內(nèi)毒素的檢測及意義主題講座課件(共30張)

內(nèi)毒素的基礎(chǔ)知識儀器試劑的簡單介紹及實驗原理臨床檢驗關(guān)心的問題132三大知識點1892年,科學(xué)家Richard在研究霍亂弧菌的時候,發(fā)現(xiàn)革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜中有一種不溶性成分,它能夠引起人體發(fā)熱、休克、器官損害等病理表現(xiàn)，因其毒性效應(yīng)和性質(zhì)與外毒素有顯著差異，就用內(nèi)毒素這一術(shù)語來描述該物質(zhì)。隨后多年對革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜的超微結(jié)構(gòu)技術(shù)和生物分析技術(shù)，證實內(nèi)毒素是磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)。內(nèi)毒素發(fā)現(xiàn)的歷史內(nèi)毒素的組成O–特異性抗原脂質(zhì)A核心多糖內(nèi)毒素的定義和危害內(nèi)毒素（Endotoxin）是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜的脂多糖（LPS）成分，是革蘭陰性菌生長時釋放或死亡后裂解出來的毒性產(chǎn)物，其中起主要致病作用的是非結(jié)合的游離脂多糖（FLPS）。內(nèi)毒素能夠直接作用于人體，激活組織內(nèi)的炎性細(xì)胞和炎癥因子，導(dǎo)致機體發(fā)熱并產(chǎn)生全身性炎癥反應(yīng)，繼而引起彌散性血管內(nèi)凝血、休克、多臟器功能衰竭等嚴(yán)重的病理生理癥狀，危及生命。定義危害內(nèi)毒素的理化性質(zhì)可濾過性：能夠穿透濾過膜水溶性：LPS的O-特異性Ag呈親水性被吸附性：可被活性碳所吸附易被強酸、強堿和強氧化劑破壞耐熱性：徹底滅活需250高溫干烤一小時人體內(nèi)毒素的來源內(nèi)源性途徑外源性途徑注射藥品及溶液開放性創(chuàng)傷燒傷骨折感染休克大手術(shù)術(shù)后肝臟疾病儀器試劑的介紹及實驗原理BET-24A細(xì)菌內(nèi)毒素分析儀天津大學(xué)天大天發(fā)科技有限公司生產(chǎn)人體液檢測專用鱟試劑盒湛江博康海洋生物制品有限公司生產(chǎn)鱟20世紀(jì)六十年代，人們發(fā)現(xiàn)一種古老的海洋生物，被稱為“海洋活化石”的鱟，它的血液與內(nèi)毒素接觸后會發(fā)生特異性的凝集反應(yīng)，人們經(jīng)過大量研究和實驗從它的血液中提取出了用來檢測內(nèi)毒素的“鱟試劑”。鱟試劑的發(fā)明

1968年1月JackLevin和FrederikB.Bang教授在美國馬塞諸塞州WoolsHole海洋生物實驗室成功分離提取鱟血細(xì)胞并研制成能夠檢測細(xì)菌內(nèi)毒素的鱟試劑，開辟了人類認(rèn)識和檢測內(nèi)毒素的新紀(jì)元！試劑盒特點鱟試劑是唯一能夠檢測內(nèi)毒素水平的生物試劑采用更為準(zhǔn)確的動態(tài)濁度法進(jìn)行檢測鱟試劑盒由鱟試劑、I號II號檢測前處理液、除菌除熱原試管和采血管、吸頭及檢測用水組成精心設(shè)置血液前處理流程，有效去除血細(xì)胞和蛋白的干擾，準(zhǔn)確評估待測樣本中的內(nèi)毒素水平采用內(nèi)毒素國家工作標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行質(zhì)控測評，保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確無誤采用國際通用的內(nèi)毒素活性單位（EU/ml）來準(zhǔn)確衡量待測樣本中的內(nèi)毒素致病效能內(nèi)毒素的單位—EU/ml1BET-24A采用國際通用的內(nèi)毒素活性單位EU/ml來表示檢測出的內(nèi)毒素結(jié)果；2活性單位指的是在生物試劑在檢測某些具有某些活性的生物時，它測得的是這種生物說是致病力，而不是這種生物的重量；3不同的Gˉ菌釋放的內(nèi)毒素活性不同，而對臨床最有診斷價值的是觀測到的內(nèi)毒素的致病力大小，所以內(nèi)毒素水平用活性單位來表示更客觀，更有科學(xué)意義。實驗原理

通過鱟試劑與內(nèi)毒素溶液混合會發(fā)生凝集反應(yīng)產(chǎn)生濁度變化，通過濃度—時間反應(yīng)曲線，得出待測樣品的內(nèi)毒素濃度；實驗原理實驗原理鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)是特異性的“S”曲線，取光密度值為0.02點時作為反應(yīng)終點時間，內(nèi)毒素的濃度與反應(yīng)時間成反比BET檢測標(biāo)本范圍

