雜環(huán)類藥物的分析

關(guān)于雜環(huán)類藥物的分析第一頁，共九十九頁，2022年，8月28日基本要求

一、掌握二氫吡啶類、喹啉類、托烷類、吩噻嗪類、苯并二氮雜卓類藥物的鑒別和含量測(cè)定的基本原理與方法。二、熟悉本類藥物中典型藥物國外藥典收載的鑒別和含量測(cè)定方法。三、了解本類藥物的體內(nèi)分析方法。返回第二頁，共九十九頁，2022年，8月28日雜環(huán)：環(huán)狀有機(jī)化合物的碳環(huán)中夾雜有其它非碳原子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。非碳原子（雜原子）：N、S、O等雜環(huán)類藥物共性：（1）是合成藥物中所占比例最大的一類藥物；（2）多為五元環(huán)或六元環(huán)，單環(huán)或合并環(huán)；（3）雜環(huán)結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，不易開環(huán)，其它性質(zhì)受雜原子種類、數(shù)目、位置影響；（4）雜環(huán)上取代基性質(zhì)較活潑，常用于分析；（5）含N雜環(huán)，其堿性的強(qiáng)弱往往用于分析。第三頁，共九十九頁，2022年，8月28日第一節(jié)二氫吡啶類藥物（鈣通道阻滯劑）苯基-1,4-二氫吡啶母核吡啶（一）結(jié)構(gòu)第四頁，共九十九頁，2022年，8月28日硝苯地平（nifedipine)第五頁，共九十九頁，2022年，8月28日（二）主要理化性質(zhì)1）二氫吡啶環(huán)的還原性2）硝基的氧化性：硝基——芳伯胺基——重氮化-偶合3）二氫吡啶的解離：與堿作用，二氫吡啶環(huán)上1,4-氫均可發(fā)生解離，形成p-π共軛而發(fā)生顏色變化4）遇光不穩(wěn)定5）旋光性：C4手性碳6）UV、IR：苯環(huán)、取代基第六頁，共九十九頁，2022年，8月28日（三）鑒別試驗(yàn)——化學(xué)鑒別法1）與亞鐵鹽反應(yīng)：-NO2Fe(OH)2Fe(OH)3灰綠色紅棕色2）與NaOH試液反應(yīng)：二氫吡啶類藥物的丙酮溶液+NaOH橙紅色3）沉淀反應(yīng)：與重金屬鹽尼莫地平+HgCl2白色沉淀4）重氮化-偶合反應(yīng)苯環(huán)硝基芳伯胺基Zn，H+第七頁，共九十九頁，2022年，8月28日二、分光光度法1）UV——尼群地平膠囊的鑒別（ChP2010）2）IR——原料藥與部分制劑；

尼群地平片的鑒別（ChP2010）二、色譜法1）TLC——硝苯地平（BP2010）2）HPLC——尼莫地平片的鑒別（ChP2010）第八頁，共九十九頁，2022年，8月28日

(四)硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查

硝苯地平遇光分子內(nèi)部發(fā)生光化學(xué)歧化作用，降解為4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（I）和4-（2-亞硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（II）。III第九頁，共九十九頁，2022年，8月28日溶液配制供試品液:硝苯地平1mg/mL對(duì)照品貯備液:雜質(zhì)I、II各10ug/mL供試品液對(duì)照品貯備液方法對(duì)照溶液1硝苯地平2ug/mL雜質(zhì)A、B各1ug/mL硝苯地平對(duì)照品雜質(zhì)I雜質(zhì)II硝苯地平1mg/mL雜質(zhì)A、B各10ug/mL對(duì)照溶液2第十頁，共九十九頁，2022年，8月28日檢測(cè)對(duì)照溶液2——進(jìn)樣測(cè)定分離度、靈敏度供試品液對(duì)照溶液1判斷供試品液中若有與雜質(zhì)I、II保留時(shí)間一致的色譜峰，其峰面積均≤0.1%（峰面積外標(biāo)法）供試液中其他雜質(zhì)峰面積≤對(duì)照溶液液1中硝苯地平峰面積的0.2%；雜質(zhì)總量≤0.5%。—分別進(jìn)樣，記錄至主峰tR的2倍第十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日第一節(jié)吡啶類藥物一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)吡啶（pyridine）異煙肼（isoniazid）尼可剎米（nikethamide）第十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日（二）主要化學(xué)性質(zhì)

