纈沙坦研究方案

纈沙坦膠囊BE研究計劃與試驗方案臨床批件號2012L00759PAGE23PAGE20/19SFDA臨床研究批件號：2012L00759注冊分類：化學(xué)藥品第6類第四部分臨床試驗資料纈沙坦膠囊健康人體生物等效性試驗臨床研究計劃和試驗方案研究機構(gòu)：華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院新藥臨床試驗機構(gòu)研究機構(gòu)地址：武漢市解放大道1277號（郵政編碼：430022）研究機構(gòu)電話究機構(gòu)主要研究者姓名：黎維勇簽名：版本號：TJXH－VALS20120515v1申辦單位：江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司聯(lián)系電話系地址：江蘇省丹陽市經(jīng)濟開發(fā)區(qū)銀杏路8號（郵政編碼：212300）目錄TOC\o"1-2"\h\z\u目錄 1試驗概述 4倫理學(xué) 5縮略語 61.引言 72.試驗?zāi)康?83.試驗管理 83.1管理機構(gòu)和實施GCP的情況 83.2監(jiān)查制度 83.3研究中發(fā)生的問題及其處理措施 93.4試驗藥品的管理 93.5資料保存 94.試驗設(shè)計 95.受試者選擇 105.1入選標(biāo)準(zhǔn) 105.2排除標(biāo)準(zhǔn) 105.3退出標(biāo)準(zhǔn) 115.4剔除標(biāo)準(zhǔn) 115.5選擇受試者的步驟 115.6受試者篩選 116.受試制劑 117.參比制劑 128.給藥途徑、劑量及確定依據(jù) 129.試驗方法 1210.對受試者要求 1210.1受試者在治療或評價中的退出 1210.1.3伴隨用藥和治療 1310.2禁忌與限制 1311.生物標(biāo)本采集 1311.1樣本名稱 1311.2采集時間和處置方法 1312.生物樣本藥物測定方法及認證 1412.1特異性 1412.2標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 1412.3精密度與準(zhǔn)確度 1412.4定量下限 1512.5提取回收率 1512.6方法學(xué)質(zhì)控 1512.7樣本穩(wěn)定性考察 1512.8基質(zhì)效應(yīng) 1613.研究數(shù)據(jù) 1613.1數(shù)據(jù)處理 1613.2統(tǒng)計方法 1613.3藥動學(xué)參數(shù) 1614.生物等效性評價 1615.AE的記錄和報告 1715.1AE的記錄 1716.聲明及簽字 1816.1申辦者聲明 1816.2研究者聲明 1917.主要參考文獻 19保密聲明本文所含信息均屬機密，并為江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司所有。本方案提供有關(guān)信息的目的在于為江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司進行一項臨床試驗，研究者可以本著同樣的目的在符合下列條件的基礎(chǔ)上將方案中的內(nèi)容透露給試驗的參加人員或研究者機構(gòu)審查委員、倫理委員會或藥事管理委員會。本方案的內(nèi)容不能用在其他臨床試驗中，也不能在事先未經(jīng)江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司書面許可的情況下擅自將本方案內(nèi)容透露給其他任何個人或集體。盡管該條件不適用于政府法規(guī)所要求的公開，但研究者必須及時將其通知給江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司。另外，對本方案進行增補的任何信息也屬機密，并為江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司所有，其機密原則同方案內(nèi)容。保密并僅用于經(jīng)江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司授權(quán)的事項，未經(jīng)事先書面許可不得向任何他人公開。若事先未獲得授權(quán)而持有本方案，請及時與江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司聯(lián)系，并將方案和其復(fù)印件交還該公司。

