醫(yī)學保健基因治療的原理與研究概況

精品PPT課件瀏覽免費下載后可以編輯修改。:///醫(yī)學精品課件最權(quán)威的課件資料，免費在線閱2基因治療的原理

與研究進展TheAdvanceandPrincipleofGeneTherapy中南大學生物科學與技術(shù)學院2023/1/123基因治療分類體細胞(somaticcell)基因治療生殖細胞(germline)基因治療只限于某一體細胞的基因的改變只限于某個體的當代對缺陷的生殖細胞進行矯正當代及子代2023/1/1241.基因治療的策略

內(nèi)容提要2.基因轉(zhuǎn)移技術(shù)

4.治療基因的受控表達3.基因干預5.基因治療的應用研究2023/1/125

一、基因治療的策略2023/1/126

(一)基因置換(genereplacement)

定義:指將特定的目的基因?qū)胩囟毎?通過定位重組,導入的正?；?以置換基因組內(nèi)原有的缺陷基因。

目的:將缺陷基因的異常序列進行橋正。對缺陷基因的缺陷部位進行精確的原位修復,不涉及基因組的任何改變。2023/1/127基因同源重組技術(shù)又稱為基因打靶(genetargeting)定向整合的條件:轉(zhuǎn)導基因的載體與基因組DNA具有相同的序列。帶有目的基因的載體就能找到同源重組的位點,進行局部基因序列交換。基因同源重組技術(shù)2023/1/128要實現(xiàn)基因置換,需要采用同源重組技術(shù)使相應的正?；蚨ㄏ?qū)胧荏w細胞基因組的缺陷部位。定向?qū)氲陌l(fā)生率約1/100萬,采用胚胎干細胞培養(yǎng)的方法,同源重組的檢出率最高可達1/10。2023/1/129(二)基因添加

基因添加(geneaugmentation):通過導入外源基因使靶細胞表達其本身不表達的基因。類型:在有缺陷基因的細胞中導入相應的正常基因,而細胞內(nèi)的缺陷基因并未除去,通過導入正?；虻谋磉_產(chǎn)物,補償缺陷基因的功能;向靶細胞中導入靶細胞本來不表達的基因,利用其表達產(chǎn)物到達治療疾病的目的。2023/1/1210(三)基因干預基因干預(geneinterference):采用特定的方式抑制某個基因的表達,或者通過破壞某個基因的結(jié)構(gòu)而使之不能表達,以到達治療疾病的目的。2023/1/1211(四)自殺基因治療自殺基因治療:惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。原理:將“自殺〞基因?qū)胨拗骷毎?這種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細胞毒性代謝物,誘導靶細胞產(chǎn)生“自殺〞效應,從而到達去除腫瘤細胞的目的。2023/1/1212自殺基因的作用機制

2023/1/1213?TK/GCV

單純皰疹病毒(herpssimplexvirus,HSV)Ⅰ型胸苷激酶(thymidinekinase,tk)基因編碼胸苷激酶,特異性地將無毒的核苷類似物丙氧鳥苷(ganciclovir,GCV)轉(zhuǎn)變成毒性GCV三磷酸核苷,后者能抑制DNA聚合酶活性,導致細胞死亡。?CD/5-FC

大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶(cytosinedeaminase,CD)基因,在細胞內(nèi)將無毒性5-氟胞嘧啶(5-FC)轉(zhuǎn)變成毒性產(chǎn)物5-氟尿嘧啶(5-FU)。1.自殺基因系統(tǒng)2023/1/1214旁觀者效應:“自殺基因〞導入后,不僅使轉(zhuǎn)導了“自殺基因〞的腫瘤細胞在用藥后被殺死,而且與其相鄰的未轉(zhuǎn)導“自殺基因〞的腫瘤細胞也被殺死。

2.旁觀者效應2023/1/1215

(五)基因免疫治療通過將抗癌免疫增強的細胞因子或MHC基因?qū)肽[瘤組織,以增強腫瘤微環(huán)境中的抗癌免疫反響。2023/1/1216二、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)

2023/1/1217基因治療的兩種途徑載體目的基因invivoexvivo靶細胞2023/1/1218

基因轉(zhuǎn)移(genetransfer)技術(shù):

2023/1/1219

1.病毒介導的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)病毒載體介導的基因轉(zhuǎn)移效率較高,因此它也是使用最多的基因治療載體。據(jù)統(tǒng)計,有72﹪的臨床實驗方案和71﹪的病例使用了病毒載體,其中用得最多的是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。2023/1/1220Retrovirus

(1)逆轉(zhuǎn)錄病毒

2023/1/12212023/1/1222(1)兩端各有一長末端重復序列LTR。

逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒的結(jié)構(gòu)特點

(2)LTR由U3、R和U5三局部組成。(3)病毒有三個結(jié)構(gòu)基因(4)5ˊ端LTR下游有一段病毒包裝所必需的序列(ψ)及剪接供體位點(SD)和剪接受體位點(SA)。

(5)含有負鏈DNA轉(zhuǎn)錄的引物結(jié)合位點(PBS)和正鏈DNA轉(zhuǎn)錄的引物結(jié)合位點。

(1)在U3內(nèi)有增強子和啟動子;

(2)U3和U5兩端分別有病毒整合序列(IS)

;(3)在R內(nèi)還有poly(A)加尾信號。

(1)gag基因,編碼核心蛋白和屬特異性抗原;(2)pol基因,編碼逆轉(zhuǎn)錄酶;(3)env基因,編碼病毒外殼或包膜糖蛋白(包括外膜糖蛋白和穿膜蛋白)。

2023/1/1223逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)

──由兩局部組成:

(1)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體

(2)輔助細胞株(如PA317)2023/1/1224Retroviralpackagingsystem2023/1/1225

逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的特點

①逆轉(zhuǎn)錄病毒包膜上env編碼的糖蛋白,能夠被許多哺乳動物細胞膜上的特異性受體識別,從而使逆轉(zhuǎn)錄病毒攜帶的遺傳物質(zhì)高效地進入靶細胞。

②逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)基因gag、env和pol的缺失不影響其他局部的活性。

③前病毒通過LTR高效整合至靶細胞基因組中,有利于外源基因在靶細胞中的永久表達。

④包裝好的假病毒顆粒(攜帶目的基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體)以出芽的方式分泌至輔助細胞培養(yǎng)的上清液中,易于別離制備。2023/1/1226

逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的主要缺點

隨機整合,有插入突變、激活癌基因的潛在危險;逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的容量較小,只能容納7kb以下的外源基因。2023/1/1227

(2)腺病毒(adenovirus,AV)載體

腺病毒是一種大分子(36kb)雙鏈無包膜DNA病毒。它通過受體介導的內(nèi)吞作用進入細胞內(nèi),然后腺病毒基因組轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi),保持在染色體外,不整合進入宿主細胞基因組中。

腺病毒是人類呼吸道感染的病原體,但目前尚未發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)生有關(guān)聯(lián)。宿主細胞范圍廣,可感染分裂和非分裂終末分化細胞,如神經(jīng)元等。2023/1/12282023/1/1229腺病毒的優(yōu)點,對人類平安;;;4.重組腺病毒可通過口服經(jīng)腸道吸收、或噴霧吸入或氣管內(nèi)滴注;,可插入7.5kb外源基因。2023/1/1230

腺病毒載體缺點2.宿主的免疫反響導致腺病毒載體表達短暫。3.有兩個環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生復制型腺病毒。4.靶向性差。

DNA中。分裂增殖快的細胞,導入的重組病毒載體,隨分裂而喪失的時機增多,表達時間相對較短。(1)腺病毒產(chǎn)生過程中與293輔助細胞內(nèi)E1區(qū)序列發(fā)生同源重組;(2)腺病毒載體與被治療的患者體內(nèi)已感染的野生型腺病毒,甚至乳頭瘤病毒、巨細胞病毒發(fā)生重組。2023/1/1231(3)腺病毒相關(guān)病毒載體腺病毒相關(guān)病毒(adenovirusassociatedvirus,AAV)是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒。其基因組DNA小于5kb,無包膜,外形為裸露的20面體顆粒。AAV不能獨立復制,只有在輔助病毒(如腺病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒)存在時,才能進行復制和溶細胞性感染,否那么只能建立溶源性潛伏感染。AAVVirusParticles2023/1/1232StructureofAAVVirusGenomicDNAREP:病毒復制基因,CAP:編碼衣殼蛋白的基因ITR:反向末端重復序列2023/1/1233AAV的特點●以潛伏感染為主;●病毒基因組與細胞共存;●只要宿主細胞正常,AAV基因表達被抑制而維持潛伏狀態(tài);●假設(shè)細胞受刺激,表達應激基因,AAV基因表達從而使AAV病毒復制;●產(chǎn)生子代病毒并釋放,又感染新的細胞,建立新的潛伏狀態(tài)。2023/1/1234AAV載體是目前正在研究的一類新型平安載體,它對人類無致病性。AAV可以高效定點整合至人19號染色體的特定區(qū)域19中,并能較穩(wěn)定地存在?？梢猿掷m(xù)穩(wěn)定表達,并可受到周圍基因的調(diào)控,兼具逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺病毒載體兩者的優(yōu)點。2023/1/1235

