豬糖皮質(zhì)激素受體研究進(jìn)展

關(guān)于豬糖皮質(zhì)激素受體研究進(jìn)展第一頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片太湖豬（二花臉、梅山豬）品種特點(diǎn)體型小、生長(zhǎng)慢性成熟早、產(chǎn)仔率高脂肪型、瘦肉率低肉質(zhì)鮮美、IMF含量高性情溫順，母性好第二頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片比利時(shí)皮特蘭豬品種特性

體型較大、生長(zhǎng)速度快瘦肉率高豬應(yīng)激綜合征

PSE肉第三頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片豬的個(gè)性（翻背試驗(yàn)）第四頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片Breed3-days10-days17-daysErhualian3.36±0.22Aa1.98±0.19Ab1.76±0.24AbPietrain8.00±0.40Ba5.58±0.51Bb4.21±0.40BcPieXEHL6.17±1.85Ca5.26±0.23Bb3.66±0.25BcDifferentsuperscriptlettersindicatesignificantdifferences.Lowercaseannotatesagedifference(p<0.05),capitalcaseannotatesbreeddifference(p<0.001).Morethan20pigletsfromatleast5litterswereusedinthetest.皮特蘭豬:高抵抗、應(yīng)激敏感二花臉豬:低抵抗、應(yīng)激耐受翻背試驗(yàn)“Backtest”評(píng)分第五頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片Lietal./LivestockScience113(2008)169–177

二花臉豬表現(xiàn)較強(qiáng)的行為可塑性：上車后第15分鐘試圖逃脫，表現(xiàn)較多的異常行為，但15分鐘后即安靜下來(lái)，大多數(shù)時(shí)間蹲坐或躺臥。皮特蘭豬表現(xiàn)顯著的刻板行為：從上車到2小時(shí)運(yùn)輸結(jié)束，表現(xiàn)很高頻率和很長(zhǎng)時(shí)間的恐懼相關(guān)的肌肉緊張，呆板站立。皮特蘭豬行為刻板，適應(yīng)性差，而二花臉豬行為模式可塑性強(qiáng)，適應(yīng)性強(qiáng)。2小時(shí)運(yùn)輸過程中的行為表現(xiàn)第六頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片血液激素和生化指標(biāo)二花臉組織損傷少，但皮質(zhì)醇水平是皮特蘭豬的2倍。EHL:dashedline;PIE:reallineCK:creatinekinase;LDH:lactatedehydrogenase第七頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片肉質(zhì)指標(biāo)和肌肉能量代謝二花臉豬運(yùn)輸后的肉質(zhì)比皮特蘭豬好，肌肉能量?jī)?chǔ)存較高Lietal./MeatScience81(2009)218–223第八頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片EHLPIE二花臉豬肝臟糖異生能力顯著高于皮特蘭

在饑餓和應(yīng)激狀態(tài)下更容易維持血糖穩(wěn)態(tài)清除血液中乳酸的能力強(qiáng)，有效防止酸中毒二花臉豬肝臟糖異生三個(gè)關(guān)鍵酶都顯著上調(diào)丙酮酸羧化酶（PC）線粒體磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK-m）果糖-1,6-二磷酸酶（FBPase）第九頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片MR

GR

11β-HSD1

11β-HSD2海馬-下丘腦-垂體

-腎上腺（HHPA）軸海馬：GR/MR11β-HSD1/2下丘腦：CRH垂體：ACTH腎上腺：皮質(zhì)醇（酮）第十頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片

糖皮質(zhì)激素受體—性狀整合調(diào)控的候選基因海馬：應(yīng)激敏感性肝臟：糖異生肌肉：能量代謝和肉質(zhì)脂肪：脂肪沉積GR基因的調(diào)控！第十一頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片糖皮質(zhì)激素受體經(jīng)典作用途徑第十二頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片GR信號(hào)途徑經(jīng)典核受體途徑（GREornGRE）其他轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同途徑（不依賴GRE）染色質(zhì)重塑協(xié)同因子膜受體途徑

第十三頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片老基因，新熱點(diǎn)—國(guó)際醫(yī)學(xué)和表遺傳學(xué)研究靶點(diǎn)

糖皮質(zhì)激素受體基因

人類和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

最受關(guān)注的藥物靶點(diǎn)啟動(dòng)子SNP與復(fù)雜性狀相關(guān)環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)的程序化調(diào)控表觀遺傳機(jī)制調(diào)控轉(zhuǎn)錄

豬（cDNA，2006）與抗逆、肉質(zhì)性狀有關(guān)受母體營(yíng)養(yǎng)程序化調(diào)控品種間存在顯著差異表觀遺傳機(jī)制？

第十四頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片人類GR基因啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)第十五頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片大鼠GR基因啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)(1)Weaver,etal.,NatNeurosci7:847-54(2004)(2)Lillycrop,etal.,J.Nutr.135:1382-1386(2005)Rats:DNAmethylationandH3K9acetylationinGRexon17promoteraremodifiedbymaternalcare(1)andmaternalproteinrestriction(2).第十六頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片有其母（養(yǎng)母）必有其女：大鼠“好媽媽”、“壞媽媽”，新生仔鼠代養(yǎng)，分為四組；無(wú)論什么遺傳背景，好媽媽哺育的雌性后代也成為好媽媽；伴隨海馬GR基因表達(dá)的改變；伴隨GR表遺傳修飾的變化；這種后天獲得的表型可以遺傳。第十七頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片母鼠妊娠期蛋白限飼改變仔鼠肝臟GR啟動(dòng)子甲基化

