梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷

關(guān)于梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷第一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日“性病”概念的演化性病：是指通過(guò)性接觸而發(fā)生傳播的一組傳染病。20世紀(jì)70年代以前——經(jīng)典性?。╲enerealdiseases,VD）包括：梅毒、淋病、軟下疳等1975年，WHO——性傳播疾?。╯exuallytransmitteddiseases,STD）20世紀(jì)90年代以后——性傳播感染（sexuallytransmittedinfections,STI），包括：艾滋病、梅毒、淋病、CA、GH等。第二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日歷史的回顧性病是一個(gè)歷史悠久的疾病，多數(shù)認(rèn)為梅毒是1505年由印度傳入我國(guó)廣東嶺南。梅毒是一個(gè)曾經(jīng)廣泛流行的性病，解放初期，估計(jì)的性?。ㄖ饕敲范荆┗颊呒s為1000萬(wàn)。1954年之后，全國(guó)逐漸形成了一個(gè)“四級(jí)”皮膚性病防治體系。1964年，實(shí)現(xiàn)了全國(guó)梅毒基本消滅的目標(biāo)。第三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日性病死灰復(fù)燃上世紀(jì)70年代末，改革開(kāi)放后，——性觀念的改變——性產(chǎn)業(yè)的出現(xiàn)——性生活方式的變化高危人群規(guī)模在不斷的增加，如：暗娼、男男性接觸者、流動(dòng)人口等。——性病在我國(guó)死灰復(fù)燃，再度流行。第四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日現(xiàn)況嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題和社會(huì)問(wèn)題；臨床認(rèn)知水平不夠，實(shí)驗(yàn)室診斷水平參差不齊；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)各流程存在不規(guī)范現(xiàn)象；新的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)不斷出現(xiàn)而又缺乏了解；部分（如私人診所）醫(yī)療工作存在過(guò)度診療或診療不規(guī)范，延誤患者的最佳診療時(shí)機(jī)；無(wú)癥狀感染者成為維系性病流行的重要的傳染源。第五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日如何就目前高發(fā)的性病，尤其是對(duì)梅毒進(jìn)行有效監(jiān)測(cè)和控制？如何對(duì)高危人群及潛在易感人群進(jìn)行篩查，主動(dòng)發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀的性病感染者？如何確定感染的病原體種類(lèi)？——需要完善的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作，包括檢測(cè)能力建設(shè)和質(zhì)量控制第六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日性病防治工作的重點(diǎn)兩個(gè)系統(tǒng)疫情監(jiān)測(cè)系統(tǒng)

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)-實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和質(zhì)量控制一個(gè)服務(wù)規(guī)范化醫(yī)療服務(wù)第七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒的定義梅毒是由密螺旋體之一的梅毒螺旋體引起的一種慢性全身感染性疾病。是傳統(tǒng)的性傳播疾病之一。第九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法病原學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)第十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日病原學(xué)檢查的原理螺旋體進(jìn)入人體后，在皮下黏膜增殖并沿淋巴管至附近的淋巴結(jié)經(jīng)過(guò)2~4周的潛伏在感染部位形成硬下疳。數(shù)天至1周后淋巴結(jié)腫大。再以后經(jīng)血液傳播至全身，或孕婦的羊水中都有大量螺旋體的存在。因此，在梅毒病人的硬下疳、扁平濕疣等皮損以及梅毒病人腫大的淋巴結(jié)，梅毒孕婦的羊水，都可以采集標(biāo)本來(lái)做此檢查第十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒病原學(xué)檢查的應(yīng)用范圍