AAV載體的缺陷:

AAV載體容量小，目前最多只能容納5kb外源DNA片段；感染效率比逆轉(zhuǎn)錄病毒載體低。在40%-80%的成人中存在過感染，可能會引起免疫排斥。2023/1/1236常用基因治療載體

整合致病性感染細胞克隆容量逆轉(zhuǎn)錄病毒載體隨機整合，效率高可能致病分裂細胞<7kb腺病毒載體不整合，可能丟失不致病分裂細胞、非分裂細胞

腺相關(guān)病毒載體定點整合(19號染色體特定區(qū)域)不致病分裂細胞、非分裂細胞<5kb2023/1/12上個世紀末,本世紀初，1996年,清華學界對中醫(yī)氣本質(zhì)，經(jīng)絡(luò)實質(zhì)，陰陽，五行，藏象，中醫(yī)哲學觀等都有了新的全面整體創(chuàng)造性的認識和解說。如，鄧宇等發(fā)現(xiàn)的:氣是流動著的‘信息－能量－物質(zhì)’的混合統(tǒng)一體；分形分維的經(jīng)絡(luò)解剖結(jié)構(gòu)；數(shù)理陰陽；中醫(yī)分形集：分形陰陽集－陰陽集的分形分維數(shù)，五行分形集－五行集的分維數(shù)；分形藏象五系統(tǒng)－暨心系統(tǒng)、肝系統(tǒng)、脾系統(tǒng)、肺系統(tǒng)、腎系統(tǒng)；中醫(yī)三個哲學觀－新提出的第三哲學觀：相似觀－分形論等。還包括近代針灸經(jīng)絡(luò)的開展史,近代中醫(yī)氣的進展簡史,中西醫(yī)結(jié)合史,中醫(yī)中藥史等.在明朝〔1368年－1644〕，著名醫(yī)學家李時珍的醫(yī)學巨著?本草綱目?成書，這本書不僅是藥物學專著，還包括植物學、動物學、〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕礦物學、化學等方面的知識。?本草綱目?刊行后很快傳入日本、朝鮮及越南等亞洲地區(qū)，〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕在公元17、18世紀先后被翻譯成多種歐洲語言。另一方面，李時珍是世界上第一個提出大腦負責精神感覺、又發(fā)現(xiàn)膽結(jié)石病、利用冰敷替高熱病人降溫以及創(chuàng)造消毒技術(shù)的醫(yī)學家。此外還有王叔和的?脈經(jīng)?、皇甫謐的?針灸甲乙經(jīng)?、陶弘景的?本草經(jīng)集注?、葛洪的?肘后備急方?、巢元方的?諸病源候論?、蘇敬的?新修本草?〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕、王燾的?外臺秘要?、元丹貢布的?四部醫(yī)典?、?太平圣惠方?、王惟一的?銅人腧穴針灸圖經(jīng)?等大量醫(yī)學典籍問世。自明朝中醫(yī)開展已經(jīng)到達了頂峰，〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕出現(xiàn)了諸多的醫(yī)學流派。同時在朝鮮研究中醫(yī)的〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕所謂東醫(yī)學也得到了很大的開展，例如許浚撰寫了?東醫(yī)寶鑒??！瞕f4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕自清朝末年，中國受西方列強侵略，國運衰弱。同時現(xiàn)代醫(yī)學〔西醫(yī)〕大量涌入，嚴重沖擊了中醫(yī)開展。中國出現(xiàn)許多人士主張醫(yī)學現(xiàn)代化，中醫(yī)學受到巨大的挑戰(zhàn)。人們開始使用西方醫(yī)學體系的思維模式加以檢視，中醫(yī)學陷入存與廢的爭論之中。同屬中國醫(yī)學體系的日本漢方醫(yī)學、韓國的韓醫(yī)學亦是如此。2003年“非典〞〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕以來，經(jīng)方中醫(yī)開始有復蘇跡象。〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕在文化大革命期間，中醫(yī)作為“古為今用〞的醫(yī)學實例得到中國共產(chǎn)黨政策上的支持而得以開展。現(xiàn)代，中醫(yī)在中國仍然是治療疾病的常用手段之一。〔4f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕近代、現(xiàn)代醫(yī)學史近代的醫(yī)學〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕西方近代醫(yī)學是指文藝復興以后逐漸興起的醫(yī)學，一般包括16世紀、17世紀、18世紀和19世紀的歐洲醫(yī)學。16世紀封建社會后期，手工業(yè)和商業(yè)開展，手工工廠出現(xiàn)，生產(chǎn)力的增長也促進對新市場的尋找。1492年哥倫布發(fā)現(xiàn)新大陸,1497年達·伽馬發(fā)現(xiàn)好望角,1519～1522年麥哲倫環(huán)繞世界一周。〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕許多藥物〔如鴉片、樟腦、松香〕，由東方傳入歐洲，美洲發(fā)現(xiàn)后，歐洲也有了金雞納、愈創(chuàng)木、可可果。〔df4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕由于資本主義的興起，首先在意大利形成了資產(chǎn)階級的知識分子。他們的特點是敢于向教會思想挑戰(zhàn)，反對宗教迷信的束縛。他們的口號是：〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕“我是人，人的一切我應該了解〞，以此來反對神學的統(tǒng)治。他們一方面?zhèn)鞑バ挛幕?一方面竭力鉆研和模仿古代希臘的文化,因此此時期稱為“文藝復興〞。1543年哥白尼出版?天體運行論?，是科學史上文藝復興的開始。〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕①醫(yī)學革命。文藝復興運動中，疑心教條、反對權(quán)威之風興起。于是，醫(yī)界也產(chǎn)生了一場以帕拉切爾蘇斯(1493～1541)〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕為代表的醫(yī)學革命。〔4f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕中世紀的醫(yī)學校中,主要講阿維森納的?醫(yī)典?,以及加倫和希波克拉底的著作。教師照本宣科，一切墨守成規(guī)，毫無生氣。文藝復興的狂潮，很快就涉及醫(yī)學領(lǐng)域。帕拉切爾蘇斯指出人體的生命過程是化學過程。他在巴塞爾大學任教時主張用流行的德語寫書和講演，使醫(yī)學易為群眾所接受，這是一件偉大的改革。他重視實踐，反對煩瑣的經(jīng)院哲學，反對中世紀頑固的傳統(tǒng)和權(quán)威觀念，他說：“沒有科學和經(jīng)驗，誰也不能成為醫(yī)生?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕我的著作不是引證古代權(quán)威的著作，而是靠最大的教師──經(jīng)驗寫成的〞。他勇敢地向墨守成規(guī)和盲目崇拜進行斗爭，公開焚毀了加倫和阿維森納的著作。②人體解剖學的建立。古代的人認為身體是靈魂寄居之處,在封建社會,各民族無例外地禁止解剖尸體。〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕因此,人體解剖學得不到開展,這個時代的醫(yī)書如加倫所著的解剖學中，解剖圖幾乎全是根據(jù)動物內(nèi)臟繪成的。反之，文藝復興時代的文化，把人作為注意的中心，在醫(yī)學領(lǐng)域內(nèi)人們首先重視的就是研究人體的構(gòu)造?！?5傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕首先革新解剖學的是意大利的達·芬奇，他認為作為現(xiàn)實主義的畫家，〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕有明了解剖的必要，尤其需要了解骨骼與肌肉，于是從事人體解剖。不過,他所繪制的700多幅解剖圖,傳至今日還有150余幅。畫得大都準確、優(yōu)美。他首先對加倫的解剖學發(fā)生疑問。他曾往氣管吹入空氣，但無論如何用力，也不見心臟膨脹起來，于是得出結(jié)論：加倫所謂肺與心相通的學說是錯誤的。他還檢查過心臟的構(gòu)造與形態(tài)，他所畫的心臟圖較以往有關(guān)圖畫正確得多。此外，他還發(fā)現(xiàn)了主動脈根部瓣膜的活動及其性質(zhì)，證明瓣膜的作用在于阻止血液回流。他所提到的心血管方面的問題，不久就引起了醫(yī)學家們的注意?！瞕f4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕根據(jù)直接的觀察來寫作人體解剖學教科書這一工作由A.維薩里完成。維薩里先肄業(yè)于盧萬大學，后轉(zhuǎn)入巴黎大學?！瞕f高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕當時，這兩所大學講解剖時，仍是教授高坐椅上講課,助手和匠人在臺下操作,而且一年內(nèi)〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕最多只允許進行3或4次解剖。維薩里不滿足這種狀況，曾夜間到野外去盜竊尸體來進行解剖。當時意大利的帕多瓦大學有歐洲最好的解剖教室。于是他到那里任教。1543年，他將工作中積累起來的材料整理成書，公開發(fā)表。這本書就是?人體構(gòu)造論?。此書指出加倫的錯誤達200多處，如5葉肝、兩塊下頜骨等。并指出加倫解剖學的依據(jù)是動物如猴等。維薩里雖然也受到當時保守派的指責，但他的學生們開展了解剖學?！?f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕總之，16世紀歐洲醫(yī)學擺脫了古代權(quán)威的束縛，開始獨立開展，〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕其主要成就是人體解剖學的建立。這既說明一門古老的學科在新的水平上復活，又標志著醫(yī)學新征途的開始。17世紀16世紀，尼德蘭發(fā)生革命，產(chǎn)生了獨立的資產(chǎn)階級國家荷蘭；17世紀，英國推翻了專制王權(quán)，建立資產(chǎn)階級的議會制度。新興資產(chǎn)階級為了開展工商業(yè)支持科學技術(shù)，提倡寬容，這些都有進步作用。哲學上培根提出經(jīng)驗主義〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕，提倡觀察實驗，主張一切知識來自經(jīng)驗，并提倡歸納法；〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕他的名言“知識就是力量〞鼓勵了后人的探索熱情。笛卡爾是唯理論的代表，他重視人的思維能力，同時，又把機械論觀點運用于對生理問題的研究，對后世的生命科學影響很大。這時期還出現(xiàn)了一些科學社團，它促進了交流，推動了科學進步。在17世紀，英國科學處于領(lǐng)先地位?！瞕f4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕生理學的進步。17世紀，量度觀念已很普及。最先在醫(yī)界使用量度手段的是圣托里奧(1561～1636)。他制作了體溫計和脈搏計。還制造了一個像小屋似的大秤〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕，可在其中生活、睡眠、運動、進食；在排泄前后，他都秤量自己的體重，如此不厭其煩地進行了30余年。他發(fā)現(xiàn)體重在不排泄時也在減輕，認為其原因是“不易覺察的出汗〞。這可以說是最早的新陳代謝研究?！?f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕實驗、量度的應用，使生命科學開始步入科學軌道。其標志是血液循環(huán)的發(fā)現(xiàn)。W.S.哈維(1578～1657)也畢業(yè)于帕多瓦大學，在他以前，帕多瓦大學的解剖學家們曾相繼發(fā)現(xiàn)并解釋了心臟血循的環(huán)節(jié)。1553年，西班牙學者M.塞爾維特〔1511～1553〕確認血液自右心室流入左心室，不是經(jīng)過中隔上的孔，而是經(jīng)過肺臟作“漫長而奇妙的迂回〞?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕哈維最先在科學研究中，應用活體解剖的實驗方法，直接觀察動物機體的活動。同時，他還精密地算出自左心室流入總動脈，和自右心室流入肺動脈的血量。他分析認為血液絕不可能來自飲食，也不可能留在身體組織內(nèi)，他斷定自左心室噴入動脈的血，必然是自靜脈〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕回歸右心室的血。這樣就發(fā)現(xiàn)了血液循環(huán)。哈維于1628年發(fā)表了著作?心臟運動論?。顯微鏡的應用。隨著實驗的興起，出現(xiàn)了許多科學儀器，顯微鏡就是17世紀初出現(xiàn)的。顯微鏡把人們帶到一個新的認識水平。在這以后，科學家利用顯微鏡取得了一系列重要發(fā)現(xiàn)?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕臨床醫(yī)學和T.西德納姆(1624～1689)?！?f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕精品課件文檔，歡送下載。下載后可以復制、編輯。382.非病毒載體介導的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(1)脂質(zhì)體介導的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)根本原理:利用陽離子脂質(zhì)體單體與DNA混合后,可以自動形成包埋外源DNA的脂質(zhì)體,然后與細胞一起孵育,即可通過細胞內(nèi)吞作用將外源DNA(即目的基因)轉(zhuǎn)移至細胞內(nèi),并進行表達。2023/1/1239脂質(zhì)體介導的基因轉(zhuǎn)移示意圖2023/1/1240

