第九屆年會(huì)-2單元july19thhong

T2DM病證結(jié)合動(dòng)物模型研究的思考

——不同STZ劑量造模

對(duì)T2DM動(dòng)物模型證候?qū)傩杂绊懞敝嗅t(yī)藥大學(xué)戴紅研究意義針對(duì)不同疾病建立常見證候的動(dòng)物模型，即病證結(jié)合動(dòng)物模型，它能探討證在某一具體疾病上的表現(xiàn)、同病異證機(jī)制和同一方藥在單純治病、單純治證、病證同治中的作用機(jī)制，對(duì)于證的本質(zhì)闡釋及新藥創(chuàng)制和療效判定具有重要意義。證候?qū)嵸|(zhì)的研究不僅能使辨證論治科學(xué)化和客觀化，也是實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥科學(xué)化、現(xiàn)代化的必由之路，病證結(jié)合正是證候?qū)嵸|(zhì)研究的重要途徑之一，動(dòng)物模型無疑是其中一個(gè)重要手段。研究意義近二十年來糖尿病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)迅速升高Sept.2012WHO

全球有3.47億糖尿病患者，其中T2DM占90%我國(guó)糖尿病患病率調(diào)查：20歲以上人群中總體患病率9.7%，總患病人數(shù)9200萬以上中藥復(fù)方能發(fā)揮多途徑、多靶點(diǎn)優(yōu)勢(shì)，在防治T2DM及其并發(fā)癥上起著重要作用。研究切實(shí)可行、與臨床證候相吻合的糖尿病各階段證候模型，將對(duì)闡明經(jīng)典方藥防治糖尿病的作用機(jī)制及新藥的研發(fā)起重要作用。目前糖尿病病證結(jié)合動(dòng)物模型的建立方法

主要是以藥物誘發(fā)為基礎(chǔ)造模方法，其中較常用的是采用鏈脲佐菌素（STZ）或高脂飼料疊加STZ造模，或在此基礎(chǔ)上疊加其它因素，如灌服中醫(yī)復(fù)方，以建立符合某種證型診斷要求的模型。

在建立模型過程中對(duì)疾病與證候的關(guān)聯(lián)性關(guān)注較少，而臨床實(shí)踐中，病與證的形成并不是截然分開的，證與疾病之間存在明顯的相關(guān)性。糖尿病病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀共識(shí)糖尿病動(dòng)物模型在病程中其表征特點(diǎn)確有變化，

具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析同一時(shí)間段出現(xiàn)的多個(gè)表征動(dòng)物模型的證型判斷成為可能糖尿病病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀在動(dòng)物品系、高脂飼養(yǎng)時(shí)間、STZ注射劑量與方法、T2DM成模判斷標(biāo)準(zhǔn)等實(shí)驗(yàn)條件的報(bào)道不一僅STZ腹腔注射劑量有25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、50mg/kg等不同造模后采血時(shí)間選擇范圍在5～28天模型建立的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)有空腹和隨機(jī)血糖之異空腹血糖就有7.0、7.8、10.0和11.13mmol/L等多個(gè)不同標(biāo)準(zhǔn)糖尿病病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀研究結(jié)論差異極大用高脂飲食結(jié)合STZ造模5周齡SD雄性大鼠用STZ35mg/kg造模后模型4～8周屬陰虛內(nèi)熱、10～13周屬氣陰兩虛；8周齡SD雄性大鼠用STZ35mg/kg造模后1～6周為時(shí)間窗，早期脾氣虧虛為主，后期痰濕瘀滯為主Wistar大鼠用STZ30mg/kg造模后4周末起為氣陰兩虛，9～10周氣陰兩虛加重并伴痰濁，11～12周為血瘀6～8周齡Wistar大鼠用STZ25mg/kg2次造模后初期為陰陽兩虛，中期為氣陰兩虛，后期為陰虛內(nèi)熱，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)STZ動(dòng)物模型的研究

大鼠

品系STZ造模選擇的注射部位STZ劑量STZ注射前大鼠的體重腹腔or

尾靜脈SDorWistar♀and♂or

♂25mg/kg30mg/kg35mg/kg40mg/kg50mg/kg5～8周齡體重：134mg～297mg

（Wistar♂

）150mg～318mg

（SD♂

）規(guī)范模型動(dòng)物的選擇標(biāo)準(zhǔn)范圍、造模劑量和方法，在疾病模型相對(duì)穩(wěn)定的情況下研究其證型表現(xiàn)平行對(duì)照研究把握疾病模型與其證型的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)一步尋找“證”在T2DM中的本質(zhì)表現(xiàn)實(shí)現(xiàn)辨證與辨病相結(jié)合平行對(duì)照研究造模方法高脂飲食4周加STZ腹腔注射STZ劑量四個(gè)常用劑量30mg/Kg、35mg/Kg、40mg/Kg、50mg/Kg觀察STZ不同劑量組模型動(dòng)物在T2DM病程中的表現(xiàn)，判斷STZ腹腔注射4種不同劑量造模后各模型組動(dòng)物在T2DM病程中的證型及其演變【飼養(yǎng)方法】每只單獨(dú)飼養(yǎng)在代謝籠中【血糖測(cè)量】每周第1天

