藥物分析PPT整理

凡從事藥品生產(chǎn)、經(jīng)營、使用的單位均應(yīng)配備相應(yīng)的執(zhí)業(yè)藥師，并以此作為開辦藥品生產(chǎn)、經(jīng)營、使用單位的必備條件之一。國家執(zhí)業(yè)藥師資格考試分為四個科目：藥事管理與法規(guī)藥學(xué)（中藥學(xué)）綜合知識與技能藥學(xué)（中藥學(xué)）專業(yè)知識（一）藥物分析藥理學(xué)藥學(xué)（中藥學(xué)）專業(yè)知識（二）藥劑學(xué)藥物化學(xué)第一章藥物分析學(xué)導(dǎo)論藥物—drug，pharmaceuticals,medicine用于預(yù)防、治療、診斷疾病和幫助機體恢復(fù)正常功能,并規(guī)定有適應(yīng)癥或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)。藥物分類：化學(xué)藥：API（ActivePharmaceuticalIngre-dient）及其制劑、抗生素、放射性藥品和診斷藥品中藥與天然藥：中藥材、中藥飲片、中成藥生物制品：生化藥品、血清、疫苗、血液制品、生物技術(shù)藥物藥物分析（狹義）：運用物理、化學(xué)、物理化學(xué)或生物化學(xué)的方法和手段研究和解決藥品質(zhì)量控制的項目和指標(biāo)限度，從而制定科學(xué)、可控的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。是研究與改進(jìn)藥品質(zhì)量控制方法的“方法學(xué)科”。藥物分析學(xué)（廣義）：（一）集成藥學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)和儀器工程學(xué)等的新理論、新方法（1）藥物分析學(xué)與藥理學(xué)結(jié)合發(fā)展化學(xué)生物學(xué)檢測方法，基于生物親合作用（受體、酶、蛋白、細(xì)胞、細(xì)胞膜、DNA等）的活性分子的快速識別與篩選新方法，在同一系統(tǒng)中以生物活性為檢測指標(biāo)，同時進(jìn)行化學(xué)成分分離分析研究，提高尋找和發(fā)現(xiàn)生物活性成分的效率與靶向性。薄層-生物自顯影技術(shù)：將薄層色譜分離和生物活性測定相結(jié)合進(jìn)行藥物篩選,操作簡單、耗費低、靈敏度和專屬性高,是一快速測定生物活性的方法。（2）藥物分析學(xué)與工學(xué)結(jié)合發(fā)展基于傳感技術(shù)的高內(nèi)涵藥效分析方法（細(xì)胞、蛋白、DNA等）微電極陣列傳感器芯片、微電子復(fù)合傳感器芯片、納米細(xì)胞傳感器等可同時檢測多組細(xì)胞生理參數(shù)和化學(xué)參數(shù)，獲得細(xì)胞的多種響應(yīng)參數(shù)，檢測細(xì)胞對藥物響應(yīng)的藥理與毒理效應(yīng)（3）藥物分析學(xué)與化學(xué)的結(jié)合（4）藥物分析學(xué)與分子影像學(xué)結(jié)合發(fā)展基于分子探針和分析儀器的分子成像技術(shù)，用于藥物分子體內(nèi)過程和藥效或毒性的實時動態(tài)檢測、藥效分子和生物分子的定位。（5）藥物分析學(xué)與儀器分析結(jié)合發(fā)展高靈敏度、高通量分析方法同時檢測多種生物標(biāo)志物抗體-藥物結(jié)合物(ADC)微量藥物雜質(zhì)和代謝物微量中藥活性成分多糖抗體藥物siRNA等……（二）發(fā)展藥物成分分析和藥物活性分析方法及相關(guān)技術(shù)傳統(tǒng)的藥物分析大多局限于通過分析藥物成分來控制藥品質(zhì)量，現(xiàn)已從以物質(zhì)為中心轉(zhuǎn)移到與生命科學(xué)的結(jié)合。（三）深入新藥研發(fā)、藥物制造和藥品臨床使用的各個環(huán)節(jié)藥物分析學(xué)屬于生命科學(xué)的范疇，其主要的研究領(lǐng)域包括藥物研究、工業(yè)藥學(xué)和臨床藥學(xué)。藥物研發(fā)：藥物的發(fā)現(xiàn)、研究與開發(fā)工業(yè)藥學(xué)：藥物生產(chǎn)、流通臨床藥學(xué)：藥物的評價和合理應(yīng)用（1）藥物分析學(xué)在藥物研究與開發(fā)中的應(yīng)用新藥需要進(jìn)行臨床前研究、臨床試驗和上市后的評價。藥物分析學(xué)不僅僅應(yīng)用于藥品質(zhì)量與穩(wěn)定性研究，更是深入到新藥研發(fā)的各個階段。（2）藥物分析學(xué)在藥物生產(chǎn)過程中的應(yīng)用藥品的質(zhì)量（quality）不是檢驗出來的而是生產(chǎn)出來的，藥品質(zhì)量與生產(chǎn)過程中的每個環(huán)節(jié)密切相關(guān)，除對終產(chǎn)品如原料和制劑按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量分析外，制藥過程關(guān)鍵工藝的監(jiān)測、控制對于保證藥品質(zhì)量至關(guān)重要。過程分析技術(shù)—ProcessAnalyticalTechnology，PAT過程分析技術(shù)與傳統(tǒng)的藥物質(zhì)量控制不同，過程分析常常是動態(tài)的、連續(xù)的分析，這對于保證藥品質(zhì)量、縮短生產(chǎn)周期、提高生產(chǎn)能力、保證設(shè)備安全、節(jié)約各種資源、減小生產(chǎn)中的人為因素、降低生產(chǎn)風(fēng)險和提高管理效率具有重要意義。過程反應(yīng)分析(in-processreactionanalysis)有助于避免產(chǎn)物分解、控制催化選擇性問題、水分毒化反應(yīng)和時間拖長等問題。一旦產(chǎn)品確定后，其重要的問題是在生產(chǎn)過程中自始至終確保一致性過程顆粒分析(in-processparticleanalysis)可以幫助解決顆粒大小不均勻、裂縫、制粒過大或過小、放大不一致性等問題（3）藥物分析學(xué)在藥品使用中的應(yīng)用藥物的質(zhì)量好壞，服用是否合理，即藥品是否安全、有效，最終還應(yīng)以臨床征象和實際療效來決定為了達(dá)到藥物使用的安全、合理和有效，對藥物及其制劑的體內(nèi)過程、作用機理及藥物效應(yīng)進(jìn)行研究，通過藥物分析的手段了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，獲得藥物代謝動力學(xué)的各種參數(shù)和代謝的機理等信息藥物研發(fā)臨床前藥學(xué)研究：藥物分離或合成工藝的篩選與優(yōu)化、藥物中間體質(zhì)量控制、藥物結(jié)構(gòu)確證、一些生物活性的高通量分析、臨床前藥物代謝及其動力學(xué)研究、藥物制劑處方篩選與質(zhì)量分析、藥物質(zhì)量及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、藥物穩(wěn)定性研究、藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定等。藥物生產(chǎn)制造過程質(zhì)量控制：應(yīng)用PAT對生產(chǎn)全過程進(jìn)行質(zhì)量控制，如各種在線分析技術(shù)用于監(jiān)控反應(yīng)過程、濃度變化、粉末干燥過程、顆粒均勻性等；離線分析技術(shù)用于檢測中間體和最終產(chǎn)品；計算機控制技術(shù)和統(tǒng)計分析技術(shù)用于集成制造和生產(chǎn)過程的調(diào)控。藥物應(yīng)用臨床藥學(xué)研究：指導(dǎo)合理用藥和個體化給藥，如臨床藥物代謝動力學(xué)、藥品生物利用度和生物等效性、治療藥物濃度監(jiān)測（therapeuticdrugmonitoring,TDM）、臨床藥物相互作用研究、人體基因型分析、生物標(biāo)志物測定;運動員興奮劑檢測、濫用藥物和法醫(yī)毒物分析等。有助于對所研究的藥物的質(zhì)量、療效和安全性做出評估，以及對藥物的改進(jìn)和發(fā)展提供依據(jù)1.基本理論掌握藥品質(zhì)量控制過程中的分析方法所依據(jù)的有關(guān)理論、化學(xué)反應(yīng)的原理及基本規(guī)律藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、存在狀態(tài)與分析方法選擇之間的相互關(guān)系熟練藥物及其分解物或代謝物的分離提取方法的原理了解制藥過程分析理論2.基本知識(1)研究開發(fā)新藥掌握藥物分析方法驗證的實驗方法、藥物鑒別試驗、雜質(zhì)檢查和含量測定的基本方法、制劑分析的特點與基本分析方法熟悉各類藥物的通性，典型藥物的特性，一般鑒別試驗掌握雜質(zhì)檢查及其限量、定量計算方法掌握制訂藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法，熟悉中藥和生物藥的質(zhì)量控制方法(2)建立體內(nèi)藥物分析方法熟悉生物性樣品的前處理技術(shù)(3)了解制藥過程質(zhì)量控制熟悉過程分析技術(shù)的方法3．基本操作熟練掌握各類儀器的使用掌握藥物的鑒別分析技術(shù)，藥物的雜質(zhì)檢查方法掌握光譜法、色譜法、比色法、比濁法和滴定法等分析技術(shù)的操作原理和測定方法等第二章藥品質(zhì)量控制與分析方法驗證《藥典》是國家監(jiān)督管理藥品質(zhì)量的法定技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)，它和其他法令一樣具有法定的約束力。藥典是藥品的生產(chǎn)、營銷、行政和技術(shù)監(jiān)督管理部門共同遵循的法定技術(shù)依據(jù)。一、中國藥典中華人民共和國藥典，簡稱《中國藥典》，其英文名稱為PharmacopoeiaofThePeople，sRepublicofChina，英文簡稱為ChinesePharmacopoeia，縮寫為Ch.P?