試驗概述本研究將采用開放、隨機、交叉的試驗設(shè)計，評估國產(chǎn)甲磺酸多沙唑嗪片空腹口服的生物等效性。20位健康志愿受試者隨機分成2組，每組10人，分別口服試驗藥或?qū)φ账幐?0mg，1周后交叉給藥。受試者在試驗前1天晚餐后禁食。第二天早8：00空腹分別口服試驗藥物或參比藥物(80mg/人)，用250ml溫水送服，服藥2小時后才能自由進水，服藥4小時后進統(tǒng)一低脂肪餐，實驗期間禁煙、酒和茶，并禁服任何其它藥物。在每次服藥前和給藥后24小時內(nèi)將采血13次，采靜脈血3ml于含肝素鈉的潔凈試管中，離心取血漿，以反相高效液相色譜-熒光檢測法測定血漿中藥物濃度。試驗期間由醫(yī)生負責(zé)臨床觀察，填寫體檢表，記錄臨床癥狀，由護士采血供試驗測定用。在篩選期受試者臨床實驗室檢查、心電圖檢查和全面體格檢查。試驗流程圖篩選入選和隨機分組第一次給藥受試者空腹后口服受試制劑T或參比制劑R至少間隔7天第二次給藥受試者空腹后交叉口服另一制劑受試者體檢，試驗結(jié)束

倫理學(xué)機構(gòu)審查委員會和倫理委員會試驗開始前，研究者需將本研究方案、知情同意書、有關(guān)當(dāng)局的批件和藥檢報告以及任何征召受試者的廣告等遞呈機構(gòu)審查委員會、倫理委員會或具有同等權(quán)力的組織審批，書面批件應(yīng)由研究者遞交江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司。知情同意書知情同意書需遞交有關(guān)的倫理委員會審批，每份知情同意書必須包括所有的有關(guān)內(nèi)容，包括一項聲明，即江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司有權(quán)根據(jù)當(dāng)局要求或政策規(guī)定查閱受試者試驗記錄。在每位可能的受試者參加任何與該試驗有關(guān)的活動之前，必須將試驗的益處和風(fēng)險全部向他們解釋清楚。在解釋了有關(guān)試驗的基本內(nèi)容，并且研究者已確信每位將參加試驗的受試者理解試驗的目的后，應(yīng)要求每位將參加試驗的受試者在知情同意書上簽上姓名和日期，研究者必須向受試者提供一份知情同意書的復(fù)印件。

縮略語短語和專門術(shù)語 解釋ALT/SGPT 丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶AST/SGOT 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶AE 不良事件AUC0t從零到最后可測濃度的血藥濃度-時間曲線下面積AUC0從零到無窮大時間內(nèi)血藥濃度-時間曲線下面積CRF 病例報告表Cmax觀察到的最高血藥濃度CL/f 表觀清除率ECG 心電圖EC 倫理委員會F相對生物利用度GCP 藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范LLOQ 定量下限MRT 平均滯留時間QA質(zhì)量保證QC質(zhì)量控制SAE 嚴重不良事件SFDA 國家食品藥品監(jiān)督管理局SOP標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程Tmax觀察到的達峰濃度的時間t1/2末端消除半衰期Vd表觀分布體積1.引言纈沙坦為血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑，能選擇性地阻斷AngⅡ與AT1受體的結(jié)合（其特異性拮抗AT1受體的作用大于AT2約20,000倍），從而抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產(chǎn)生降壓作用。本品不作用于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）、腎素及其他受體；不抑制與血壓調(diào)節(jié)和鈉平衡有關(guān)的離子通道；不影響體內(nèi)緩激肽水平，因而導(dǎo)致咳嗽的副作用少于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑。臨床上主要用于治療原發(fā)性高血壓。毒理：大鼠每日灌服纈沙坦，連續(xù)3個月，劑量分別為60、200、600mg/kg，結(jié)果大劑量組動物水?dāng)z入量和血尿量稍增加，雄性大鼠輕度腎小球增生和嗜堿細胞增加，雌性大鼠腎小球輸入小動脈肥大，恢復(fù)期結(jié)束后未見異常。