免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展課件

一、免疫學(xué)基本原理二、免疫沉淀三、免疫比濁技術(shù)原理免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展一、免疫學(xué)基本原理免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展1一、免疫學(xué)基本原理1、抗原與抗體2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)3、免疫學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)一、免疫學(xué)基本原理1、抗原與抗體21、抗原與抗體抗原（Antigen,Ag）是刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。

“應(yīng)”是指抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答產(chǎn)物--抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞“答”是指相應(yīng)抗原與免疫應(yīng)答產(chǎn)物結(jié)合并將其排除體外）抗原的免疫原性和免疫反應(yīng)性完全抗原與半抗原抗原表位與抗原結(jié)合價(jià)位1、抗原與抗體抗原（Antigen,Ag）是刺激機(jī)體產(chǎn)生免31、抗原與抗體1、抗原與抗體41、抗原與抗體免疫原性免疫原性（immunogenecity）是指抗原分子能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答（產(chǎn)生特異性抗體及免疫效應(yīng)細(xì)胞）的性質(zhì)。AgTB致敏T細(xì)胞活化漿細(xì)胞抗體免疫原性示意圖1、抗原與抗體免疫原性免疫原性（immunogene51、抗原與抗體免疫反應(yīng)性：是指抗原分子與免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞）發(fā)生特異性結(jié)合的性質(zhì)。AgTB致敏T細(xì)胞漿細(xì)胞

抗原性（免疫反應(yīng)性）示意圖抗體1、抗原與抗體免疫反應(yīng)性：是指抗原分子與免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或61、抗原與抗體完全抗原（completeantigen)具有免疫原性和抗原性的物質(zhì)。半抗原（hapten，又稱不完全抗原incompleteantigen）無(wú)免疫原性，只有抗原性的物質(zhì)。載體（carrier）賦予半抗原以免疫原性的蛋白質(zhì)。半抗原+蛋白質(zhì)（載體）＝完全抗原。1、抗原與抗體完全抗原（completeantigen)7半抗原

+載體抗體BTh完全抗原BBBTh半抗原—載體效應(yīng)示意圖半抗原+蛋白質(zhì)（載體）＝完全抗原半抗原+載體抗體BTh完全抗原BBBTh半抗原—載體效應(yīng)示81、抗原與抗體抗原決定簇：抗原分子存在的能TCR/BCR或抗體Fab片段特異性結(jié)合的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫應(yīng)答特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。構(gòu)象決定簇：構(gòu)象決定簇（conformationaldeterminant）由空間構(gòu)象形成的決定簇，序列上不連續(xù)。順序決定簇：順序決定簇（sequencedeterminant），又稱線性決定簇（lineardeterminant），序列相連續(xù)的氨基酸肽片段構(gòu)成的決定簇。抗原結(jié)合價(jià)：抗原結(jié)合價(jià)（antigenicvalence）是指能夠與抗體分子結(jié)合的決定簇?cái)?shù)目。1、抗原與抗體抗原決定簇：抗原分子存在的能TCR/BCR或抗91、抗原與抗體1、抗原與抗體101、抗原與抗體抗原表位的性質(zhì)、數(shù)目、位置、空間排列和立體構(gòu)象決定著抗原-抗體反應(yīng)的高度特異性。1、抗原與抗體抗原表位的性質(zhì)、數(shù)目、位置、空間排列和立體構(gòu)象111、抗原與抗體共同表位（commonepitope）指不同抗原之間含有的相同或相似的抗原表位。交叉反應(yīng)（cross-reaction）指抗體或致敏淋巴細(xì)胞對(duì)具有相同或相似表位的不同抗原均具有的反應(yīng)（交叉結(jié)合）。1、抗原與抗體共同表位（commonepitope）指不同121、抗原與抗體抗體（antibody,Ab）功能性概念是由抗原刺激而產(chǎn)生并能與刺激其產(chǎn)生的抗原發(fā)生特異性結(jié)合的、具有免疫功能的球蛋白?？贵w主要存在血清中，也存在于如呼吸道粘膜液、小腸粘膜液、唾液以及乳汁等其它體液中。

免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）結(jié)構(gòu)性概念

具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體分子相似的球蛋白。

抗體一定是球蛋白，球蛋白未必是抗體

1、抗原與抗體抗體（antibody,Ab）功能性概念131、抗原與抗體抗體的分子結(jié)構(gòu)1、抗原與抗體抗體的分子結(jié)構(gòu)141、抗原與抗體“Y”型，四肽鏈重鏈

（5種:、

、、、）

輕鏈（2種:、）可變區(qū)