及標(biāo)本采集適用范圍

病人出現(xiàn)的硬下疳、扁平濕疣、腫大的腹股溝淋巴結(jié)穿刺液、羊水穿刺液等。標(biāo)本采集：略第十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒病原學(xué)檢查的方法1、暗視野顯微鏡檢查法2、鍍銀染色檢測(cè)法3、剛果紅負(fù)染色法第十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日暗視野檢查法儀器器材1、暗視野顯微鏡2、無(wú)菌紗布3、不銹鋼刮刀4、滅菌棉拭子5、滅菌生理鹽水6、載玻片、蓋玻片第十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日暗視野檢查法標(biāo)本收集1、皮膚黏膜組織液2、淋巴液3、羊水第十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日暗視野檢查法檢測(cè)流程1、制片2、暗視野顯微鏡的使用及觀察第十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日暗視野檢查法結(jié)果判讀發(fā)現(xiàn)有纖細(xì)、白色、有折光的螺旋狀微生物，具有旋轉(zhuǎn)、蛇行及伸縮等特征性的運(yùn)動(dòng)方式，可判斷為梅毒螺旋體報(bào)告暗視野顯微鏡下發(fā)現(xiàn)有上述特征的螺旋體報(bào)告“發(fā)現(xiàn)蒼白螺旋體”第十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日暗視野檢查法臨床意義1、檢測(cè)陽(yáng)性，在臨床上可確證梅毒；2、如未能發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體，不能排除診斷；3、無(wú)論暗視野顯微鏡檢查的結(jié)果如何，都應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。第十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日鍍銀染色檢查檢測(cè)原理梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染成棕黑色，可以從普通高倍顯微鏡下觀察到梅毒螺旋體。第十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日鍍銀染色檢查儀器器材1、普通顯微鏡2、加拿大樹(shù)膠3、羅吉固定液4、鞣酸媒染劑5、Fontana銀溶液6、無(wú)水乙醇7、無(wú)菌紗布等取材用品第二十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日鍍銀染色檢查操作流程1、涂片干燥：自然干燥，不可用火固定；2、固定：2-3分鐘3、洗滌：無(wú)水乙醇4、媒染：微加熱、30秒5、銀染：水洗、微加熱、30秒6、鏡檢：水洗待干、封片鏡檢第二十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日鍍銀染色檢查結(jié)果判讀在顯微鏡下觀察到染成棕褐色的螺旋體狀生物，可判斷為梅毒螺旋體。報(bào)告見(jiàn)到染成棕褐色梅毒螺旋體報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果，否則報(bào)告陰性結(jié)果。第二十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日剛果紅負(fù)染色法原理：剛果紅是一種酸堿指示劑在涂有標(biāo)本的玻片上剛果紅將玻片染色，而螺旋體、細(xì)菌、細(xì)胞、真菌等生物體形成占位而不著色。再用鹽酸蒸氣將剛果紅的紅色熏成藍(lán)色方便觀察。第二十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日剛果紅負(fù)染色法器材及試劑：1、普通顯微鏡2、1%的剛果紅水溶液、3、濃鹽酸。第二十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日剛果紅負(fù)染色法結(jié)果判讀：