(2)受體介導轉(zhuǎn)移技術(shù)

將DNA與細胞或組織親和性的配體偶聯(lián),可使DNA具有靶向性。這種偶聯(lián)通常通過多聚陽離子(如多聚賴氨酸)來實現(xiàn)。多聚陽離子與配體共價連接后,又通過電荷相互作用與帶負電荷的DNA結(jié)合,將DNA包圍,只留下配體暴露于外表。這樣形成的復合物可被帶有特異性受體的靶細胞吞飲,從而將外源DNA導入靶細胞。2023/1/1241受體介導轉(zhuǎn)移技術(shù)示意圖2023/1/1242(3)基因直接注射技術(shù)不需要進行基因工程的繁瑣操作,直接將裸露DNA注入動物肌肉或某些器官組織內(nèi)。動物實驗說明:接受注射外源DNA的小鼠能夠按其基因編碼合成相應的蛋白質(zhì),并能維持數(shù)月之久。,可使其心臟壁內(nèi)毛細血管增加30﹪～40﹪;,能分泌糖尿病所缺少的胰島素;3.肌內(nèi)注射凝血因子Ⅸ基因,可產(chǎn)生血友病所需的凝血因子Ⅸ。2023/1/1243

基因直接注射法的優(yōu)點DNA重組體的技術(shù)較容易;;,防止了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入整合后,一旦發(fā)生副作用不易中止或逆轉(zhuǎn)的缺點;,而病毒載體那么可能誘導體內(nèi)免疫應答,致使反復治療效果下降。2023/1/1244三、基因干預

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(一)反義RNA1.反義RNA與基因表達調(diào)控利用反義RNA對體外培養(yǎng)的細胞進行基因表達調(diào)控,通常采用的方法有兩種:

(1)體外合成反義RNA,直接作用于培養(yǎng)細胞,細胞吸收RNA后,發(fā)揮作用。

(2)構(gòu)建一些能轉(zhuǎn)錄反義RNA的重組質(zhì)粒,將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細胞中,轉(zhuǎn)錄出反義RNA而發(fā)揮作用。2023/1/1246

反義RNA的關(guān)鍵技術(shù)問題:?反義RNA進入靶細胞前的降解問題?專一性轉(zhuǎn)移問題:

2023/1/12472.受體介導反義RNA技轉(zhuǎn)移術(shù)

①受體介導的RNA轉(zhuǎn)移十分專一,而且效率高;②被轉(zhuǎn)移的RNA是被保護的,與周圍環(huán)境之間存在多聚賴氨酸的保護層,可以抵抗環(huán)境中的核酸酶的降解作用。

將脫唾液酸血清類粘蛋白(ASGP)與多聚賴氨酸(PL)共價連接,得到ASGP-PL復合物,成為運載核酸的工具。ASGP-PL反義RNA復合物可以專一性地被肝細胞外表的ASGP受體所識別,并吞噬到肝細胞中,反義RNA進入肝細胞后,可被逐漸釋放出來發(fā)揮作用。

借助前述的受體介導基因轉(zhuǎn)移方法,可以實現(xiàn)受體介導的反義RNA轉(zhuǎn)移。2023/1/1248

3.反義RNA的應用前景

受體介導的反義RNA基因治療有其自身的優(yōu)點,而在一定程度上補充了轉(zhuǎn)基因治療的缺乏。

(l)平安性高

(2)反義RNA設(shè)計和制備方便

(3)具有劑量調(diào)節(jié)效應

(4)能直接作用于一些RNA病毒反義RNA只作用于特異的mRNA分子,不改變所調(diào)節(jié)基因的結(jié)構(gòu)。反義RNA分子無論怎樣修飾,最終將在細胞內(nèi)部被降解。

在治療RNA病毒感染性疾病時,受體介導的反義RNA基因治療比一般的DNA基因治療有更大的優(yōu)勢。利用反義RNA可以直接作用于病毒RNA,阻斷RNA病毒的繁殖。2023/1/1249(二)干擾RNA

實驗結(jié)果顯示,有義鏈RNA(senseRNA)或反義鏈RNA(antisenseRNA)均能抑制線蟲基因的表達,雙鏈RNA比單鏈RNA更為有效。將特異的雙鏈RNA注入線蟲體內(nèi)可抑制有同源序列的基因的表達。得到的結(jié)果是有義鏈RNA和反義鏈RNA都同樣阻斷基因表達途徑。這與傳統(tǒng)上對反義RNA技術(shù)的解釋正好相反。而且其抑制基因表達的效率比反義RNA至少高2個數(shù)量級。干擾現(xiàn)象

RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是一種由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象。在此過程中,與雙鏈RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,從而抑制該基因的表達。對RNA干擾的認識來源于用線蟲(C.elegans)和果蠅所進行的實驗。2023/1/1250

干擾的機制

RNA干擾過程主要有2個步驟:

(1)小干擾性RNA(siRNA)(2)siRNA與細胞內(nèi)的某些酶和蛋白質(zhì)形成復合體,稱為RNA誘導的沉默復合體(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC)。該復合體可識別與siRNA有同源序列的mRNA,并在特異的位點將該mRNA切斷。長雙鏈RNA被細胞內(nèi)的雙鏈RNA特異性核酸酶Dicer切成21-23個堿基對的短雙鏈RNA,稱為小干擾性RNA(smallinterferingRNA,siRNA)。2023/1/1251A.賈第鞭毛蟲Dicer的晶體結(jié)構(gòu);B.