，F(xiàn)行《中國藥典》：2010版（第9版）一部：收載中藥材及飲片、植物油脂和提取物、成方制劑等；二部：兩部分，第一部分收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射藥品；第二部分收載藥用輔料；三部：收載生物制品藥典組成：凡例正文附錄索引（一）凡例解釋和使用《中國藥典》正確進(jìn)行質(zhì)量檢定的基本原則。把一些與標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)的、共性的、需要明確的問題，以及采用的計量單位、符號與專門術(shù)語等，用條文加以規(guī)定，以避免在全書中重復(fù)說明。其有關(guān)規(guī)定具法定約束力。按內(nèi)容分類：名稱及編排，項目與要求，檢驗方法和限度，標(biāo)準(zhǔn)品、對照品，計量，精確度，試藥、試液、指示劑，動物實驗，說明書、包裝、標(biāo)簽等。1.名稱與編排對正文品種中收載的中文藥品名稱、英文名稱、有機藥物化學(xué)名稱的命名，藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)式的書寫、有關(guān)內(nèi)容的編排作出規(guī)定。中文名：《中國藥品通用名稱》英文名：《國際非專利藥品名稱》INN化學(xué)名：《有機化學(xué)命名原則》母體的選定與國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）的命名系統(tǒng)一致化學(xué)結(jié)構(gòu)式：WHO推薦的“藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)式書寫指南”2.項目與要求對正文中各項目進(jìn)行說明。如性狀項、鑒別項、檢查項、含量測定項、貯藏項等。例《中國藥典》規(guī)定的“陰涼處”是指A.放在陰暗處，溫度不超過2℃B.放在陰暗處，溫度不超過10℃C.避光，溫度不超過20℃D.溫度不超過20℃E.放在室溫避光處例藥品的近似溶解度以下列名詞表示A.極易溶解B.幾乎不溶或不溶C.微溶D.溶解E.略溶1.系指溶質(zhì)1g（ml）在溶劑10000ml中不能完全溶解（B）2.系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑100～不到1000ml中溶解（C）3.系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑不到lml中溶解（A）4.系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑30～不到100ml中溶解（E）5.系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑10～不到30ml中溶解（D）3.檢驗方法與限度檢驗方法：按規(guī)定的方法進(jìn)行檢驗，否則應(yīng)做比較實驗，仲裁以藥典為準(zhǔn)。限度：包括上和下限兩個數(shù)值本身及中間數(shù)值，最后一位為有效數(shù)值。原料藥含量（%）一般為重量比，上限未作規(guī)定時為101.0%。注意：如規(guī)定上限為100%以上時，系指用本方法測定時可能達(dá)到的數(shù)值，并非真實含量，是本測定方法允許的偏差。例中國藥典規(guī)定鹽酸苯海拉明的含量按干燥品計算，不得少于99.0％，這一含量應(yīng)是A.鹽酸苯海拉明的真實含量B.鹽酸苯海拉明的規(guī)定限度C.鹽酸苯海拉明的含量D.鹽酸苯海拉明干燥品的含量E.按苯海拉明計算的含量4.對照品、標(biāo)準(zhǔn)品用于鑒別、檢查、含量測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，由國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門指定的單位制備、標(biāo)定和供應(yīng)。注意：對照品與標(biāo)準(zhǔn)品的區(qū)別標(biāo)準(zhǔn)品用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按效價單位（或mg）計，以國際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定。對照品除另有規(guī)定外，均按干燥品（或無水物）進(jìn)行計算后使用。標(biāo)準(zhǔn)品、對照品均應(yīng)附有使用說明書、標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量要求（包括水分等）、使用期限和裝量等。標(biāo)準(zhǔn)品系指A.用于生物檢定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)B.用于抗生素含量或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)C.用于生化藥品含量或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)D.用于校正檢定儀器性能的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)E.用于鑒別、雜質(zhì)檢查的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照品系指A.自行制備、精制、標(biāo)定后使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)B.由國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門指定的單位制備、標(biāo)定和供應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)C．按效價單位（或mg）計D.均按干燥品（或無水物）進(jìn)行計算后使用E.均應(yīng)附有使用說明書、質(zhì)量要求、使用有效期和裝量等5.計量試驗用的計量儀器均應(yīng)符合國家技術(shù)監(jiān)督部門的規(guī)定。本版藥典采用的計量單位：滴定液和試液的濃度、溫度、百分比、液體的滴、溶液后記示的“（110）”等符號、藥篩分等、計算分子量所使用的原子量。按藥典規(guī)定，精密標(biāo)定的滴定液（如鹽酸及其濃度）正確表示為A.鹽酸滴定液（0.152mol/L）B.鹽酸滴定液（0.1524mol/L）C.鹽酸滴定液（0.152M/L）D.0.1524M/L鹽酸滴定液E.0.152mol/L鹽酸滴定液6.精確度“稱取”或“量取”精確度根據(jù)數(shù)值的有效位數(shù)來確定：0.1g0.06~0.14g2g1.5~2.5g2.0g1.95~2.05g2.00g1.995~2.005g精密稱定：稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一稱定：稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的百分之一“約”：指取用量在規(guī)定量的±10％精密量?。毫咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精密度要求量?。嚎捎昧客玻虬凑樟咳◇w積的有效位數(shù)選用量具恒重：連續(xù)兩次重量差異＜0.3mg（第二次稱重需在干燥1h或熾灼0.5h后）。7.試藥、試液、指示劑試驗用水，除另有規(guī)定外，均系指純化水。酸堿度檢查所用的水，均系指新沸并放冷至室溫的水。酸堿性試驗時，如未指明用何種指示劑，均系指石蕊試紙。（二）正文是藥典的主要內(nèi)容，為所收載藥品或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。項下按順序：（1）品名（2）有機藥物結(jié)構(gòu)式（3）分子式與分子量（4）來源或有機藥物化學(xué)名稱（5）含量或效價規(guī)定（6）處方（7）制法（8）性狀（9）鑒別（10）檢查（11）含量或效價測定（12）類別（13）規(guī)格（14）貯藏（15）制劑【性狀】本品為白色有光澤的結(jié)晶性粉末；無臭、味微苦；飽和水溶液顯酸性反應(yīng)。本品在乙醇或乙醚中溶解，在氯仿中略溶，在水中極微溶解；在氫氧化鈉或碳酸鈉溶液中溶解。熔點本品的熔點(附錄VIC）為174.5~178°C?！捐b別】（1）本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄III）。（2）取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg（略）（3）取樣品約50mg，置試管中（略）（4）本品的紅外吸收光譜應(yīng)與對照譜圖（光譜集227圖）一致?！緳z查】酸度乙醇溶液的澄清度中性或堿性物質(zhì)干燥失重（附錄VIIIL）熾灼殘渣（附錄VIIIN）【含量測定】取本品約0.2g，精密稱定，加甲醇40ml溶解，再加新制的3%無水碳酸鈉溶液15ml，照電位滴定法（附錄VIIA），用硝酸銀滴定液滴定。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于23.22mg的C12H12N2O3。【類別】鎮(zhèn)靜催眠藥、抗驚厥藥【貯藏】密封保存【制劑】苯巴比妥片（三）附錄正文中試驗用的試藥，括號中加注的附錄為所用方法的依據(jù)，如前苯巴比妥。附錄部分主要收載制劑通則、通用檢測方法和指導(dǎo)原則。二部附錄收載：制劑通則、藥用輔料、一般鑒別試驗、分光光度法、色譜法、物理常數(shù)測定法、一般定量分析法、一般雜質(zhì)檢查方法、制劑檢查法、生物檢定法、生物測定法、放射性藥品檢定法、試藥與滴定液、制藥用水、滅菌法、原子量表和指導(dǎo)原則。