尼染色、熒光染色)，分枝桿菌培養(yǎng)[23]核酸檢測（XpertMTB/RIF）[24]病毒病毒轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，室溫，≤2h4℃，≤5d；-70℃，?5d核酸檢測[25-26]，病毒抗原檢測（DFA、膠體金法）[25，27]分離培養(yǎng)寄生蟲無菌容器，室溫，≤2h4℃，≤24h直接鏡檢，核酸檢測[25]，抗原檢測（ELISA、ICT）[28].標(biāo)本送檢及保存條件檢測目的轉(zhuǎn)運(yùn)條件保存條件檢測方法細(xì)菌無菌容16并發(fā)癥支氣管肺泡灌洗是一種相對安全的檢查方法,在支氣管鏡操作技術(shù)熟練及準(zhǔn)確評估患者適應(yīng)證及禁忌證的情況下，較少發(fā)生嚴(yán)重的并發(fā)癥，常見的術(shù)中和術(shù)后并發(fā)癥主要有[29-31]：（1）支氣管痙攣或哮喘發(fā)作；（2）氣道黏膜損傷及出血；（3）心律失常，但發(fā)生率較低，且與患者基礎(chǔ)心臟疾病有關(guān)；.并發(fā)癥支氣管肺泡灌洗是一種相對安全的檢查方法,在支氣管鏡操作17（4）灌洗后數(shù)小時出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱，多為吸收熱，需注意排除感染擴(kuò)散的可能；（5）灌洗肺野術(shù)后影像學(xué)檢查可見短暫性磨玻璃影,偶可發(fā)生肺不張；（6）術(shù)中PaO2一過性降低，部分延續(xù)至術(shù)后，肺功能（肺活量、一秒用力呼氣容積、呼氣峰值流速）可有短暫性降低；(7)氣胸少見，一般僅見于同時行經(jīng)支氣管鏡肺活檢時。.（4）灌洗后數(shù)小時出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱，多為吸收熱，需注意排除感染18臨床意義1.微生物學(xué)涂片檢查：BALF中的沉淀物進(jìn)行革蘭染色、抗酸染色及真菌的特殊染色，對細(xì)菌、分枝桿菌、真菌及寄生蟲的檢出有較大意義。2.微生物學(xué)培養(yǎng)：在嚴(yán)格無菌操作下采集的BALF進(jìn)行直接接種培養(yǎng)或取其沉淀物進(jìn)行培養(yǎng)，對檢測細(xì)菌及真菌具有較大的臨床意義，BALF細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)≥104CFU/ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時具有臨床診斷意義。3.灌洗液中GM測定：取5~10ml灌洗液置于無菌容器中，4h內(nèi)送檢；對于早期快速診斷侵襲性肺曲霉病，特別是氣道曲霉感染的患者具有重要的臨床價值。.臨床意義1.微生物學(xué)涂片檢查：BALF中的沉淀物進(jìn)行革蘭染色194.特殊病原體，對于某些病原體如病毒、肺孢子菌及寄生蟲等可通過BALF中的抗原或核酸測定進(jìn)行診斷。5.細(xì)胞學(xué)分類：本共識主要用于規(guī)范利用BALF標(biāo)本進(jìn)行下呼吸道病原學(xué)檢測，在回吸收的肺泡灌洗量足夠的情況下，也可進(jìn)一步行細(xì)胞學(xué)分析。灌洗液中以中性粒細(xì)胞比例增高為主時，見于各種細(xì)菌或真菌等感染；以淋巴細(xì)胞比例增高為主時，見于病毒性肺炎、結(jié)節(jié)病或過敏性肺炎，還可根據(jù)BALF中淋巴細(xì)胞的亞群，區(qū)分不同間質(zhì)性肺疾病；以嗜酸粒細(xì)胞比例增高為主時，見于嗜酸粒細(xì)胞浸潤癥、支氣管哮喘或變應(yīng)性支氣管肺曲霉病等。.4.特殊病原體，對于某些病原體如病毒、肺孢子菌及寄生蟲等可通20常見問題說明1.灌洗部位的選擇：可參考近期的胸部CT，遵循“灌洗病變?nèi)~段”的原則，特別是出現(xiàn)新的或進(jìn)展性的浸潤性病變的葉段[9,32]；影像學(xué)提示雙肺彌漫性病變時，推薦選擇右肺中葉或左肺舌段，這2個部位的灌洗操作便利且回吸收量較多（與下葉比較可增加約20%）[33]。對于肺外周病變，有條件的單位可考慮采用徑向超聲支氣管鏡技術(shù)進(jìn)行更準(zhǔn)確的定位。.常見問題說明1.灌洗部位的選擇：可參考近期的胸部CT，遵循“212.灌洗液量的選擇：灌洗量的多少可影響標(biāo)本檢測的結(jié)果，包括細(xì)胞比例、蛋白含量及GM水平等。具體灌洗多少生理鹽水是合適的，不同文獻(xiàn)甚至指南的推薦均有差異[8-9,32,34-36]。Rennard等[37]發(fā)現(xiàn)，灌入20ml液體后獲得的回吸收標(biāo)本內(nèi)含有更多的上皮細(xì)胞和鐵蛋白，表明該標(biāo)本更可能是支氣管灌洗液。研究結(jié)果表明，在灌入60ml或120ml液體時所回吸收標(biāo)本的檢測結(jié)果差異明顯，至少灌入120ml生理鹽水時所回吸收的標(biāo)本結(jié)果才相對穩(wěn)定[38-39]。上述文獻(xiàn)主要集中于健康成人及間質(zhì)性肺疾病患者的觀察，對于肺部感染性疾病患者，基于查找病原體的目的，又要防止在灌洗過程中感染的擴(kuò)散，本共識認(rèn)為采用60~120ml的灌洗劑量，且分次灌洗，是比較好的方法。常見問題說明.2.灌洗液量的選擇：灌洗量的多少可影響標(biāo)本檢測的結(jié)果，包括細(xì)22常見問題說明3.吸引負(fù)壓的選擇：過大的負(fù)壓會引起支氣管壁塌陷或黏膜損傷，從而影響灌洗液的回收量和質(zhì)量。但負(fù)壓過小時，回吸收量亦會受到影響。美國胸科協(xié)會發(fā)布的指南中推薦采用100mmHg的負(fù)壓[9]。在臨床實(shí)際工作中，可以參考但不局限于這一數(shù)值，選擇合適的負(fù)壓（如-100～-150mmHg），盡可能多的收集標(biāo)本。.常見問題說明3.吸引負(fù)壓的選擇：過大的負(fù)壓會引起支氣管壁塌陷23常見問題說明4.BALF的預(yù)處理：對獲取的BALF，特別是含有黏液成分時，是否需要無菌紗布過濾？本共識認(rèn)為不需要常規(guī)過濾，因?yàn)樵谶^濾過程中，細(xì)胞會黏附于紗布，會損失部分細(xì)胞及其他成分，如肺孢子菌（Pneumocystisjirovecii）更多的存在于黏液成分[40]。過濾過程會使標(biāo)本的穩(wěn)定性受到影響，且存在污染的可能性。.常見問題說明4.BALF的預(yù)處理：對獲取的BALF，特別是含24常見問題說明

