免疫缺陷動(dòng)物與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物優(yōu)秀課件

免疫缺陷動(dòng)物與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物第一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日主要內(nèi)容一、免疫缺陷動(dòng)物基本概念免疫缺陷動(dòng)物的分類常用免疫缺陷動(dòng)物的特點(diǎn)和應(yīng)用二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物基本概念轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的命名目前制作轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的主要方法轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究的意義及應(yīng)用第二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)免疫缺陷動(dòng)物一、基本概念免疫缺陷（immunodeficiencydiseases)是免疫系統(tǒng)中任何一個(gè)環(huán)節(jié)或其組分因先天發(fā)育不全或后天因各種因素所致?lián)p害而使免疫活性細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展、分化增殖和代謝異常并引起免疫功能不全所出現(xiàn)的臨床綜合征。第三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日免疫缺陷動(dòng)物（immunodeficientanimal)是指由于先天性遺傳突變或用人工方法造成一種或多種免疫系統(tǒng)組成成分缺陷的動(dòng)物。第四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日免疫缺陷病大體分為兩類：1、先天（或原發(fā)）性免疫缺陷，可導(dǎo)致對(duì)病原微生物的高度易感性；2、獲得（或繼發(fā)）性免疫缺陷，可由于營(yíng)養(yǎng)不良、惡性腫瘤、免疫抑制藥物治療或是免疫活性細(xì)胞受到病毒的感染。如HIVAIDS。第五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日二、免疫缺陷動(dòng)物的分類1、先天性免疫缺陷動(dòng)物2、獲得性免疫缺陷動(dòng)物目前，世界各國(guó)相繼培育出一系列免疫缺陷動(dòng)物，從嚙齒類擴(kuò)展到馬和牛等大型哺乳類動(dòng)物；從單一的T淋巴細(xì)胞免疫缺陷到幾種免疫細(xì)胞聯(lián)合缺陷。第六頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日

第七頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日三、常用免疫缺陷動(dòng)物的特點(diǎn)和應(yīng)用1、裸小鼠（Nudemice）即先天性無(wú)胸腺裸小鼠，由11號(hào)染色體上nu隱性基因突變導(dǎo)致。該基因已回交到不同品系，包括：NIH-nu/nu、BALB/c-nu/nu、C3H-nu/nu、C57BL/6-nu/nu。第八頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日具有純合裸基因（nu/nu)的小鼠主要的缺陷特征：1、毛發(fā)生長(zhǎng)發(fā)育異常，表現(xiàn)為全身形似無(wú)毛，呈裸體外表；2、無(wú)胸腺，僅有胸腺殘跡或異常的胸腺上皮，這種上皮不能使T細(xì)胞正常分化，缺乏成熟T細(xì)胞的輔助、抑制及殺傷功能，因而細(xì)胞免疫力低下，不能執(zhí)行正常T細(xì)胞功能。第九頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日BALB/c-nu的胸腺昆明小鼠的胸腺第十頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日3、裸小鼠的B細(xì)胞功能基本正常，成年裸小鼠（6~8周齡）較普通鼠有較高水平的NK細(xì)胞活性，但幼鼠（3~4周齡）的NK細(xì)胞活性低下，裸小鼠粒細(xì)胞數(shù)比普通小鼠低。第十一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日4、繁育能力差，乳腺發(fā)育缺損，以雄性純合子與雌性雜合子繁育。5、T細(xì)胞缺陷可通過(guò)移植成熟T細(xì)胞、胸腺細(xì)胞或正常胸腺上皮得到校正。第十二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日裸鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是一種奇跡，在研究人癌方面具有獨(dú)一無(wú)二的特點(diǎn)，它是人癌研究的“活試管”，為人們研究腫瘤提供美妙的動(dòng)物模型原來(lái)科學(xué)家們先用一種高分子材料做成“人耳”的模型支架，然后讓人體的軟骨組織細(xì)胞在這個(gè)支架上繁殖生長(zhǎng)。一周后，在裸鼠的背上割開(kāi)一個(gè)口子，將培育過(guò)的這個(gè)“人耳”模子植入縫合，隨著人體軟骨細(xì)胞不斷增殖，支架慢慢地被機(jī)體降解吸收，使“人耳”和裸鼠融為一體。當(dāng)然，這個(gè)“人耳”的軟骨組織來(lái)自人體，而“人耳”外的皮膚則來(lái)自裸鼠第十三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日裸小鼠（

