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染色體顯帶原理與技術(shù)染色體顯帶技術(shù)染色體顯帶技術(shù):經(jīng)物理、化學(xué)因素處理后,再用染料對(duì)染色體進(jìn)行分化染色,使其呈現(xiàn)特定的深淺不同帶紋(band)的方法。顯帶技術(shù)可分為兩大類:一類是產(chǎn)生的染色帶分布在整條染色體上如:G、Q和R帶;另一類是局部性的顯帶,它只能使少數(shù)特定的區(qū)域顯帶,如C、T和N帶。幾種顯帶的制作方法之間的關(guān)系Q帶喹丫因染色后,紫外照射下的明暗帶(富含AT的明帶,富含GC的暗帶)喹丫因,Quinacrine,易結(jié)合于富含AT的DNA的熒光染料。R帶在細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中加入堿基的類似物(Brdu),然后用紫外線照射后再用Giemsa染料染色,可以得到和G-顯帶相反的帶紋,稱為R-帶(ReverseG-band)。BrdU,5-Bromo-2-deoxyUridine,5-溴脫氧尿嘧啶核苷在DNA合成期(S期)可代替胸腺嘧啶R顯帶總體圖C帶將染色體用堿或者去垢劑處理后,再用Giemsa染色,可以得到只顯示著絲粒(centromere)區(qū)域的帶紋,稱為C-帶。T帶T顯帶是R顯帶的亞類,因?yàn)樘禺惖刂诙肆6Q為T(mén)顯帶。T帶是R帶的最深染部分,必須用特殊的高熱處理染色體,然后用吉姆薩或與熒光聯(lián)合染色。是染色體端粒部位經(jīng)丫啶橙染色后呈現(xiàn)的區(qū)帶。N帶此技術(shù)可以使13、14、15、21和22號(hào)染色體的隨體和隨體柄著色。G帶制備的染色體標(biāo)本經(jīng)胰蛋白酶消化、Giemsa染色后,可在染色體縱軸上顯示出著色深、淺相間的橫紋——帶,表明每條染色體的特征。正常人的核型分析(G帶染色)目的和要求1.了解人類染色體的分組特征2.了解人類染色體G顯帶的每號(hào)染色體的帶型特點(diǎn)3.初步掌握人類染色體的核型分析方法原理1.染色體分組根據(jù)染色體大小和著絲粒位置。2.以G顯帶染色體的帶型特征,作為識(shí)別染色體的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)人類體細(xì)胞染色體的分組(二)G顯帶染色體標(biāo)本的核型分析(一)染色體分組根據(jù)染色體大小和著絲粒位置A:1-31,3近中著絲粒,2號(hào)為亞中B:4-5亞中著絲粒(短臂較短)C:6-12,X亞中著絲粒D:13-15近端著絲粒E:16-1816號(hào)中著絲粒,17、18號(hào)亞中F:19-20近中著絲粒G:21-22,Y近端著絲粒(二)G顯帶染色體標(biāo)本的核型分析1號(hào):近中著絲粒,短臂遠(yuǎn)端帶少,“1禿”p:近端到中部可見(jiàn)2條深帶,遠(yuǎn)端帶少,著色較淺。q:緊靠著絲粒的地方為深染的次縊痕,此外在整個(gè)長(zhǎng)臂上分布著4條帶,以第二條最寬,染色最深。A組:1-3號(hào)(最大)2號(hào):亞中著絲粒,長(zhǎng)短臂上帶較多,“2蛇”
p:可見(jiàn)4條深帶,中間2條較靠近。
q:可見(jiàn)7條深帶,近端的2條較淺。3號(hào):近中著絲粒,著絲粒上下有兩條深染的寬帶相對(duì)稱,“3蝶腰”著絲粒深染,長(zhǎng)臂、短臂近著絲粒的地方各有一深帶,遠(yuǎn)端各有2條深帶,兩臂的中部分別為一明顯的陰性帶,乍看上去似乎兩臂的帶型呈對(duì)稱分布,但短臂遠(yuǎn)端的2條深帶較靠近末端。4號(hào):長(zhǎng)臂4條深帶,均勻排列,近側(cè)帶深。p:可見(jiàn)1條深帶。q:可見(jiàn)均勻分布的4條深帶,近端的1條最深。B組:4-5號(hào),亞中著絲粒5號(hào):長(zhǎng)臂4條帶,3條帶集中,第4條帶靠近末端。p:可見(jiàn)1條深帶。q:可見(jiàn)4-5條深帶,中部的3條深帶較靠近,有時(shí)融在一起似2條深帶,遠(yuǎn)端的1條較深,近端的1條較淺而有別于4號(hào)染色體相同部位的那條帶。6號(hào):短臂中段有一寬淺帶似“小白臉”p:近端1條深帶,中部為一寬的陰性帶,遠(yuǎn)端2條深帶常融合成1條。q:可見(jiàn)4條深帶,較長(zhǎng)的染色體有時(shí)可見(jiàn)6條帶。C組:6-12號(hào),X,亞中著絲粒7號(hào):長(zhǎng)臂有3條深帶,短臂頂端有一深帶似“瓶塞”p:中部1條較窄的深帶,末端為一明顯的深帶,形似“瓶塞”。q:有3條深帶,近端和中部的2條深且明顯,遠(yuǎn)端的1條著色較淺。10號(hào):長(zhǎng)臂三條深帶,近側(cè)帶最深(“10上”)