1.弱堿性

吡啶環(huán)上的氮為堿性氮原子，吡啶環(huán)的pKb

值為8.8（水中）。尼可剎米除了吡啶環(huán)氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化學(xué)性質(zhì)不甚活潑，但遇堿水解后釋放出具有堿性的二乙胺，故可以進(jìn)行鑒別。

第十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日

3．吡啶環(huán)的特性

異煙肼和尼可剎米的吡啶環(huán)α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶環(huán)β、β’位被甲酸甲酯所取代，其吡啶環(huán)可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)。

2．還原性

異煙肼的吡啶環(huán)γ位上被具有還原性酰肼取代，可被氧化劑氧化，可與含羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。

第十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日二、鑒別試驗(yàn)（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)

適用于吡啶環(huán)的α、α’位無取代基的異煙肼和尼可剎米。1.戊烯二醛反應(yīng)（k?ning反應(yīng)）尼可剎米+溴化氰H2O戊烯二醛衍生物苯胺黃色第十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日CNBr第十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日（黃色~黃棕色）衍生物的顏色隨芳伯胺胺的不同而不同第十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日2．二硝基氯苯反應(yīng)（Vongerichten反應(yīng)）吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫紅色無水條件第十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日

采用本法鑒別異煙肼、尼可剎米時(shí)，需適當(dāng)處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪鉃轸然筮M(jìn)行鑒別。如異煙肼鑒別：第十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日異煙肼不經(jīng)處理的反應(yīng)：異煙肼+2，4-二硝基氯苯乙醇OH-紫紅色第二十頁，共九十九頁，2022年，8月28日（二）酰肼基團(tuán)的反應(yīng)

1．還原反應(yīng)異煙肼+AgNO3N2+Ag銀鏡異煙肼+亞硒酸硒（紅色）第二十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日2．縮合反應(yīng)

異煙肼的酰肼基與芳醛縮合形成腙，其有固定的熔點(diǎn)，可用以鑒別。ChP和BP均采用本法鑒別.

黃色結(jié)晶mp為228℃～231℃

第二十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日-NH2活性-CH2-+1，2-萘醌-4-磺酸OH-紅色第二十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日（三）形成沉淀的反應(yīng)

具有吡啶環(huán)的結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類及苦味酸等試劑形成沉淀。

尼可剎米+CuSO4+硫氰酸銨草綠色尼可剎米異煙肼+HgCl2白色第二十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日

（四）分解產(chǎn)物的反應(yīng)使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán)尼可剎米異煙肼+無水Na2CO3Ca(OH)2吡啶臭尼可剎米+NaOH二乙胺第二十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日（五）紫外吸收光譜特征

本類藥物的分子結(jié)構(gòu)中均含有芳雜環(huán)，在紫外光區(qū)有特征吸收，其最大、最小吸收波長及百分吸收系數(shù)可供鑒別。

本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法

藥物溶劑λmax（nm）λmin（nm）E1cm1%

異煙肼HCl（0.01mol/L）265—約420水266234378尼可剎米HCl（0.01mol/L）263—285NaOH（0.1mol/L）255—840260—860

硝苯地平無水乙醇333—140第二十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日

（一）異煙肼中游離肼的檢查

三、有關(guān)物質(zhì)檢查TLC（ChP、BP）比濁法（JP）差示分光光度法（文獻(xiàn)）第二十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日1.TLC法

異煙肼及其注射液,采用TLC法中雜質(zhì)對(duì)照法。對(duì)照品：硫酸肼薄層板：硅膠（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）展開劑：異丙醇-丙酮（3：2）顯色劑：乙醇制對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液規(guī)定：供試品主斑點(diǎn)前方，不得顯黃色斑點(diǎn)樣品液：50mg異煙肼/mL，點(diǎn)樣10uL雜質(zhì)對(duì)照液：50ug游離肼/mL，點(diǎn)樣2uL

雜質(zhì)限量：

Ch.P50×250×103×10×100%=0.02%第二十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日

BP的檢查方法：

供試品溶液制備:

取異煙肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml.