大鼠灌服纈沙坦最高劑量達200mg/kg/日(部分動物6個月)，連續(xù)12個月，猴口服纈沙坦最高劑量120mg/kg/日，連續(xù)12個月，均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。試驗表明纈沙坦無遺傳毒性且無致癌作用。生殖毒性試驗表明本品在大劑量時可能有輕微的生殖毒性，因此妊娠與哺乳期婦女禁用。本品不良反應(yīng)發(fā)生率約為7.1%，與安慰劑相似。常見的不良反應(yīng)為頭痛和水腫，一般程度輕微且呈一過性，多數(shù)患者可以耐受。其他不良反應(yīng)包括腹瀉、偏頭痛，偶爾可導(dǎo)致轉(zhuǎn)氨酶增加、白細胞及血小板減少、高血鉀等，極少有蕁麻疹及血管神經(jīng)性水腫發(fā)生。在高血壓患者的臨床試驗中還觀察到以下不良事件（無論是否與研究藥物有關(guān)）：關(guān)節(jié)痛、無力，背痛、腹瀉，頭暈，頭痛、失眠、性欲降低、惡心、水腫、咽炎，鼻炎，竇炎，上呼吸道感染、病毒感染。藥代動力學(xué)：纈沙坦口服后吸收迅速，絕對生物利用度為25%，進食后服藥吸收率降低46%，但臨床療效無明顯降低，因此飯前飯后服用均可。血漿達峰時間為2～3小時，消除半衰期為6～7小時，血漿蛋白結(jié)合率為94%～97%。每日服藥1次，三天后血藥濃度達穩(wěn)態(tài)。纈沙坦以原型藥物代謝，主要(70%)經(jīng)膽道排泄，其余通過腎臟排泄。根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）“藥品注冊管理辦法”規(guī)定，若需申請纈沙坦膠囊《仿制藥生產(chǎn)許可證》，要考核其人體生物等效性，故特制定本研究方案以評價纈沙坦膠囊的人體生物等效性。2.試驗?zāi)康谋驹囼災(zāi)康氖窃u價健康中國男性受試者空腹口服纈沙坦膠囊（受試制劑T）和北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)的纈沙坦膠囊（代文，參比制劑）后的藥代動力學(xué)特點和生物等效性。3.試驗管理3.1管理機構(gòu)和實施GCP的情況3.1.1申辦者和研究者均應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行臨床試驗的QC和QA系統(tǒng)。3.1.2原始資料必須符合中國GCP要求。3.1.3實驗室檢查結(jié)果必須準(zhǔn)確可靠。3.1.4所用觀察結(jié)果和發(fā)現(xiàn)都應(yīng)加以核實，以保證數(shù)據(jù)的可靠性。3.1.5建立完整的試驗組織機構(gòu)，明確各級人員職責(zé)。3.1.6由主要研究者負責(zé)全面質(zhì)量控制，執(zhí)行各級人員職責(zé)。3.1.7由主要研究者負責(zé)設(shè)計試驗方案、CRF，并經(jīng)申辦者同意后使用。試驗結(jié)束后寫出試驗的總結(jié)報告。3.1.8由指定研究者負責(zé)制定試驗實施細則和SOP，在試驗中使用。3.1.9試驗前由試驗小組組織全體參加者學(xué)習(xí)方案，試驗參加人員均經(jīng)過GCP培訓(xùn)并獲相應(yīng)證書。3.1.10參加試驗的醫(yī)師、護士要嚴格遵守方案的規(guī)定，按程序進行，不得隨意更改。3.1.11由指定統(tǒng)計人員負責(zé)數(shù)據(jù)的全面統(tǒng)計學(xué)處理。3.1.12由專人負責(zé)CRF的保管，試驗結(jié)束后統(tǒng)一上交機構(gòu)辦公室歸檔。3.2監(jiān)查制度3.2.1由申辦者派監(jiān)查員對本試驗進行監(jiān)督，確保試驗按方案規(guī)定進行，確保CRF所記錄數(shù)據(jù)與原始數(shù)據(jù)相同。3.3研究中發(fā)生的問題及其處理措施3.3.1方案的修訂：本方案經(jīng)EC會批準(zhǔn)后，若要修改，需制定“方案修改說明書”，并由主要研究者簽字，經(jīng)申辦者同意后方可修改方案。3.3.2方案修改后，需報EC審查后方可執(zhí)行。3.3.3任何參加試驗的人員不得違背方案。若發(fā)生違背方案事件，需寫出說明并通知申辦者，后者有權(quán)決定試驗是否繼續(xù)。