附錄中收載的指導(dǎo)原則，為執(zhí)行藥典、考察藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、起草和復(fù)核藥品標(biāo)準(zhǔn)所制定的指導(dǎo)性規(guī)定，不作法定標(biāo)準(zhǔn)。Ch.P（2010）二部附錄收載的指導(dǎo)原則：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導(dǎo)原則原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則緩釋、控釋和遲釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑的指導(dǎo)原則藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則藥物引濕性試驗指導(dǎo)原則近紅外分光光度法指導(dǎo)原則拉曼光譜法指導(dǎo)原則（四）索引二、三部中文索引（漢語拼音）英文索引二、主要國外藥典（一）美國藥典目前版本為USP37-NF32（二）英國藥典BP是由英國藥典委員會（BritishPharma-copoeiaCommission，BPC）編制出版。自1816年開始編制《倫敦藥典》，后出版有《愛丁堡藥典》和《愛爾蘭藥典》，1864年合并為《英國藥典》。BP的最新版本為2014年版，縮寫為BP（2014），自2014年1月1日起生效。（三）歐洲藥典EP由歐洲藥品質(zhì)量管理局（EuropeanQualityControlofMedicines，EDQM）編撰出版，有英文和法文兩種法定文本，為27個成員國及歐共體所認(rèn)可。其最新版本為第8版，簡寫為EP8.0，2014年1月起執(zhí)行。除人用和獸用疫苗、免疫制劑、放射性藥物、天然藥物等生物制品外，《歐洲藥典》不收載制劑，均為原料藥。（四）日本藥局方JP即《日本藥局方》，由日本藥局方編集委員會編制，厚生省頒布執(zhí)行。最新版2012年版為第十六版，即JP（16）。在正文“法定品種”標(biāo)準(zhǔn)中，依次列有：①藥品名稱（包括英文名、日文名）；②結(jié)構(gòu)式、分子式與分子量；③化學(xué)名及CA登錄號；④含量要求；⑤性狀（Description），在制劑品種項下為制法；⑥鑒別（Identification）；⑦物理常數(shù)與檢查；⑧含量測定（Assay）方法及其計算公式；⑨容器與包裝（ContainersandStorage）。（五）國際藥典目前，Ph.Int.為第四版Ph.Int.是由世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization，WHO）國際藥典和藥物制劑專家咨詢小組編撰，由世界衛(wèi)生大會批準(zhǔn)出版，并被建議“由藥典官方機構(gòu)來考慮是否最終收載其中的條款”。除非被藥典官方機構(gòu)接受，國際藥典不作為任何國家的法定藥典。三、藥品質(zhì)量控制藥品質(zhì)量監(jiān)督中，依據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對藥品進(jìn)行質(zhì)量檢驗是確保藥品質(zhì)量的可靠手段，但并非唯一的保障體系。為保證臨床用藥的安全有效，對藥品的各個環(huán)節(jié)進(jìn)行全面的質(zhì)量管理已成為各國藥品質(zhì)量監(jiān)督管理部門的共識。1.中國的法令性文件（5P）《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodLaboratoryPractice，GLP）《藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodClinicalPractice，GCP）《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodManufacturePractice，GMP）《藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodSupplyPractice，GSP）《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GoodAgriculturePractice，GAP）2.標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程與質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），在藥品的研究、生產(chǎn)、供應(yīng)等各個環(huán)節(jié)的每項具體操作均應(yīng)建立相應(yīng)的SOP。質(zhì)量控制（QC），在實施各項實驗操作SOP的同時，實驗操作過程的QC已成為實驗室科學(xué)管理的重要內(nèi)容，也是實驗室提供準(zhǔn)確可靠數(shù)據(jù)的重要保證。3.人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）世界各國對藥品的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、進(jìn)口等進(jìn)行審批，其藥品注冊制度的技術(shù)要求各不相同，為了避免國際間制藥工業(yè)人力物力的浪費，由歐盟國家,美國、日本三方于1990年發(fā)起了《人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會》(ICH)。（一）ICH組建目的1.三方成員國藥品注冊技術(shù)要求的協(xié)調(diào)2.新藥研究開發(fā)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)與革新3.節(jié)約人力物力、縮短研究開發(fā)周期，提高效率。（二）ICH的協(xié)調(diào)內(nèi)容1.協(xié)調(diào)的專題內(nèi)容（1）安全性（藥理、毒理、藥代）（2）質(zhì)量（穩(wěn)定性、驗證、雜質(zhì)、規(guī)格）（3）有效性（臨床試驗，GCP）（4）綜合學(xué)科（術(shù)語、管理通訊）2.ICH職責(zé)（1）創(chuàng)造注冊部門與制藥部門對話的場所（2）監(jiān)測和更新已協(xié)調(diào)文件（3）隨著新技術(shù)進(jìn)展和新治療方法，及時協(xié)調(diào)（4）推動新方法替代現(xiàn)有方法（5）鼓勵已協(xié)調(diào)文件的交流和應(yīng)用我國的GLP、GCP等各項新藥研究的指導(dǎo)原則，是根據(jù)我國國情并參照WHO和ICH的指導(dǎo)原則制訂的，使我國的新藥研發(fā)逐步與國際接軌并達(dá)到國際水平。第二節(jié)藥品檢驗工作的機構(gòu)和基本程序一、藥品質(zhì)量監(jiān)督管理的性質(zhì)與意義政府藥品監(jiān)督管理部門，根據(jù)法律賦予的職權(quán)和義務(wù)，依據(jù)藥典、藥品標(biāo)準(zhǔn)、藥事管理法規(guī)和政策，對國內(nèi)藥品研究開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、使用等進(jìn)行監(jiān)督管理。二、藥品質(zhì)量監(jiān)督管理的行政機構(gòu)1.國家食品藥品監(jiān)督管理局2.省級食品藥品監(jiān)督管理局3.市、縣級食品藥品監(jiān)督管理局三、藥品質(zhì)量監(jiān)督管理的技術(shù)機構(gòu)（一）國家藥典委員會負(fù)責(zé)組織編撰《中華人民共和國藥典》及制訂、修訂國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，是法定的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作專業(yè)管理機構(gòu)。（二）各級藥檢所《中華人民共和國藥品管理法》第六條規(guī)定“藥品監(jiān)督管理部門設(shè)置或確定的藥品檢驗機構(gòu)，承擔(dān)依法實施藥品審批和藥品質(zhì)量監(jiān)督檢查所需的藥品檢驗工作”。中國藥品生物制品檢定所：為國家級藥品檢驗所各省、市、自治區(qū)藥品檢驗所：承擔(dān)各轄區(qū)之內(nèi)的藥品檢驗工作四、藥品檢驗的基本程序藥品檢驗工作的基本程序：藥品檢驗工作的基本程序一般為取樣、性狀觀察、樣品制備、物理常數(shù)測定、鑒別、檢查、含量測定、檢驗報告。（一）取樣（Sampling）應(yīng)考慮到取樣的科學(xué)性、真實性、代表性。1.基本原則均勻、合理2.特殊裝置如固體原料藥用取樣探針取樣3.取樣量設(shè)樣品總件數(shù)為x當(dāng)x≤3時，每件取樣當(dāng)x≤300時，當(dāng)x﹥300時，（二）性狀觀察（description）性狀項下一般記載有藥品的外觀、色澤、臭、味、溶解度以及物理常數(shù)等。性狀能綜合反應(yīng)藥品內(nèi)在質(zhì)量，在評價質(zhì)量優(yōu)劣方面具有重要意義。（三）樣品制備（samplepreparation）樣品制備的發(fā)展趨勢：少用或不用有機溶劑，方法簡單快速、盡量集采樣、萃取、凈化、濃縮、分離于一體。（四）物理常數(shù)測定（physicalconstans）對藥品具有鑒別意義，也可反應(yīng)藥品的純度，是評價藥品質(zhì)量的主要指標(biāo)。（五）鑒別（Identifcation）鑒別是指用規(guī)定的試驗方法來證明已知藥物的真?zhèn)?，采用一組（通常2-4個）項目全面鑒別。（1）一般鑒別試驗依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物的真?zhèn)?。只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。