在藍(lán)黑色背景中發(fā)現(xiàn)白色纖細(xì)的螺旋狀微生物螺距數(shù)量為平均6~14個(gè)，可判斷為“蒼白螺旋體”報(bào)告

發(fā)現(xiàn)上述特征螺旋體結(jié)構(gòu)微生物，可報(bào)告“發(fā)現(xiàn)蒼白螺旋體”第二十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第二十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第二十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第二十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第二十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒血清學(xué)檢測(cè)分類(lèi)（1）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （非特異性梅毒抗體）（2）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）第三十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，在3-4周產(chǎn)生抗類(lèi)脂質(zhì)抗原的IgM和IgG的混合抗體（也叫反應(yīng)素）。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長(zhǎng)期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)陰。第三十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理反應(yīng)素與心磷脂形成抗原抗體反應(yīng)，卵磷脂可加強(qiáng)心磷脂的抗原性，膽固醇可增強(qiáng)抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂及膽固醇都是醇溶性脂類(lèi)、遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結(jié)晶。第三十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖第三十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法包括：（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST)（3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）所用抗原基本成分是：心磷脂、卵磷脂和膽固醇第三十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)——抗原組成及特點(diǎn)抗原組成：0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂、0.90%膽固醇抗原需新鮮配制，不能保存待檢血清需滅活需要在顯微鏡下觀察結(jié)果目前主要用于腦脊液檢查，特異性較高是診斷神經(jīng)梅毒的重要依據(jù)，但檢測(cè)陰性不能排除神經(jīng)梅毒第三十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)—儀器材料1、水平旋轉(zhuǎn)儀、顯微鏡2、試劑盒：VDRL抗原原液、VDRL緩沖液、抗原滴管及針頭、帶直徑為14mm漆圈的玻璃反應(yīng)板、VDRL試驗(yàn)結(jié)果判讀用參照涂片3、30ml平底玻璃小瓶、生理鹽水第三十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)—標(biāo)本采集1、血清：新鮮血清或凍存血清；2、腦脊液：采用腰穿術(shù)獲得一般來(lái)說(shuō)，送檢VDRL試驗(yàn)的腦脊液應(yīng)采集兩份，一份作腦脊液常規(guī)（白細(xì)胞≧10*106/L、蛋白含量＞500mg/L）測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果與另一份用作VDRL試驗(yàn)的腦脊液樣本同時(shí)送實(shí)驗(yàn)室。第三十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)—操作步驟1、VDRL抗原配制；2、VDRL玻片定性試驗(yàn)（1）滅活：血清標(biāo)本56℃滅活30分鐘；（2）吸樣：吸取0.05ml血清放入反應(yīng)板圈中，并涂布于整個(gè)圈內(nèi)；（3）加抗原：用標(biāo)準(zhǔn)針頭加入1滴抗原；（4）反應(yīng)：置水平旋轉(zhuǎn)儀上旋轉(zhuǎn)4min，180±5次/min，立即置低倍顯微鏡下觀察。第三十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)—操作步驟3、VDRL定量試驗(yàn)（1）加稀釋液：在圈內(nèi)加入0.05ml生理鹽水；（2）樣本稀釋?zhuān)何?.05ml樣本與第一個(gè)圈內(nèi)生理鹽水混合，混勻后，吸取0.05ml加至第二個(gè)圈，做系列稀釋?zhuān)⑾♂寴颖就坎加谡麄€(gè)圈內(nèi)（3）同定性試驗(yàn)的（3）、（4）。第三十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)—結(jié)果判讀凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)：3+——4+：鏡下見(jiàn)中等大小或大的絮狀物，液體清亮；2+：絮狀物較小，液體較清亮；1+：絮狀物較小，均勻分布，液體渾濁；±：抗原復(fù)合物顆粒稍粗；：抗原顆粒均勻、細(xì)小。定性試驗(yàn)：鏡下可見(jiàn)1+——4+的絮狀凝集物為陽(yáng)性，不產(chǎn)生凝集為陰性；定量試驗(yàn)：鏡下可見(jiàn)絮狀凝集物的樣本最高稀釋倍數(shù)為其滴度。第四十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日VDRL試驗(yàn)—臨床意義腦脊液VDRL試驗(yàn)是神經(jīng)梅毒的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，陽(yáng)性結(jié)果可診斷為神經(jīng)梅毒，但陰性結(jié)果不能排除診斷，存在假陰性。第四十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日RPR試驗(yàn)在VDRL試劑成分的基礎(chǔ)上，加入黑色活性碳顆粒，作為凝集的指示物；與待檢血清（漿）中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的黑色絮狀物。用白色硬紙片代替玻片；血清不需要滅活；不需要顯微鏡觀察結(jié)果可作定性和定量試驗(yàn)第四十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TRUST試驗(yàn)原理和成分以及操作與RPR試驗(yàn)相同用紅色的甲苯胺紅替代了活性碳顆粒，在與待檢血清（血漿）中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的紅色絮狀物第四十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)樣本類(lèi)型：血清、血漿、腦脊液樣本保存：短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于2-8℃；保存一周以上的應(yīng)置于-20℃以下冰箱保存；長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-70℃以下冰箱中保存。第四十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)樣本運(yùn)送：