3.3.4試驗過程中發(fā)生任何AE或SAE，將按照該方案“153.4試驗藥品的管理3.4.1申辦者需攜帶藥品合格證書復(fù)印件、主要研究者申請書及試驗藥品到研究機構(gòu)辦理登記手續(xù)，藥品存放在專門地點。3.4.2藥品由專人管理，嚴格按照已有的SOP，并符合相應(yīng)的藥品管理規(guī)定。3.4.3試驗藥品僅供試驗使用，不可用于其他任何情況。3.4.4使用藥品情況均需詳細記錄在原始病歷上，發(fā)藥者簽名并注明日期和時間。3.4.5試驗結(jié)束后，剩余藥品由申辦者清點后收回。3.5資料保存3.5.1試驗記錄保存：原始記錄隨CRF在機構(gòu)保存。3.5.2CRF（1）按GCP原則進行CRF填寫，保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。（2）由專人按原始記錄填寫CRF。（3）最后由主要研究者審核后在CRF上簽字。4.試驗設(shè)計采用隨機交叉對照實驗設(shè)計，將20位健康志愿受試者隨機分成2組，每組10人，分別口服試驗藥或?qū)φ账幐?0mg，1周后交叉。受試者在試驗前1天晚餐后禁食（約10h）。第二天早8：00空腹分別口服試驗藥物或參比藥物(80mg/人)，統(tǒng)一用250ml溫水送下，服藥2小時后才能自由進水，服藥4小時后進統(tǒng)一低脂肪餐，實驗期間禁煙、酒和茶，并禁服任何其它藥物。服藥前取空白血，服藥后0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、3.5、4、6、8、12、24、30小時取前臂靜脈血3ml于含肝素鈉的潔凈試管中，立即離心取血漿，置－70℃冰箱中保存至測定，以液質(zhì)聯(lián)用分析方法測定血漿中藥物濃度。試驗期間由醫(yī)生負責(zé)臨床觀察，填寫體檢表，記錄臨床癥狀，由護士采血供試驗測定用。5.受試者選擇5.1入選標(biāo)準(zhǔn)（1）健康志愿者；（2）年齡：18～40歲，同批受試者年齡相差小于10歲；（3）性別：男性；（4）體重：不低于50kg，體重指數(shù)[＝體重kg/(身高m)2]在19～24之間；（5）體格檢查無異常發(fā)現(xiàn)者；一般體格檢查，血壓、心率、心電圖、肝腎功能、血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)及胸透檢查無異常；（6）收縮壓≥90mmHg，舒張壓≥60mmHg者；（7）自愿參加試驗并簽署知情同意書。5.2排除標(biāo)準(zhǔn)（1）體檢不符合上述受試者健康標(biāo)準(zhǔn)者；（2）有藥物濫用史、有明顯煙酒嗜好者；（3）3個月內(nèi)參加過其他藥物試驗者；（4）近2周內(nèi)用過已知對某臟器有損害藥物，或目前正在應(yīng)用其他預(yù)防或治療藥物者；（5）有慢性或復(fù)發(fā)性心血管、肝、腎、消化道、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)疾病史者；（6）已知對研究藥物同類有過敏史者；（7）最近3月內(nèi)獻血者。5.3退出標(biāo)準(zhǔn)（1）受試者依從性差，不能按時按量用藥；（2）受試者不愿意繼續(xù)進行臨床試驗，向主管醫(yī)生提出退出者。5.4剔除標(biāo)準(zhǔn)（1）不符合入選標(biāo)準(zhǔn)者；（2）符合排除標(biāo)準(zhǔn)者；（3）一次藥未用者；（4）無任何記錄者。5.5選擇受試者的步驟（1）經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，征集志愿者自愿報名；（2）在向志愿者告知本試驗各方面情況后，志愿者簽署知情同意書；（3）經(jīng)研究者按篩選表問訊，進行體格檢查和實驗室檢查，符合入選標(biāo)準(zhǔn)，不屬排除標(biāo)準(zhǔn)所列任何情況者，并能按時參加試驗者則納為正式志愿受試者。5.6受試者篩選生命體征包括血壓、心率、呼吸、脈搏檢查，體格檢查，ECG和臨床實驗室檢查在篩選進行。實驗室檢查項目如下：（1）血液學(xué)：白細胞計數(shù)和分類、血紅蛋白、血球壓積、血小板計數(shù)和紅細胞計數(shù)。（2）血液生化：總膽紅素、直接膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮、肌酐、尿酸、葡萄糖；Na＋、K＋、Ca2＋。（3）尿液分析：pH值、蛋白、葡萄糖、酮體、比重、紅細胞、白細胞。6.