RNA干擾機制示意圖

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1.體外化學合成;

2.用質(zhì)粒載體或病毒載體可在細胞內(nèi)穩(wěn)定地生成。siRNA的產(chǎn)生2023/1/1253干擾的應用前景RNA干擾研究目前已經(jīng)在功能基因組學研究、微生物學研究、基因治療和信號轉(zhuǎn)導等廣泛領(lǐng)域取得了令人矚目的進展,使其在醫(yī)學、生物學領(lǐng)域的應用有著廣闊的前景。2023/1/1254(1)研究基因功能的新工具

由于RNA干擾技術(shù)具有高度的序列專一性和有效的干擾能力,可以使特定基因沉默或功能喪失,因此可以作為功能基因組學的一種強有力的研究工具。

RNA干擾技術(shù)能夠在哺乳動物中抑制特定基因的表達,建立多種表型;抑制基因表達的時間可以控制在發(fā)育的任何階段。

2023/1/1255

(2)腫瘤的基因治療

傳統(tǒng)反義RNA技術(shù)誘發(fā)的單一癌基因的阻斷,不可能完全抑制或逆轉(zhuǎn)腫瘤的生長,而RNA干擾技術(shù)可以利用同一基因家族的多個基因具有一段同源性很高的保守序列這一特性,設(shè)計針對這一區(qū)段序列的雙鏈RNA分子,只使用一種雙鏈RNA即可以產(chǎn)生多個基因同時剔除的表型,也可以同時使用多種雙鏈RNA而將多個序列不相關(guān)的基因同時剔除。RNA干擾技術(shù)可用于治療有異?；虮磉_的惡性腫瘤。

K-RAS蛋白為腫瘤發(fā)生所必需,bcr/ab1融合基因與人白血病有關(guān),用RNA干擾技術(shù)可以阻礙K-RAS蛋白的表達從而抑制腫瘤發(fā)生,或殺死有bcr/ab1的人白血病細胞系。通過RNA干擾抑制某些內(nèi)源性基因的表達,能促進白血病細胞系的細胞凋亡或增加其對化療藥物的反響性。應用RNA干擾技術(shù)成功地阻斷了MCF-7乳腺癌細胞中一種異常表達的與細胞增殖分化相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子基因Sp1的功能。2023/1/1256

(3)病毒性疾病的基因治療

RNA干擾可以被看成是一種與免疫系統(tǒng)類似的防御機制。用siRNA抑制人類免疫缺陷病毒(HIV)某些基因的表達,如P24、Vif、nef、tat或rev,阻礙HIV在細胞內(nèi)復制。用RNA干擾技術(shù)抑制HIV的受體(CD4)或輔助受體(CXCR4或CCR5)在細胞內(nèi)表達,可阻礙HIV感染細胞。也可通過RNA干擾抑制其他病毒在細胞內(nèi)復制,如脊髓灰質(zhì)炎病毒、人乳頭狀瘤病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒等。2023/1/1257

siRNA在病毒感染的早期階段能有效地抑制病毒的復制,病毒感染能被針對病毒基因和相關(guān)宿主基因的siRNA所阻斷,RNA干擾技術(shù)將成為一種有效的抗病毒治療手段。2023/1/1258(三)核酶(ribozyme)

天然核酶多為單一的RNA分子,具有自我剪切作用。但核酶也可以由兩個RNA分子組成。在基因治療時,利用核酶分子結(jié)合到靶RNA分子中適當?shù)牟课?形成錘頭狀核酶結(jié)構(gòu),將靶RNA分子切斷,通過破壞靶RNA分子而到達治療疾病的目的(如去除病毒基因組RNA,癌基因表達的mRNA等)。2023/1/1259核酶錘頭狀的二級結(jié)構(gòu)只要兩個RNA分子通過互補序列相結(jié)合,形成錘頭狀的二級結(jié)構(gòu)(3個螺旋區(qū)),并能組成核酶的核心序列(13個或11個保守核苷酸序列),就可在錘頭右上方產(chǎn)生剪切反響。2023/1/1260

1.核酶的設(shè)計核酶是通過靶RNA分子與核酶分子共同組成酶活性結(jié)構(gòu)域,要從靶分子和核酶分子兩個方面來設(shè)計核酶。

(1)選擇適宜的靶部位,該部位具有核酶切割位點,能與核酶分子結(jié)合并組成酶活性結(jié)構(gòu)域。(2)核酶的根本組成:用于基因治療的核酶分子由三個局部組成,中間是保守序列(能夠組成酶活性結(jié)構(gòu)域),兩端是引導序列。在基因治療中,主要是根據(jù)治療的靶基因序列的特點,設(shè)計和合成特定的核酶。設(shè)計的根本原那么是核酶分子與靶部位結(jié)合后能形成酶活性結(jié)構(gòu)域。

2023/1/1261核酶的作用機制

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2.核酶的應用

與一般的反義RNA相比,核酶具有較穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu),不易受到RNA酶的攻擊。更重要的是,核酶在切斷mRNA后,又可從雜交鏈上解脫下來,重新結(jié)合和切割其它的mRNA分子。