尾部血管采血法【動(dòng)物體重稱量】每周第1天

動(dòng)態(tài)天平【造模后飼料與飲水】給予普通飼料、超純水喂養(yǎng)平行對(duì)照研究特點(diǎn)【觀測(cè)指標(biāo)】每日觀察每只動(dòng)物表征，測(cè)定每只動(dòng)物代謝指標(biāo)，包括24h采食量、24h飲水量、24h尿量【實(shí)驗(yàn)人員】中診教師and實(shí)驗(yàn)師實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果第6周單日空腹血糖、24h采食量、24h飲水量和24h尿量變化及相關(guān)性檢驗(yàn)第9周單日隨機(jī)血糖、24h采食量、24h飲水量和24h尿量變化及相關(guān)性檢驗(yàn)高脂飲食是造模的重要因素，四周高脂飲食期間，采食量大的動(dòng)物STZ造模后血糖較高、飲水量大、尿量多、大便色淺且多濕爛并有較濃烈酸臭味；飲食在糖尿病模型動(dòng)物的病情輕重及病程演變上有決定意義；且與模型動(dòng)物表征、臨床表現(xiàn)（飲食量、飲水量、尿量、大便性狀等）密切相關(guān)，并有一定時(shí)間窗。STZ劑量除動(dòng)物的24h采食量、飲水量、尿量的定量測(cè)定值，各組動(dòng)物舌質(zhì)、大便的性狀、質(zhì)地、便量等對(duì)判斷動(dòng)物證型及變化具有重要意義觀測(cè)指標(biāo)STZ各劑量組模型動(dòng)物第5-10周期間在體重、24h采食量、24h飲水量、24h尿量、空腹血糖、隨機(jī)血糖組間比較有顯著差異觀測(cè)指標(biāo)觀測(cè)指標(biāo)數(shù)據(jù)分析初步結(jié)論觀測(cè)指標(biāo)數(shù)據(jù)分析初步結(jié)論時(shí)間窗模型4組血糖監(jiān)測(cè)治療時(shí)間STZ造模后第1-3周，模型1組、模型2組和模型3組動(dòng)物證型主要表現(xiàn)為津傷、熱象，但模型1組和模型3組動(dòng)物津傷表現(xiàn)更為嚴(yán)重，模型3組動(dòng)物尚有氣虛和濕盛表現(xiàn)；第4周起模型3組動(dòng)物氣陰兩虛表現(xiàn)明顯，而模型2組動(dòng)物第6周出現(xiàn)氣陰兩虛之象。動(dòng)物病情較重，迅速進(jìn)入衰竭期，STZ腹腔注射后第3周是其轉(zhuǎn)折點(diǎn)，該劑量組動(dòng)物模型類似于人類T1DM，不適合作為降糖中藥復(fù)方研究的載體血糖值作為DM動(dòng)物模型觀察的重要指標(biāo)，DM大鼠的隨機(jī)血糖較空腹血糖更為穩(wěn)定可靠，與動(dòng)物的病情和代謝指標(biāo)一致性高，相比之下，空腹血糖波動(dòng)范圍較大，不利于判斷動(dòng)物的真實(shí)血糖水平。實(shí)驗(yàn)11周起，各劑量組動(dòng)物體重變化小、較為穩(wěn)定，提示DM動(dòng)物的治療周期在6-8周以內(nèi)較為理想，有利于觀察降糖藥物療效。思考1.如何選擇模型？以病為主以證為主2.模型建立飲食STZ劑量造模方法判斷標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物品系性別周齡3.證型的判斷判斷依據(jù)？無法采集自覺癥狀憑動(dòng)物表征……？如何驗(yàn)證？證型表征…病證結(jié)合模型疾病證型的判定依據(jù)疾病動(dòng)物模型建立動(dòng)物品系動(dòng)物周齡建模時(shí)間建模方法tough病證結(jié)合模型涉及廣泛，變化較多，有待進(jìn)一步研究復(fù)雜實(shí)驗(yàn)過程中一些與人類疾病不同的變化實(shí)驗(yàn)11周后：模型1組（STZ30mg/kg）造模后血糖＜11.1mmol/L的那只動(dòng)物3天內(nèi)病情迅速進(jìn)展，出現(xiàn)多飲多食多尿，且血糖迅速升高并持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束；模型3組（STZ40mg/kg）中一只動(dòng)物病情好轉(zhuǎn)，多飲多食多尿及血糖值在一周內(nèi)逐步減輕直至恢復(fù)正常，并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。提示某些糖尿病動(dòng)物病情有可能自發(fā)性緩解，而人類T2DM患者病程中尚無可能。差異再思考1.在不同病程階段觀察模型動(dòng)物表征的基礎(chǔ)上結(jié)合微觀指標(biāo)檢測(cè)，結(jié)合相應(yīng)方劑反證證型有無可能準(zhǔn)確地判斷證型，從而有利于探