無血清培養(yǎng)基介紹

4/4無血清培養(yǎng)基介紹無血清培養(yǎng)基

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發(fā)布日期：2012-02-1712:29文章來源：丁香園

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1.處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期

2.>90%活細(xì)胞率

3.適應(yīng)時(shí)以較高的起始細(xì)胞接種

細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法

1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。

一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng)，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時(shí)，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時(shí)，細(xì)胞完全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí)，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。

（1）以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。

（2）當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時(shí)，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（3）以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75%SFM中傳代培養(yǎng)。

（4）當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（5）每隔3到5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí)，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代。

在適應(yīng)過程中，最好不要讓細(xì)胞生長(zhǎng)過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響。

細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)替代血清：許多細(xì)胞利用連續(xù)適應(yīng)方法能很好的適應(yīng)，用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1（v∶v）的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式，連續(xù)幾代減少當(dāng)前培養(yǎng)基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養(yǎng)基。每次適應(yīng)改變血清比例時(shí)，傳代細(xì)胞2到3次。

培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長(zhǎng)的延遲可能會(huì)發(fā)生，4允許進(jìn)行2到3次的傳代，使生長(zhǎng)率恢復(fù)到以前的水平。

特別需要強(qiáng)調(diào)的是：配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水，如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因?yàn)闊o血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護(hù)細(xì)胞的大分子，既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微，也可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵因素之一。

無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)

1.可避免血清批次間的質(zhì)量變動(dòng)，提高細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。

2.避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染。

3.避免血清組分對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的影響。

4.有利于體外培養(yǎng)細(xì)胞的分化。

5.可提高產(chǎn)品的表達(dá)水平并使細(xì)胞產(chǎn)品易于純化。

缺點(diǎn)：

1.細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基的保存和應(yīng)用不如傳統(tǒng)的合成培養(yǎng)基方便。

2.成本較高。

3.針對(duì)性很強(qiáng)，一種無血清培養(yǎng)基僅適合某一類細(xì)胞的培養(yǎng)。

無血清培養(yǎng)基一些配方

1.神經(jīng)細(xì)胞，干細(xì)胞，PC12細(xì)胞

成份終濃度

葡萄糖－－0.6%

谷氨酰胺－2mM

NaHCO3－－3mM

Hepes－－5mM

胰島素－－2.5μg/ml

轉(zhuǎn)鐵蛋白－100ng/ml

孕酮－－20nM

丁二胺－－60μM

硒酸鈉－－30nM

青霉素－－50mg/ml

鏈霉素－－50mg/ml

最后用DF12添加到100ml即可

細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品>>無血清培養(yǎng)基>>無血清液體培養(yǎng)基

產(chǎn)品編號(hào)：12523385216

產(chǎn)品名稱：無血清液體培養(yǎng)基

規(guī)格：

見產(chǎn)品說明

產(chǎn)品備注：

產(chǎn)品類別：細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品

產(chǎn)品說明

人樹突狀細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

RDC2000500ml1200.00

特點(diǎn)

含重組人血清白蛋白（臨床級(jí)）重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白（臨床級(jí)）重組人胰島素（臨床級(jí)）不含重組生長(zhǎng)因子。無菌，

無支原體，無病毒.

哺乳動(dòng)物樹突狀細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

DC2000500ml800.00

特點(diǎn)

含牛血清白蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），牛胰島素（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）不含重組生長(zhǎng)因子。無菌，

無支原體，無病毒

人干細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

特點(diǎn)

適用于造血干細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞。含重組人血清白蛋白（臨床級(jí)）重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白（臨床級(jí)），重組人胰島素（臨

床級(jí)）不含重組生長(zhǎng)因子。無菌，無支原體，無病毒

哺乳動(dòng)物干細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

ZX2001500ml1000.00

特點(diǎn)

適用于造血干細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞。含牛血清白蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），牛胰島素（細(xì)胞

培養(yǎng)級(jí)）不含重組生長(zhǎng)因子。無菌，無支原體，無病毒

其它無血清液體培養(yǎng)基

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

人樹突狀細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基添加物

RDC2000T20ml700.00

特點(diǎn)

含重組人血清白蛋白（臨床級(jí)）重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白

（臨床級(jí)），重組人胰島素（臨床級(jí)）不含重組

生長(zhǎng)因子。不含丙酮酸鈉。無菌，無支原體，無

病毒。20%的RDC2000T加入80%的基礎(chǔ)培養(yǎng)

基中使用。

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

哺乳動(dòng)物樹突狀細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基添加物

特點(diǎn)

含牛血清白蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），牛胰島素（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）不含重組生長(zhǎng)因子。不含丙酮酸鈉。無菌，無支原體，無病毒20%的DC2000T加入80%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基

中使用。

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

哺乳動(dòng)物干細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基添加物

RZX2001T20ml850.00

特點(diǎn)

含牛血清白蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），牛胰島素（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）及微量元素不含重組生長(zhǎng)因子，不含丙酮酸鈉。無菌，無

支原體，無病毒。

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

人干細(xì)胞無血清液體培養(yǎng)基添加物

ZX2001T20ml800.00

特點(diǎn)

含重組人血清白蛋白（臨床級(jí)）重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白（臨床級(jí)），重組人胰島素（臨床級(jí)）不含重組生長(zhǎng)因子。不含丙酮酸鈉。無菌，無支原體，無

病毒。20%的RDC2000T加入80%的基礎(chǔ)培養(yǎng)

基中使用

產(chǎn)品描述規(guī)格價(jià)格(RMB)

廣譜無血清培養(yǎng)基添加物

GP2004T20ml(20倍濃縮液)440.00

特點(diǎn)

含牛血清白蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），牛胰島素（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）及微量元素不含重組生長(zhǎng)因子，不含