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四、治療基因的受控表達

2023/1/12上個世紀末,本世紀初，1996年,清華學界對中醫(yī)氣本質(zhì)，經(jīng)絡(luò)實質(zhì)，陰陽，五行，藏象，中醫(yī)哲學觀等都有了新的全面整體創(chuàng)造性的認識和解說。如，鄧宇等發(fā)現(xiàn)的:氣是流動著的‘信息－能量－物質(zhì)’的混合統(tǒng)一體；分形分維的經(jīng)絡(luò)解剖結(jié)構(gòu)；數(shù)理陰陽；中醫(yī)分形集：分形陰陽集－陰陽集的分形分維數(shù)，五行分形集－五行集的分維數(shù)；分形藏象五系統(tǒng)－暨心系統(tǒng)、肝系統(tǒng)、脾系統(tǒng)、肺系統(tǒng)、腎系統(tǒng)；中醫(yī)三個哲學觀－新提出的第三哲學觀：相似觀－分形論等。還包括近代針灸經(jīng)絡(luò)的開展史,近代中醫(yī)氣的進展簡史,中西醫(yī)結(jié)合史,中醫(yī)中藥史等.在明朝〔1368年－1644〕，著名醫(yī)學家李時珍的醫(yī)學巨著?本草綱目?成書，這本書不僅是藥物學專著，還包括植物學、動物學、〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕礦物學、化學等方面的知識。?本草綱目?刊行后很快傳入日本、朝鮮及越南等亞洲地區(qū)，〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕在公元17、18世紀先后被翻譯成多種歐洲語言。另一方面，李時珍是世界上第一個提出大腦負責精神感覺、又發(fā)現(xiàn)膽結(jié)石病、利用冰敷替高熱病人降溫以及創(chuàng)造消毒技術(shù)的醫(yī)學家。此外還有王叔和的?脈經(jīng)?、皇甫謐的?針灸甲乙經(jīng)?、陶弘景的?本草經(jīng)集注?、葛洪的?肘后備急方?、巢元方的?諸病源候論?、蘇敬的?新修本草?〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕、王燾的?外臺秘要?、元丹貢布的?四部醫(yī)典?、?太平圣惠方?、王惟一的?銅人腧穴針灸圖經(jīng)?等大量醫(yī)學典籍問世。自明朝中醫(yī)開展已經(jīng)到達了頂峰，〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕出現(xiàn)了諸多的醫(yī)學流派。同時在朝鮮研究中醫(yī)的〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕所謂東醫(yī)學也得到了很大的開展，例如許浚撰寫了?東醫(yī)寶鑒?。〔df4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕自清朝末年，中國受西方列強侵略，國運衰弱。同時現(xiàn)代醫(yī)學〔西醫(yī)〕大量涌入，嚴重沖擊了中醫(yī)開展。中國出現(xiàn)許多人士主張醫(yī)學現(xiàn)代化，中醫(yī)學受到巨大的挑戰(zhàn)。人們開始使用西方醫(yī)學體系的思維模式加以檢視，中醫(yī)學陷入存與廢的爭論之中。同屬中國醫(yī)學體系的日本漢方醫(yī)學、韓國的韓醫(yī)學亦是如此。2003年“非典〞〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕以來，經(jīng)方中醫(yī)開始有復蘇跡象。〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕在文化大革命期間，中醫(yī)作為“古為今用〞的醫(yī)學實例得到中國共產(chǎn)黨政策上的支持而得以開展?，F(xiàn)代，中醫(yī)在中國仍然是治療疾病的常用手段之一?！?f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕近代、現(xiàn)代醫(yī)學史近代的醫(yī)學〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕西方近代醫(yī)學是指文藝復興以后逐漸興起的醫(yī)學，一般包括16世紀、17世紀、18世紀和19世紀的歐洲醫(yī)學。16世紀封建社會后期，手工業(yè)和商業(yè)開展，手工工廠出現(xiàn)，生產(chǎn)力的增長也促進對新市場的尋找。1492年哥倫布發(fā)現(xiàn)新大陸,1497年達·伽馬發(fā)現(xiàn)好望角,1519～1522年麥哲倫環(huán)繞世界一周?！瞕f高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕許多藥物〔如鴉片、樟腦、松香〕，由東方傳入歐洲，美洲發(fā)現(xiàn)后，歐洲也有了金雞納、愈創(chuàng)木、可可果。〔df4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕由于資本主義的興起，首先在意大利形成了資產(chǎn)階級的知識分子。他們的特點是敢于向教會思想挑戰(zhàn)，反對宗教迷信的束縛。他們的口號是：〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕“我是人，人的一切我應該了解〞，以此來反對神學的統(tǒng)治。他們一方面?zhèn)鞑バ挛幕?一方面竭力鉆研和模仿古代希臘的文化,因此此時期稱為“文藝復興〞。1543年哥白尼出版?天體運行論?，是科學史上文藝復興的開始?！?5傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕①醫(yī)學革命。文藝復興運動中，疑心教條、反對權(quán)威之風興起。于是，醫(yī)界也產(chǎn)生了一場以帕拉切爾蘇斯(1493～1541)〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕為代表的醫(yī)學革命。〔4f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕中世紀的醫(yī)學校中,主要講阿維森納的?醫(yī)典?,以及加倫和希波克拉底的著作。教師照本宣科，一切墨守成規(guī)，毫無生氣。文藝復興的狂潮，很快就涉及醫(yī)學領(lǐng)域。帕拉切爾蘇斯指出人體的生命過程是化學過程。他在巴塞爾大學任教時主張用流行的德語寫書和講演，使醫(yī)學易為群眾所接受，這是一件偉大的改革。他重視實踐，反對煩瑣的經(jīng)院哲學，反對中世紀頑固的傳統(tǒng)和權(quán)威觀念，他說：“沒有科學和經(jīng)驗，誰也不能成為醫(yī)生?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕我的著作不是引證古代權(quán)威的著作，而是靠最大的教師──經(jīng)驗寫成的〞。他勇敢地向墨守成規(guī)和盲目崇拜進行斗爭，公開焚毀了加倫和阿維森納的著作。②人體解剖學的建立。古代的人認為身體是靈魂寄居之處,在封建社會,各民族無例外地禁止解剖尸體。〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕因此,人體解剖學得不到開展,這個時代的醫(yī)書如加倫所著的解剖學中，解剖圖幾乎全是根據(jù)動物內(nèi)臟繪成的。反之，文藝復興時代的文化，把人作為注意的中心，在醫(yī)學領(lǐng)域內(nèi)人們首先重視的就是研究人體的構(gòu)造?！?5傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕首先革新解剖學的是意大利的達·芬奇，他認為作為現(xiàn)實主義的畫家，〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕有明了解剖的必要，尤其需要了解骨骼與肌肉，于是從事人體解剖。不過,他所繪制的700多幅解剖圖,傳至今日還有150余幅。畫得大都準確、優(yōu)美。他首先對加倫的解剖學發(fā)生疑問。他曾往氣管吹入空氣，但無論如何用力，也不見心臟膨脹起來，于是得出結(jié)論：加倫所謂肺與心相通的學說是錯誤的。他還檢查過心臟的構(gòu)造與形態(tài)，他所畫的心臟圖較以往有關(guān)圖畫正確得多。此外，他還發(fā)現(xiàn)了主動脈根部瓣膜的活動及其性質(zhì)，證明瓣膜的作用在于阻止血液回流。他所提到的心血管方面的問題，不久就引起了醫(yī)學家們的注意?！瞕f4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕根據(jù)直接的觀察來寫作人體解剖學教科書這一工作由A.維薩里完成。維薩里先肄業(yè)于盧萬大學，后轉(zhuǎn)入巴黎大學?！瞕f高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕當時，這兩所大學講解剖時，仍是教授高坐椅上講課,助手和匠人在臺下操作,而且一年內(nèi)〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕最多只允許進行3或4次解剖。維薩里不滿足這種狀況，曾夜間到野外去盜竊尸體來進行解剖。當時意大利的帕多瓦大學有歐洲最好的解剖教室。于是他到那里任教。1543年，他將工作中積累起來的材料整理成書，公開發(fā)表。這本書就是?人體構(gòu)造論?。此書指出加倫的錯誤達200多處，如5葉肝、兩塊下頜骨等。并指出加倫解剖學的依據(jù)是動物如猴等。維薩里雖然也受到當時保守派的指責，但他的學生們開展了解剖學。〔4f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕總之，16世紀歐洲醫(yī)學擺脫了古代權(quán)威的束縛，開始獨立開展，〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕其主要成就是人體解剖學的建立。這既說明一門古老的學科在新的水平上復活，又標志著醫(yī)學新征途的開始。17世紀16世紀，尼德蘭發(fā)生革命，產(chǎn)生了獨立的資產(chǎn)階級國家荷蘭；17世紀，英國推翻了專制王權(quán)，建立資產(chǎn)階級的議會制度。新興資產(chǎn)階級為了開展工商業(yè)支持科學技術(shù)，提倡寬容，這些都有進步作用。哲學上培根提出經(jīng)驗主義〔df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕，提倡觀察實驗，主張一切知識來自經(jīng)驗，并提倡歸納法；〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕他的名言“知識就是力量〞鼓勵了后人的探索熱情。笛卡爾是唯理論的代表，他重視人的思維能力，同時，又把機械論觀點運用于對生理問題的研究，對后世的生命科學影響很大。這時期還出現(xiàn)了一些科學社團，它促進了交流，推動了科學進步。在17世紀，英國科學處于領(lǐng)先地位?！瞕f4肺炎88gdg青霉素d25f肝炎df6〕生理學的進步。17世紀，量度觀念已很普及。最先在醫(yī)界使用量度手段的是圣托里奧(1561～1636)。他制作了體溫計和脈搏計。還制造了一個像小屋似的大秤〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕，可在其中生活、睡眠、運動、進食；在排泄前后，他都秤量自己的體重，如此不厭其煩地進行了30余年。他發(fā)現(xiàn)體重在不排泄時也在減輕，認為其原因是“不易覺察的出汗〞。這可以說是最早的新陳代謝研究?！?f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕實驗、量度的應用，使生命科學開始步入科學軌道。其標志是血液循環(huán)的發(fā)現(xiàn)。W.S.哈維(1578～1657)也畢業(yè)于帕多瓦大學，在他以前，帕多瓦大學的解剖學家們曾相繼發(fā)現(xiàn)并解釋了心臟血循的環(huán)節(jié)。1553年，西班牙學者M.塞爾維特〔1511～1553〕確認血液自右心室流入左心室，不是經(jīng)過中隔上的孔，而是經(jīng)過肺臟作“漫長而奇妙的迂回〞?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕哈維最先在科學研究中，應用活體解剖的實驗方法，直接觀察動物機體的活動。同時，他還精密地算出自左心室流入總動脈，和自右心室流入肺動脈的血量。他分析認為血液絕不可能來自飲食，也不可能留在身體組織內(nèi)，他斷定自左心室噴入動脈的血，必然是自靜脈〔df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr〕回歸右心室的血。這樣就發(fā)現(xiàn)了血液循環(huán)。哈維于1628年發(fā)表了著作?心臟運動論?。顯微鏡的應用。隨著實驗的興起，出現(xiàn)了許多科學儀器，顯微鏡就是17世紀初出現(xiàn)的。顯微鏡把人們帶到一個新的認識水平。在這以后，科學家利用顯微鏡取得了一系列重要發(fā)現(xiàn)?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕臨床醫(yī)學和T.西德納姆(1624～1689)?！?f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕精品課件文檔，歡送下載。下載后可以復制、編輯。65時間:要實現(xiàn)治療基因的受控表達,必須建立完善的基因表達調(diào)控體系?；蛘{(diào)控策略大致有以下幾種:基因內(nèi)部調(diào)節(jié)機制、基因外部調(diào)節(jié)機制、利用病灶微環(huán)境使治療基因特異性表達以及治療基因的誘導表達等。

