微生物實驗五微生物數(shù)量的測定

關(guān)于微生物實驗五微生物數(shù)量的測定第一頁，共十五頁，2022年，8月28日實驗五微生物數(shù)量的測定一、實驗?zāi)康?、明確血球計數(shù)板計數(shù)的原理2、掌握測定酵母細胞總數(shù)、出芽率和死亡率的技術(shù)第二頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實驗原理

鏡檢計數(shù)法適用于各種含單細胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球計數(shù)板；一般細菌則采用彼得羅夫·霍澤(PetroffHausser)細菌計數(shù)板。兩種計數(shù)板的原理和部件相同，只是細菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，故細菌不易看清。第三頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實驗原理

血球計數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個方格網(wǎng)。每個方格網(wǎng)共分9大格，其中間的一大格(又稱為計數(shù)室)常被用作微生物的計數(shù)。計數(shù)室的刻度有兩種：一種是大方格分為16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格；另一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)室是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即每個大方格都由400個小方格組成。第四頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實驗原理

每一個大方格邊長為1mm，每一個大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計數(shù)室的容積為0.1mm3（10-4）16個中方格的計數(shù)板1mL菌液中的總菌數(shù)=A/4*16*104*B25個中方格的計數(shù)板1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5*25*104*B第五頁，共十五頁，2022年，8月28日第六頁，共十五頁，2022年，8月28日三、實驗器材

啤酒酵母菌懸液，顯微鏡，血球計數(shù)板，載玻片，電吹風(fēng)，蓋玻片，接種環(huán)，0.1%、0.05%呂氏美藍染色液。第七頁，共十五頁，2022年，8月28日四、實驗方法和步驟1、菌懸液的制備為便于計數(shù)，對樣品進行適當稀釋，稀釋程度以每小格內(nèi)含5-10個酵母宜，可采用10倍系列稀釋法。2、鏡檢計數(shù)室在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。如有污物，則需清洗，用點吹風(fēng)吹干后才能進行計數(shù)。第八頁，共十五頁，2022年，8月28日3、加樣品將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，用吸水紙吸去多余菌液。樣品要均勻充滿計數(shù)室，不可有氣泡。4、顯微鏡計數(shù)加樣后靜止5min，然后將血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍物鏡尋找計數(shù)室的位置，然后換成高倍物鏡（40倍）進行計數(shù)。顯微鏡視野中的光線要暗一些，否則，不容易看清計數(shù)室的方格線。計數(shù)時，對位于線上的酵母菌，可采取只計數(shù)兩條邊的辦法，即遵循查上不查下，查左不查右的原則。當酵母菌芽體達到母細胞大小1/2時，即可計作兩個細胞。第九頁，共十五頁，2022年，8月28日5、出芽率的測定按前法，測定出酵母菌芽體數(shù)（小于母細胞1/2的），計算出單位體積內(nèi)測得酵母菌細胞的芽體占總數(shù)的百分率，即為酵母菌的出芽率。第十頁，共十五頁，2022年，8月28日6、酵母死亡率的測定滴一滴0.1%、0.05%呂氏美藍液于載玻片中央，再用接種環(huán)取酵母菌液少許，與染液混勻，染色2–3min，加蓋玻片，立即鏡檢，計數(shù)在一個視野中，以變藍（死）和未變藍（活）的細胞數(shù)。依法再計數(shù)2-3個視野中的細胞數(shù)。死細胞數(shù)死亡率= ×100%

細胞總數(shù)死亡率是單位體積內(nèi)死亡的細胞數(shù)占總細胞數(shù)的百分率。第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日7、計數(shù)完畢，將計數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或電吹風(fēng)吹干。第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日五、實驗結(jié)果次數(shù)12平均值中方格序號細胞數(shù)芽體數(shù)細胞數(shù)/ml芽體數(shù)/ml出芽率第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日