應(yīng)按照生物安全要求進(jìn)行包裝和運(yùn)送。（1）第一層容器（如試管）（2）第二層容器（3）第三層容器第四十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)樣本接收：（1）檢查標(biāo)本管有無(wú)破損和溢漏；（2）核對(duì)標(biāo)本與送檢單；（3）檢查標(biāo)本的狀況;（4）如標(biāo)本不能接收，怎么處理？（5）樣本交接應(yīng)在接收單上雙方簽字確認(rèn)注意：應(yīng)把每一份樣本當(dāng)作強(qiáng)陽(yáng)性樣本來(lái)處置和對(duì)待??！第四十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀（要求？）試劑盒：（1）含有活性碳的抗原懸液；（2）一個(gè)標(biāo)定的9號(hào)針頭（0.9mm）；（3）壓印有18mm直徑圓圈的封塑環(huán)狀卡片；（4）內(nèi)部對(duì)照；為了保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，以及每批試劑間的可比性，應(yīng)制備外部對(duì)照血清（5）50ul量程移液器和吸頭（6）0.9%無(wú)菌生理鹽水第四十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)定性試驗(yàn)（1）試劑準(zhǔn)備：復(fù)室溫30分鐘（2）加標(biāo)本：樣本量50ul；（3）加抗原：抗原量（60±1滴/ml，約17ul/滴）（4）反應(yīng)：反應(yīng)時(shí)間8min（5）讀取結(jié)果第四十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)定量試驗(yàn)抗原1滴抗原1滴抗原1滴抗原1滴抗原1滴50ul標(biāo)本1:1（全血）50ul標(biāo)本50ulN.S1:250ulN.S1:450ulN.S1:850ulN.S1:16吸取50ul吸取50ul吸取50ul棄掉50ul標(biāo)本稀釋順序涂布順序第四十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)結(jié)果判讀判讀凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)：3+-4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的黑色絮狀物，液體清亮；2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到中的黑色絮狀物，液體較清亮；1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁；-：圓圈內(nèi)僅見(jiàn)碳顆粒集于中央一點(diǎn)或均勻分散。第五十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第五十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)結(jié)果報(bào)告（1）定性試驗(yàn)：出現(xiàn)1+-4+強(qiáng)度的凝集反應(yīng)報(bào)告陽(yáng)性（+）不產(chǎn)生凝集反應(yīng)報(bào)告陰性（-）（2）定量試驗(yàn)：出現(xiàn)凝集反應(yīng)的血清最高稀釋倍數(shù)為抗體滴度，結(jié)果報(bào)告滴度為1：X。也可將每個(gè)稀釋度的反應(yīng)強(qiáng)度依次報(bào)告，如1:1（全血）（4+）、1:2（3+）、1:4（2+）、1:8（1+）、1:16（-）。有利于療效觀察第五十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)質(zhì)量控制（1）內(nèi)部對(duì)照：試劑盒含有的陽(yáng)性質(zhì)控血清，用于檢查該盒試劑的有效性。新開(kāi)試劑，以及每天工作開(kāi)始前或每批試驗(yàn)開(kāi)始前，應(yīng)常規(guī)進(jìn)行內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控。（2）外部對(duì)照：可采取自留陽(yáng)性標(biāo)本用作外部對(duì)照。新開(kāi)試劑或更換試劑批次，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行外部對(duì)照試驗(yàn)，用于檢查每批試驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和可比性。第五十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)質(zhì)量控制（3）移液器質(zhì)量控制：強(qiáng)檢和定期校準(zhǔn)；（4）旋轉(zhuǎn)儀質(zhì)量控制：檢查轉(zhuǎn)速；（5）人員的質(zhì)量控制：有經(jīng)驗(yàn)人員的指導(dǎo)下開(kāi)展工作、雙人核對(duì)結(jié)果；（6）操作的質(zhì)量控制：反復(fù)操作、正確操作。第五十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)臨床意義（1）產(chǎn)生的抗類(lèi)脂質(zhì)抗體，未經(jīng)治療可長(zhǎng)期存在；（2）經(jīng)適當(dāng)治療后，抗體可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性；（3）定性試驗(yàn)結(jié)果可用于現(xiàn)癥梅毒診斷；（4）定量試驗(yàn)結(jié)果可用于療效觀察及判愈。第五十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)梅毒血清反應(yīng)假陽(yáng)性

即非梅毒患者的梅毒血清反應(yīng)呈陽(yáng)性的現(xiàn)象。（1）技術(shù)性假陽(yáng)性反應(yīng)由于標(biāo)本保存不當(dāng)（如細(xì)菌污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過(guò)期、或試驗(yàn)操作錯(cuò)誤等所造成。（2）生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)采用的抗原為脂類(lèi)混合物，所檢測(cè)的抗心磷脂抗體亦可見(jiàn)于其他多種疾病，如自身免疫性疾病、懷孕的婦女，麻風(fēng)病人。第五十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日