受試制劑T：纈沙坦膠囊，規(guī)格：80mg，江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司研制，批號：20120415，保存條件：遮光、密閉，陰涼處保存；有效期：暫定24個月。7.參比制劑R：纈沙坦膠囊，規(guī)格：80mg，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號：待定，保存條件：遮光，密封，在30℃以下保存；有效期：36個月。8.給藥途徑、劑量及確定依據(jù)由于受試制劑為膠囊，通過口腔口服給藥。本試驗根據(jù)文獻報道的劑量范圍和參比制劑的臨床常用劑量，確定該試驗的劑量為受試制劑纈沙坦膠囊1粒（80mg）或參比制劑1粒（80mg）。9.試驗方法受試者一旦入選，采用DAS2.0軟件進行分組。受試者禁食10小時后，次日晨空腹給予受試制劑纈沙坦膠囊1粒、或給予參比制劑北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)的纈沙坦膠囊1粒。用250ml溫水送服。受試者服藥后2小時內(nèi)禁水，并在4小時后給予統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)午餐。在每次服藥前和給藥后24小時內(nèi)將采血13次，血樣用于測定纈沙坦的血藥濃度以評估國產(chǎn)纈沙坦膠囊與參比制劑的生物等效性，并在24小時內(nèi)以一定的間隔觀察生命體征以評估其安全性。經(jīng)過至少7天的清洗期后，受試者于第二階段服用另一種藥物。在篩選期和最后一次采血結(jié)束后，所有受試者將分別作全面體格檢查、12導(dǎo)聯(lián)心電圖和臨床實驗室檢查。10.對受試者要求10.1受試者在治療或評價中的退出10在研究者的觀察下，受試者可以在任何時間退出，退出的原因列舉如下：（1）在任何時間，受試者都有權(quán)決定撤回知情同意而退出研究并不會影響其今后的治療和觀察；（2）申辦者江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司認為由于安全原因，中止研究；（3）任何SAE的發(fā)生；（4）試驗方案的順應(yīng)性很差；（5）不符合入選（剔除標(biāo)準(zhǔn)）而入選的試驗對象或非正確隨機化的試驗對象；（6）在研究期間（包括服藥期和清洗期）服用除研究藥物以外的其他藥物；（7）失隨訪；（8）違反試驗方案，尤其是漏服試驗用藥。10.1.2退出程序受試者可在任何時間自由退出試驗，其以后的治療及隨訪不會因此受影響。研究者應(yīng)詢問退出的原因，是否發(fā)生任何AE。如有可能，受試者應(yīng)完成最后一次隨訪，進行實驗室檢查和AE記錄，并需追蹤其AE。10.1.3伴隨用藥和治療除非試驗方案中有說明，否則在試驗期間受試者不得服用任何其他藥物(包括中草藥制劑)。10.2禁忌與限制（1）受試者在服藥前至少禁食10小時和服藥后4小時內(nèi)禁食，2小時內(nèi)禁水；（2）受試者在試驗前至少12小時及試驗中不得吸煙和飲用含咖啡因或酒精的飲料；（3）受試者每次服藥都必須留在研究場所一天一夜；（4）受試者在整個研究過程中必須避免劇烈的體力活動，亦不得長時間臥床。11.生物標(biāo)本采集11.1樣本名稱血漿。11.2采集時間和處置方法給藥前在受試者肘靜脈處安放一留置針，每次采血前抽0.3ml棄去，分別于給藥前和給藥后0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、3.5、4、6、8、12、24、30小時（共14點）抽血3.0ml，置于事先已經(jīng)貼好標(biāo)簽的試管內(nèi)，3000rpm離心10min，血漿轉(zhuǎn)移至塑料試管中置7012.生物樣本藥物測定方法及認證按照參考文獻的方法并加以改進，采用反相高效液相色譜-熒光檢測法測定血漿中纈沙坦的濃度。生物樣本的測定、藥動學(xué)參數(shù)計算及數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院新藥臨床試驗機構(gòu)具體負責(zé)。12.1特異性本實驗建立的方法用于測定血漿中纈沙坦的含量，結(jié)果應(yīng)證明無內(nèi)源性物質(zhì)或代謝物干擾本品的測定。12.2標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍使用與待測樣品相同的生物介質(zhì)，不同生物樣品應(yīng)配制標(biāo)準(zhǔn)樣品制備各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。