（2）專屬鑒別試驗依據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來鑒別藥物的真?zhèn)巍ｈb別方法：（1）化學(xué)鑒別方法化學(xué)鑒別法操作簡便、快速，實驗成本低，應(yīng)用廣，有一定的專屬性和靈敏度，但專屬性比儀器分析法差。（2）光譜鑒別法a.紫外光譜法本法有一定專屬性，應(yīng)用范圍廣、使用頻率高。同時，紫外-可見分光光度計的普及率高，操作也比較簡便，在藥檢工作中易于為大家接受。b.紅外光譜鑒別法藥物的紅外光譜能反映藥物分子的結(jié)構(gòu)特點，具有專屬性強的特點，是驗證已知藥物的有效方法，應(yīng)用較廣，主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，亦可用于制劑的鑒別。用本法鑒別藥物時，中國藥典要求按指定條件繪制供試品的紅外光吸收圖譜，與《藥品紅外光譜集》中的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比，如果峰位、峰形、相對強度都一致時，即為同一種藥物。（3）色譜鑒別法利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時間）進(jìn)行鑒別試驗。薄層色譜法（TLC）高效液相色譜法（HPLC）氣相色譜法（GC）紙色譜法（PC）（4）生物學(xué)方法是利用微生物或?qū)嶒瀯游镞M(jìn)行鑒別，主要用于抗生素和生化藥物的鑒別。（六）檢查包括藥品的純度要求、安全性、有效性、均一性等內(nèi)容。1.有效性藥品的有效性，是以動物試驗為基礎(chǔ)，最終以臨床療效來評價的。如對藥物生物利用度有影響的因素的檢查（粒度細(xì)度，晶型，平均分子量，含氟量）等。2.均一性均一性主要是檢查制劑的均勻程度，如含量均勻度、重量差異等。3.純度要求純度要求即藥物的雜質(zhì)檢查，亦稱限度檢查、純度檢查。4.安全性用生物學(xué)方法檢測藥品中存在的某些痕量雜質(zhì)，如熱原檢查、毒性試驗、刺激性試驗、過敏試驗、升壓或降壓物質(zhì)檢查等內(nèi)容。（七）含量測定含量測定：用理化方法測定有效物質(zhì)，以質(zhì)量單位為計算單位。效價測定：用生物學(xué)或生化方法測定生理活性物質(zhì)，以效價單位(IU)為計算單位。生物學(xué)方法包括生物檢定法和微生物檢定法。生物檢定法是利用藥物對生物體或其離體器官組織所起的藥理作用來檢定藥物效價的方法，用于無適當(dāng)理化方法進(jìn)行檢定的藥物．抗生素微生物檢定法是利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴散作用，采用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩種對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。注意：判斷一個藥物的質(zhì)量是否符合要求，必須全面考慮鑒別、檢查與含量測定三者的檢驗結(jié)果。（八）檢驗報告1.檢驗記錄完整、真實、具體，清晰（1）供試品情況（名稱、批號、規(guī)格、數(shù)量、來源、外觀、包裝等）；（2）日期（取樣、檢驗、報告等）；（3）檢驗情況（依據(jù)、項目、操作步驟、數(shù)據(jù)、計算結(jié)果、結(jié)論等）；（4）若需涂改，只可劃線，重寫后要簽名；（5）記錄完成后，需復(fù)核。復(fù)核后的記錄，屬內(nèi)容和計算錯誤的，由復(fù)核人負(fù)責(zé)；屬檢驗操作錯誤的，由檢驗人負(fù)責(zé)。品名包裝規(guī)格批號廠牌來源數(shù)量取樣日期取樣數(shù)量報告日期檢驗依據(jù)檢驗記錄結(jié)論復(fù)核人檢驗人2.檢驗報告（1）簡潔明了、結(jié)論明確。除無操作步驟外其它內(nèi)容同原始記錄。（2）檢驗人、復(fù)核人、負(fù)責(zé)人簽名；必要時單位蓋章3.結(jié)論（1）全面檢驗均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如：本品為“維生素C”；符合中國藥典（2010年版）的規(guī)定。（2）全面檢驗后有個別項目不符合規(guī)定本品為“葡萄糖”；檢“乙醇溶液的澄清度”不符合規(guī)定，其他各項檢驗均符合中國藥典（2010年版）的規(guī)定。認(rèn)為可改作“口服葡萄糖”用，但不得供制備注射劑用。（3）全面檢驗后不合藥用者，或雖未全面檢驗、但主要項目不合規(guī)定，已可作不得供藥用處理者。如：本品為“葡萄糖注射液”，其熱原檢查不符合中國藥典（2010年版）的規(guī)定，不得供藥用。（4）根據(jù)送檢者要求，僅作個別項目檢驗者。如：本品（維生素B12注射液）的pH值為5.5，檢“pH值”符合中國藥典（2010年版）的規(guī)定。（pH值應(yīng)為4.0～6.0）第三節(jié)誤差控制與數(shù)據(jù)處理一、誤差與誤差控制1.誤差（analyticalerror）測量值（observation）與被測定藥物的真實值（簡稱為真值）之間的的偏離（bias）。誤差是測量值與真值之差，反映分析結(jié)果與真值的接近程度，是衡量一個分析方法的準(zhǔn)確度（accuracy）的指標(biāo)。系統(tǒng)誤差（systematicerror）、可定誤差（determinateerror），有固定的方向（正或負(fù)）和大小；系統(tǒng)誤差是由確定的因素引起的，可通過對分析系統(tǒng)進(jìn)行校正加以消除；系統(tǒng)誤差分為方法誤差、試劑誤差、儀器誤差及操作誤差。偶然誤差（accidentalerror）、不可定誤差（indeterminateerror）、隨機誤差（randomerror），其產(chǎn)生具有偶然性，其方向或大小均不固定。由分析條件或環(huán)境條件的改變等偶然的因素引起，符合統(tǒng)計學(xué)規(guī)律：正負(fù)誤差出現(xiàn)的概率大致相等，往往能部分甚至完全抵消；該類誤差不能通過校正的方法加以消除，但可通過多次平行測定，以平均值作為分析結(jié)果來減小該類誤差；絕對誤差（absoluteerror），即誤差，是指測量值與真值之差。因為測量值與真值的單位相同，所以絕對誤差的單位與測量值和真值的相同；絕對誤差具有方向性，可以是正值，也可以是負(fù)值δ=x-μ相對誤差（relativeerror）是指絕對誤差與真值的比值，即誤差率。因為絕對誤差的單位與真值的單位相同，所以相對誤差沒有單位。2.偏差偏差（deviation，d）是指一組測量值中各測量值與該組測量值的平均值之差。它反映一組測量值之間彼此符合的程度（或離散程度），是衡量分析方法的精密度（precision）的指標(biāo)。偏差越大，精密度越低。3.誤差的控制方法選用合適的分析方法減少測量過程的誤差驗證并消除系統(tǒng)誤差（回收試驗、校準(zhǔn)儀器、對照試驗）平行試驗二、不確定度不確定度（measurementuncertainty），是表征合理地賦予被測量值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。如標(biāo)準(zhǔn)測量不確定度的標(biāo)準(zhǔn)偏差，或是說明了包含概率的區(qū)間半寬度。不確定度是以一個區(qū)間的形式表示。如果是為一個分析過程和所規(guī)定樣品類型做評估時，可適用于其所描述的所有測量值。一般不能用不確定度數(shù)值來修正測量結(jié)果。誤差是被測量的單個結(jié)果和真值之差，是一個單個數(shù)值。原則上已知誤差的數(shù)值可以用來修正結(jié)果，但實際上誤差是一個理想的概念，不可能被確切地知道。三、測量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理(一)平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差樣本均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差與測量次數(shù)的平方根成反比，但其可靠性提高的速度隨測量次數(shù)的增加而顯著下降。在實際分析工作中，一般平行測定2~3次即可；而在進(jìn)行方法學(xué)驗證時，要求測定5~6次。(二)平均值的置信區(qū)間雙側(cè)置信區(qū)間（一定置信水平下，同時具有上下限的置信范圍）單側(cè)置信區(qū)間（三）可疑數(shù)據(jù)的取舍在一組測量值中有時會出現(xiàn)個別過高或過低的測量值，稱為可疑數(shù)據(jù)，在統(tǒng)計學(xué)上稱為逸出值（outliers，也稱異常值或離群值）。對于可疑數(shù)據(jù)常采用以下做法：①重復(fù)相應(yīng)部分的實驗操作，以求得替代的數(shù)據(jù)；②用統(tǒng)計學(xué)方法評估可疑數(shù)據(jù)的來源，并決定取舍；③舍棄可疑值，或在舍棄可疑值后以相鄰數(shù)據(jù)替代。四、有效數(shù)字的修約有效數(shù)字：在分析工作中實際能測量到的數(shù)字稱為有效數(shù)字。1.在記錄有效數(shù)字時，只允許末位欠準(zhǔn)，而且只能上下差1。2.單位改變時，有效數(shù)字的位數(shù)不變。3.常量分析要達(dá)到千分之一的準(zhǔn)確度，需保留四位有效數(shù)字。4.數(shù)字0在數(shù)字前面時，是定位用的無效數(shù)字，其余都是有效數(shù)字。5.首位為8或9的數(shù)，可多計一位有效數(shù)字。6.pH、lgK等對數(shù)數(shù)值，小數(shù)點后的位數(shù)為有效數(shù)字。數(shù)字修約規(guī)則：1.四舍六入五成雙。若5后還有數(shù)，宜進(jìn)位。2.原測量值要一次修約至所需位數(shù)，不可分次修約。（如：1.2349）3.運算中可多保留一位有效數(shù)字，算出結(jié)果后再按規(guī)定修約。4.修約標(biāo)準(zhǔn)偏差值或其他不確定度時，只要有效數(shù)字后面還有數(shù)字，都進(jìn)位。