GMP質量體系醋酸氫化可的松檢驗操作規(guī)程

PAGE4PAGE1目的：為檢驗為檢驗醋酸氫化可的松規(guī)定一個標準的程序，以便獲得準確的實驗數(shù)據(jù)。范圍：適用于醋酸氫化可的松的檢驗。職責：檢驗室主任、檢驗員。規(guī)程：性狀:本品為白色或幾乎白色的結晶性粉末，無臭。本品在乙醇或氯仿中微溶，在水中不溶。1.1熔點：取本品，按熔點測定法(SOP-QC-307-00)，熔點為216-224℃，熔融時同時分解，為符合規(guī)定。1.2比旋度：取本品，精密稱取250mg，置25ml量瓶，加二氧六環(huán)溶解并定量稀釋至刻度，搖勻，按(SOP-QC-310-00)測定，比旋度為+158°至+165°為符合規(guī)定。a×25[a]=W×（1－B）式中：a：旋光儀讀數(shù)；W：樣品稱重量（mg）；B：水分含量（%）。1.3吸收系數(shù):精密稱取本品50mg，置100ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精吸2ml，置100ml量瓶中加無水乙醇，稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法(SOP-QC-301-00)，在241nm的波長處測定吸收度，吸收系數(shù)（E1cm1%）為383-407為符合規(guī)定。2.鑒別2.1試劑與儀器2.1.1 硫酸苯肼試液 2.1.2 硫酸、硫酸溶液（1→2）2.1.3 乙醇制氫氧化鉀試液 2.1.4 小型3用水箱2.1.5 燒杯、試管 2.1.6 紅外分光光度計2.1.7 移液管（10ml，2ml） 2.1.8 電子天平(萬分之一克)2.2檢驗步驟2.2.1取本品約0.1mg，置試管，加乙醇1ml溶解后，加新制的硫酸苯肼試液(SOP-QC-349-00)8ml，在70℃加熱15分鐘，即顯黃色為符合規(guī)定。2.2.2取本品約2mg，加硫酸2ml溶解，即顯黃至棕黃色，并帶綠色熒光為符合規(guī)定。2.2.3取本品約50mg，加乙醇制氫氧化鉀試液2ml(SOP-QC-349-00)，置水浴上加熱5分鐘，冷卻，加硫酸溶液（1→2）2ml，緩緩煮沸1分鐘，即發(fā)生醋酸乙酯的香氣為符合規(guī)定。2.2.4取本品，照紅外分光光度法(SOP-QC-302-00)測定，紅外吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集552圖）一致為符合規(guī)定。3.檢查3.1試劑與儀器3.1.1 氯仿-甲醇（9：1） 3.1.2 1，2-二氯乙烷-甲醇-水（95：5：0.3）3.1.3 堿性四氮唑藍試液 3.1.4 移液管(2ml)3.1.5 電子天平(萬分之一克) 3.1.6 容量瓶(100ml，10ml)3.1.7 微量進樣器 3.1.8 層析缸3.1.9 稱量瓶 3.1.10 恒溫烘箱3.1.11 噴霧器 3.1.12 硅膠G薄層板3.2項目與步驟3.2.1其他甾體:取本品，精密稱取30mg，置10ml量瓶中，加氯仿-甲醇(9:1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加氯仿-甲醇(9:1)稀釋至刻度，作為對照品溶液；照薄層色譜法(SOP-QC-304-00)試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以1，2-二氯乙烷-甲醇-水（95：5：0.3）為展開劑，展開后，晾干，在105℃干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍試液(SOP-QC-349-00)，立即檢視，供試品溶液如顯雜質斑點，其顏色對照溶液的主斑點比較，不得更深為符合規(guī)定。3.2.2干燥失重：稱取本品約1g，置稱量瓶中，按干燥失重測定法(SOP-QC-325-00)，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過0.5%為符合規(guī)定。4.含量測定4.1試劑與儀器4.1.1 C18硅膠色譜柱 4.1.2 醋酸氫化可的松對照品4.1.3 炔諾酮對照品 4.1.4 甲醇4.1.5 容量瓶(100ml，25ml)，單標移液管（5ml）4.1.6 電子天平（萬分之一克）4.1.7 稱量瓶 4.1.8 注射器(10ml)，過濾器，濾膜4.1.9 高效液相色譜儀4.2檢驗步驟按高效液相色譜法(SOP-QC-306-00)檢測。4.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用試驗用C18硅膠色譜柱，流動相為甲醇-水（65：35），流速為每分鐘1ml，檢測波長為240nm。量取醋酸氫化可的松對照溶液與內標溶液的混合對照溶液[*]20μl，注入液相色譜儀，醋酸氫化可的松峰和內標物質峰的分離度應大于2.0，理論板數(shù)按醋酸氫化可的松峰計算應不低于1300。4.2.2內標溶液的制備：取炔諾酮30mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。4.2.3醋酸氫化可的松對照溶液與樣品溶液的制備以及測定醋酸氫化可的松對照液與內標溶液的混合對照溶液的制備：[*]取醋酸氫化可的松對照品約35mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇30ml，溫熱溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液與內標溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照溶液。樣品溶液與內標溶液的混合樣品溶液的制備以及測定：取本品約35mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇30ml，溫熱溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液與內標溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，量取10μl注入液相色譜儀，將混合對照溶液按同法測定，按下式計算本品中醋酸氫化可的松（C23H32O6）的折干含量，應在97.0%-102.0%為符合規(guī)定。Cd=CW/（1－B%）Cd：本品的折干含量；CW：本品的濕品含量；B%：本品的含水百分數(shù)；A1×WsCW＝f××100%As×W1A1：樣品溶液中醋酸氫化可的松色譜峰面積或峰高；AS：內標物溶液中炔諾酮的峰面積或峰高；W1：樣品的稱樣量（g）；Ws：內標物的稱樣量（g）；f:為校正因子；As/Wsf=A2/W2