Nudemice）裸大鼠(NudeRats)

第十四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2、裸大鼠（Nuderat）裸大鼠的基因符號(hào)為rnu。純合子裸大鼠（rnu/rnu），一般特征似裸小鼠。發(fā)育遲緩，體重為正常大鼠的70%。裸大鼠較裸小鼠對(duì)多種傳染病更敏感。比裸小鼠更強(qiáng)壯、壽命更長(zhǎng)。體型較大，可提供足夠的血樣、也可為各種研究提供足夠的瘤組織及對(duì)大范圍的外科手術(shù)方法較有利。第十五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日裸大鼠(NudeRats)

封閉群（OutbredMice）來(lái)源：

1979-1980年期間，含有裸基因的8個(gè)近交系大鼠(BN、MR、BUF、WN、ACI、WKY、M520、F344)在一系列交配之后育成了NIH裸大鼠。

2001年CharlesRiver從NIH引入，命名為Crl:NIH-Foxn1rnu。該品系沒(méi)有胸腺，缺乏T細(xì)胞，在胸腺外周淋巴器官的主要區(qū)域表現(xiàn)為細(xì)胞群體衰竭特征

第十六頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日3、性連鎖免疫缺陷小鼠性連鎖免疫缺陷小鼠（X—linkedimmunedeficiencymouse,XID)起源于CBA/N小鼠，其B細(xì)胞功能缺陷，基因符號(hào)xid位于X性染色體上。純合子雌鼠（xid/xid）和雜合子雄鼠（xid/y)對(duì)非胸腺依賴性Ⅱ型抗原沒(méi)有體液免疫反應(yīng)，血清中IgM和IgG含量降低，其T細(xì)胞功能基本正常。該模型是研究B淋巴細(xì)胞的發(fā)生、功能與異質(zhì)性理想的動(dòng)物。第十七頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日4、Biege(bg)小鼠為NK細(xì)胞活性缺陷的突變系小鼠，隱性突變基因bg位于第13號(hào)染色體上。目前常使用的主要為C57BL/6J系beige小鼠純合鼠被毛完整，但毛色變淺，耳廓和尾尖色素減少，出生時(shí)眼睛顏色很淡。此小鼠表型特征與人的齊—希二氏綜合癥（Chedian—Higashisyndrome)相似。第十八頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日5、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠SCID小鼠，是位于第16號(hào)染色體的scid單個(gè)隱性突變基因所導(dǎo)致。外觀與正常小鼠無(wú)異，生長(zhǎng)發(fā)育正常胸腺、脾、淋巴結(jié)的重量一般為正常小鼠的30%，組織學(xué)上表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞缺失。所有T、B細(xì)胞功能測(cè)試均為陰性。第十九頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCID是由SevereCombinedImmune-deficiency縮寫(xiě)而來(lái)，最早此一癥狀是1950年在人類的嬰兒中發(fā)現(xiàn)。直到1983年才首次在CB-17品系小鼠中發(fā)現(xiàn)SCID癥狀。SCID的特征為喪失B與T淋巴球的功能，造成低免疫球蛋白血癥，但不意味在SCID小鼠體內(nèi)完全沒(méi)有B與T淋巴球，應(yīng)該說(shuō)SCID小鼠體中沒(méi)有成熟的B與T淋巴球，來(lái)足以擔(dān)當(dāng)有效的免疫功能。第二十頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCID小鼠巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、紅細(xì)胞等均呈正常狀態(tài)，NK細(xì)胞及淋巴激活因子（LAK）也呈正常。其外周血白細(xì)胞較少，淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的10%--20%，而正常小鼠應(yīng)占約70%。第二十一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCID小鼠需要飼養(yǎng)于SPF屏障系統(tǒng)環(huán)境。SCID小鼠的腫瘤移植率高，對(duì)白血病和惡性腫瘤不但轉(zhuǎn)移率高，而且能廣泛擴(kuò)散，與人體腫瘤生物學(xué)行為極為相似。第二十二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCID小鼠的Leaky現(xiàn)象：在臨床表現(xiàn)上，約有2-23%子代具有少量的淋巴樣細(xì)胞，并產(chǎn)生少量的免疫球蛋白的現(xiàn)象。隨著SCID小鼠年齡的增長(zhǎng)與暴露于抗原刺激下，會(huì)增加其Leaky現(xiàn)象。飼養(yǎng)在SPF環(huán)境中，借干凈的環(huán)境、較少的抗原刺激，減緩Leaky現(xiàn)象出現(xiàn)，爭(zhēng)取可供實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。在繁殖SCID小鼠時(shí)，監(jiān)測(cè)血清IgM為一種有效的篩選種鼠的方式。第二十三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCID—hu小鼠是科學(xué)家通過(guò)移植人免疫組織或免疫細(xì)胞，使SCID小鼠具有了部分人類免疫系統(tǒng)，稱為SCID—hu小鼠。該小鼠用途也十分廣泛。目前已用于人類生理學(xué)、病理學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)和血液學(xué)的研究。它也用于藥物篩選和疫苗效應(yīng)與安全性的試驗(yàn)。第二十四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCID小鼠—SHO