運算法則：1.加減運算可按小數(shù)點后位數(shù)最少的數(shù)保留。2.乘除運算可按有效數(shù)字位數(shù)最少的數(shù)保留。第四節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證一、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分析方法驗證驗證目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求，方法驗證理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草或修訂說明中。需驗證的分析項目：1.鑒別試驗；2.雜質(zhì)定量檢查或限度檢查；3.原料藥或制劑中有效成分含量測定；4.制劑中其它成分（如防腐劑等）的測定；5.溶出度、釋放度等檢查中的溶出量等的測試方法。驗證內(nèi)容：驗證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。（一）精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。一般以偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。1.重復(fù)性在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度。在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果評價，例如，設(shè)計3個不同濃度，每個濃度分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測定。或?qū)⑾喈?dāng)于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評價。2.中間精密度同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度?？疾祀S機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。3.重現(xiàn)性在不同實驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度。法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。（二）準(zhǔn)確度指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般以回收率（%）表示。1.原料藥的回收率計算法取已知純度的對照品或樣品（加入量），按本法進(jìn)行測定（實測值）2.制劑的回收率計算法（1）取除被測物以外的各組分混合物，加入已知量的被測物，按本法進(jìn)行測定。（2）加樣回收率試驗取已準(zhǔn)確測得被測物的量(P)的制劑樣品，加入已知量的被測物(A)，按本法進(jìn)行測定，得被測物的量為M。（3）還可以通過與已建立準(zhǔn)確度的另一方法進(jìn)行比較來確立本法的準(zhǔn)確度。中藥制劑大多數(shù)采用加樣回收率試驗。數(shù)據(jù)要求回收率試驗中應(yīng)注意至少用9次測定結(jié)果進(jìn)行評價，一般制備3個不同濃度的樣品，各測定3次。（三）專屬性指在樣品介質(zhì)中有其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料）共存時，采用的方法對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)伲瑧?yīng)采用多個方法予以補充。（四）檢測限（LOD）檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。限度試驗參數(shù)，無需定量測定。常用%、ppm、ppb等表示。1．非儀器分析目視法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2．信噪比法把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。3．標(biāo)準(zhǔn)偏差法用空白樣品進(jìn)行分析，求得方法背景響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差S空，再將3倍空白標(biāo)準(zhǔn)偏差作為檢測限的估算值。適用于不能直觀比較信噪比的儀器分析方法（如紫外分光光度法）。（五）定量限定量限系指樣品中被測物能被定量檢測的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具一定的準(zhǔn)確度與精密度。常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比為10:1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定。（六）線性線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。（七）范圍范圍系指能達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用、線性、準(zhǔn)確度、精密度的結(jié)果和要求確定。（八）耐用性 耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。如果測定條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中說明。是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間等。HPLC法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速等。GC法變動因素有：色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。二、生物樣品中藥物定量分析方法驗證驗證內(nèi)容與藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法基本相同，但方法與要求有所不同。（一）分析方法的驗證類型1.完全驗證完全驗證（FullValidation）適用于首次建立和付諸實施的生物樣品分析方法。2.部分驗證部分驗證（PartialValidation）是對已通過驗證的生物樣品分析方法的修改部分進(jìn)行驗證，其驗證的范圍應(yīng)根據(jù)修改的內(nèi)容確定。典型的分析方法的修改包括但不僅限于以下范圍：(1)同一個生物樣品分析方法在實驗室之間和分析人員之間的轉(zhuǎn)移；(2)獲取生物樣本時抗凝劑的改變；(3)同種屬內(nèi)生物樣品種類的改變（如：人血漿與人尿液）；(4)生物樣品處理方法的改變；(5)相同生物樣品但種屬的改變（如：大鼠血漿與小鼠血漿）；(6)有關(guān)濃度范圍的改變；(7)儀器系統(tǒng)和/或軟件系統(tǒng)的改變；(8)在特定的代謝產(chǎn)物存在下待測物選擇性的證明。3.交叉驗證交叉驗證（Cross-Validation)是指采用兩種或兩種以上方法用于相同研究或不同研究的測定數(shù)據(jù)時，對驗證參數(shù)進(jìn)行的比較驗證。例如：將一種已通過驗證的原始分析方法作為參考，對修改后的分析方法進(jìn)行比較驗證。

（二）分析方法的驗證內(nèi)容專屬性或選擇性基質(zhì)效應(yīng)；精密度、準(zhǔn)確度和提取回收率標(biāo)準(zhǔn)曲線和靈敏度生物樣品中待測組分的穩(wěn)定性考察專屬性（特異性）（1）內(nèi)源性物質(zhì)的干擾（2）藥物代謝物的干擾（3）在臨床藥物監(jiān)測時要同時考慮服用藥物的干擾必須證明所測定的物質(zhì)是原形藥物或特定的活性代謝物，內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)的代謝物不得干擾樣品的測定。對于色譜法至少要提供空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對于復(fù)方制劑應(yīng)特別加強專屬性研究，以排除可能的干擾。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)包括一個空白樣品（不加內(nèi)標(biāo)物的空白生物基質(zhì)）、一個零樣品（空白生物基質(zhì)中添加內(nèi)標(biāo)物）和6~8個覆蓋預(yù)期樣品濃度的非零樣品（包括LLOQ）。3.精密度與準(zhǔn)確度選擇3個濃度的質(zhì)控樣品同時進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。每一個濃度至少測定5個樣本。低濃度：在定量下限的3倍以內(nèi)高濃度：接近標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限中間濃度精密度：用日內(nèi)和日間標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，一般應(yīng)小于15%（在LLOQ附近小于20%）。準(zhǔn)確度：一般應(yīng)在85~115%范圍內(nèi)（在LLOQ附近應(yīng)在80~120%）。4.定量下限測定3~5個半衰期后樣品中藥物濃度；或峰值濃度的1/20~1/10的藥物濃度；準(zhǔn)確度應(yīng)在80~120%范圍內(nèi)；RSD應(yīng)小于20%；信噪比應(yīng)大于5；至少由5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明5.樣品穩(wěn)定性對含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，確定生物樣品的存放時間和條件。