王千秋教授等檢測(cè)了10546份血清樣本，RPR假陽(yáng)性率為0.21%（15/7002）。假陽(yáng)性中：

10例為有高危性行為的常規(guī)檢查者

2例孕婦皮肌炎、尖銳濕疣、龜頭破潰各1例第五十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)梅毒血清反應(yīng)假陽(yáng)性的處理（1）技術(shù)性假陽(yáng)性反應(yīng)：實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的有效性、重復(fù)操作排除人為操作錯(cuò)誤等；（2）生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)：應(yīng)做TPPA(TPHA)等試驗(yàn)進(jìn)行排除

單一RPR（非特異性抗體血清試驗(yàn)）結(jié)果陽(yáng)性，不能作為梅毒的確定性診斷試驗(yàn)結(jié)果，需用梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)進(jìn)行確證。第五十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的反應(yīng)素導(dǎo)致抗原抗體濃度不匹配，出現(xiàn)弱陽(yáng)性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又像早期梅毒（一期和二期），此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，可出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的現(xiàn)象。

第五十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)血清固定

指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的血清固定常與治療不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。病期不明的潛伏梅毒患者血清固定發(fā)生率顯著增高，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)潛伏梅毒的篩查和及時(shí)治療。第六十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)RPR用于腦脊液的檢測(cè)，近年來(lái)也有不少研究。有作者在對(duì)154例各期梅毒患者及90例非梅毒神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者的腦脊液進(jìn)行試驗(yàn)并作統(tǒng)計(jì)分析：

RPR腦脊液敏感性為99.1%、特異性為77.8%VDRL腦脊液敏感性為98.6%、特異性為70.4

結(jié)論：RPR可以代替VDRL用于神經(jīng)梅毒的診斷。但是？第六十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR)注意事項(xiàng)1、使用無(wú)菌生理鹽水；標(biāo)本無(wú)嚴(yán)重脂血、溶血和細(xì)菌污染2、正確操作，移液器吸頭保證在血清/血漿液面以下但不能接觸反應(yīng)紙板；防止產(chǎn)生氣泡；3、每批次標(biāo)本數(shù)量不宜過(guò)多，防止干燥或血清水分揮發(fā)，4、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)檢查水平旋轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)速，常規(guī)進(jìn)行質(zhì)量控制；5、稀釋后攤開(kāi)液面是順序應(yīng)從低濃度向高濃度進(jìn)行；6、反應(yīng)完畢應(yīng)及時(shí)觀察結(jié)果。第六十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)原理：

以梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測(cè)梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽(yáng)性，則患者幾乎終生陽(yáng)性。第六十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)方法：（1）梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）（2）梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）（3）梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）（4）梅毒免疫層析法—梅毒快速檢測(cè)（RT）（5）熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）（6）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）（7）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）第六十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA/TPHA