5.第1管回吸收液的處理[9，12，37，40]：研究結(jié)果顯示，第1管回吸收液與后續(xù)回吸收的標(biāo)本中細(xì)胞成分有較大差異，有學(xué)者建議第1管回吸收的灌洗液需單獨(dú)處理或舍棄。美國胸科協(xié)會推薦混合所有的灌洗液包括第1管的灌洗液進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞學(xué)分析。本共識認(rèn)為，如果考慮氣道的疾病，第1管的回吸收標(biāo)本需單獨(dú)處理。而對于大多數(shù)疾病，可考慮混合所有的標(biāo)本進(jìn)行檢測。.常見問題說明5.第1管回吸收液的處理[9，12，37，4025常見問題說明6.BALF的儲存與轉(zhuǎn)運(yùn)[41-42]：BALF的儲存對于GM的檢測結(jié)果非常重要。獲取BALF標(biāo)本后，應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室完成檢測。BALF的GM水平在4℃條件下24h內(nèi)保持穩(wěn)定。血清和BALF的GM水平在零下20℃條件下可以存放11個月保持相對穩(wěn)定。如果標(biāo)本在采集后立即送到實(shí)驗(yàn)室檢測，可在室溫下轉(zhuǎn)送，要求送檢時間?4h。如果送檢時間超過4h，應(yīng)在4℃下保存，可以儲存24h；超過24h的標(biāo)本，不適合再送檢。.常見問題說明6.BALF的儲存與轉(zhuǎn)運(yùn)[41-42]：BALF26常見問題說明7.BALF-GM的解讀：作為非培養(yǎng)檢測手段診斷侵襲性肺曲霉病，BALF-GM已被列入IDSA和EORTC/MSG推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。但在臨床診治工作中，不能僅憑BALF-GM的結(jié)果進(jìn)行抗真菌治療，需要結(jié)合臨床資料及影像學(xué)表現(xiàn)等進(jìn)行綜合分析，來判斷BALF-GM陽性結(jié)果的意義。.常見問題說明7.BALF-GM的解讀：作為非培養(yǎng)檢測手段診斷27BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——顯微鏡檢查