（V區(qū)）

超變區(qū)（又稱CDR互補(bǔ)決定區(qū)）

骨架區(qū):FR恒定區(qū)（C區(qū)）鉸鏈區(qū)1、抗原與抗體“Y”型，四肽鏈15免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展課件161、抗原與抗體根據(jù)重鏈抗原性的不同，免疫球蛋白可以分為5類：IgG—γ(gamma)IgA—α(alpha)IgM—μ(mu)IgD—δ(delta)IgE—ε(epsilon)1、抗原與抗體根據(jù)重鏈抗原性的不同，免疫球蛋白可以分為5類：17免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展課件181、抗原與抗體根據(jù)輕鏈C區(qū)抗原性不同，免疫球蛋白可分為2型)

κ(kappa)型λ(lambda)型輕鏈存在于各類免疫球蛋白中同一個(gè)免疫球蛋白分子中的輕鏈同型1、抗原與抗體根據(jù)輕鏈C區(qū)抗原性不同，免疫球蛋白可分為2型)191、抗原與抗體抗體的生物學(xué)功能——特異性結(jié)合抗原超變區(qū)－表位靜電力、氫鍵、范德華力可逆影響因素：PH、溫度、電解質(zhì)

結(jié)合基礎(chǔ)1、抗原與抗體抗體的生物學(xué)功能——特異性結(jié)合抗原結(jié)合基礎(chǔ)202、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的原理抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于兩種分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性，這兩種特性是由抗原與抗體分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定的?？乖贵w反應(yīng)可分為兩個(gè)階段。第一為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應(yīng)快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。第二為可見(jiàn)反應(yīng)階段，抗原抗體復(fù)合物在環(huán)境因素（如電解質(zhì)、pH、溫度、補(bǔ)體）的影響下，進(jìn)一步交聯(lián)和聚集，表現(xiàn)為凝集、沉淀、溶解、補(bǔ)體結(jié)合介導(dǎo)的生物現(xiàn)象等肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)?？乖贵w的結(jié)合使電荷減少或消失，蛋白質(zhì)由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。四種分子間引力（電荷引力、范登華引力、氫鍵結(jié)合力和疏水作用）參與并促進(jìn)抗原抗體間的特異性結(jié)合。2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的原理212、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)典型的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特異性識(shí)別形成抗原抗體復(fù)合物2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)典型的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特異性222、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性按比例可逆性2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性232、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)242、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)影響抗原抗體反應(yīng)的因素電解質(zhì)（離子強(qiáng)度）：抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無(wú)電解質(zhì)參加，仍不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1－，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢(shì)下降。當(dāng)電勢(shì)降至臨界電勢(shì)（12～15mV）以下時(shí)，則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見(jiàn)的沉淀物或凝集物。酸堿度（pH）：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行。蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn)?？乖贵w反應(yīng)一般在pH為6～8進(jìn)行。PH過(guò)高或過(guò)低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)，例如pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時(shí)，即使無(wú)相應(yīng)抗體存在，也會(huì)引起顆粒性抗原非特異性的凝集，造成假陽(yáng)性反應(yīng)。溫度：在一定范圍內(nèi)，溫度升高可加速分子運(yùn)動(dòng)，抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多，使反應(yīng)加速。但若溫度高于56℃時(shí)，可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；在40℃時(shí)，結(jié)合速度慢，但結(jié)合牢固，更易于觀察。常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃。每種試驗(yàn)都有其獨(dú)特的最適反應(yīng)溫度，例如冷凝集素在4左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。其它：適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸，加速反應(yīng)。2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)影響抗原抗體反應(yīng)的因素253、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)凝集與沉淀比濁電位、微天平放射性核素標(biāo)記酶標(biāo)記、熒光標(biāo)記和膠體金標(biāo)記化學(xué)發(fā)光物標(biāo)記或偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)

非標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)3、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)凝集與沉淀放射性核素標(biāo)記非標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)26二、免疫沉淀凝集：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖?，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為凝集反應(yīng)（agglutination）是最經(jīng)典的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

二、免疫沉淀凝集：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖?，在適當(dāng)電解27二、免疫沉淀免疫沉淀反應(yīng):(precipitation)

可溶性抗原與相應(yīng)抗體，在適宜條件下發(fā)生結(jié)合，出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。免疫沉淀液體內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)免疫電泳技術(shù)免疫濁度技術(shù)絮狀沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)試管法平板法免疫電泳對(duì)流免疫電泳火箭免疫電泳免疫固定電泳透射免疫比濁t(yī)urbidimetermeasure散射免疫比濁nephelomitermeasure二、免疫沉淀免疫沉淀反應(yīng):(precipitation)

281:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗體量不變振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同試管內(nèi)絮狀沉淀試驗(yàn)輕搖絮狀沉示意圖淀AgAbAg1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原29AbAg凝膠內(nèi)沉淀——試管法單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)AbAg凝膠內(nèi)沉淀——試管法單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)30凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)——平板法標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測(cè)定不同病人抗原濃度測(cè)定原理

將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中，使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，與相應(yīng)抗體結(jié)合形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原濃度呈正相關(guān)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)——平板法標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測(cè)定不同病人抗原濃度測(cè)31