感染梅毒螺旋體后2-4周內(nèi)，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生特異的梅毒螺旋體抗體。TPPA具有較高的敏感性和特異性。是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)。第六十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA試驗(yàn)原理圖第六十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA試驗(yàn)儀器耗材（1）試劑盒“A”溶解液：用于溶解致敏顆?！癈”和非致敏顆?！癉”“B”血清稀釋液：用于血清標(biāo)本的稀釋“C”凍干的致敏顆?！癉”凍干的非致敏顆?！癊”陽(yáng)性質(zhì)控血清：為含梅毒抗體的兔血清制品，最終滴度1:320，（2）微量振蕩器（3）移液器及吸頭（4）保濕盒第六十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA試驗(yàn)檢驗(yàn)流程（1）試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前復(fù)溫30分鐘（2）加稀釋液（B液）（3）標(biāo)本稀釋?zhuān)?）加致敏、未致敏顆粒（5）混合：微量振蕩器震蕩30秒（6）反應(yīng)：置濕盒，15-30℃至少2小時(shí)（7）觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度第六十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA試驗(yàn)檢驗(yàn)流程稀釋液100ul標(biāo)本25ul1:5稀釋液25ul1:10稀釋液25ul1:20稀釋液25ul1:40吸取25ul吸取25ul吸取25ul棄掉25ul未致敏粒子致敏粒子℃第六十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA試驗(yàn)結(jié)果判讀首先觀察未致敏粒子反應(yīng)孔是否出現(xiàn)凝集（第3孔）如出現(xiàn)凝集，則為無(wú)效試驗(yàn)。如無(wú)凝集，則根據(jù)致敏粒子反應(yīng)孔標(biāo)本與致敏粒子是否產(chǎn)生1+-4+凝集反應(yīng)，判斷結(jié)果。第七十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA凝集反應(yīng)分級(jí)4+：粒子光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊；3+：粒子光滑覆蓋大部分孔底；2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周?chē)幸患?xì)胞環(huán)；1+：粒子光滑聚集覆蓋孔子，周?chē)幸幻黠@細(xì)胞環(huán)；±：粒子沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)；—：粒子緊密沉積孔底中央。第七十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第七十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA結(jié)果報(bào)告未致敏粒子反應(yīng)孔不出現(xiàn)凝集，致敏粒子反應(yīng)孔出現(xiàn)凝集反應(yīng)報(bào)告陽(yáng)性（+）；未致敏粒子與致敏粒子反應(yīng)孔均未出現(xiàn)凝集反應(yīng)報(bào)告陰性（-）第七十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA重吸收試驗(yàn)如標(biāo)本與非致敏和致敏顆粒均產(chǎn)生凝集者，標(biāo)本需作重吸收試驗(yàn)：（1）加0.95ml非致敏顆粒溶液于小試管內(nèi)；（2）加入0.05ml血清充分混勻，置室溫吸收30分鐘以上；（3）2000r/min離心5分鐘，吸取上清液0.05ml加入第3孔；（4）第4孔加血清稀釋液25ul；（5）孔3吸取25ul至孔4，混勻后棄去25ul；（6）分別加致敏與未致敏顆粒（試驗(yàn)方法同上）第七十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TPPA臨床意義1、特異性高（98%），陽(yáng)性可確證為現(xiàn)癥或既往感染。2、終生陽(yáng)性，不能作為療效觀察的指標(biāo)。3、不能區(qū)分現(xiàn)癥或既往感染。

第七十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和酶標(biāo)記的單克隆羊抗人免疫球蛋白抗體或酶標(biāo)記的梅毒螺旋體基因重組抗原，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶標(biāo)儀判定陽(yáng)性反應(yīng)?？捎糜诖髽颖镜难鍣z測(cè)。

第七十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TP-ELISA（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）試驗(yàn)原理：是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上待檢血清或血漿和酶標(biāo)記的梅毒螺旋體基因重組抗原，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶標(biāo)儀判定陽(yáng)性反應(yīng)。

第七十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TP-ELISA（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）檢測(cè)流程：與其他ELISA檢測(cè)方法相同，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行對(duì)照的設(shè)置及檢測(cè)。結(jié)果判讀及報(bào)告：

1、根據(jù)陽(yáng)性、陰性對(duì)照的OD值是否在規(guī)定的數(shù)值范圍內(nèi)以判斷試驗(yàn)的有效性，并根據(jù)陽(yáng)性、陰性O(shè)D值設(shè)定閾值（cut-off);2、標(biāo)本OD值大于或等于cut-off值報(bào)告陽(yáng)性，否則報(bào)告陰性。

第七十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TP-ELISA（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）

臨床意義：

1、同TPPA，可用于非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)陽(yáng)性標(biāo)本的確證試驗(yàn)；

2、可用于大樣本篩查檢測(cè)，但陽(yáng)性標(biāo)本需進(jìn)一步進(jìn)行非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)復(fù)檢，確證是否為梅毒現(xiàn)癥感染者；

3、如對(duì)結(jié)果存在疑問(wèn)，可用TPPA或其他方法進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。