1.革蘭染色及BALF質(zhì)量評價：建議使用細(xì)胞離心機(jī)制片，取適量BALF標(biāo)本600～1000r/min離心10～20min,進(jìn)行革蘭染色。低倍鏡下若鱗狀上皮細(xì)胞占全部細(xì)胞（不包括紅細(xì)胞）比例>1%，提示標(biāo)本被上呼吸道分泌物污染；柱狀上皮細(xì)胞>5%時,提示BALF并非來自于遠(yuǎn)端氣腔。BALF標(biāo)本質(zhì)量不合格也可以檢驗(yàn)，但應(yīng)在報告單中注明。觀察革蘭染色結(jié)果及白細(xì)胞情況，如果見到噬菌現(xiàn)象，須報告吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞占或全部中性粒細(xì)胞的比例，通常數(shù)值為5%時可作為肺炎診斷的閾值。.BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——顯微鏡檢查

1.革蘭染色及B282.抗酸染色：用于檢測分枝桿菌，弱抗酸染色可用于檢測奴卡菌。3.氫氧化鉀(KOH)壓片：用于真菌，特別是絲狀真菌的形態(tài)學(xué)觀察。4.六胺銀染色：常用于肺孢子菌的檢測。5.墨汁染色：用于隱球菌的檢測。6.免疫熒光顯微鏡：可用于軍團(tuán)菌、肺孢子菌及病毒的檢測。.2.抗酸染色：用于檢測分枝桿菌，弱抗酸染色可用于檢測奴卡菌。29BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——培養(yǎng)

1.一般細(xì)菌培養(yǎng)（定量培養(yǎng)）：（1）渦旋震蕩BALF標(biāo)本30～60s。（2）定量接種：用經(jīng)校準(zhǔn)的加樣器（或定量接種環(huán)）取10μl的BALF標(biāo)本，分別點(diǎn)種于血平板和巧克力平板上且密集劃線，有條件時最好采用滅菌L型玻棒涂布平板。還可取100μlBALF接種于麥康凱或中國藍(lán)培養(yǎng)基。（3）孵育：將接種的平板放在二氧化碳培養(yǎng)箱（5%～10%CO2）中，35℃培養(yǎng)48h。（4）結(jié)果判定：分別對不同形態(tài)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘上稀釋倍數(shù)即為此細(xì)菌的菌落數(shù)。菌落計(jì)數(shù)BALF≥104CFU/ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時認(rèn)為是可能的病原菌，但不能機(jī)械使用該閾值，還要結(jié)合患者的實(shí)際情況及有無使用抗菌藥物等因素綜合判斷。.BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——培養(yǎng)

1.一般細(xì)菌培養(yǎng)（定量302.真菌培養(yǎng)：BALF標(biāo)本1500～1800×g，離心15～20min，沉淀物混勻后接種于沙保平板上，30℃和35℃孵育7d，懷疑雙相真菌時應(yīng)使用帶螺帽的培養(yǎng)基，孵育6周。3.特殊病原菌培養(yǎng)：BALF離心后的沉淀物還可用于分枝桿菌、軍團(tuán)菌及病毒等的培養(yǎng)。.2.真菌培養(yǎng)：BALF標(biāo)本1500～1800×g，離心131BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——核算檢測，真菌抗原