無(wú)毛封閉群小鼠模型SHO（SCIDHairlessOutbred）Crl:HA-Prkdcscid和Crl:SKH1-Hrhr雜交而成美國(guó)CharlesRiverLab自2007年開(kāi)始培育，在2008年得到了兩條染色體上均帶有SCID基因的無(wú)毛的SCID小鼠。將人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3分別接種到SCID和SHO身上對(duì)比，研究發(fā)現(xiàn)，SHO除去具有與SCID小鼠相同的腫瘤生長(zhǎng)特性之外，還摒除了Nu/Nu裸鼠接種PC-3時(shí)出現(xiàn)的皮膚潰瘍現(xiàn)象。第二十五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日SCIDBeige專業(yè)名稱：CB17.B6-PrkdcscidLystbg/CrlVr

近交系（InbredMice）來(lái)源：

該品系為scid和beige常染色體隱性突變同類系小鼠該品系由Croy等在Guelph大學(xué)通過(guò)C.B-17scid/scid和C57BL/6bg/bg小鼠的雜交得到該品系B、T淋巴細(xì)胞功能缺失，同時(shí)自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)功能低下

1993年CharlesRiver引入該品系第二十六頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日NODSCID

JaksonLab用非肥胖糖尿病小鼠NOD/Lt與SCID小鼠雜交得到降低了Nk細(xì)胞活性，雜交雙突變小鼠NOD/Lt-SCID表達(dá)了NK細(xì)胞活性相對(duì)低的特性。第二十七頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日

Nu/Nu裸鼠

封閉群（OutbredMice）來(lái)源：

此免疫缺陷鼠來(lái)源于NIH

開(kāi)始被認(rèn)為是BALB/c的同類系

后來(lái)表明此鼠不是近交小鼠，并以遠(yuǎn)交方式保存下來(lái)

此小鼠沒(méi)有胸腺，是免疫缺陷鼠，不能產(chǎn)生T細(xì)胞

第二十八頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日國(guó)內(nèi)常用免疫缺陷大小鼠對(duì)比第二十九頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日（1）BALB/c-nu來(lái)源于BALB/C小鼠基因突變（2）Nu/Nu裸鼠（注意首字母大寫(xiě)）由NIH培育成功，是一個(gè)獨(dú)立的品系（3）CD-1裸鼠，將nu基因?qū)隒D-1小鼠獲得該品系。Nu/Nu、CD-1裸鼠為封閉群，隨機(jī)交配方式進(jìn)行繁殖，后代基因純合程度低，個(gè)體間差異大第三十頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日第二節(jié)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物隨著現(xiàn)代高新科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)已從過(guò)去注重于動(dòng)物飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)操作的宏觀向微觀方向發(fā)展。對(duì)小鼠基因組研究的目的不僅在于了解小鼠本身的基因結(jié)構(gòu)，更主要的是為人類基因組研究、人類遺傳疾病研究提供動(dòng)物模型。

第三十一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日一、基本概念轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（Transgenicanimal）:是指以實(shí)驗(yàn)方法導(dǎo)入的外源基因在其染色體基因組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動(dòng)物。外源基因隨細(xì)胞分裂分配到所有子細(xì)胞中并遺傳給后代嚴(yán)格說(shuō)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物有別于嵌合體?；驹?