對(duì)照溶液制備:

取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀釋至100ml；量取10ml，加供試品溶液0.2ml，加丙酮-水(1:1)稀釋至100ml。

薄層板：硅膠GF254薄層板

展開劑：醋酸乙酯-丙酮－甲醇－水(50:20:20:10)

顯色劑：乙醇制對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液第二十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日

檢測(cè)結(jié)果：

于254nm紫外光下檢測(cè)，供試品中的雜質(zhì)斑點(diǎn)強(qiáng)度應(yīng)小于對(duì)照溶液中異煙肼色譜斑點(diǎn)；再噴以對(duì)-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下檢視，對(duì)照溶液中硫酸肼斑點(diǎn)的強(qiáng)度大于供試液中的雜質(zhì)斑點(diǎn)。第三十頁，共九十九頁，2022年，8月28日

2．比濁法(JP)

原理：游離肼+水楊醛水楊醛腙（渾濁）規(guī)定：異煙肼樣品+水楊醛5min內(nèi)不得渾濁

此法專屬性差，因異煙肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。第三十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日3.差示分光光度法

肼異煙肼+對(duì)-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物對(duì)-二甲氨基苯甲醛連氮(λmax=456nm有最大吸收)形成的縮合產(chǎn)物對(duì)-二甲氨基芐叉(于λmax=456nm波長處無吸收)

可在456nm波長處測(cè)定并計(jì)算二者的差示吸收度ΔA456，同時(shí)以對(duì)照品比較法計(jì)算游離肼含量。第三十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日

具體測(cè)定法：

對(duì)照品溶液：硫酸肼CR＝1μg/ml

5ml+丙酮λmax=456nm測(cè)A1+對(duì)-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm測(cè)A2

供試品溶液：異煙肼C＝2mg/ml

游離肼CX=ΔAs/AR×CR

1份+丙酮

λmax=456nm測(cè)A1

+對(duì)-二甲氨基苯甲醛

(ΔA456＝A2－A1)ΔAs

2份

λmax=456nm測(cè)A2第三十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日(二)尼可剎米中有關(guān)雜質(zhì)檢查

因有關(guān)雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不明，故Ch.p采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。

第三十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日第二節(jié)吩噻嗪類藥物一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物第三十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日第三十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日第三十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日奮乃靜第三十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日癸氟奮乃靜第三十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日鹽酸氟奮乃靜第四十頁，共九十九頁，2022年，8月28日鹽酸三氟拉嗪第四十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日（二）主要化學(xué)性質(zhì)

1.UV和IR：硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л體系

三個(gè)最大吸收峰別：205nm、254nm、300nm

由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮雜蒽母核的硫?yàn)槎r(jià)，易氧化為砜和亞砜，其UV光譜有明顯不同，有四個(gè)峰值。另外，取代基R和R’不同，IR不同。第四十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日2.易氧化呈色：二價(jià)硫易氧化，遇H2SO4、HNO3、FeCl3、H2O2等氧化劑易被氧化，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。

3.與金屬離子絡(luò)合呈色：本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成有色配合物，其氧化產(chǎn)物則無此反應(yīng)?？捎糜阼b別和含量測(cè)定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。4.弱堿性：硫氮雜蒽母核中的N原子堿性極弱；10位取代的脂烴氨基、哌嗪及哌啶的衍生物的N原子堿性較強(qiáng)，可用于鑒別與含量測(cè)定第四十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實(shí)例如下：

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm鹽酸氯丙嗪鹽酸（9→1000）52540.46915306——鹽酸異丙嗪鹽酸（0.01mol/L）6249—883~937奮乃靜無水乙醇72580.65—癸氟奮乃靜乙醇10260——鹽酸氟奮乃靜鹽酸（9→1000）10255—553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸（1→20）10256—630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與315——二、鑒別試驗(yàn)第四十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日

（二）顯色反應(yīng)

1.與氧化劑的顯色反應(yīng)

藥物名稱硫酸硝酸過氧化氫

鹽酸氯丙嗪顯紅色,漸變淡黃色—鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色,放置生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜——顯深紅色;放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色,溫?zé)帷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪—生成微帶紅色的白色沉淀;放—置后,紅色變深,加熱后變黃色

鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色—

—

第四十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日

2.與鈀離子絡(luò)合顯色反應(yīng)（ChP2010）

利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。第四十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日第四十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日（三）分解產(chǎn)物的反應(yīng)

癸氟奮乃靜碳酸鈉及碳酸鉀F-+酸性茜素鋯試液

[ZrF6]2-配位離子，茜素游離使溶液由紅色變?yōu)辄S色。600℃熾灼第四十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日三、特殊雜質(zhì)檢查——HPLC、TLC