必須至少用6個濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點。定量范圍要能覆蓋全部待測的生物樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點，僅用于評價干擾。當(dāng)線性范圍較寬的時候，推薦采用加權(quán)的方法對標(biāo)準(zhǔn)曲線進行計算，以使低濃度點計算得比較準(zhǔn)確。用回歸分析方法計算的回歸方程，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.95。12.3精密度與準(zhǔn)確度精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)來考察方法的精密度。一般RSD應(yīng)小于15%，在LLOQ附近RSD應(yīng)小于20%。準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實濃度的接近程度（即質(zhì)控樣品的實測濃度與真實濃度的偏差），重復(fù)測定已知濃度分析物樣品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng)在85%～115%范圍內(nèi)，在LLOQ附近應(yīng)在80%～120%范圍內(nèi)。一般要求選擇3個濃度的質(zhì)控樣品同時進行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在LLOQ的3倍以內(nèi)；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；中間選一個濃度。每一濃度至少制備并測定5個樣品，為獲得批間精密度應(yīng)至少在不同天連續(xù)制備并測定3個合格的分析批。12.4定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度與精密度要求的最低藥物濃度。LLOQ應(yīng)能滿足測定3~5個半衰期時樣品中的藥物濃度或能檢測出Cmax的1/10~1/20時藥物濃度，其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實濃度的80%～120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%。應(yīng)由至少5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明。12.5提取回收率從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值與純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值的比值即為分析物的提取回收率。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取出來供分析的比例。應(yīng)考察各種藥物的高、中、低3個濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)一致、精密和可重現(xiàn)。12.6方法學(xué)質(zhì)控應(yīng)在生物樣本分析方法確證完成以后開始測定未知樣品。在測定生物樣品中的藥物濃度時進行質(zhì)量控制，以保證所建立的方法在實際應(yīng)用中的可靠性。推薦由獨立的人員配制不同濃度的質(zhì)控樣品對分析方法進行考核。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進行復(fù)測。每個分析批生物樣品測定時應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定各成分的高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。每個濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中。當(dāng)一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許1/3不在同一濃度的質(zhì)控樣品超限。濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測定。對于定量下限的樣品，在進行藥動學(xué)分析時，在達到Cmax以前取樣的樣品以零值計算，在達到Cmax以后取樣的樣品以無法定量（ND）計算。12.7樣本穩(wěn)定性考察對含藥生物樣品在室溫、冰凍（－70℃）和凍融（3次）條件下以及不同存放時間進行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。同時考察儲備液（4℃）的穩(wěn)定性以及樣品處理后溶液中分析物的穩(wěn)定性（室溫和進樣器中放置若干小時），以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。12.8基質(zhì)效應(yīng)從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值與有基質(zhì)存在時分析物產(chǎn)生的響應(yīng)值的比值即為分析物的基質(zhì)效應(yīng)。應(yīng)考察各種藥物的高、中、低3個濃度的基質(zhì)效應(yīng)，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)一致、精密和可重現(xiàn)。13.研究數(shù)據(jù)13.1數(shù)據(jù)處理分別計算纈沙坦的血藥濃度和藥動學(xué)參數(shù)。本實驗所測得的血藥濃度數(shù)據(jù)用非房室模型進行計算，Cmax和Tmax用實測值表示；AUC0-t用梯形法計算，AUC0-=AUC0-t+Ctn/λz，tn是最后一次可實測濃度的取樣時間；Ctn是末次可測定樣本藥物濃度；λz是系對數(shù)血藥濃度-時間曲線末端直線部分求得的末端消除速率常數(shù)，可用對數(shù)血藥濃度-時間曲線末端直線部分的斜率求得；t1/2用公式t1/2＝0.693/λz計算。并根據(jù)以下公式計算試驗藥的相對生物利用度(F值)：F=(AUCT)/(AUCR)100％AUCT：受試制劑T的藥-時曲線下面積，AUCR：參比制劑R的藥-時曲線下面積，13.2統(tǒng)計方法試驗數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）和相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，藥動學(xué)參數(shù)用SPSS16.0軟件包進行方差分析（ANOV），顯著差異的標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05。13.3藥動學(xué)參數(shù)主要藥動學(xué)參數(shù)包括：AUC0-t、AUC0-、Cmax、Tmax、MRT和t1/2等，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的AUC0-t的90%可信限在參比制劑的80125%之間，受試制劑的Cmax在參比制劑的75133%之間，則可認為兩種制劑等效。14.生物等效性評價將受試制劑與參比制劑的AUC0-t、和Cmax經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后用雙單側(cè)t檢驗和置信區(qū)間法確定是否符合生物等效性要求，Tmax經(jīng)非參數(shù)法檢驗應(yīng)無顯著差異，則認為兩種制劑生物等效。15.AE的記錄和報告15.1AE的記錄AE受試者在試驗過程中發(fā)生的任何AE必須記錄在相應(yīng)的CRF中。此外在每次檢測受試者的生命體征和采血時，參加試驗的護士或醫(yī)師均需用間接提問的方式詢問AE的發(fā)生情況。及時和完整的AE報告可幫助申辦者確定其是否可能為藥物相關(guān)性事件，從而更多地了解藥物毒性；找出藥物的劑量相關(guān)毒性；修正研究方案；遵守法規(guī)以保護受試者、處方醫(yī)師和申辦者?！把芯克幬铩倍x為所研究的制劑及用于研究的參比制劑。本試驗的研究藥物為江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司研制生產(chǎn)的纈沙坦膠囊和北京諾華制藥有限公司的參比制劑纈沙坦膠囊（代文）?！芭R床AE”是指在研究過程中出現(xiàn)的或惡化的疾病、體征或癥狀。通過研究者對受試者的詢問和體檢，所有的臨床AE，不管其是否被研究者