凝膠內(nèi)沉淀——雙向瓊脂擴(kuò)散原理示意圖AbAg模擬圖染色瓊脂圖1.抗原抗體雙向自由擴(kuò)散2.24小時(shí)出結(jié)果3.呈現(xiàn)沉淀線或弧凝膠內(nèi)沉淀——雙向瓊脂擴(kuò)散原理示意圖AbAg模擬圖染色瓊脂32三、免疫比濁技術(shù)原理

當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，二者比例合適時(shí)，在特殊的緩沖液中它們快速形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液體出現(xiàn)濁度。利用現(xiàn)代光學(xué)測(cè)量?jī)x器對(duì)濁度進(jìn)行測(cè)定從而檢測(cè)抗原含量。檢測(cè)器光源透鏡濾光片平光線散射透射光三、免疫比濁技術(shù)原理當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，33λ光波比濁測(cè)定法原理示意圖d當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的1/20時(shí)，形成不對(duì)稱前向散射，在90o以前的角度測(cè)量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表復(fù)合物的量當(dāng)復(fù)合物小于入射波長(zhǎng)時(shí)呈全透射，透射與散射相當(dāng)λ光波比濁測(cè)定法原理示意圖d當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的1/20時(shí)34三、免疫比濁技術(shù)原理免疫比濁技術(shù)分類：按光路透射免疫比濁散射免疫比濁按測(cè)定時(shí)間終點(diǎn)比濁速率比濁按增敏劑無(wú)增敏PEG增敏膠乳增敏三、免疫比濁技術(shù)原理免疫比濁技術(shù)分類：按光路透射免疫比濁按測(cè)35透射比濁法和散射比濁法光路檢測(cè)器A檢測(cè)器BIC

I0

Iθ

Iθ

透射比濁法

散射比濁法透射免疫比濁法是在180°角，即在直射角度上測(cè)定光透射強(qiáng)度。散射比濁法在光路的5°～96°角的方向上測(cè)量散射光強(qiáng)度。透射比濁法和散射比濁法光路檢測(cè)器A檢測(cè)器BICI0Iθ36單色器透射比濁計(jì)散射比濁計(jì)散射比濁和透射比濁的區(qū)別示意圖θ透射光散射光散射光單色器透散射散射比濁和透射比濁的區(qū)別示意圖θ透射光散射光37透射免疫比濁法

（transmissionturbidimetry原理抗原與抗體在一定緩沖液中形成IC，當(dāng)光線透過(guò)反應(yīng)溶液時(shí)，由于溶液內(nèi)IC粒子對(duì)光線的反射和吸收，引起透射光減少，IC越多透射光越少，可用吸光度表示。透射免疫比濁法

（transmissiont38透射免疫比濁法溶液中形成的復(fù)合物分子應(yīng)足夠大(35-100nm)溶液中形成的復(fù)合物分子要足夠多控制抗原抗體反應(yīng)的溫度和時(shí)間加增敏劑，提高復(fù)合物形成速度，縮短檢測(cè)時(shí)間應(yīng)選擇親和力好、效價(jià)高的抗體，保證抗體過(guò)量將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至少5個(gè)濃度測(cè)定，以吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，在半對(duì)數(shù)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線反應(yīng)要求透射免疫比濁法溶液中形成的復(fù)合物分子應(yīng)足夠大(35-100n39透射免疫比濁法靈敏度較低。要求抗原－抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大、足夠多，分子太小則入射光直接通過(guò)。加增敏劑。直線光路，靈敏度有先天缺陷。設(shè)計(jì)散射比濁。透射比濁是依據(jù)透射光減弱的原理來(lái)定量的，因此只能測(cè)定抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，檢測(cè)仍需抗原－抗體溫育反應(yīng)時(shí)間，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)。缺陷透射免疫比濁法靈敏度較低。要求抗原－抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大、40散射免疫比濁法

抗原抗體復(fù)合物對(duì)一定波長(zhǎng)的光產(chǎn)生折射、偏轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)角度及散射光強(qiáng)度與復(fù)合物粒子的大小和量有關(guān)原理單色器散射比濁計(jì)θ散射光散射免疫比濁法抗原抗體復(fù)合物對(duì)一定波長(zhǎng)的41散射免疫比濁法定時(shí)散射比濁分析基本原理：免疫沉淀反應(yīng)和散射比濁分析結(jié)合之技術(shù)，反應(yīng)分兩個(gè)階段，預(yù)反應(yīng)階段和反應(yīng)階段保證抗原不過(guò)量的方法：確保反應(yīng)體系抗體過(guò)量對(duì)抗原過(guò)量進(jìn)行閾值限定時(shí)間檢測(cè)分兩個(gè)在預(yù)反應(yīng)時(shí)段，加小量樣本與抗原/抗體反應(yīng)，測(cè)定第一次散射光信號(hào)值加全量樣本，約反應(yīng)2分鐘后，第二次測(cè)定散射光信號(hào)信號(hào)峰值計(jì)算機(jī)處理轉(zhuǎn)換為樣品濃度散射免疫比濁法定時(shí)散射比濁分析基本原理：保證抗原不過(guò)量的方法42預(yù)反應(yīng)階段5ul樣本抗原過(guò)剩區(qū)閾值信號(hào)反應(yīng)階段45ul樣本7.5秒2分鐘定時(shí)散射比濁反應(yīng)曲線圖抗原不過(guò)量抗原過(guò)量預(yù)反應(yīng)階段抗原過(guò)剩區(qū)閾值信號(hào)反應(yīng)階段7.5秒243散射免疫比濁法速率散射比濁分析基本原理：抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的一種動(dòng)態(tài)測(cè)定法，適時(shí)檢測(cè)抗原抗體復(fù)合物形成的散射光信號(hào)。是測(cè)定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。