P300-305返回藥物與有關(guān)物質(zhì)在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上具有相似性第四十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日第三節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物NNClH3CO地西泮第五十頁，共九十九頁，2022年，8月28日阿普唑侖第五十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日奧沙西泮第五十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日氯氮卓NNNCH3OClH第五十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日主要理化性質(zhì)：弱堿性：二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上N原子具堿性，苯基的取代使堿性下降，可用非水滴定法測(cè)定。UV吸收——共軛體系；含量測(cè)定水解性：環(huán)比較穩(wěn)定，在強(qiáng)酸下水解，生成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物，可用于鑒別和比色測(cè)定溶解性：多為游離堿，不溶于水，溶于甲醇、乙醇和氯仿中。第五十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日

(一)化學(xué)鑒別試驗(yàn)

1.沉淀反應(yīng)

氯氮卓

橙紅色沉淀

阿普唑侖鹽酸氟西泮

＋KBiI4

橙紅色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，

二、鑒別試驗(yàn)阿普唑侖+硅鎢酸白色沉淀第五十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日2.水解后呈芳伯胺反應(yīng)

氯氮卓和奧沙西泮第五十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日3.硫酸-熒光反應(yīng)

本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。

地西泮黃綠色

黃色氯氮卓黃色

紫色艾司唑侖+H2SO4亮綠色+稀硫酸天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色

藍(lán)綠色奧沙西泮淡黃綠色第五十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日4.分解產(chǎn)物的反應(yīng)

本類藥物多為有機(jī)氯化合物，氧瓶燃燒法破壞，顯氯化物反應(yīng)。Ch.P用于地西泮鑒別。

第五十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日

（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）

地西泮0.5%硫酸甲醇溶液10284440-468氯氮卓鹽酸溶液(0.1M)7245,308309-329(308nm)氯硝西泮0.5%硫酸乙醇溶液10252,307奧沙西泮乙醇10229,315(較弱)

紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別。

第五十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日（三）TLC法

1.硝西泮片的TLC鑒別法——對(duì)照法

第六十頁，共九十九頁，2022年，8月28日2.酸水解產(chǎn)物的TLC法

利用苯并二氮雜卓類藥物經(jīng)酸水解產(chǎn)生的二苯甲酮衍生物進(jìn)行鑒別。由于不同的苯并二氮雜卓類藥物水解后可能會(huì)獲得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的專屬性較差。

第六十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日

（一）有關(guān)物質(zhì)檢查

多采用TLC、HPLC法。三唑侖USP采用GC法三、特殊雜質(zhì)檢查第六十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日

1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查

地西泮在合成過程中因其副反應(yīng)，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。

2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查

USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。第六十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日

3.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法

色譜條件：色譜柱為250mm×2.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；n=3000；流動(dòng)相為甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH為6.0；流速為1ml/min;紫外檢測(cè)器波長為254nm。

檢測(cè)結(jié)果：氨基物（Ⅱ）的tR為12.0min、氧化物（Ⅲ）的tR為4.3min，痕量雜質(zhì)（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）的tR為13.8、3.6、4.7min。

第六十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日

(二)降解產(chǎn)物的檢查

地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進(jìn)行檢查。返回第六十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日一、非水溶液滴定法(一)基本原理第四節(jié)含量測(cè)定當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸因此，要根據(jù)不同情況采用相應(yīng)測(cè)定條件。第六十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日(二)一般方法供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果高氯酸滴定液滴定以空白試驗(yàn)校正第六十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日

1.適用范圍

主要用于Kb＜10-8的有機(jī)堿鹽的含量測(cè)定。對(duì)堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點(diǎn)指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

一般來說：

Kb為10-8～10-10時(shí)，宜選冰醋酸作為溶劑；藥物的Kb為10-10～10-12時(shí)，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；

Kb＜10-12時(shí)，應(yīng)用醋酐作為溶劑。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測(cè)定結(jié)果。

(三)問題討論第六十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日

2.酸根的影響：

無機(jī)酸類，在醋酸介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：

HClO4＞HBr＞H2SO4＞HCl＞HNO3過量(1～3倍)不影響測(cè)定結(jié)果

消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點(diǎn)不明顯，結(jié)果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

第六十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日3.滴定劑的穩(wěn)定性非水溶液滴定法所用的溶劑為醋酸，具有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯存條件都影響滴定劑的濃度。若滴定樣品與標(biāo)定HClO4溶液時(shí)的溫度不一致，溫差未超過10℃時(shí)，應(yīng)將高氯酸滴定液的濃度用下列公式加以校正：