6.提取回收率又稱絕對回收率。是反映提取或處理過程中待測藥物的丟失情況，區(qū)別于方法回收率。要求制備高、中、低3個濃度的樣品，每一濃度至少5個樣品。每個濃度的提取回收率應(yīng)≥70%，高中濃度的RSD應(yīng)≤15%，低濃度的RSD應(yīng)≤20%。7.基質(zhì)效應(yīng)在LC-MS中，色譜分離時共洗脫物質(zhì)改變了待測成分的離子化效率，所引起的信號的抑制或提高。因樣品來源不同，基質(zhì)成分的不同，測定結(jié)果受到影響，有時會導(dǎo)致錯誤的判斷，因此用LC-MS進(jìn)行分析要對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行相關(guān)研究?；|(zhì)效應(yīng)的消除：制備樣品時盡量除去基質(zhì)改善色譜條件，使待測成分與基質(zhì)盡量分離優(yōu)化質(zhì)譜分析條件選擇內(nèi)標(biāo)物8.質(zhì)控樣品質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。9.測定未知樣品應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進(jìn)行復(fù)測。每個分析批測定應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。第四章

藥物鑒別試驗藥物的鑒別(identification)是根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，用規(guī)定的試驗方法來辨別藥物真?zhèn)蔚馁|(zhì)量控制過程。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項下的試驗方法用于證實是否為其標(biāo)簽所標(biāo)示的藥物。鑒別試驗的分類：1.按照鑒別方法的原理物理學(xué)方法（熔點等物理常數(shù)的測定）化學(xué)方法（顏色變化反應(yīng)、沉淀生成反應(yīng)等）物理化學(xué)方法（分光光度法和色譜法等）生物學(xué)方法2.按照鑒別方法的專屬性一般鑒別試驗：只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。如：Na+、枸櫞酸、芳香第一胺類等鑒別專屬鑒別試驗：如：維生素B1的硫色素反應(yīng)鑒別試驗設(shè)計的依據(jù)：鑒別試驗是根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)來進(jìn)行設(shè)計的。鑒別試驗方法選用原則：1.有一定的專屬性、靈敏度，并且易于推廣2.盡量將化學(xué)法與儀器法相結(jié)合3.每種藥品一般選用2～4種方法進(jìn)行試驗鑒別試驗的條件：溶液的酸堿度藥物的濃度溶液的溫度與反應(yīng)速度共存物質(zhì)的干擾反應(yīng)的溶劑一、性狀鑒別質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“性狀”項下的外觀和溶解度，可作為藥物鑒別試驗的輔助試驗，對藥物的真?zhèn)芜M(jìn)行初步的判斷。一、外觀性狀性狀是對藥品的色澤和外表感觀的規(guī)定，一般包括藥品的聚集狀態(tài)、色澤、臭、味等。性狀鑒別簡便快速，但只用于初步判斷。二、溶解度溶解度是指在一定溫度下，物質(zhì)在一定量的某種溶劑中達(dá)到飽和狀態(tài)時所溶解的克數(shù)。溶解度測定簡便，可供制備溶液使用，對在特定溶劑中的溶解性能需作質(zhì)量控制時，應(yīng)在“檢查”項下另作規(guī)定。二、物理常數(shù)測定法藥物的物理常數(shù)（physicalconstant）是藥物的特性常數(shù)，收載于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的性狀項下。Ch.P在附錄中收載了相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、吸收系數(shù)、碘值、皂化值和酸值等物理常數(shù)的測定方法。物理常數(shù)測定結(jié)果不僅對藥品具有鑒別意義，也反映藥品的純度，是評價藥品質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。一、熔點熔點是大多數(shù)固體有機藥物重要的物理常數(shù)。測定熔點的藥品，應(yīng)是遇熱晶型不轉(zhuǎn)化，其初熔點和終熔點容易分辨的藥品。藥物若純度差，則熔點下降，熔距增長。因此通過測定藥物的熔點，不但可以鑒別藥物真?zhèn)?，也可用于檢查藥品的純度。測定方法：Ch.P規(guī)定采用毛細(xì)管法測定熔點。根據(jù)供試品性質(zhì)的不同，Ch.P附錄收載了三種測定方法：第一法用于測定易粉碎的固體藥品；第二法用于測定不易粉碎的固體藥品（如脂肪、脂肪酸、石蠟和羊毛脂等）；第三法用于測定凡士林及其他類似物質(zhì)。二、吸收系數(shù)吸收系數(shù)（absorptioncoefficient），是指在一定波長下，單位光路長度，某物質(zhì)單位濃度的吸光度值。吸收系數(shù)與被測物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和測定波長等因素有關(guān)，是反映物質(zhì)吸光性質(zhì)的重要物理常數(shù)。測定方法：1.按照Ch.P附錄分光光度法項下的儀器校正和檢定方法進(jìn)行校正；2.檢查吸收池的配對性；3.取干燥的供試品適量，用規(guī)定的溶劑配制成吸光度在0.6~0.8之間的濃度（2份），以配制供試品溶液的同批溶劑為空白，在規(guī)定的波長處測定吸光度值，計算。4.精密吸取上述溶液適量，稀釋1倍使其吸光度在0.3~0.4之間，以同批溶劑為空白，在規(guī)定的波長處測定吸光度值，計算。5.高低濃度溶液均分別在5臺不同型號分光儀上測定，計算得到的吸收系數(shù)同一臺儀器2份間的偏差不超過1%，5臺儀器測得結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)差不能超過1.5%。6.取平均值為藥物的吸收系數(shù)。三、比旋度偏振光通過長1dm且每1ml中含旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度稱為比旋度。比旋度是手性化合物重要的物理常數(shù)?？梢杂糜阼b別手性藥物的真?zhèn)?，也可用于雜質(zhì)檢查和含量測定。測定方法：用旋光計測定。按各品種項下的規(guī)定進(jìn)行操作。除另有規(guī)定外，供試液的測定溫度應(yīng)為20℃±0.5℃，使用波長589.3nm的鈉光譜的D線。將測定管用供試液體或固體藥品的供試品溶液沖洗數(shù)次，緩緩注入旋光計的樣品管中，注意勿使光路中有氣泡。置于旋光計內(nèi)檢測讀數(shù)。旋光度讀數(shù)應(yīng)重復(fù)3次，取其平均值。根據(jù)旋光度和溶液的濃度與液層厚度，計算比旋度。三、化學(xué)鑒別法化學(xué)鑒別試驗(chemicalidentification)是指通過加入試劑與藥物發(fā)生反應(yīng)，觀察反應(yīng)現(xiàn)象，對藥物進(jìn)行鑒別的試驗?；瘜W(xué)鑒別法為經(jīng)典的鑒別試驗方法，由于操作簡便、快速，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中用得較多。2.氯化物（1）取供試品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀復(fù)生成。（2）取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱,即發(fā)生氯氣，能使用水濕潤的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。3.硫酸鹽（1）取供試品溶液，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。（2）取供試品溶液，滴加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。（3）取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀（與硫代硫酸鹽區(qū)別）。4.鈉鹽（1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（2）取供試品約100mg，置10ml試管中，加水2ml溶解，加15%碳酸鉀溶液2ml，加熱至沸，應(yīng)不得有沉淀生成；加焦銻酸鉀試液4ml，加熱至沸，置冰水浴中冷卻，必要時，用玻棒摩擦試管內(nèi)壁，應(yīng)有致密的沉淀生成。（二）常見有機結(jié)構(gòu)的鑒別1.水楊酸類2.苯甲酸類3.芳香第一胺4.丙二酰脲類5.托烷生物堿類二、專屬鑒別試驗1.顏色變化鑒別法2.沉淀生成鑒別法3.氣體生成鑒別法4.熒光反應(yīng)鑒別法5.衍生物熔點測定法四、光譜鑒別法一、紫外-可見分光光度法紫外-可見吸收光譜與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)有關(guān)，同一物質(zhì)在相同的條件下測得的吸收光譜應(yīng)具有完全相同的特征，故常用于藥物的鑒別。光譜的形狀、吸收峰數(shù)目、吸收峰（或谷）波長的位置、吸光強度以及吸收系數(shù)等均可作為鑒別的依據(jù)。（一）常見方法1.核對吸收光譜的特征參數(shù)布洛芬Ch.P（2010）【鑒別】取本品，加0.4％氫氧化鈉溶液制成每1ml中含0.25mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA）測定，在265nm與273nm的波長處有最大吸收，在245nm與271nm的波長處有最小吸收，在259nm的波長處有一肩峰。