治療基因的受控表達包括控制治療基因表達的時間、空間和水平三個方面。

空間:表達水平:希望治療基因能在一個適當?shù)乃奖磉_。

,而平時不需要進行治療時那么處于關(guān)閉狀態(tài);,控制治療基因持續(xù)表達的時間跨度。為了提高基因治療的專一性和平安性,嚴格限制治療基因只在靶細胞中表達,防止治療基因指導合成的蛋白質(zhì)干擾非靶細胞的正常生活,產(chǎn)生毒副作用。2023/1/1266(一)基因內(nèi)部的調(diào)節(jié)機制?使用正常細胞的組織特異性啟動子、增強子元件?使用病變細胞的組織特異性啟動子、增強子元件2023/1/1267

1.使用正常細胞的組織特異性啟動子、增強子元件

例如,酪氨酸酶是皮膚細胞和黑色素瘤細胞產(chǎn)生色素途徑中的一種酶,可利用其啟動子驅(qū)動治療基因只在黑色素瘤細胞中表達,而不在正常的周邊細胞中表達。不同類型的正常細胞或組織中往往存在某些特有的蛋白質(zhì),它們的基因表達調(diào)控元件可用于驅(qū)動治療基因的特異性表達,從而起到治療作用。前列腺特異性抗原(PSA)是參與精液凝塊中蛋白質(zhì)降解、使精液液化的一種絲氨酸蛋白酶。它主要在前列腺中產(chǎn)生,而在前列腺癌細胞中含量很高,可以利用PSA基因調(diào)控元件驅(qū)動治療基因在PSA陽性的前列腺癌細胞中表達而發(fā)揮作用,而其在PSA陰性細胞和非前列腺癌細胞中不能使治療基因表達。2023/1/1268

2.使用病變細胞的組織特異性啟動子、增強子元件

某些病變的細胞或組織產(chǎn)生一些特殊的蛋白質(zhì),其基因表達調(diào)控元件也可以用來控制治療基因的特異性表達。甲胎蛋白(AFP)基因正常情況下只在胚胎肝細胞中表達,不在成年肝臟細胞中表達。肝細胞腺癌細胞中AFP基因異常激活,因此可利用該基因啟動子驅(qū)動治療基因(如自殺基因)在癌細胞中表達,使癌細胞經(jīng)給藥后被殺死。癌胚抗原(CEA)是膜糖蛋白家族的成員,在許多腺癌細胞中表達很高,采用其啟動子可以使治療基因只在CEA陽性的癌細胞中表達,而不會在陰性細胞中表達。2023/1/1269(二)基因外部的調(diào)節(jié)機制

除利用基因內(nèi)部的調(diào)節(jié)機制以外,還可通過施加外部刺激,促進治療基因在特定細胞或組織中表達。采用熱休克蛋白基因的表達調(diào)控元件來驅(qū)動治療基因的表達,可以通過對病灶局部進行熱處理,到達使治療基因特異性表達的目的。

Egr-1基因是一種編碼鋅指轉(zhuǎn)錄因子的早期基因,包括電離輻射在內(nèi)的多種外部刺激都可以誘導其表達,將該基因啟動子控制的TNF基因?qū)肽[瘤組織,在電離輻射的作用下,使TNF獲得暫時性的局部表達,殺死腫瘤細胞。組織纖溶酶原激活物(t-PA)作為溶解血栓的藥劑,在中風和心肌梗死等疾病治療中起著重要的作用。t-PA的活性在輻射后增加50倍,說明其基因表達調(diào)控元件中存在受輻射誘導的調(diào)控元件,故可利用t-PA調(diào)控元件啟動治療基因的表達,增強放療效果。2023/1/1270(三)利用病灶微環(huán)境使治療基因特異性表達

病灶微環(huán)境與正常時往往不同,因此可利用這些變化控制治療基因的表達。在腫瘤病灶處,常常出現(xiàn)葡萄糖缺乏等情況,葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白GRP78/Bip的含量也隨之增加,使癌細胞能夠抵御應激。當采用這種基因的啟動子來控制治療基因時,可以使治療基因在腫瘤細胞中表達,使腫瘤組織壞死。

腫瘤細胞生長速度快于形成血管的內(nèi)皮細胞生長速度,造成供血缺乏,因此在腫瘤內(nèi)部形成酸性、缺氧和營養(yǎng)缺乏的區(qū)域。缺氧條件可以通過缺氧誘導因子(HIF-1)和缺氧響應元件(HRE)相互作用,調(diào)節(jié)一些基因的表達;如果采用缺氧響應元件(HRE)來控制治療基因的表達,即可實現(xiàn)治療基因只在缺氧的腫瘤組織中表達,而在正常組織中不表達。

機體發(fā)炎時所可產(chǎn)生的許多急性期蛋白,其基因的啟動子可以控制炎癥條件下治療基因的表達;而一旦炎癥消失,治療基因的表達也隨之終止。2023/1/1271(四)治療基因的誘導表達

采用組織特異性啟動子控制治療基因的表達,可能造成這些基因在靶細胞中表達,不再受外界控制。為了防止這種情況發(fā)生,研究人員正在開發(fā)和完善一些可誘導性基因表達系統(tǒng)。這種系統(tǒng)的必要成分:一種是轉(zhuǎn)錄激活劑,它只在誘導藥物存在時才能與DNA結(jié)合;另一種那么是特異性基因表達調(diào)控元件,僅對這種轉(zhuǎn)錄激活劑有所響應。2023/1/1272四環(huán)素抗性操縱子系統(tǒng)原理四環(huán)素抗性基因的轉(zhuǎn)錄受Tet阻遏蛋白的負調(diào)控。無四環(huán)素存在時,阻遏蛋白與四環(huán)素抗性操縱子序列結(jié)合阻斷四環(huán)素抗性基因的表達。四環(huán)素存在時,阻遏蛋白與四環(huán)素具有極高的親和性,造成阻遏蛋白對四環(huán)素抗性操縱子阻遏解除,使四環(huán)素抗性基因的轉(zhuǎn)錄得以進行。。

2023/1/12732023/1/1274

五、基因治療的應用研究2023/1/1275世界上第一個正式被批準用于基因治療的病例是先天性腺苷脫氨酶(ADA)缺乏癥。1990年9月美國Blaese博士成功地將正常的人的ADA基因植入ADA缺乏癥病人的淋巴結(jié)內(nèi),完成世界上首例基因治療試驗。2023/1/1276(一)遺傳病的基因治療研究

人類有4000多種遺傳病,在人群中的發(fā)病率約為40％～50％。但真正了解病因,能進行產(chǎn)前診斷的僅限于那些為數(shù)不多的常見遺傳病。

DNA水平明確其發(fā)病原因及機制;,而且屬隱性遺傳;;4.該基因能在一種便于臨床操作的組織細胞(如皮膚細胞,骨髓細胞等)中表達并發(fā)揮其生理作用;5.該遺傳病不經(jīng)治療將有嚴重后果(如不治療難以存活等)?？晒┻x擇并符合上述4條以上要求的不過只有30余種遺傳病。遺傳病基因治療必須符合以下要求:2023/1/12771．腺苷脫氨酶(ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)缺乏癥2．珠蛋白生成障礙性貧血和血紅蛋白病3．血友病和其他血漿蛋白缺乏癥4．苯丙酮酸尿癥和其他先天性代謝缺陷病5．萊-納(Lesch-Nyhan)綜合征6．家族性高膽固醇血癥7．囊性纖維化病2023/1/1278(二)惡性腫瘤基因治療研究

(1)通過基因置換和基因補充,導入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、開展和轉(zhuǎn)移;腫瘤發(fā)生是一個極為復雜的過程,許多基因的突變會導致腫瘤的發(fā)生。(2)抑制癌基因的活性,通過干擾癌基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯,發(fā)揮抑癌作用;(3)增強腫瘤細胞的免疫原性,通過對腫瘤組織進行細胞因子修飾,刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對腫瘤細胞的溶解和排斥反響;(4)通過導入“自殺基因〞殺傷癌細胞。2023/1/12791.腫瘤基因治療的根本策略從臨床治療的應用角度來看,腫瘤基因治療的策略包括:(1)直接殺傷腫瘤細胞或抑制其生長。(2)增強機體免疫系統(tǒng),間接殺傷或抑制腫瘤細胞。(3)改善腫瘤常規(guī)治療方法,提高療效。2023/1/1280

2.腫瘤基因治療的常用方法

?基因干預技術(shù):通過基因干預,抑制腫瘤細胞中過度表達的癌基因,從而降低其惡性表型。?自殺基因治療:直接殺死腫瘤細胞。?腫瘤的免疫基因治療:激發(fā)機體腫瘤免疫效應或提高免疫效應細胞功能。?提高化療效果的輔助基因治療:藥物增敏基因治療;耐藥基因治療。