第七十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日關(guān)于TP重組抗原

目前已重組的TP抗原20多種，包括：TP15KD、4D、TP24、G17等。G17的反應(yīng)性比較高，目前的檢測(cè)試劑盒趨向于將2種或2種以上重組抗原聯(lián)合使用，綜合其特性，從而獲得更高的特異性和敏感性。第八十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗體快速免疫層析檢測(cè)法（TP-RT）檢測(cè)原理：以硝酸纖維素膜為載體，將重組的梅毒螺旋體抗原固定在膜上，待檢標(biāo)本與標(biāo)記的梅毒螺旋體特異性抗原結(jié)合并沿著固相載體遷移，陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位形成重組抗原-特異性抗體-標(biāo)記的特異性抗原復(fù)合物，顯示出有色條帶，可直接判讀結(jié)果。

第八十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TP-RT檢測(cè)流程：全血和血清/血漿標(biāo)本檢測(cè)步驟不一樣，但基本流程為：

1、加樣

2、加緩沖液

3、反應(yīng)

4、判讀結(jié)果第八十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TP-RT臨床意義：1、同TPPA、ELISA?？刹捎萌獧z測(cè)，適合于單樣本快速篩查；2、簡(jiǎn)單、快速，如結(jié)果存在疑問(wèn)，可用TPPA或其他方法進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。第八十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日TP-RT注意事項(xiàng)：1、如出現(xiàn)無(wú)效結(jié)果，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，并用新的試條重新測(cè)試，如問(wèn)題仍然存在，應(yīng)停止使用該批號(hào)產(chǎn)品；2、注意試劑盒的儲(chǔ)存條件，以及反應(yīng)的溫度條件；3、按試劑盒說(shuō)明書(shū)，反應(yīng)時(shí)間應(yīng)足夠、加樣量也要準(zhǔn)確。第八十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)第八十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體熒光抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

檢測(cè)原理：以梅毒螺旋體作為抗原，與經(jīng)吸收劑吸收的梅毒血清抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FITC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，形成帶有熒光的抗原抗體復(fù)合物，在熒光顯微鏡下螺旋體顯出綠色熒光。

第八十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日FTA-ABS臨床意義：

FTA-ABS是梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其臨床意義同TPPA試驗(yàn)。腦脊液的FTA-ABS試驗(yàn)陰性可排除神經(jīng)梅毒，但特異性不高，存在假陽(yáng)性。操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，需要高質(zhì)量熒光顯微鏡和技術(shù)熟練的操作人員，一般不作為常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。第八十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗體化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA)

檢測(cè)原理：利用雙抗原夾心法化學(xué)發(fā)光免疫分析原理，采用多種梅毒螺旋體特異抗原包被固相發(fā)光微孔板，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記相同蛋白抗原作為標(biāo)記抗原，與樣本中梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心復(fù)合物后，加入化學(xué)發(fā)光底物，測(cè)定其發(fā)光值（RLU），根據(jù)cut-off值判斷結(jié)果第八十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日CLIA儀器耗材

1、化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；

2、微孔洗板機(jī)（全自動(dòng)系統(tǒng)無(wú)需單獨(dú)配置）；

3、微量振蕩器（全自動(dòng)系統(tǒng)無(wú)需單獨(dú)配置）；

4、恒溫箱：37±1

℃（全自動(dòng)系統(tǒng)無(wú)需單獨(dú)配置）；

5、移液器、計(jì)時(shí)器；

6、新鮮制備的蒸餾水或去離子水；第八十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日CLIA結(jié)果判讀及報(bào)告

根據(jù)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)量的發(fā)光值（RLU）自動(dòng)判讀結(jié)果。標(biāo)本RLU值大于或等于cut-off值，報(bào)告陽(yáng)性；標(biāo)本RLU值小于cut-off值，報(bào)告陰性。CLIA的臨床意義同TPPA\ELISA

2008年有文獻(xiàn)報(bào)道，以TPPA作為金標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性：94.23%

特異性：98%第九十頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒IgM抗體檢測(cè)