—所謂速率，是在單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物的速度。將各單位時(shí)間內(nèi)形成復(fù)合物的速率及測(cè)定的散射信號(hào)連接在一起，即是動(dòng)態(tài)的速率比濁分析。—當(dāng)儀器測(cè)定到某一時(shí)間內(nèi)形成速率下降時(shí)，即出現(xiàn)速率峰，該峰值的高低，即代表所測(cè)抗原的量?！俾史逯狄话阍?5秒時(shí)出現(xiàn)?！诜磻?yīng)介質(zhì)中加入一定量的促凝劑，可加速抗原抗體復(fù)合物的形成，以減少反應(yīng)時(shí)間?！俾史ǖ膬?yōu)點(diǎn)：是快速、不需要減去樣本和試劑本底讀數(shù)，校正結(jié)果也較穩(wěn)定。散射免疫比濁法速率散射比濁分析基本原理：44抗原濃度遞增散射光峰值峰值信號(hào)與抗原抗體反應(yīng)之間的關(guān)系圖ABCDFGHI抗原濃度遞增散射光峰值峰值信號(hào)與抗原抗體反應(yīng)之間的關(guān)系圖AB45反應(yīng)時(shí)間（秒）06085散射率抗體過(guò)量抗原過(guò)量第二峰值信號(hào)反應(yīng)時(shí)間（秒）06085散射率抗體過(guò)量抗原過(guò)量第二峰值信號(hào)46粒子增強(qiáng)免疫比濁分析技術(shù)基本原理

選擇一種大小適中，均勻一致的膠乳顆粒吸附或交聯(lián)抗體后，當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí)，則發(fā)生聚集，單個(gè)膠乳顆粒在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。當(dāng)兩個(gè)膠乳顆粒凝聚時(shí)，則使透射光減少，這種減少的程度與膠乳凝集成正比，當(dāng)然也與抗原量成正比。

特點(diǎn)：變非均相反應(yīng)為均相反應(yīng)，靈敏度提高（≥0.1ng/mL）；聚乙烯、聚苯乙烯等高分子膠乳顆粒，直徑100~200nM;以物理吸附（多抗）或化學(xué)交聯(lián)（單抗）方式與抗體連接；