J.Nutr.135:1382–1386,2005.第十八頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片豬GR基因啟動(dòng)子克隆和測(cè)序

第十九頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片豬GR基因啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)

Exon3’-BoundaryPosition14GGCCCAAGgt-4473to-430115CTTCAAGTgt-3825to-376916GGCCCAGAgt-3597to-351817AAGACCAGgt-3207to-314718GCCAACAGgt-3026to-293619/10GGGCAGAGgt-2654to-2360111CTCAACAGgt-1851to-1699

豬GR啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)和序列與人的同源性高于大鼠與人的同源性。第二十頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片GRmRNA5’變體表達(dá)具有組織特異性ExonTissuedistribution1-4LV=LD<AD<HP1-5LV=LD<AD=HP1-6LV<LD=AD<HP1-7LV=LD=AD<HP1-8LV=LD=AD<HP1-9/10LV<LD=AD=HP1-11LV=AD=HP<LD

豬GR第1外顯子呈組織特異性表達(dá)，表明不同組織采用的啟動(dòng)子有所不同。第二十一頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片GRmRNA5’變體表達(dá)具有品種特異性LiverAdrenalcortexLWEHL第二十二頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片GR啟動(dòng)子全長(zhǎng)甲基化水平總體不存在品種差異大白豬二花臉豬

豬GR啟動(dòng)子甲基化水平普遍較低；

15～17個(gè)CpG位點(diǎn)存在組織差異，主要分布于exon1-4之前，1-4,1-5之間，以及1-9,10和1-11之間；肌肉甲基化程度顯著高于肝臟及海馬。ColorKey00.20.40.60.81第二十三頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片某些CpG位點(diǎn)存在品種差異，并與TF有關(guān)

肝臟存在品種差異的位點(diǎn)有2個(gè)。涉及的轉(zhuǎn)錄因子：GR，sp1，C/EBPα,STAT5/6。

背最長(zhǎng)肌存在品種差異的位點(diǎn)有6個(gè)。涉及的轉(zhuǎn)錄因子：sp1,ATF2（組蛋白轉(zhuǎn)移酶）,CREB,MyoD，F(xiàn)OXM1，GR，ZAC-1α，sp1,SMAD3/4,CTCF（抑制啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性）。第二十四頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)和與啟動(dòng)子結(jié)合存在品種差異WBChIP第二十五頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片GR啟動(dòng)子組蛋白乙?；图谆痯=0.15**0.000.200.400.600.801.001.201.401.60LDPSLVH3K9mevaluesrelativetototalhistoneH3大白(n=5)二花臉(n=5)p=0.41*p=0.100.000.501.001.502.002.50LDPSLVH3K4me3valuesrelativetototalhistoneH3大白(n=5)二花臉(n=5)H3K27me3H3AcH3K4me3H3K9me第二十六頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片豬GR基因3‘UTR的克隆以及靶向GR的microRNA的篩選

克隆了GR基因3‘UTR，篩選了10個(gè)靶向GR的microRNA，有待功能驗(yàn)證。第二十七頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片母豬妊娠期和哺乳期飼喂高低蛋白日糧HPLPHPLPWeaningFatteningGestation&lactation

Sow35

d8mon=lowprotein(6%、7%)組織采樣FinisherBirth=highprotein(12%、14%)Growth&meatqualityMyofiberpropertiesGeneexpressionEpigeneticregulationWeaner第二十八頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片母體日糧蛋白改變斷奶仔豬肌肉GRmRNA變體的表達(dá)第二十九頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片SequenomMassARRAY?DNA甲基化分析第三十頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片肝臟GRExon1-4甲基化1234GAGCGCCAGGGGCAGGGCAGGGTGGAGCTGCGGCAGCCTCCGCCCCCGTCTGCAGCT56GGCAAGCGCTGTCACCTGTGGGGGCGCAAAAGTTCCCTCCCCAAACCCTAAAGCCACA789CAGCACAACCTTTCCCCGAGTCACAAAAATCGTAATATGTGCGGCCCAAGGTAGGAGGC101112131415TCGGTCCCAAACGTTCCCAAGCCCTCTGGACGCGGCGGGCCGGGGAAGGGGGCTGGG1617181920GAGGGGGCCTCCCGCGCGGACACCCCTCACCGCACGCCCCTCTCTTTGGGGAAGGGCC2122232425ACGTGTTTCCTTCGAGCCGAGGAGGAGGCGCCTAACGGGCACAGCTGGAAGGAGTTTA

ATGC第三十一頁(yè)，共34頁(yè)幻燈片肌肉GRExon1-4甲基化1234GAGCGCCAGGGGCAGGGCAGGGTGGAGCTGCGGCAGCCTCCGCCCCCGTCTGCAGCT56GGCAAGCGCTGTCACCTGTGGGGGCGCAAAAGTTCCCTCCCCAAACCCTAAAGCCACA789CAGCACAACCTTTCCCCGAGTCACAAAAATCGTAATATGTGCGGCCCAAGGTAGGAGGC1011