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文檔簡介

聚合酶鏈式反應主要內容PCR的原理PCR的反應過程PCR反應體系PCR的步驟PCR產物的檢測PCR技術的基本原理基于核酸體內擴增的原理，在體外進行待擴增目的基因或DNA兩端的兩個引物與該目的基因序列退火而后延伸最終達到擴增的目的，是通過酶促反應在體外成百萬倍地擴增一段目的基因。變性、退火、延伸三步變性：雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補部位相配對和結合延伸：以目的基因為模板，合成互補的新DNA鏈PCR的基本反應過程PCR反應體系的基本成分模板DNA引物脫氧核苷三磷酸(dNTP)維持pH值的緩沖液二價陽離子一價陽離子熱穩(wěn)定DNA聚合酶標準PCR反應體系10×擴增緩沖液 5μl20mmol/L4種dNTP混合液 1μl20μmol/L正向引物 2.5μl20μmol/L反向引物 2.5μl熱穩(wěn)定DNA聚合酶 1-5μl超純水（UPW） 28-33μl模板DNA 5-10μl總體積 50μl液體石蠟（備選）各成分的終濃度Mg2+ 1.5mmol/LKCl 50mmol/LdNTP 200μmol/L 引物 1μmol/LDNA聚合酶 1-5單位模板DNA 1pg-1μgPCR步驟：設計引物，準備靶DNA混合反應液PCR反應：預變性（95oC，5min)

變性（95oC，50sec)

退火（50oC，1min)

延伸（72oC，1.5min)

延伸（72oC，10min)PCR產物的鑒定

電泳鑒定序列測定核酸凝膠電泳核酸核苷酸堿基戊糖磷酸基團：帶負電荷多聚陰離子（Polyanions)當將核酸分子放置在電場中時，就會向正電極方向遷移一、基本原理2、瓊脂糖凝膠電泳的制備和檢查配制緩沖液等配制瓊脂糖凝膠裝備電泳裝置核酸上樣核酸遷移觀察BufferWorkingSolutionTAE1x40mMTris-acetate1mMEDTATBE0.5x45mMTris-borate1mMEDTA2、瓊脂糖凝膠電泳的制備和檢查2、瓊脂糖凝膠電泳的制備和檢查瓊脂糖凝膠電泳1,636bp

1,018bp

517bpPCR產物的序列測定PCR產物直接測序克隆測序PCR技術的應用基因克隆染色體步移（

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