基于單抗膠乳免疫散射速率比濁技術(shù)的定量分析是發(fā)展方向。粒子增強(qiáng)免疫比濁分析技術(shù)基本原理特點(diǎn)：變非均相反應(yīng)為均相反應(yīng)47λ光波dd<λ<2d當(dāng)粒子直徑小于入射波長(zhǎng)時(shí)呈全透射，透射與散射相當(dāng)當(dāng)粒子直徑大于入射光波的1/20時(shí)，形成不對(duì)稱前向散射，在90o以前的角度測(cè)量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表復(fù)合物的量λ光波dd<λ<2d當(dāng)粒子直徑小于入射波長(zhǎng)時(shí)呈全透射，當(dāng)粒48特定蛋白分析儀簡(jiǎn)介以免疫比濁法原理設(shè)計(jì)的特定蛋白分析儀有1970年ImmunoPreciptin）、1977年BEHRING公司開(kāi)發(fā)的BL（(BehringLaserNephelometer)）、而后該公司又先后于1985年研制出BN（BehringNephelometerAnalysers）、1987年研制出TTS（TurbiTimeSystem）和1988年開(kāi)發(fā)出BN-100（BehringNephelometer100）），美國(guó)BECKMAN公司也在80年代推出ARRAY360和ARRAY360E兩種型號(hào)的特定蛋白分析儀，德國(guó)寶靈曼公司也同時(shí)推出KeySys特定蛋白分析儀，最近2000年DADEBEHRING公司又將BN-100升級(jí)為BNProspec。特定蛋白分析儀簡(jiǎn)介以免疫比濁法原理設(shè)計(jì)的特定蛋白分析儀有1949特定蛋白分析儀簡(jiǎn)介當(dāng)抗原（待測(cè)物質(zhì)）含量過(guò)高時(shí)，可能出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，也就是鉤狀效應(yīng)。此時(shí)，由于抗原、抗體比例不符合免疫反應(yīng)的最適比例，而不發(fā)生反應(yīng)，不能形成免疫復(fù)合物，造成反應(yīng)結(jié)果的假陰性。容易受待測(cè)標(biāo)本，如血漿本身濁度的影響。當(dāng)有明顯脂肪血、黃疸或溶血時(shí)，本身就有一定的濁度，尤其在待測(cè)物質(zhì)含量較低的情況下可造成假陽(yáng)性。偽濁度的干擾。產(chǎn)生偽濁度的原因主要有（１）抗體（試劑）的質(zhì)量，如試劑中含有非特異性的交叉反應(yīng)性抗體、試劑被污染或變質(zhì)。（２）試劑中填加的增濁劑濃度過(guò)高。（３）反應(yīng)時(shí)間掌握不當(dāng)，如速率法反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，終點(diǎn)法時(shí)出現(xiàn)絮狀沉淀。（４）樣品處理不當(dāng)，如發(fā)生溶血。（５）比色杯質(zhì)量不合格或長(zhǎng)久使用清潔度下降。傳統(tǒng)特定蛋白分析儀存在的問(wèn)題特定蛋白分析儀簡(jiǎn)介當(dāng)抗原（待測(cè)物質(zhì)）含量過(guò)高時(shí)，可能出現(xiàn)前帶50特定蛋白分析儀簡(jiǎn)介速率信號(hào)的獲取性能抗原過(guò)剩的監(jiān)測(cè)性能膠乳粒子增強(qiáng)技術(shù)技術(shù)改進(jìn)閾值預(yù)反應(yīng)階段5ul樣本抗原過(guò)剩區(qū)閾值2分鐘抗原不過(guò)量抗原過(guò)量反應(yīng)階段45ul樣本特定蛋白分析儀簡(jiǎn)介速率信號(hào)的獲取性能技術(shù)改進(jìn)閾值預(yù)反應(yīng)階段51小結(jié)免疫比濁分析技術(shù)是傳統(tǒng)免疫沉淀技術(shù)與比濁分析技術(shù)的結(jié)合免疫比濁分析技術(shù)主要有透射免疫比濁分析和散射免疫比濁分析兩種速率測(cè)定和膠乳粒子增敏是免疫比濁分析的發(fā)展方向全自動(dòng)生化分析儀和特定蛋白分析儀是免疫比濁分析的兩個(gè)重要應(yīng)用載體，均可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化分析小結(jié)免疫比濁分析技術(shù)是傳統(tǒng)免疫沉淀技術(shù)與比濁分析技術(shù)的結(jié)合52精品課件！精品課件！53精品課件！精品課件！54謝謝！END謝謝！END55一、免疫學(xué)基本原理二、免疫沉淀三、免疫比濁技術(shù)原理免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展一、免疫學(xué)基本原理免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展56一、免疫學(xué)基本原理1、抗原與抗體2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)3、免疫學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)一、免疫學(xué)基本原理1、抗原與抗體571、抗原與抗體抗原（Antigen,Ag）是刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。

“應(yīng)”是指抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答產(chǎn)物--抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞“答”是指相應(yīng)抗原與免疫應(yīng)答產(chǎn)物結(jié)合并將其排除體外）抗原的免疫原性和免疫反應(yīng)性完全抗原與半抗原抗原表位與抗原結(jié)合價(jià)位1、抗原與抗體抗原（Antigen,Ag）是刺激機(jī)體產(chǎn)生免581、抗原與抗體1、抗原與抗體591、抗原與抗體免疫原性免疫原性（immunogenecity）是指抗原分子能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答（產(chǎn)生特異性抗體及免疫效應(yīng)細(xì)胞）的性質(zhì)。AgTB致敏T細(xì)胞活化漿細(xì)胞抗體免疫原性示意圖1、抗原與抗體免疫原性免疫原性（immunogene601、抗原與抗體免疫反應(yīng)性：是指抗原分子與免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞）發(fā)生特異性結(jié)合的性質(zhì)。AgTB致敏T細(xì)胞漿細(xì)胞

抗原性（免疫反應(yīng)性）示意圖抗體1、抗原與抗體免疫反應(yīng)性：是指抗原分子與免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或611、抗原與抗體完全抗原（completeantigen)具有免疫原性和抗原性的物質(zhì)。半抗原（hapten，又稱不完全抗原incompleteantigen）無(wú)免疫原性，只有抗原性的物質(zhì)。載體（carrier）賦予半抗原以免疫原性的蛋白質(zhì)。半抗原+蛋白質(zhì)（載體）＝完全抗原。1、抗原與抗體完全抗原（completeantigen)62半抗原