N1=N0/[1+0.0011(t1-t0)]4.終點(diǎn)指示方法常用電位法和指示劑法。Ch.P收載的本類藥物大多采用結(jié)晶紫指示劑指示終點(diǎn)，少數(shù)采用電位法指示終點(diǎn)。第七十頁，共九十九頁，2022年，8月28日(四)應(yīng)用實(shí)例

1.游離弱堿性藥物測(cè)定

異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等。基于這些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測(cè)定其含量。由于這些藥物的堿性強(qiáng)弱不同，測(cè)定時(shí)所采用溶劑、指示劑及其指示終點(diǎn)的方法也不盡相同。

藥物名稱取樣量(g)溶劑指示劑終點(diǎn)顏色

尼可剎米0.15冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結(jié)晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)色第七十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日

2.氫鹵酸鹽類藥物測(cè)定

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

藥物名稱取樣量(g)溶劑加入醋酸汞試液(ml)指示劑終點(diǎn)顏色鹽酸氯丙嗪0.2醋酐10ml5橙黃Ⅳ玫瑰紅色鹽酸異丙嗪0.3冰醋酸10ml4結(jié)晶紫藍(lán)色鹽酸氟奮乃靜0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫藍(lán)綠色鹽酸環(huán)丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黃Ⅳ粉紅色氫溴酸東莨菪堿0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫純藍(lán)色鹽酸硫利達(dá)嗪0.3丙酮100ml5電位滴定法

第七十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日3.硫酸鹽類藥物測(cè)定

硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級(jí)解離，生成SO42-，但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4-，即只供給一個(gè)H+，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。第七十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日（1）硫酸阿托品測(cè)定：阿托品為堿性較強(qiáng)的

一元堿藥物，因而硫酸阿托品的化學(xué)結(jié)構(gòu)式可以簡寫為(BH+)2·SO42-，用HClO4直接滴定時(shí)的反應(yīng)式為：(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4-

n硫酸阿托品:n高氯酸=1:1第七十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日（2）硫酸奎寧測(cè)定：奎寧為二元堿，其中喹核堿的堿性較強(qiáng)，可與硫酸生成鹽；而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽，而保持游離狀態(tài)。當(dāng)用高氯酸直接滴定硫酸奎寧時(shí)，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸。其反應(yīng)式如下：

(C20H24N2·H+)2SO4+3HClO4→(C20H24N2·2H+)·2ClO4-

+(C20H24N2·2H+)·HSO4-·ClO4-Ch.P和USP(24)都采用此法測(cè)定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。第七十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日(3)硫酸奎寧片的測(cè)定：

硫酸奎寧片劑堿化處理，生成奎寧游離堿，然后再用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定。此時(shí)1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸，因此片劑分析的滴定度與原料藥分析的滴定度不同。

第七十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日4.硝酸鹽的測(cè)定

硝酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性不強(qiáng)，滴定反應(yīng)可以進(jìn)行完全。硝酸具氧化性可破壞指示劑使其變色，無法指示終點(diǎn)。因此采用非水溶液滴定法測(cè)定硝酸鹽時(shí)，一般用電位法指示終點(diǎn)。第七十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日5.磷酸鹽與有機(jī)酸鹽

磷酸與有機(jī)酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性極弱，不影響滴定反應(yīng)的定量完成，可以按常規(guī)方法直接滴定。第七十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日（一）硝苯地平的測(cè)定

基本原理硝苯地平的測(cè)定原理，可用下列反應(yīng)式表示：

終點(diǎn)時(shí):微過量的Ce4+將指示劑中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈淡藍(lán)色或無色，以指示終點(diǎn)的到達(dá)。二、鈰量法第七十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日（二）吩噻嗪類藥物的測(cè)定藥物Ce(SO4)2,-e紅色Ce(SO4)2,-2e紅色消退自身指示終點(diǎn)或電位法、永停法指示終點(diǎn)第八十頁，共九十九頁，2022年，8月28日(一）酸性染料比色法

1.基本原理三、比色法第八十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日

2.影響因素

(1)水相最佳pH值的選擇：水相的pH應(yīng)使有機(jī)堿性藥物均成陽離子(BH+)，而酸性染料應(yīng)電離足夠的陰離子(In-),陰陽離子才能定量生成離子對(duì)，并完全溶于有機(jī)溶劑中，而過量的染料完全保留在水相中，才能保證定量的測(cè)定。