（三）核酸檢測：用于病毒、軍團(tuán)菌、肺孢子菌或分枝桿菌等的檢測。（四）真菌抗原：半乳甘露聚糖試驗(yàn)（GM試驗(yàn)）主要用于曲霉的檢測；目前有關(guān)BALF檢測隱球菌莢膜抗原的研究證據(jù)較少，可考慮作為診斷的補(bǔ)充手段。.BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——核算檢測，真菌抗原

（三）核32BALF病原體檢測流程圖支氣管肺泡灌洗液BALF接種10ul適量BALF標(biāo)本600~1000r/min離心10~20min剩余的BALF標(biāo)本（1500~1800）*g離心15~20min定量培養(yǎng)革蘭染色，標(biāo)本質(zhì)量評估沉淀物混勻后上清液顯微鏡檢查：不染色鏡檢；革蘭染色；抗酸染色；弱抗酸染色；六胺銀染色；墨汁染色；氫氧化鉀壓片；免疫熒光染色特殊病原菌培養(yǎng)：分枝桿菌，真菌，軍團(tuán)菌，病毒等核酸檢測：病毒，軍團(tuán)菌，肺孢子菌，分枝桿菌等，真菌抗原：半乳甘露聚糖，隱球菌莢膜多糖抗原渦旋震蕩30～60s.BALF病原體檢測流程圖支氣管肺泡灌洗液BALF接種10u33此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！34肺部感染性疾病支氣管肺泡灌洗病原體檢測中國專家共識（2017年）中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會.肺部感染性疾病支氣管肺泡灌洗病原體檢測中國專家共識（201735背景20世紀(jì)60年代后期，可彎曲支氣管鏡首次應(yīng)用于臨床[1]。1974年Reynolds和Newball報道用支氣管鏡進(jìn)行支氣管肺泡灌洗術(shù)（BronchoalveolarLavage,BAL）提供了新的檢查手段[2]。隨著臨床診治及檢測水平的提高，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)從支氣管肺泡灌洗液（BALF）中可以獲取細(xì)胞學(xué)、可溶性蛋白、酶類、細(xì)胞因子、生物活性介質(zhì)等多種信息，因此BAL成為診斷某些肺疾病如支氣管肺癌、間質(zhì)性肺疾病、肺部感染性疾病的重要手段[3-7]。為規(guī)范支氣管肺泡灌洗的操作技術(shù)，中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會根據(jù)我國具體情況于2002年制定了“支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)規(guī)范（草案）”[8]。美國胸科醫(yī)師學(xué)會2012年頒布了“支氣管肺泡灌洗液的細(xì)胞學(xué)分析在間質(zhì)性肺疾病中的臨床應(yīng)用”[9]。.背景20世紀(jì)60年代后期，可彎曲支氣管鏡首36背景近年來，BALF中半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）作為非培養(yǎng)性檢測手段診斷侵襲性肺曲霉病，因其良好的敏感度和特異度，成為美國感染病學(xué)會(IDSA)和歐洲癌癥研究和治療侵襲性真菌感染協(xié)作組及美國變態(tài)反應(yīng)和感染性疾病協(xié)會制定的真菌病研究組(EORTC/MSG)推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[10-11]。為了更充分利用BALF的檢測價值、增加BALF病原體的檢出率、提高肺部感染性疾病的診治成功率，需要進(jìn)一步規(guī)范支氣管肺泡灌洗的操作流程及標(biāo)本處理，以便更好地指導(dǎo)臨床。為此中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會感染學(xué)組組織專家撰寫了“肺部感染性疾病支氣管肺泡灌洗病原體檢測中國專家共識”。.背景近年來，BALF中半乳甘露聚糖（gala37內(nèi)容目錄BAL的定義適應(yīng)癥禁忌癥操作流程標(biāo)本送檢并發(fā)癥臨床意義常見問題說明BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測.內(nèi)容目錄BAL的定義.38BAL的定義

BAL：支氣管肺泡灌洗

是指通過支氣管鏡向支氣管肺泡內(nèi)注入生理鹽水并進(jìn)行抽吸，收集肺泡表面液體（診斷性）及清除充填于肺泡內(nèi)的物質(zhì)（治療性），進(jìn)行炎癥與免疫細(xì)胞及可溶性物質(zhì)的檢查，達(dá)到明確診斷和治療目的的技術(shù)，本共識適用于診斷性BAL。.BAL的定義