尿液胸腔積液血液腦脊液透析液和透析用水腹腔積液檢測內(nèi)毒素的方法定性檢測凝膠法定量檢測光度（濁度）法顯色（比色）法動態(tài)濁度法終點濁度法動態(tài)顯色法終點顯色法幾種檢測方法的比較凝膠法檢測的特點“限量”檢測，是一種傳統(tǒng)經(jīng)典的檢測方法；凝膠法是以試管內(nèi)反應(yīng)物凝膠牢固程度為判斷標(biāo)準(zhǔn)，易受人為因素影響；限量檢查的最低檢測限僅為0.035EU/ml，因供試品稀釋倍數(shù)所限，容易被供試品干擾，誤差大。因此，凝膠法不適合在臨床用于體液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；顯色法檢測的特點顯色基質(zhì)法系利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內(nèi)毒素含量的方法，根據(jù)產(chǎn)物顏色判斷內(nèi)毒素濃度。此法試劑較昂貴，操作較復(fù)雜，在一定范圍之內(nèi)靈敏度、特異性較高，但檢測范圍窄；動態(tài)濁度法檢測的特點動態(tài)濁度法檢測的特點利用細(xì)菌內(nèi)毒素在與鱟試劑形成凝膠過程中濁度動態(tài)變化定量測定細(xì)菌內(nèi)毒素水平動態(tài)濁度法法檢測范圍寬，檢測范圍為0.005EU/ml

100EU/ml，應(yīng)用范圍廣對樣本的內(nèi)毒素含量可以定量檢測，標(biāo)準(zhǔn)化程度高，適合用于臨床體液細(xì)菌內(nèi)毒素引起發(fā)熱及重癥疾病的早期診斷檢測發(fā)熱原因的快速輔助診斷（<1小時）內(nèi)毒素定量檢測的臨床意義早期判斷革蘭陰性菌的感染情況（Gˉ菌所致）重癥疾患的早期診斷幫助臨床醫(yī)生快速合理篩選適當(dāng)?shù)目股嘏袛嗫垢腥局委熜Ч邦A(yù)后腸源性內(nèi)毒素血癥的預(yù)判及評估惡性腫瘤感染結(jié)締組織GˉG+發(fā)熱發(fā)熱原因的快速輔助診斷病毒真菌等細(xì)菌幫助臨床醫(yī)生快速篩選合理抗生素Gˉ內(nèi)毒素頭孢菌素類喹諾酮類碳?xì)涿瓜╊惏被沁邦惖?2回日本泌尿器科學(xué)會1994.4內(nèi)毒素檢測與微生物培養(yǎng)的關(guān)系內(nèi)毒素檢測微生物培養(yǎng)確定菌種菌種確定精確確定指導(dǎo)用藥√√檢測速度≯1h快3～7天，慢評估病情輕重√×重疾早期預(yù)警√×陽性率＞80%＜20%內(nèi)毒素與血培養(yǎng)的結(jié)果比較科室內(nèi)毒素結(jié)果(EU/ml)血培養(yǎng)結(jié)果腦外科0.4808大腸埃希菌ICU0.2136大腸埃希菌ICU0.5904鮑曼不動桿菌ICU0.1408鮑曼不動桿菌腎內(nèi)科13.4727大腸埃希菌肝移植科2.1大腸埃希菌肝移植科16.8792大腸埃希菌內(nèi)毒素超標(biāo),血培養(yǎng)陽性內(nèi)毒素與痰培養(yǎng)的結(jié)果比較

科室內(nèi)毒素結(jié)果(EU/ml)痰培養(yǎng)結(jié)果腦外科3.0096肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌腦外科3.2064肺炎克雷伯菌腦外科11.2776銅綠假單胞菌鮑曼不動桿菌腎內(nèi)科1.8264肺炎克雷伯菌銅綠假單胞菌腎移植科10.204陰溝腸桿菌ICU8.0672大腸埃希菌肝移植科2.79鮑曼不動桿菌BET和PCT(降鈣素原)的區(qū)別PCT本身無致病作用，而LPS能直接導(dǎo)致人體發(fā)熱及產(chǎn)生炎癥反應(yīng)PCT也是在以LPS為首的炎癥因子作用下刺激機體靶細(xì)胞產(chǎn)生PCT僅能判斷是否是細(xì)菌感染，BET能判斷是否為Gˉ菌感染，檢測更精準(zhǔn)對于某些腫瘤患者、新生兒及接受移植手術(shù)患者而言，如感染則檢測PCT有制約，而BET對此毫無制約分段區(qū)間的解釋0～0.035EU/ml無明顯內(nèi)毒素血癥