+載體抗體BTh完全抗原BBBTh半抗原—載體效應(yīng)示意圖半抗原+蛋白質(zhì)（載體）＝完全抗原半抗原+載體抗體BTh完全抗原BBBTh半抗原—載體效應(yīng)示631、抗原與抗體抗原決定簇：抗原分子存在的能TCR/BCR或抗體Fab片段特異性結(jié)合的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫應(yīng)答特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。構(gòu)象決定簇：構(gòu)象決定簇（conformationaldeterminant）由空間構(gòu)象形成的決定簇，序列上不連續(xù)。順序決定簇：順序決定簇（sequencedeterminant），又稱線性決定簇（lineardeterminant），序列相連續(xù)的氨基酸肽片段構(gòu)成的決定簇。抗原結(jié)合價(jià)：抗原結(jié)合價(jià)（antigenicvalence）是指能夠與抗體分子結(jié)合的決定簇?cái)?shù)目。1、抗原與抗體抗原決定簇：抗原分子存在的能TCR/BCR或抗641、抗原與抗體1、抗原與抗體651、抗原與抗體抗原表位的性質(zhì)、數(shù)目、位置、空間排列和立體構(gòu)象決定著抗原-抗體反應(yīng)的高度特異性。1、抗原與抗體抗原表位的性質(zhì)、數(shù)目、位置、空間排列和立體構(gòu)象661、抗原與抗體共同表位（commonepitope）指不同抗原之間含有的相同或相似的抗原表位。交叉反應(yīng)（cross-reaction）指抗體或致敏淋巴細(xì)胞對(duì)具有相同或相似表位的不同抗原均具有的反應(yīng)（交叉結(jié)合）。1、抗原與抗體共同表位（commonepitope）指不同671、抗原與抗體抗體（antibody,Ab）功能性概念是由抗原刺激而產(chǎn)生并能與刺激其產(chǎn)生的抗原發(fā)生特異性結(jié)合的、具有免疫功能的球蛋白?？贵w主要存在血清中，也存在于如呼吸道粘膜液、小腸粘膜液、唾液以及乳汁等其它體液中。

免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）結(jié)構(gòu)性概念

具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體分子相似的球蛋白。

抗體一定是球蛋白，球蛋白未必是抗體

1、抗原與抗體抗體（antibody,Ab）功能性概念681、抗原與抗體抗體的分子結(jié)構(gòu)1、抗原與抗體抗體的分子結(jié)構(gòu)691、抗原與抗體“Y”型，四肽鏈重鏈

（5種:、

、、、）

輕鏈（2種:、）可變區(qū)

（V區(qū)）

超變區(qū)（又稱CDR互補(bǔ)決定區(qū)）

骨架區(qū):FR恒定區(qū)（C區(qū)）鉸鏈區(qū)1、抗原與抗體“Y”型，四肽鏈70免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展課件711、抗原與抗體根據(jù)重鏈抗原性的不同，免疫球蛋白可以分為5類：IgG—γ(gamma)IgA—α(alpha)IgM—μ(mu)IgD—δ(delta)IgE—ε(epsilon)1、抗原與抗體根據(jù)重鏈抗原性的不同，免疫球蛋白可以分為5類：72免疫比濁檢驗(yàn)技術(shù)原理與進(jìn)展課件731、抗原與抗體根據(jù)輕鏈C區(qū)抗原性不同，免疫球蛋白可分為2型)

κ(kappa)型λ(lambda)型輕鏈存在于各類免疫球蛋白中同一個(gè)免疫球蛋白分子中的輕鏈同型1、抗原與抗體根據(jù)輕鏈C區(qū)抗原性不同，免疫球蛋白可分為2型)741、抗原與抗體抗體的生物學(xué)功能——特異性結(jié)合抗原超變區(qū)－表位靜電力、氫鍵、范德華力可逆影響因素：PH、溫度、電解質(zhì)