BAL：支氣管肺泡灌洗.39適應(yīng)癥

1.肺部感染，特別是免疫受損患者肺部機(jī)會性感染的病原體診斷。2.肺部不明原因陰影、疑似肺部感染或需與其他疾病鑒別。.適應(yīng)癥

1.肺部感染，特別是免疫受損患者肺部機(jī)會性感染的病原40禁忌癥

1.嚴(yán)重通氣和（或）換氣功能障礙，且未采用有效呼吸支持。建立人工氣道并非禁忌證，患者可經(jīng)臨床醫(yī)生全面評估并在密切監(jiān)護(hù)下進(jìn)行。2.新近發(fā)生的急性冠狀動脈綜合征、未控制的嚴(yán)重高血壓及惡性心律失常。3.主動脈瘤和食管靜脈曲張有破裂危險。.禁忌癥

1.嚴(yán)重通氣和（或）換氣功能障礙，且未采用有效呼吸支414.不能糾正的出血傾向,如嚴(yán)重的凝血功能障礙、大咯血或消化道大出血等。出血高風(fēng)險：血小板計(jì)數(shù)<20×109/L；出血較高風(fēng)險：血小板計(jì)數(shù)20-50×109/L、凝血酶原時間（PT）或活化部分凝血活酶時間（APTT）用法定計(jì)量單位并給出中文?。?gt;1.5倍正常值。對于操作前血小板低下的患者，可考慮通過輸注血小板后進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，減少出血風(fēng)險。5.多發(fā)性肺大皰有破裂危險。

6.嚴(yán)重消耗性疾病或狀態(tài)及各種原因?qū)е碌幕颊卟荒芰己门浜稀?4.不能糾正的出血傾向,如嚴(yán)重的凝血功能障礙、大咯血或消化道42操作流程

（一）術(shù)前準(zhǔn)備（二）灌洗操作

(三)注意事項(xiàng).操作流程

（一）術(shù)前準(zhǔn)備.43操作流程——術(shù)前準(zhǔn)備

支氣管肺泡灌洗操作前需要進(jìn)行常規(guī)的臨床狀態(tài)評估，排除出血等風(fēng)險，嚴(yán)格對照支氣管鏡檢查的適應(yīng)證及禁忌證；在支氣管鏡常規(guī)氣道檢查后且在活檢、刷檢前進(jìn)行支氣管肺泡灌洗。局部麻醉劑為2%利多卡因。有條件開展靜脈復(fù)合麻醉的醫(yī)院，應(yīng)盡量在靜脈復(fù)合麻醉下進(jìn)行，以獲得支氣管鏡嵌頓較好、增加BALF回吸收量的效果，但需嚴(yán)格篩選患者，術(shù)前應(yīng)評估有否靜脈麻醉的禁忌證，年老體弱及心、肺、肝、腎等重要臟器功能不全的患者應(yīng)慎用。術(shù)中應(yīng)常規(guī)進(jìn)行心電及脈搏血氧飽和度（SPO2）監(jiān)測。.操作流程——術(shù)前準(zhǔn)備