p:中部可見(jiàn)1條深帶。q:可見(jiàn)3條深帶,近端的1條染色最深而有別于8號(hào)染色體。8號(hào):長(zhǎng)臂三條深帶分界不明顯,遠(yuǎn)側(cè)帶深(“8下”)
p:近端和遠(yuǎn)端各有1深帶,中部為陰性帶。q:可見(jiàn)3條深帶,近端的1條較淺。9號(hào):長(zhǎng)臂兩條寬深帶,由于次縊痕呈現(xiàn)“細(xì)脖子”p:中部和末端各有1條深帶,中部的帶染色較深。q:可見(jiàn)2條明顯的深帶。著絲粒區(qū)深染,其下的次縊痕區(qū)淺染,呈現(xiàn)特有的頸部區(qū)。12號(hào):長(zhǎng)臂深帶寬,近側(cè)淺帶相對(duì)11號(hào)較窄p:中部可見(jiàn)1條深帶。q:中部1條較寬的深帶,它與著絲粒之間為明顯的淺染部分,但比11號(hào)染色體同一部位的陰性帶窄一些。X染色體:長(zhǎng)臂、短臂各有一深帶,以著絲粒為中點(diǎn)對(duì)稱,呈竹節(jié)狀p:正中部有1條明顯的深帶,近端和遠(yuǎn)端為陰性帶。q:可見(jiàn)3條深帶,近端的1條深帶特別深而寬,形如“竹節(jié)”。遠(yuǎn)端的2條深帶較淺。11號(hào):長(zhǎng)臂深帶寬,近側(cè)有一寬淺帶p:可見(jiàn)1條深帶。q:中部2條深帶,常融合成1條,這2條帶與著絲粒之間是一寬的陰性帶。D組:13-15,近端著絲粒13號(hào):長(zhǎng)臂3條深帶長(zhǎng)臂可見(jiàn)4條深帶,中部2條寬而深。14號(hào):長(zhǎng)臂2條深帶長(zhǎng)臂也有4條深帶,其分布與13號(hào)不同,近端1條窄的和1條寬的深帶常融合在一起,中部1條很窄的深帶,遠(yuǎn)端有1條較寬的深帶為其特征。15號(hào):長(zhǎng)臂1深帶長(zhǎng)臂中部為一條較寬的深帶,近端有一條較窄的深帶,遠(yuǎn)端的1條深帶位于長(zhǎng)臂的最末端,而有別于14號(hào)染色體,且著色不如14號(hào)長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端的帶深。16號(hào):次縊痕與著絲粒形成“▲”區(qū)。形態(tài)多變,一般在p中部有1條深帶,q可見(jiàn)1-2條深帶,次縊痕區(qū)深染且寬是其特點(diǎn)。E組:16-18號(hào),16號(hào)中著絲粒,17、18號(hào)亞中17號(hào):長(zhǎng)臂有1條深帶,鐐銬p:有1條較窄的深帶。q:有1條明顯的深帶,位于遠(yuǎn)端,這條帶與著絲粒之間為一寬的陰性帶。18號(hào):長(zhǎng)臂2條深帶短臂淺染,長(zhǎng)臂近端和遠(yuǎn)端各有一深帶。
19號(hào):染色最淺的染色體,僅著絲粒及周?chē)钊局z粒深染,長(zhǎng)、短臂均為陰性帶。F組:19-20,近中著絲粒20號(hào):短臂1條深帶。著絲粒較深,長(zhǎng)、短臂各有一條深帶。短臂上的深帶較寬。G組:21-22,Y,近端著絲粒21號(hào):長(zhǎng)臂近側(cè)有一深帶,葫蘆長(zhǎng)臂上有1條深帶,常和著絲粒在一起。22號(hào):著絲粒區(qū)著色濃,長(zhǎng)臂有2條較淺的深帶著絲粒深染,長(zhǎng)臂中部有1條較窄的深帶。Y:長(zhǎng)臂易并攏,無(wú)隨體,整個(gè)長(zhǎng)臂深染。因個(gè)體不同而長(zhǎng)短、形態(tài)各異,一般整個(gè)長(zhǎng)臂深染。有時(shí)可見(jiàn)2條深帶。
Y四、作業(yè)1.將分散良好的標(biāo)本進(jìn)行顯微鏡照相2.識(shí)別:1,2,3,7,21,X1:短臂遠(yuǎn)端帶少,“1禿”2:長(zhǎng)短臂上帶較多,“2蛇”3:長(zhǎng)短臂深帶對(duì)稱,“3蝶腰”4:長(zhǎng)臂4條深帶,均勻排列,近側(cè)帶深5:長(zhǎng)臂4條帶,3條帶集中,第4條帶靠近末端6:短臂中段有一寬淺帶似“小白臉”7:長(zhǎng)臂有3條深帶,短臂頂端有一深帶似“瓶塞”8:長(zhǎng)臂三條深帶分界不明顯,遠(yuǎn)側(cè)帶深(“8下”)
9:長(zhǎng)臂兩條寬深帶,由于次縊痕呈現(xiàn)“細(xì)脖子”10:長(zhǎng)臂三條深帶,近側(cè)帶深(“10上”)
11:長(zhǎng)臂有一寬深帶,近側(cè)有一寬淺帶12:長(zhǎng)臂有一寬深帶,近側(cè)淺帶相對(duì)11號(hào)較窄X:長(zhǎng)、短臂各一深帶,對(duì)稱,呈
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