2023/1/1281

3.自殺基因治療:自殺基因治療是目前腫瘤基因治療領(lǐng)域中的研究熱點之一。根本原理:向腫瘤細胞內(nèi)導入某些真核細胞中不存在的酶基因(自殺基因),這些基因表達的特異性酶可以催化對真核細胞無毒或低毒的藥物前體,轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸种坪怂岷铣尚目勾x藥物,進而選擇性地使轉(zhuǎn)染了“自殺基因〞的腫瘤細胞“自殺〞。2023/1/1282自殺基因治療的前提條件是“自殺基因〞的表達必須局限于腫瘤細胞中,而不傷及正常細胞。

①利用免疫脂質(zhì)體、受體介導等技術(shù)進行定向基因轉(zhuǎn)移。②利用病毒載體進行基因轉(zhuǎn)移。③瘤內(nèi)直接注射。

自殺基因轉(zhuǎn)移常用方法2023/1/1283

4.腫瘤的免疫基因治療激發(fā)機體腫瘤免疫效應或提高免疫效應細胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。

主要包括:細胞因子(或受體)基因治療;抗原抗體基因治療。2023/1/12845.提高化療效果的輔助基因治療:

臨床上對腫瘤患者進行化療時,通常面臨兩大難題:(1)患者機體內(nèi)的腫瘤細胞對化療藥物的敏感程度存在差異,特別是某些經(jīng)過屢次化療的患者,其體內(nèi)的腫瘤細胞已經(jīng)產(chǎn)生了多藥耐藥性,對多種化療藥物產(chǎn)生交叉耐受,最終導致化療失敗。(2)大劑量的化療可能導致患者的正常細胞,特別是骨髓造血細胞的功能受到抑制。

2023/1/1285

(1)藥物增敏基因治療:

將雞鈣調(diào)素(calmodulin,CaM)基因?qū)胄∈笕橄侔┘毎闏127,結(jié)果僅需低劑量的長春新堿或長春花堿即可明顯抑制該細胞株的生長。其作用原理可能是:CaM基因的表達產(chǎn)物作為細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的重要物質(zhì),顯著增加腫瘤細胞對長春新堿或長春花堿的吸收量而相應減少了排出量,從而提高了腫瘤細胞內(nèi)化療藥物濃度,導致腫瘤細胞死亡。為了使化療藥物能夠最大程度地殺死腫瘤細胞,可以考慮將某些藥物增敏基因?qū)肽[瘤細胞,特別是對化療藥物原本不敏感的腫瘤細胞,使其對抗腫瘤藥物的敏感性大大增加,從而到達增強化療效果的目的。

2023/1/1286

(2)耐藥基因治療:在解決化療所致骨髓細胞造血功能受到嚴重抑制的問題方面,通過向腫瘤患者的骨髓細胞導入某種耐藥基因,如mdr-1基因等,以增強骨髓細胞的抗藥性,以便耐受大劑量的化療藥物,以到達徹底殺滅腫瘤細胞的目的。腫瘤細胞耐藥性的產(chǎn)生與多種糖蛋白或酶有關(guān),包括多藥耐藥(mdr-1)基因編碼的P-糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)以及近年來發(fā)現(xiàn)的肺耐藥相關(guān)蛋白等;還有細胞內(nèi)氧化和解毒作用的酶系統(tǒng),包括細胞色素P-450(cytochromeP-450)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)等等。目前除了開發(fā)針對腫瘤細胞耐藥性產(chǎn)生機制的拮抗劑,如用于阻斷P-糖蛋白所引發(fā)多藥耐藥的戊脈安(verapamil)和用于阻斷GSH合成的丁硫氨酸亞砜胺(BSO)等。還采用基因干擾技術(shù),在基因水平阻斷耐藥基因的表達,使腫瘤細胞喪失多藥耐藥性,從而易于被化療藥物殺死。

2023/1/1287(三)病毒性疾病的基因治療研究據(jù)統(tǒng)計,75﹪的人類傳染病是由病毒引起的。病毒感染人體后不僅可能急性發(fā)病,還可以在人體內(nèi)長期潛伏,造成終身傷害。病毒還是造成先天畸形的重要因素之一。研究說明,它與某些癌癥、自身免疫性疾病和內(nèi)分泌疾病也存在一定的聯(lián)系。迄今為止,臨床上對絕大多數(shù)病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治療手段,而在眾多開展的抗病毒治療方案中,抗病毒基因治療十分引人注目。2023/1/12881．調(diào)節(jié)機體免疫應答:

(1)將細胞因子(如干擾素、白細胞介素等)的基因,導入機體免疫細胞,激活免疫細胞并促進其增殖分化,增強機體的細胞和體液免疫應答,促進機體去除病毒感染的細胞和游離病毒。(2)將能夠誘導機體產(chǎn)生保護性免疫應答的病毒抗原基因,如乙型肝炎病毒外表抗原基因等,導入機體,表達的抗原不僅可以誘導機體產(chǎn)生保護性抗體,還可以引發(fā)特異性的細胞免疫應答,產(chǎn)生對野生型致病病毒攻擊的防御作用。2023/1/1289

2．抗病毒復制:根據(jù)病毒在機體細胞中復制周期的各個環(huán)節(jié)來設(shè)計的,主要包括:(1)抑制病毒與宿主細胞結(jié)合:即阻斷病毒外表抗原決定簇與宿主細胞受體間的特異性結(jié)合。

(2)干擾病毒基因組的轉(zhuǎn)錄起始和調(diào)控。

(3)抑制病毒基因組的復制和蛋白質(zhì)合成。

(4)RNA干擾技術(shù)。

(5)將抗病毒蛋白質(zhì)基因,如2ˊ→5ˊ腺苷酸合成酶等基因,導入細胞并持續(xù)表達,可以激活核酸酶F,降解病毒RNA,對RNA病毒的感染產(chǎn)生明顯的抵抗作用。2023/1/1290(四)其他疾病的基因治療研究

神經(jīng)退化性疾病(如帕金森氏病):由于腺病毒可以感染有絲分裂后的細胞,同時具有潛在的高轉(zhuǎn)導效率和在中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫特惠區(qū)(immunologicallyprivilegedsite)的低病原性,因此是進行神經(jīng)系統(tǒng)疾病基因治療的有效載體。

神經(jīng)母細胞(neuroprogenitor)和人星型膠質(zhì)細胞可以作為自體同源細胞用于exvivo修飾。使用四環(huán)素調(diào)節(jié)的腺病毒載體來表達酪氨酸羥化酶,在動物模型中表現(xiàn)出了可觀的前景。在用腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)腺病毒重組體緩解亨廷頓疾病的實驗過程中,發(fā)現(xiàn)表達BDNF的大鼠取得了明顯結(jié)果。

(1)重組載體的腦內(nèi)直接注射;(2)取出體內(nèi)細胞在體外經(jīng)由載體轉(zhuǎn)染修飾后回輸腦內(nèi)相關(guān)區(qū)域。傳遞治療基因的兩種主要策略:2023/1/1291