2.比較規(guī)定波長處的吸光度比值3.比較供試品與對照品在一定波長范圍內(nèi)的吸收光譜（二）特點1.操作簡便、儀器普及，應(yīng)用范圍廣，但要注意儀器的校正和檢定。2.吸收光譜相同，不一定就是相同的物質(zhì)3.溶劑的種類、溶液pH值及溶液濃度對鑒別試驗結(jié)果可能會有影響二、紅外分光光度法紅外光譜是由物質(zhì)分子的振動和轉(zhuǎn)動能級躍遷所產(chǎn)生的光譜。幾乎所有的有機化合物在紅外光區(qū)均有吸收，而且分子中不同官能團(tuán)，在發(fā)生振動和轉(zhuǎn)動能級躍遷時所需的能量各不相同，產(chǎn)生的吸收譜帶其波長（波數(shù)）位置就成為藥物鑒別的依據(jù)，其吸收強度則是定量分析的依據(jù)。（一）鑒別方法Ch.P一般采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比法，即在規(guī)定的條件下測定供試品的圖譜，再與Ch.P的配套用書《藥品紅外光譜集》中記載的該品種的標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照，要求主要峰位、峰形和相對強度應(yīng)一致。USP主要采用對照品對比法；BP多采用對照品對比法，少部分采用對照圖譜對比法；JP一般采用對照圖譜對比法（二）特點1.專屬性強、應(yīng)用廣泛。2.主要用于組成單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥的鑒別。制劑需提取分離排除干擾后再采用紅外分光光度法鑒別。3.還可用于藥物晶型的鑒別。4.儀器分辨率的差異和不同的操作條件、藥品晶型的差異、以及樣品含水量的不同等多種因素都可能影響紅外光譜的測定結(jié)果。五、色譜鑒別法藥物分子由于結(jié)構(gòu)不同，在固定相和流動相中的吸附或分配等性質(zhì)不同，所以在一定的色譜條件下可產(chǎn)生差速遷移，根據(jù)藥物分子的保留值等色譜參數(shù)可對藥物進(jìn)行鑒別。一、薄層色譜鑒別法（一）鑒別方法1.對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）比較法采用與供試品溶液同濃度的對照品溶液，在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點的顏色（或熒光）與位置應(yīng)與對照品溶液的主斑點一致，而且主斑點的大小與顏色的深淺也應(yīng)大致相同。2.選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的藥物對照品與供試品溶液的主斑點比較，兩者位置應(yīng)不同，或?qū)⑸鲜鰞煞N溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個清晰分離的斑點。（二）特點1.靈敏度高、專屬性強、操作簡便，在藥物鑒別中應(yīng)用廣泛；2.由于薄層板的種類、展開劑的種類與比例、試驗溫度和濕度等多種因素均可影響色譜的分離效果，故要注意實驗條件的控制。二、氣相與高效液相色譜鑒別法（一）測定方法使用氣相色譜儀或高效液相色譜儀測定。一般采用對照品比較法，規(guī)定按供試品含量測定項下的色譜條件進(jìn)行試驗。要求供試品和對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）色譜峰的保留時間（tR）應(yīng)一致。含量測定方法為內(nèi)標(biāo)法時，可要求供試品溶液和對照品溶液色譜圖中藥物峰的保留時間與內(nèi)標(biāo)峰保留時間的比值應(yīng)相同。（二）特點1.靈敏度高、專屬性強、分析速度快。2.操作時應(yīng)按各品種項下要求對檢測方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗，使理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子符合要求。3.氣相色譜法適合于高溫下穩(wěn)定、容易氣化藥物的鑒別。4.高效液相色譜法不受藥物氣化和熱穩(wěn)定性的限制，適合于大多數(shù)藥物的鑒別。六、其他鑒別法（一）顯微鑒別利用顯微鏡觀察待檢樣品，描述顯微特征，對其進(jìn)行鑒別的方法。一般指對生藥進(jìn)行鑒別，觀察生藥內(nèi)部的細(xì)胞、組織構(gòu)造及細(xì)胞內(nèi)含物。（二）生物學(xué)鑒別藥物通過一定的途徑給予微生物、動物或離體器官，觀察藥理作用作為判斷依據(jù)的鑒別。七、晶型分析（一）熔點測定（二）熱分析法（三）X射線粉末衍生法（四）紅外光譜法第五章藥物的雜質(zhì)分析第一節(jié)雜質(zhì)和雜質(zhì)限量一、藥物的純度要求指藥物純凈程度，反映了藥物質(zhì)量的優(yōu)劣，含有雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因素。藥物中雜質(zhì)指：1.有毒副作用的物質(zhì)。2.本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質(zhì)。3.本身無毒副作用，也不影響藥物的穩(wěn)定性和療效，但影響藥物的科學(xué)管理的物質(zhì)。藥物的純度與化學(xué)試劑的純度：藥物的純度考慮雜質(zhì)的生理作用，藥物必須進(jìn)行臨床試驗。藥品只有兩個等級：合格或不合格?；瘜W(xué)試劑有很多等級，如基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級純（GR）、分析純（AR）、化學(xué)純（CP）、色譜純、光譜純。二、雜質(zhì)的來源與種類（一）雜質(zhì)的來源1.生產(chǎn)過程中引入（1）原料、反應(yīng)中間體及副產(chǎn)物（2）試劑、溶劑、催化劑類（3）生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質(zhì)2.貯藏過程中引入（1）藥物本身不穩(wěn)定易水解氧化易水解藥物：酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易氧化藥物：醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等（2）藥物貯存不當(dāng)空氣、濕度、溫度、光照等因素使得藥物變質(zhì)：如：細(xì)菌污染、發(fā)霉、吸潮AgNO3：光→Ag↓（二）雜質(zhì)的分類1.按結(jié)構(gòu)分類無機雜質(zhì)、有機雜質(zhì)2.按性質(zhì)分類信號雜質(zhì)、有害雜質(zhì)、無效或低效的異構(gòu)體3.按來源分類（1）一般雜質(zhì)多數(shù)藥物在生產(chǎn)或貯藏中容易引入的雜質(zhì)。如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘渣等。一般雜質(zhì)其檢查方法收載在中國藥典的附錄中。（2）特殊雜質(zhì)指某一個或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過程中引入的雜質(zhì)，如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼及甾體激素中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方法收載在中國藥典正文各藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。三、雜質(zhì)限量雜質(zhì)限量：藥物允許雜質(zhì)存在的最大量雜質(zhì)量＜限量＜雜質(zhì)量↓↓符合規(guī)定不符合規(guī)定根據(jù)雜質(zhì)的本身性質(zhì)與生產(chǎn)能力，參考各國藥典標(biāo)準(zhǔn)制定。百分之幾：無危害雜質(zhì)（%）百萬分之幾：危害人體健康的雜質(zhì)，如砷鹽、重金屬等（ppm）。四、雜質(zhì)限量檢查方法1.對照法取一定量被檢雜質(zhì)的對照品溶液與一定量的供試品溶液在相同條件下處理后，比較反應(yīng)結(jié)果（比色、比濁、比較色斑），確認(rèn)雜質(zhì)是否超過規(guī)定。特點：需要對照品不需知雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量2.靈敏度法直接在供試品中加入試劑，在一定條件下反應(yīng)，觀察有無正反應(yīng)出現(xiàn)。特點：不需對照物質(zhì)。3.比較法供試品在一定條件下所測得數(shù)值與規(guī)定值進(jìn)行比較，如控制一定波長下的吸收度值來控制雜質(zhì)限量。特點：可準(zhǔn)確測雜質(zhì)含量，不需對照五、雜質(zhì)限量計算方法第二節(jié)一般雜質(zhì)及其檢查方法1.遵循平行操作原則（1）儀器的配對性:如納氏比色管配對，刻度線高低相差不超過2mm，砷鹽檢查時導(dǎo)氣管長度及孔的大小要一致等（2）對照品與供試品的同步操作2.正確的比色、比濁方法3.檢查結(jié)果不符合規(guī)定或在限度邊緣時應(yīng)對供試管和對照管各復(fù)查二份一、氯化物檢查法（一）原理：Cl-樣+Ag+→AgCl↓白Cl-標(biāo)+Ag+→AgCl↓白（二）檢查方法：取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml（溶液若顯堿性,可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，應(yīng)濾過，置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試品液。