(2)酸性染料及其濃度：常用酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)、甲基橙、溴甲酚綠等。酸性染料濃度，對(duì)測(cè)定影響不大，有足夠量即可。

第八十二頁，共九十九頁，2022年，8月28日(3)有機(jī)溶劑的選擇

應(yīng)對(duì)離子對(duì)提取率高，不與水混溶，或能與離子對(duì)形成氫鍵的有機(jī)溶劑。常用的有機(jī)溶劑有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)水分的影響：嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中，水相中過量有色酸性染料，而影響測(cè)定結(jié)果；水分的混入使氯仿混濁，而影響比色測(cè)定。一般加入脫水劑，或?yàn)V紙過濾的方法，除去混入的水分。第八十三頁，共九十九頁，2022年，8月28日3.應(yīng)用示例

Ch.P中硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片和氫溴酸山莨菪堿片等，采用本法測(cè)定含量測(cè)定。第八十四頁，共九十九頁，2022年，8月28日（二）鈀離子比色法優(yōu)點(diǎn)：鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測(cè)定。max~500nm吩噻嗪類藥物

+Pd2+pH2±0.1紅色絡(luò)合物在max處測(cè)定A，以對(duì)照法定量第八十五頁，共九十九頁，2022年，8月28日（一）直接分光光度法

供試品不需提取分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測(cè)定。

1.奧沙西泮原料的測(cè)定在229nm，采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法測(cè)定。

2.鹽酸異丙嗪片的測(cè)定在249nm，采用E1cm1%＝910測(cè)定。

3.鹽酸異丙嗪注射液的測(cè)定

測(cè)定波長的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，可還原異丙嗪紅色氧化產(chǎn)物，從而防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長249nm處有吸收，干擾注測(cè)定。因此選用299nm波長測(cè)定鹽酸異丙嗪注射液的含量時(shí)，維生素C在此波長處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。四、紫外分光光度法第八十六頁，共九十九頁，2022年，8月28日(二)萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪氨水堿化氯丙嗪乙醚提取乙醚層鹽酸提取鹽酸氯丙嗪max254±1nm處測(cè)定A，E1cm1%＝915第八十七頁，共九十九頁，2022年，8月28日（三）萃取-雙波長分光光度法

本法是USP（24）收載的方法，用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定，主要用來校正樣品中氧化物對(duì)測(cè)定的干擾。測(cè)定原理利用氯丙嗪的最λmax為254nm，其氧化物在此波長也有吸收，同時(shí)在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波長無吸收。因此，可由兩波長處測(cè)得△A計(jì)算氯丙嗪含量。第八十八頁，共九十九頁，2022年，8月28日第八十九頁，共九十九頁，2022年，8月28日（四）二階導(dǎo)數(shù)分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液抗氧劑維生素C的二階導(dǎo)數(shù)光譜近似為接近基線的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測(cè)定。因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導(dǎo)數(shù)光譜量取峰266nm～谷254nm距離，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量

其測(cè)定方法如下：

第九十頁，共九十九頁，2022年，8月28日1.光譜繪制

測(cè)繪條件：波長范圍為200nm～320nm；狹縫為12nm；紙速為120mm/min。2.線性關(guān)系精取鹽酸氯丙嗪對(duì)照液(50μg/ml)制得標(biāo)準(zhǔn)系列，以HCI(0.1mol/L)為空白，按光譜繪制項(xiàng)下分別測(cè)定。用尺量取不同濃度系列溶液光譜266nm-谷254nm距離（DL），并以峰谷距離為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.供試品測(cè)定精密量取鹽酸氯丙嗪注射液2.0ml，按光譜繪制項(xiàng)下的方法，測(cè)得二階導(dǎo)數(shù)光譜，量取光譜峰-谷(266nm～254nm)距離，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度，計(jì)算百分含量。第九十一頁，共九十九頁，2022年，8月28日五、氣相色譜法（一）硫酸阿托品片的含量測(cè)定

USP(24)采用的方法。以后馬托品作為內(nèi)標(biāo),

采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法。

測(cè)定方法

(1)內(nèi)標(biāo)溶液的制備：

(2)供試品溶液與對(duì)照品溶液的制備：

(3)色譜系統(tǒng)：色譜柱為1.8m×2mm的玻璃柱；擔(dān)體為與碳酸鈉混合于900℃熔融后，經(jīng)酸和堿處理的硅烷化藻土；固定相為3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