支氣管肺泡灌洗操作前44操作流程——灌洗操作1.部位選擇：病變局限者選擇病變段；彌漫性病變者選擇右肺中葉或左上葉舌段[12-13]。2.局部麻醉：在灌洗的肺段經(jīng)活檢孔注入2%利多卡因1~2ml，行灌洗肺段局部麻醉。靜脈復(fù)合麻醉的患者如仍有強(qiáng)烈的氣道反應(yīng)，同樣可注入2%利多卡因1~2ml。3.注入生理鹽水：支氣管鏡頂端嵌頓在目標(biāo)支氣管段或亞段開口后，經(jīng)操作孔道快速注入37℃或室溫滅菌生理鹽水，總量為60~120ml，分次注入（每次20-~50ml）。.操作流程——灌洗操作1.部位選擇：病變局限者選擇病變段；彌漫454.負(fù)壓吸引：注入生理鹽水后，立即用合適的負(fù)壓（一般推薦低于100mmHg）吸引獲取BALF，總回收率≥30%為宜。5.BALF收集：用于病原學(xué)分析的標(biāo)本需用無菌容器收集；細(xì)胞學(xué)分析需選擇塑料容器或硅化的玻璃容器以減少細(xì)胞的黏附。如考慮為大氣道疾病時，建議第1管回吸收液單獨(dú)處理；非大氣道疾病時，可將所有標(biāo)本混合后分送。.4.負(fù)壓吸引：注入生理鹽水后，立即用合適的負(fù)壓（一般推薦低于46操作流程——灌洗操作1.支氣管肺泡灌洗時支氣管鏡頂端要緊密嵌頓于段或亞段支氣管開口，防止大氣道分泌物混入或灌洗液外溢。2.灌洗液一般可從支氣管鏡操作孔道直接注入，也可先置入導(dǎo)管再從導(dǎo)管注入進(jìn)行遠(yuǎn)端肺泡灌洗，可減少灌洗液的反流，且灌洗量可適當(dāng)增多；也可置入前端帶氣囊的導(dǎo)管，灌洗時將氣囊充氣并緊密嵌頓于段或亞段支氣管開口，進(jìn)行保護(hù)性支氣管肺泡灌洗。.操作流程——灌洗操作1.支氣管肺泡灌洗時支氣管鏡頂端要緊密嵌473.灌洗過程中，麻醉要充分，咳嗽反射必須得到充分抑制，防止因劇烈咳嗽引起的支氣管黏膜損傷出血，影響B(tài)ALF的回吸收量和檢測結(jié)果。4.回吸收時注意負(fù)壓不宜過大，一般推薦低于100mmHg，也可根據(jù)情況進(jìn)行調(diào)整，以吸引時支氣管腔不塌陷為宜。.3.灌洗過程中，麻醉要充分，咳嗽反射必須得到充分抑制，防止因48標(biāo)本送檢用無菌容器收集BALF標(biāo)本，送檢量一般需要10~20ml（≥5ml），貼好標(biāo)本信息標(biāo)簽，應(yīng)在室溫2h內(nèi)送至微生物實(shí)驗(yàn)室。若延遲送檢，可將標(biāo)本放置于2～8℃保存，并在報告中說明并提示可能對培養(yǎng)結(jié)果造成的影響。標(biāo)本送檢及保存條件見表1[14]，如下。.標(biāo)本送檢用無菌容器收集BALF標(biāo)本，送檢量一49標(biāo)本送檢及保存條件檢測目的轉(zhuǎn)運(yùn)條件保存條件檢測方法細(xì)菌無菌容器，室溫，≤2h

4℃，≤24h

革蘭染色定量培養(yǎng)奴卡菌革蘭染色，弱抗酸染色，培養(yǎng)軍團(tuán)菌培養(yǎng)（BCYE營養(yǎng)培養(yǎng)基、GVPC及MWY篩選培養(yǎng)基）[15]，核酸檢測，抗原檢測（DFA）[15]真菌無菌容器，室溫，≤2h