細(xì)菌、病毒感染后的早期體液免疫應(yīng)答反應(yīng)，結(jié)果是IgM抗體的產(chǎn)生，在梅毒螺旋體的感染中也不例外。

IgM抗體出現(xiàn)在感染的潛伏期、早期梅毒患者及晚期病人。

IgM抗體不能通過(guò)胎盤(pán)屏障及完整無(wú)損的血腦屏障，因此：若在新生兒血中檢測(cè)到TP-IgM抗體是產(chǎn)前感染的診斷依據(jù)；若在完整無(wú)損的血腦屏障的腦脊液中出現(xiàn)，則提示患有活動(dòng)性神經(jīng)梅毒。

第九十一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒IgM抗體檢測(cè)

可采用抗IgM單克隆抗體的酶標(biāo)法、蛋白印跡法等進(jìn)行檢測(cè)。目前測(cè)定IgM抗體的方法的敏感性不高，但檢查到IgM抗體則有助于以下病例的臨床診斷：先天梅毒、早期一期梅毒、晚期梅毒、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)前的早期感染病人的判愈試驗(yàn)以及有梅毒史或其他螺旋體感染史病人的再感染。第九十二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日

龔匡隆教授等就現(xiàn)用梅毒血清試驗(yàn)臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了評(píng)估治療前的敏感度

RPRTPPATP-IgMELISA一期梅毒（硬下疳）83.3%91.7%91.7%二期梅毒100%100%100%早期潛伏梅毒88.9%100%88.9%正規(guī)治療12月后的敏感度

RPRTP-IgMELISA一期梅毒（硬下疳）--二期梅毒64.5%67.7%早期潛伏梅毒43.7%43.7%第九十三頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日先天梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷方法依據(jù)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)診斷查到螺旋體；非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)滴度持續(xù)上升；滴度高于母親4倍（高于2個(gè)稀釋滴度）；檢測(cè)到抗梅毒的19S-IgM特異性抗體陽(yáng)性；隨訪18個(gè)月觀察抗體的變化（主要是指特異性抗體）。第九十四頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日神經(jīng)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性；腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)或蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果異常；腦脊液VDRL試驗(yàn)陽(yáng)性；腦脊液檢測(cè)到IgM抗體。第九十五頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法評(píng)價(jià)

各種檢測(cè)方法在臨床應(yīng)用中都存在一定的局限性。1、梅毒的臨床診斷：（1）特征性皮損中檢測(cè)到梅毒螺旋體；（2）血清中檢測(cè)到抗體。2、梅毒的表現(xiàn)非常復(fù)雜，感染后可不出現(xiàn)皮損或皮損不明顯，檢測(cè)不到抗原；3、感染極早期或窗口期的存在，檢測(cè)不到抗體。第九十六頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法評(píng)價(jià)血清學(xué)檢測(cè)是目前提供診斷依據(jù)的主要的梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。1、但檢測(cè)腦脊液中的抗體時(shí)，VDRL更具有臨床診斷價(jià)值。2、對(duì)病人進(jìn)行治療效果的隨訪觀察，需根據(jù)RPR或TRUST定量試驗(yàn)及抗體滴度的變化進(jìn)行判斷。3、抗原血清試驗(yàn)都是檢測(cè)特異性梅毒螺旋體抗體。無(wú)論采用哪一種梅毒螺旋體抗原抗體檢測(cè)方法，都不能代替非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義。第九十七頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日第九十八頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖治療前治療后陽(yáng)性：陰性：一期：二期：早期潛伏：晚期潛伏：三期：早期晚期第九十九頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖治療前治療后陽(yáng)性：陰性：一期：二期：早期潛伏：晚期潛伏：三期：早期晚期第一百頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義匯總試驗(yàn)結(jié)果主要臨床意義TPPA等RPR等++現(xiàn)癥梅毒或接受過(guò)治療的晚期梅毒--排除梅毒感染或極早期梅毒（窗口期）或極晚期-+非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)假陽(yáng)性+-臨床治愈的早期梅毒（既往感染）或極早期梅毒第一百零一頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，2022年，8月28日應(yīng)用策略梅毒血清學(xué)檢測(cè)的目的：臨床診療、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)、高危人群篩查和干預(yù)等。無(wú)論什么目的，都需要根據(jù)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)這兩類(lèi)血清學(xué)檢測(cè)方法的特性進(jìn)行結(jié)果判斷。第一百零二頁(yè)，共一百一十二頁(yè)，20