結(jié)合基礎(chǔ)1、抗原與抗體抗體的生物學(xué)功能——特異性結(jié)合抗原結(jié)合基礎(chǔ)752、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的原理抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于兩種分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性，這兩種特性是由抗原與抗體分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定的?？乖贵w反應(yīng)可分為兩個(gè)階段。第一為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應(yīng)快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。第二為可見(jiàn)反應(yīng)階段，抗原抗體復(fù)合物在環(huán)境因素（如電解質(zhì)、pH、溫度、補(bǔ)體）的影響下，進(jìn)一步交聯(lián)和聚集，表現(xiàn)為凝集、沉淀、溶解、補(bǔ)體結(jié)合介導(dǎo)的生物現(xiàn)象等肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)?？乖贵w的結(jié)合使電荷減少或消失，蛋白質(zhì)由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。四種分子間引力（電荷引力、范登華引力、氫鍵結(jié)合力和疏水作用）參與并促進(jìn)抗原抗體間的特異性結(jié)合。2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的原理762、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)典型的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特異性識(shí)別形成抗原抗體復(fù)合物2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)典型的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特異性772、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性按比例可逆性2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性782、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)792、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)影響抗原抗體反應(yīng)的因素電解質(zhì)（離子強(qiáng)度）：抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無(wú)電解質(zhì)參加，仍不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1－，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢(shì)下降。當(dāng)電勢(shì)降至臨界電勢(shì)（12～15mV）以下時(shí)，則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見(jiàn)的沉淀物或凝集物。酸堿度（pH）：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行。蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn)。抗原抗體反應(yīng)一般在pH為6～8進(jìn)行。PH過(guò)高或過(guò)低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)，例如pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時(shí)，即使無(wú)相應(yīng)抗體存在，也會(huì)引起顆粒性抗原非特異性的凝集，造成假陽(yáng)性反應(yīng)。溫度：在一定范圍內(nèi)，溫度升高可加速分子運(yùn)動(dòng)，抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多，使反應(yīng)加速。但若溫度高于56℃時(shí)，可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；在40℃時(shí)，結(jié)合速度慢，但結(jié)合牢固，更易于觀察。常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃。每種試驗(yàn)都有其獨(dú)特的最適反應(yīng)溫度，例如冷凝集素在4左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。其它：適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸，加速反應(yīng)。2、抗原抗體的結(jié)合——免疫學(xué)反應(yīng)影響抗原抗體反應(yīng)的因素803、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)凝集與沉淀比濁電位、微天平放射性核素標(biāo)記酶標(biāo)記、熒光標(biāo)記和膠體金標(biāo)記化學(xué)發(fā)光物標(biāo)記或偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)

非標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)3、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)凝集與沉淀放射性核素標(biāo)記非標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)81二、免疫沉淀凝集：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為凝集反應(yīng)（agglutination）是最經(jīng)典的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

二、免疫沉淀凝集：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖谶m當(dāng)電解82二、免疫沉淀免疫沉淀反應(yīng):(precipitation)

可溶性抗原與相應(yīng)抗體，在適宜條件下發(fā)生結(jié)合，出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。免疫沉淀液體內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)免疫電泳技術(shù)免疫濁度技術(shù)絮狀沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)試管法平板法免疫電泳對(duì)流免疫電泳火箭免疫電泳免疫固定電泳透射免疫比濁t(yī)urbidimetermeasure散射免疫比濁nephelomitermeasure二、免疫沉淀免疫沉淀反應(yīng):(precipitation)

831:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗體量不變振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同試管內(nèi)絮狀沉淀試驗(yàn)輕搖絮狀沉示意圖淀AgAbAg1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原84AbAg凝膠內(nèi)沉淀——試管法單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)AbAg凝膠內(nèi)沉淀——試管法單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)85凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)——平板法標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測(cè)定不同病人抗原濃度測(cè)定原理

將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中，使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，與相應(yīng)抗體結(jié)合形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原濃度呈正相關(guān)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)——平板法標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測(cè)定不同病人抗原濃度測(cè)86

凝膠內(nèi)沉淀——雙向瓊脂擴(kuò)散原理示意圖AbAg模擬圖染色瓊脂圖1.抗原抗體雙向自由擴(kuò)散2.24小時(shí)出結(jié)果3.呈現(xiàn)沉淀線或弧凝膠內(nèi)沉淀——雙向瓊脂擴(kuò)散原理示意圖AbAg模擬圖染色瓊脂87三、免疫比濁技術(shù)原理

當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，二者比例合適時(shí)，在特殊的緩沖液中它們快速形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液體出現(xiàn)濁度。利用現(xiàn)代光學(xué)測(cè)量?jī)x器對(duì)濁度進(jìn)行測(cè)定從而檢測(cè)抗原含量。檢測(cè)器光源透鏡濾光片平光線散射透射光三、免疫比濁技術(shù)原理當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，88λ光波比濁測(cè)定法原理示意圖d當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的1/20時(shí)，形成不對(duì)稱前向散射，在90o以前的角度測(cè)量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表復(fù)合物的量當(dāng)復(fù)合物小于入射波長(zhǎng)時(shí)呈全透射，透射與散射相當(dāng)λ光波比濁測(cè)定法原理示意圖d當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的1/20時(shí)89三、免疫比濁技術(shù)原理免疫比濁技術(shù)分類：按光路透射免疫比濁散射免疫比濁按測(cè)定時(shí)間終點(diǎn)比濁速率比濁按增敏劑無(wú)增敏PEG增敏膠乳增敏三、免疫比濁技術(shù)原理免疫比濁技術(shù)分類：按光路透射免疫比濁按測(cè)90透射比濁法和散射比濁法光路檢測(cè)器A檢測(cè)器BIC