4℃，≤24h

KOH壓片、熒光白染色，真菌培養(yǎng)曲霉KOH壓片或熒光白染色，真菌培養(yǎng)，半乳甘露聚糖抗原試驗(yàn)（GM）[16-18]肺孢子菌六胺銀染色，核酸檢測[19]，抗原檢測[20-21]隱球菌墨汁染色，真菌培養(yǎng)，隱球菌莢膜多糖抗原[22]分枝桿菌無菌容器，室溫，≤2h4℃，≤24h涂片抗酸染色(萋-尼染色、熒光染色)，分枝桿菌培養(yǎng)[23]核酸檢測（XpertMTB/RIF）[24]病毒病毒轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，室溫，≤2h4℃，≤5d；-70℃，?5d核酸檢測[25-26]，病毒抗原檢測（DFA、膠體金法）[25，27]分離培養(yǎng)寄生蟲無菌容器，室溫，≤2h4℃，≤24h直接鏡檢，核酸檢測[25]，抗原檢測（ELISA、ICT）[28].標(biāo)本送檢及保存條件檢測目的轉(zhuǎn)運(yùn)條件保存條件檢測方法細(xì)菌無菌容50并發(fā)癥支氣管肺泡灌洗是一種相對安全的檢查方法,在支氣管鏡操作技術(shù)熟練及準(zhǔn)確評估患者適應(yīng)證及禁忌證的情況下，較少發(fā)生嚴(yán)重的并發(fā)癥，常見的術(shù)中和術(shù)后并發(fā)癥主要有[29-31]：（1）支氣管痙攣或哮喘發(fā)作；（2）氣道黏膜損傷及出血；（3）心律失常，但發(fā)生率較低，且與患者基礎(chǔ)心臟疾病有關(guān)；.并發(fā)癥支氣管肺泡灌洗是一種相對安全的檢查方法,在支氣管鏡操作51（4）灌洗后數(shù)小時出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱，多為吸收熱，需注意排除感染擴(kuò)散的可能；（5）灌洗肺野術(shù)后影像學(xué)檢查可見短暫性磨玻璃影,偶可發(fā)生肺不張；（6）術(shù)中PaO2一過性降低，部分延續(xù)至術(shù)后，肺功能（肺活量、一秒用力呼氣容積、呼氣峰值流速）可有短暫性降低；(7)氣胸少見，一般僅見于同時行經(jīng)支氣管鏡肺活檢時。.（4）灌洗后數(shù)小時出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱，多為吸收熱，需注意排除感染52臨床意義1.微生物學(xué)涂片檢查：BALF中的沉淀物進(jìn)行革蘭染色、抗酸染色及真菌的特殊染色，對細(xì)菌、分枝桿菌、真菌及寄生蟲的檢出有較大意義。2.微生物學(xué)培養(yǎng)：在嚴(yán)格無菌操作下采集的BALF進(jìn)行直接接種培養(yǎng)或取其沉淀物進(jìn)行培養(yǎng)，對檢測細(xì)菌及真菌具有較大的臨床意義，BALF細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)≥104CFU/ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時具有臨床診斷意義。3.灌洗液中GM測定：取5~10ml灌洗液置于無菌容器中，4h內(nèi)送檢；對于早期快速診斷侵襲性肺曲霉病，特別是氣道曲霉感染的患者具有重要的臨床價值。.臨床意義1.微生物學(xué)涂片檢查：BALF中的沉淀物進(jìn)行革蘭染色534.特殊病原體，對于某些病原體如病毒、肺孢子菌及寄生蟲等可通過BALF中的抗原或核酸測定進(jìn)行診斷。5.細(xì)胞學(xué)分類：本共識主要用于規(guī)范利用BALF標(biāo)本進(jìn)行下呼吸道病原學(xué)檢測，在回吸收的肺泡灌洗量足夠的情況下，也可進(jìn)一步行細(xì)胞學(xué)分析。灌洗液中以中性粒細(xì)胞比例增高為主時，見于各種細(xì)菌或真菌等感染；以淋巴細(xì)胞比例增高為主時，見于病毒性肺炎、結(jié)節(jié)病或過敏性肺炎，還可根據(jù)BALF中淋巴細(xì)胞的亞群，區(qū)分不同間質(zhì)性肺疾?。灰允人崃＜?xì)胞比例增高為主時，見于嗜酸粒細(xì)胞浸潤癥、支氣管哮喘或變應(yīng)性支氣管肺曲霉病等。.4.特殊病原體，對于某些病原體如病毒、肺孢子菌及寄生蟲等可通54常見問題說明1.灌洗部位的選擇：可參考近期的胸部CT，遵循“灌洗病變?nèi)~段”的原則，特別是出現(xiàn)新的或進(jìn)展性的浸潤性病變的葉段[9,32]；影像學(xué)提示雙肺彌漫性病變時，推薦選擇右肺中葉或左肺舌段，這2個部位的灌洗操作便利且回吸收量較多（與下葉比較可增加約20%）[33]。對于肺外周病變，有條件的單位可考慮采用徑向超聲支氣管鏡技術(shù)進(jìn)行更準(zhǔn)確的定位。.常見問題說明1.灌洗部位的選擇：可參考近期的胸部CT，遵循“552.灌洗液量的選擇：灌洗量的多少可影響標(biāo)本檢測的結(jié)果，包括細(xì)胞比例、蛋白含量及GM水平等。具體灌洗多少生理鹽水是合適的，不同文獻(xiàn)甚至指南的推薦均有差異[8-9,32,34-36]。Rennard等[37]發(fā)現(xiàn)，灌入20ml液體后獲得的回吸收標(biāo)本內(nèi)含有更多的上皮細(xì)胞和鐵蛋白，表明該標(biāo)本更可能是支氣管灌洗液。研究結(jié)果表明，在灌入60ml或120ml液體時所回吸收標(biāo)本的檢測結(jié)果差異明顯，至少灌入120ml生理鹽水時所回吸收的標(biāo)本結(jié)果才相對穩(wěn)定[38-39]。上述文獻(xiàn)主要集中于健康成人及間質(zhì)性肺疾病患者的觀察，對于肺部感染性疾病患者，基于查找病原體的目的，又要防止在灌洗過程中感染的擴(kuò)散，本共識認(rèn)為采用60~120ml的灌洗劑量，且分次灌洗，是比較好的方法。常見問題說明.2.灌洗液量的選擇：灌洗量的多少可影響標(biāo)本檢測的結(jié)果，包括細(xì)56常見問題說明3.吸引負(fù)壓的選擇：過大的負(fù)壓會引起支氣管壁塌陷或黏膜損傷，從而影響灌洗液的回收量和質(zhì)量。但負(fù)壓過小時，回吸收量亦會受到影響。美國胸科協(xié)會發(fā)布的指南中推薦采用100mmHg的負(fù)壓[9]。在臨床實(shí)際工作中，可以參考但不局限于這一數(shù)值，選擇合適的負(fù)壓（如-100～-150mmHg），盡可能多的收集標(biāo)本。.常見問題說明3.吸引負(fù)壓的選擇：過大的負(fù)壓會引起支氣管壁塌陷57常見問題說明4.BALF的預(yù)處理：對獲取的BALF，特別是含有黏液成分時，是否需要無菌紗布過濾？本共識認(rèn)為不需要常規(guī)過濾，因?yàn)樵谶^濾過程中，細(xì)胞會黏附于紗布，會損失部分細(xì)胞及其他成分，如肺孢子菌（Pneumocystisjirovecii）更多的存在于黏液成分[40]。過濾過程會使標(biāo)本的穩(wěn)定性受到影響，且存在污染的可能性。.常見問題說明4.BALF的預(yù)處理：對獲取的BALF，特別是含58常見問題說明