另取各藥品項下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，搖勻,即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋至50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置于黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較即得。（三）條件1.比色范圍標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液：10ug/ml的Cl-在測定條件下，氯化物的濃度以50ml中含50~80ug的Cl-為合適，此范圍內(nèi)氯化物所顯渾濁梯度明顯，便于比較；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5~8ml。2.硝酸酸性以50mL中含稀硝酸10ml為宜。（1）避免弱酸銀鹽即氧化銀的生成（2）加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁3.試劑硝酸銀4.供試液和對照液稀釋后，再加硝酸銀溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀5.避光、暗處放置5分鐘后比濁，避免光線使單質(zhì)銀析出6.比色方法在黑色背景上，從上向下觀察，比較濁度7.平行原則（四）干擾及排除1.溶液不澄清以HNO3溶液洗凈濾紙中的Cl-，再以濾紙過濾供試品溶液。2.溶液有顏色（1）外消色法利用藥物的化學(xué)性質(zhì)外加試劑使溶液的顏色消除。 例：高錳酸鉀中氯化物的檢查先加適量乙醇，使高錳酸鉀還原褪色后依法檢查。（2）內(nèi)消色法（倍量法）取兩份供試品溶液1，2供1+AgNO3搖勻過濾供3供3+氯化鈉對照對照供2比濁3.藥物與硝酸銀反應(yīng)4.藥物不溶于水多采用加水振搖，使氯化物溶解，濾除不溶物再檢查；或以乙醇、丙酮溶解后檢查。5.有機氯雜質(zhì)二、硫酸鹽檢查法（一）原理：SO42-樣+Ba2+→BaSO4↓白SO42-標(biāo)+Ba2+→BaSO4↓白（二）檢查方法：取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成約40ml（溶液若顯堿性可滴加鹽酸使成中性；溶液若不澄清，應(yīng)濾過），置50ml納氏比色管中，加鹽酸2ml，搖勻，使得供試液。另取藥品項下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，得對照溶液。于供試液與對照液中，分別加入25%氯化鋇溶液5ml，用水稀釋至50ml，充分搖勻，放置10分鐘，同置黑色背景上，從比色管方向向下觀察，比較。（三）條件1.比色范圍標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：0.1mg/ml的SO42-在測定條件下，硫酸根的濃度以50ml中含0.1~0.5mg為合適，此范圍內(nèi)所顯渾濁梯度明顯，便于比較；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1~5ml。2.鹽酸酸性以50ml中含稀鹽酸2ml，PH值為1為宜（1）避免碳酸鋇與磷酸鋇生成（2）酸度影響硫酸鋇的溶解度，從而影響靈敏度3.沉淀劑25%的氯化鋇溶液稀釋后加入沉淀劑，立即充分搖勻，保證生成為白色渾濁而非沉淀。4.比色方法在黑色背景上，從上向下觀察，比較濁度。（四）干擾及排除1.溶液不澄清以HCl溶液洗凈濾紙中的SO42-，再以濾紙過濾供試品溶液2.溶液有顏色同氯化物三、鐵鹽檢查法（一）硫氰酸鹽法1.原理：鐵鹽在鹽酸酸性中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子。Fe3++6SCN-HCl[Fe(SCN)6]3-2.檢查方法：除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml，移置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻；如顯色，立即與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液一定量制成的對照溶液（取各藥品項下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成25ml，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻）比較，即得。3.條件：（1）比色范圍標(biāo)準(zhǔn)溶液：FeNH4(SO4)2·12H2O（10μgFe／ml）加硫酸防止水解。在測定條件下，50ml溶液中含有10~50ug的Fe3+時顯色梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1~5ml。（2）顯色劑：過量硫氰酸銨（3）鹽酸酸性防止水解，以50mL溶液中含4ml稀鹽酸為宜。（4）比色方法在白色背景上，從上向下觀察，比較顏色。（5）過硫酸銨氧化Fe2+為Fe3+防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色注意：某些藥物在檢查中已加硝酸處理，不需加過硫酸銨，但要加熱去除氧化氮。4.干擾（1）供試液若與對照液色調(diào)不一致，或生成物顏色淺不便比較時，可用正丁醇將生成物提取后比較。（2）具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機藥物，需經(jīng)700～800℃熾灼破壞，使鐵鹽成三氧化二鐵處理后再依法檢查。（3）干擾離子的影響（二）巰基醋酸法（BP）原理：巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，并在氨堿性溶液中作用生成紅色配位離子。注意：加巰基醋酸前先加20%的枸櫞酸溶液2ml四、重金屬檢查法重金屬：在實驗條件下與S2-可作用顯色的金屬雜質(zhì)，以鉛為代表原理：Pb2++S2-PbS↓硫化氫試液硫代乙酰胺試液硫化鈉試液重金屬檢查法（Ch.P）：共三法（一）第一法（硫代乙酰胺法）取藥品項下規(guī)定量的供試品，加醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2ml與水適量使成25ml，加硫代乙酰胺試液2ml，放置2分鐘后，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛同法制成的對照液比較。檢查重金屬，除供試管、對照管外、還應(yīng)有監(jiān)控管同時進(jìn)行比較。監(jiān)控管：供試品+標(biāo)準(zhǔn)鉛比較方法：供試管不得深于對照管，監(jiān)控管應(yīng)深于或等于對照管。條件：1.PH3.5CH3CSNH2+H2O-----CH3CONH2+H2SH2S+Pb2+--------PbS↓+2H+酸度大：硫化鉛呈色變淺甚至不呈色酸度?。翰灰咨闪蚧瘹?.標(biāo)準(zhǔn)鉛硝酸鉛：10ug/ml的Pb3.比色范圍27ml中含10~20ug的Pb，顯色梯度最為明顯；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛1~2ml。干擾及排除：1.樣品有色（1）外消色法：對照液中加稀焦糖溶液調(diào)色（2）內(nèi)消色法：供試液等分為兩份；一份加硫代乙酰胺，過濾，加標(biāo)準(zhǔn)鉛，為對照液2.微量高鐵鹽存在在弱酸性溶液中可氧化硫化氫析出硫，產(chǎn)生渾濁影響比色?？杉涌箟难峄螓}酸羥胺，使高鐵離子還原為亞鐵離子。3.若供試品為鐵鹽應(yīng)先除去供試品本身的鐵鹽，再進(jìn)行檢查。如：右旋糖苷鐵注射液在一定濃度鹽酸中，用乙酸異丁酯提取除去鐵鹽，依法檢查。4.供試品本身與硫離子反應(yīng)通過加入掩蔽劑排除干擾。（二）第二法（熾灼殘渣法）將供試品熾灼后檢查或取熾灼殘渣項下遺留的殘渣進(jìn)行檢查的方法。用于在水、乙醇中難溶，或能與重金屬離子形成配位化合物的有機藥物。操作步驟：1.碳化2.硫酸處理3.高溫灰化溫度越高，重金屬損失越多，一般控制在500~600oC即可使完全灰化。4.熾灼殘渣加硝酸加熱處理使有機物進(jìn)一步分解破壞完全5.蒸干除盡氧化氮防止亞硝酸氧化硫化氫析出硫6.加鹽酸使樣品成為氯化物7.水浴加熱除去鹽酸，加水溶解后以氨水調(diào)PH至對酚酞顯中性，加醋酸鹽緩沖液8.依一法檢查注意：對照溶液要平行操作注意：含鈉鹽或氟的有機物在熾灼時可腐蝕坩堝而引入重金屬，應(yīng)改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。（三）第三法（硫化鈉法）主要用于易溶于堿性條件而難溶于稀酸的藥物，如磺胺類、巴比妥類。檢查方法：取規(guī)定量的供試品，加氫氧化鈉試液5ml與水2ml溶解后，加硫化鈉試液5滴，再與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法處理后比較。注意：硫化鈉試液對玻璃有一定的腐蝕性，且久置后會產(chǎn)生絮狀物，應(yīng)臨用前新配。第一法適用范圍：在弱酸性水溶液實驗條件下，供試液澄清、無色，對檢查無干擾的藥物。第三法適用范圍：對于易溶于堿或經(jīng)除干擾處理后溶液顯堿性的，以第三法進(jìn)行檢查。PH顯色劑適用范圍第一法3~3.5硫代乙酰胺溶于水、稀酸乙醇藥物第二法3~3.5硫代乙酰胺不溶于水、稀酸的藥物第三法NaOH硫化鈉溶于堿的藥物五、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法1.原理：金屬鋅與酸作用生成新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，判斷藥物中砷鹽的含量。供試品HClH2OKISnCl2放置ZnPb(Ac)2HgBr245′對照液5ml至28ml5ml5滴10′2g棉花試紙比色3.條件：（1）比色范圍0.002mgAs3＋/33ml標(biāo)準(zhǔn)溶液：As2O3（1μgAs/ml）藥典規(guī)