I0

Iθ

Iθ

透射比濁法

散射比濁法透射免疫比濁法是在180°角，即在直射角度上測(cè)定光透射強(qiáng)度。散射比濁法在光路的5°～96°角的方向上測(cè)量散射光強(qiáng)度。透射比濁法和散射比濁法光路檢測(cè)器A檢測(cè)器BICI0Iθ91單色器透射比濁計(jì)散射比濁計(jì)散射比濁和透射比濁的區(qū)別示意圖θ透射光散射光散射光單色器透散射散射比濁和透射比濁的區(qū)別示意圖θ透射光散射光92透射免疫比濁法

（transmissionturbidimetry原理抗原與抗體在一定緩沖液中形成IC，當(dāng)光線透過(guò)反應(yīng)溶液時(shí)，由于溶液內(nèi)IC粒子對(duì)光線的反射和吸收，引起透射光減少，IC越多透射光越少，可用吸光度表示。透射免疫比濁法

（transmissiont93透射免疫比濁法溶液中形成的復(fù)合物分子應(yīng)足夠大(35-100nm)溶液中形成的復(fù)合物分子要足夠多控制抗原抗體反應(yīng)的溫度和時(shí)間加增敏劑，提高復(fù)合物形成速度，縮短檢測(cè)時(shí)間應(yīng)選擇親和力好、效價(jià)高的抗體，保證抗體過(guò)量將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至少5個(gè)濃度測(cè)定，以吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，在半對(duì)數(shù)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線反應(yīng)要求透射免疫比濁法溶液中形成的復(fù)合物分子應(yīng)足夠大(35-100n94透射免疫比濁法靈敏度較低。要求抗原－抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大、足夠多，分子太小則入射光直接通過(guò)。加增敏劑。直線光路，靈敏度有先天缺陷。設(shè)計(jì)散射比濁。透射比濁是依據(jù)透射光減弱的原理來(lái)定量的，因此只能測(cè)定抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，檢測(cè)仍需抗原－抗體溫育反應(yīng)時(shí)間，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)。缺陷透射免疫比濁法靈敏度較低。要求抗原－抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大、95散射免疫比濁法

抗原抗體復(fù)合物對(duì)一定波長(zhǎng)的光產(chǎn)生折射、偏轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)角度及散射光強(qiáng)度與復(fù)合物粒子的大小和量有關(guān)原理單色器散射比濁計(jì)θ散射光散射免疫比濁法抗原抗體復(fù)合物對(duì)一定波長(zhǎng)的96散射免疫比濁法定時(shí)散射比濁分析基本原理：免疫沉淀反應(yīng)和散射比濁分析結(jié)合之技術(shù)，反應(yīng)分兩個(gè)階段，預(yù)反應(yīng)階段和反應(yīng)階段保證抗原不過(guò)量的方法：確保反應(yīng)體系抗體過(guò)量對(duì)抗原過(guò)量進(jìn)行閾值限定時(shí)間檢測(cè)分兩個(gè)在預(yù)反應(yīng)時(shí)段，加小量樣本與抗原/抗體反應(yīng)，測(cè)定第一次散射光信號(hào)值加全量樣本，約反應(yīng)2分鐘后，第二次測(cè)定散射光信號(hào)信號(hào)峰值計(jì)算機(jī)處理轉(zhuǎn)換為樣品濃度散射免疫比濁法定時(shí)散射比濁分析基本原理：保證抗原不過(guò)量的方法97預(yù)反應(yīng)階段5ul樣本抗原過(guò)剩區(qū)閾值信號(hào)反應(yīng)階段45ul樣本7.5秒2分鐘定時(shí)散射比濁反應(yīng)曲線圖抗原不過(guò)量抗原過(guò)量預(yù)反應(yīng)階段抗原過(guò)剩區(qū)閾值信號(hào)反應(yīng)階段7.5秒298散射免疫比濁法速率散射比濁分析基本原理：抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的一種動(dòng)態(tài)測(cè)定法，適時(shí)檢測(cè)抗原抗體復(fù)合物形成的散射光信號(hào)。是測(cè)定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。

—所謂速率，是在單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物的速度。將各單位時(shí)間內(nèi)形成復(fù)合物的速率及測(cè)定的散射信號(hào)連接在一起，即是動(dòng)態(tài)的速率比濁分析。—當(dāng)儀器測(cè)定到某一時(shí)間內(nèi)形成速率下降時(shí)，即出現(xiàn)速率峰，該峰值的高低，即代表所測(cè)抗原的量?！俾史逯狄话阍?5秒時(shí)出現(xiàn)。—在反應(yīng)介質(zhì)中加入一定量的促凝劑，可加速抗原抗體復(fù)合物的形成，以減少反應(yīng)時(shí)間?！俾史ǖ膬?yōu)點(diǎn)：是快速、不需要減去樣本和試劑本底讀數(shù)，校正結(jié)果也較穩(wěn)定。散射免疫比濁法速率散射比濁分析基本原理：99抗原濃度遞增散射光峰值峰值信號(hào)與抗原抗體反應(yīng)之間的關(guān)系圖ABCDFGHI抗原濃度遞增散射光峰值峰值信號(hào)與抗原