5.第1管回吸收液的處理[9，12，37，40]：研究結(jié)果顯示，第1管回吸收液與后續(xù)回吸收的標(biāo)本中細(xì)胞成分有較大差異，有學(xué)者建議第1管回吸收的灌洗液需單獨(dú)處理或舍棄。美國胸科協(xié)會推薦混合所有的灌洗液包括第1管的灌洗液進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞學(xué)分析。本共識認(rèn)為，如果考慮氣道的疾病，第1管的回吸收標(biāo)本需單獨(dú)處理。而對于大多數(shù)疾病，可考慮混合所有的標(biāo)本進(jìn)行檢測。.常見問題說明5.第1管回吸收液的處理[9，12，37，4059常見問題說明6.BALF的儲存與轉(zhuǎn)運(yùn)[41-42]：BALF的儲存對于GM的檢測結(jié)果非常重要。獲取BALF標(biāo)本后，應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室完成檢測。BALF的GM水平在4℃條件下24h內(nèi)保持穩(wěn)定。血清和BALF的GM水平在零下20℃條件下可以存放11個月保持相對穩(wěn)定。如果標(biāo)本在采集后立即送到實(shí)驗(yàn)室檢測，可在室溫下轉(zhuǎn)送，要求送檢時間?4h。如果送檢時間超過4h，應(yīng)在4℃下保存，可以儲存24h；超過24h的標(biāo)本，不適合再送檢。.常見問題說明6.BALF的儲存與轉(zhuǎn)運(yùn)[41-42]：BALF60常見問題說明7.BALF-GM的解讀：作為非培養(yǎng)檢測手段診斷侵襲性肺曲霉病，BALF-GM已被列入IDSA和EORTC/MSG推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。但在臨床診治工作中，不能僅憑BALF-GM的結(jié)果進(jìn)行抗真菌治療，需要結(jié)合臨床資料及影像學(xué)表現(xiàn)等進(jìn)行綜合分析，來判斷BALF-GM陽性結(jié)果的意義。.常見問題說明7.BALF-GM的解讀：作為非培養(yǎng)檢測手段診斷61BALF標(biāo)本病原體實(shí)驗(yàn)室檢測——顯微鏡檢查

1.革蘭