基因治療的問題與展望治療基因調(diào)控元件的選擇;平安高效載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)移技術(shù)的選擇;靶細胞的選擇。2023/1/1292謝謝！2023/1/1293Akiyama,K.etal.Nucl2023/1/12現(xiàn)今醫(yī)學分為傳統(tǒng)醫(yī)學、基于“生物-醫(yī)學模式〞近代開展起來的西醫(yī)，20世紀西醫(yī)又開展到“社會-心理-生物醫(yī)學〞或綜合醫(yī)學模式，后基因組時代系統(tǒng)生物學的興起，形成了系統(tǒng)醫(yī)學在全球的迅速開展，成為繼傳統(tǒng)醫(yī)學、西醫(yī)學之后中、西醫(yī)學匯通的未來醫(yī)學。當代中國醫(yī)學類專業(yè)比較優(yōu)秀的學校有北京大學、華中科技大學、鄭州大學等學校。中醫(yī)即中國傳統(tǒng)醫(yī)藥學，是形成于數(shù)千年前的中國，是建立在人們與疾病長期斗爭的經(jīng)驗總結(jié)及陰陽五行、八綱臟腑辨證根底上，運用樸素辯證法及思辨推理方法，認識機體、自然、疾病三者關(guān)系，開展起來的一門以“功能人〞包括功能臟器為概念的獨特的醫(yī)學哲學理論體系。在治療上，除了藥物外，還有針灸、推拿氣功、耳針等特殊療法，它是世界傳統(tǒng)醫(yī)學中最完善的一種醫(yī)學理論體系。它為人類尤其為中國人民健康和民族繁衍做出了巨大奉獻。西醫(yī)學是最近三四百年來建立在解剖學、生物學及現(xiàn)代科學技術(shù)根底上、開展起來的一門以“解剖人、肉體人〞為概念的、新興的現(xiàn)代醫(yī)學科學理論體系。主要采用科學實驗方法，從宏觀到微觀，直至目前的分子基因?qū)哟嗡?，開展極為迅速，超過其它任何一門醫(yī)學科學，成為世界醫(yī)學史上的主流。可見中西醫(yī)學，一個是以“功能人〞為概念的獨特的哲學醫(yī)學理論體系，一個是以“解剖人、肉體人〞為概念的新興的現(xiàn)代醫(yī)學科學理論體系，二者都不是以完整人為研究對象的科學，從理論講二者都不是科學的，勢必影響各自開展。事實也證明這一切，中醫(yī)長期停滯不前、療效也不確實。西醫(yī)盡管開展到目前的基因分子層次，但疾病發(fā)病率居高不下，對絕大局部疾病發(fā)病原因認識不清、發(fā)病機理弄不明白，治療受到制約，在小小SARS、禽流感面前竟束手無策，在糖尿病、癌癥、心腦血管疾病、尿毒癥等相當多疾病面前更是不得不求助或借助中醫(yī)治療。一個是療效不確實，一個是有些甚至相當多疾病無法治療，這就是中西醫(yī)學結(jié)合的緣由。然而，由于二者是兩套理論、兩股道上跑的車，風馬牛不相及，從理論上講就沒有結(jié)合的可能，只是形式上的融合罷了。故出現(xiàn)西醫(yī)對治療不了的疾病只好求助中醫(yī)，而中醫(yī)那么往往采用西醫(yī)診斷中醫(yī)治療，以及中西治療法一塊用的局面。至于循證醫(yī)學、比較醫(yī)學、后現(xiàn)代醫(yī)學、行為醫(yī)學等所謂“醫(yī)學〞，都稱不上一門獨立的醫(yī)學科學，關(guān)于這一點在靈魂醫(yī)學有關(guān)章節(jié)中將有相關(guān)點評。總之，目前以中西醫(yī)學為主的世界各種醫(yī)學科學都存在不完整性的瑕疵，即都是以不完整的人為研究對象的醫(yī)學科學，故不能解決目前存在于中西醫(yī)學甚至人文社會科學史上一切疑難模糊問題，成為阻礙醫(yī)學科學前進的羈絆。確實，要解決目前存在于中西醫(yī)學甚至人文社會科學上一切疑難模糊問題，顯然已完全超出了中西醫(yī)學所涉及的范疇，我們必須跳出中西醫(yī)學的理論框架，建立起一個新的醫(yī)學理論體系-東方醫(yī)學和西方醫(yī)學〔即西醫(yī)〕的融合形成現(xiàn)代系統(tǒng)醫(yī)學。該體系所涉及的一切問題不管從廣度上，還是從深度上，都應該遠遠超過現(xiàn)有的中西醫(yī)學理論，并將現(xiàn)有中西醫(yī)學理論納入自己的理論框架范圍之內(nèi)。為了肩負起這一歷史使命，原創(chuàng)人生、醫(yī)學理論體系——靈魂醫(yī)學soulmedicine應運而生，她不但從宏觀上或戰(zhàn)略上圓滿解釋并解決了存在于人類醫(yī)學及人文社會科學史上的一切疑難模糊問題，而且還能夠使人們得以啟迪人生，不得不重新認識人類自身、不得不重新認識人類賴以生存的這個多維世界。醫(yī)學化驗醫(yī)學定義〔medicine〕，是處理人健康定義中人的生理處于良好狀態(tài)相關(guān)問題的一種科學，以治療預防生理疾病和提高人體生理機體健康為目的。狹義的醫(yī)學只是疾病的治療和機體有效功能的極限恢復，廣義的醫(yī)學還包括中國養(yǎng)生學和由此衍生的西方的營養(yǎng)學?，F(xiàn)在世界上醫(yī)學主要有西方微觀西醫(yī)學和東方宏觀中醫(yī)學兩大系統(tǒng)體系。醫(yī)學的科學性在與應用根底醫(yī)學的理論不斷完善和實踐的驗證，例如生化、生理、微生物學、解剖、病理學、藥理學、統(tǒng)計學、流行病學，中醫(yī)學及中醫(yī)技能等，來治療疾病與促進健康。雖然東西方由于思維方式的不同導致研究人體健康與外界聯(lián)系及病理機制的宏觀微觀順序不同，但在不遠的將來中西醫(yī)實踐的豐富經(jīng)驗的積累和理論的形成必將誕生新的醫(yī)學---------人類醫(yī)學。不同于現(xiàn)代醫(yī)學，不同于傳統(tǒng)中醫(yī)，金水醫(yī)學誕生了，金水醫(yī)學是以驅(qū)除病理，恢復生理為主張的全新醫(yī)學，走出了人類醫(yī)學的誤區(qū)，治療疾病的特色鮮明，不管是任何疾病都能做到從危為安，由重到輕的恢復方法。金水醫(yī)學認識到人體是生命體，生命體有自己的強大的生理自我愈合功能，幫助生命體恢復自主作用才是治療疾病的根本。針對當今現(xiàn)代文明病，現(xiàn)代疑難病，現(xiàn)代慢性病，亞健康，一體多病，取得了巨大的成功，治療法那么為“胃腸潔，氣血流，玄府開，營衛(wèi)昌〞人生命體運動符合自然節(jié)律，最終到達人體生理增強，消滅疾病的目的。編輯本段醫(yī)學的分類醫(yī)學研究醫(yī)學可分為現(xiàn)代醫(yī)學〔即通常說的西醫(yī)學〕和傳統(tǒng)醫(yī)學〔包括中醫(yī)學、藏醫(yī)學、蒙醫(yī)學等〕多種醫(yī)學體系。不同地區(qū)和民族都有相應的一些醫(yī)學體系，宗旨和目的不相同。印度傳統(tǒng)醫(yī)學系統(tǒng)也被認為很興旺。研究領(lǐng)域大方向包括根底醫(yī)學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學、預防醫(yī)學、保健醫(yī)學、康復醫(yī)學等。根底醫(yī)學包括：醫(yī)學生物數(shù)學,醫(yī)學生物化學,醫(yī)學生物物理學,人體解剖學,醫(yī)學細胞生物學,人體生理學,人體組織學,人體胚胎學,醫(yī)學遺傳學,人體免疫學,醫(yī)學寄生蟲學,醫(yī)學微生物學,醫(yī)學病毒學,人體病理學,病理生理學,藥理學,醫(yī)學實驗動物學,醫(yī)學心理學,生物醫(yī)學工程學,醫(yī)學信息學,急救學,護病學,新中心法那么。臨床醫(yī)學包括：臨床診斷學實驗診斷學.影像診斷學+放射診斷學+超聲診斷學+核醫(yī)診斷學*臨床治療學職能治療學化學治療學生物治療學血液治療學組織器官治療學飲食治療學物理治療學語言治療學心理治療學內(nèi)科學外科學泌尿科學婦產(chǎn)科學兒科學老年醫(yī)學眼科學耳鼻喉科學口腔醫(yī)學傳染病學皮膚醫(yī)學神經(jīng)醫(yī)學精神病學腫瘤醫(yī)學急診醫(yī)學麻醉學護理學家庭醫(yī)學性醫(yī)學臨終關(guān)心學康復醫(yī)學保健醫(yī)學聽力學。編輯本段醫(yī)學的上個世紀末,本世紀初，1996年,清華學界對中醫(yī)氣本質(zhì)，經(jīng)絡(luò)實質(zhì)，陰陽，五行，藏象，中醫(yī)哲學觀等都有了新的全面整體創(chuàng)造性的認識和解說。如，鄧宇等發(fā)現(xiàn)的:氣是流動著的‘信息－能量－物質(zhì)’的混合統(tǒng)一體；〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕分形分維的經(jīng)絡(luò)解剖結(jié)構(gòu)；數(shù)理陰陽；中醫(yī)分形集：分形陰陽集－陰陽集的分形分維數(shù)，五行分形集－五行集的分維數(shù)；分形藏象五系統(tǒng)－暨心系統(tǒng)、肝系統(tǒng)、脾系統(tǒng)、肺系統(tǒng)、腎系統(tǒng)；中醫(yī)三個哲學觀－新提出的第三哲學觀：相似觀－分形論等?！瞕f肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2〕還包括近代針灸經(jīng)絡(luò)的開展史,近代中醫(yī)氣的進展簡史,中西醫(yī)結(jié)合史,中醫(yī)中藥史等.古代(經(jīng)典)中醫(yī)史〔4f腫瘤fbb癌癥yuw3胃癌d65io腸癌.f2tr肺癌65ff〕中國的中醫(yī)學起源于三皇五帝時期，相傳伏羲創(chuàng)造了〔45傳染病q566丙肝964jo乙肝28