目的基因或基因組片段受精卵或著床前胚胎細(xì)胞受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中

攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物第三十二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日嵌合體動(dòng)物：只有部分組織細(xì)胞整合有外源基因的動(dòng)物，稱嵌合體動(dòng)物?；驹恚篈動(dòng)物的ES細(xì)胞B動(dòng)物動(dòng)物的囊胚代孕鼠的子宮生產(chǎn)出嵌合體動(dòng)物與雜合體的區(qū)別，雜合體是由來(lái)自不同的物種的兩個(gè)配子形成的，如騾子是驢與馬結(jié)合創(chuàng)造的一個(gè)雜合體，而不是嵌合體。馬（2n=64）

驢（2n=62)第三十三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日克隆動(dòng)物（clone）概念：指動(dòng)物通過(guò)體細(xì)胞進(jìn)行的無(wú)性生殖以及由無(wú)性生殖形成的基因型幾乎完全相同的后代個(gè)體組成的群體。原理第三十四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日1982年––第一只轉(zhuǎn)基因小鼠RichardPalmiter

和RalphBrinster

領(lǐng)導(dǎo)的一個(gè)小組將一個(gè)能夠被鋅調(diào)控的DNA元件與大鼠的生長(zhǎng)激素基因連在一起，并將其注射到了受精了的小鼠胚胎中，從而培育出了第一批轉(zhuǎn)基因小鼠。這些轉(zhuǎn)基因小鼠長(zhǎng)期取食含有足量鋅的食物后，就會(huì)長(zhǎng)得非常大。轉(zhuǎn)基因小鼠的出現(xiàn)掀起了遺傳學(xué)研究的新的浪潮。第三十五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日1983年––PCRKaryMullis發(fā)明了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），這是一種能夠極其快速的獲得特定DNA片段的方法。目前PCR已成了生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中的不可缺少的常規(guī)技術(shù)，在全世界都被廣泛使用。Millis因這項(xiàng)了不起的發(fā)明獲得了1993年的諾貝爾獎(jiǎng)。

第三十六頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日1987-89年––第一只基因敲除小鼠MartinEvans，OliverSmithies和MarioCapecch領(lǐng)導(dǎo)的幾個(gè)研究小組對(duì)胚胎干細(xì)胞中特定目標(biāo)基因進(jìn)行失活，培育出了第一只基因敲除小鼠。這三位科學(xué)家因?yàn)檫@項(xiàng)工作在2001獲得了Lasker獎(jiǎng)。接下來(lái)，科學(xué)家們用同樣的技術(shù)又培育出了幾千只基因敲除小鼠。于2007年獲諾貝爾獎(jiǎng)。

第三十七頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日1998年––

第一只克隆鼠

在1997年克隆羊“多莉”誕生之后，夏威夷的一個(gè)小組培育出了第一批克隆鼠——“Cumulina”和她的姐妹們。第三十八頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日1999年--小鼠基因組測(cè)序協(xié)會(huì)在1990年人類基因組計(jì)劃啟動(dòng)之初，該計(jì)劃就將小鼠列為了必須進(jìn)行測(cè)序的五個(gè)重要的模式生物之一。1999年，人類基因組三個(gè)主要測(cè)序中心成立了一個(gè)相互協(xié)作的小鼠基因組測(cè)序機(jī)構(gòu)，取名為小鼠基因組測(cè)序協(xié)會(huì)（MGSC）。小鼠基因組測(cè)序項(xiàng)目正式啟動(dòng)，到2002年，MGSC已經(jīng)發(fā)展到了擁有6個(gè)國(guó)家的26個(gè)研究機(jī)構(gòu)。第三十九頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2001年2月--人類基因組

在人類基因組計(jì)劃正式啟動(dòng)之后的第十一年，人類基因組的第一張測(cè)序草圖完成并公布于眾。同時(shí)發(fā)表的人類基因組草圖有兩份，一份由公共基金資助的國(guó)際人類基因組測(cè)序協(xié)會(huì)完成，發(fā)表在Nature上，另一份由CraigVenter領(lǐng)導(dǎo)的一家美國(guó)私人測(cè)序公司CeleraGenomics完成，發(fā)表在Science上。第四十頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2001年6月--散彈法

美國(guó)公司CeleraGenomics使用散彈法測(cè)得了用于銷(xiāo)售的小鼠序列草圖。散彈法是一種一次性測(cè)得基因組全序列的技術(shù)。簽訂一份三年的合同后，私人客戶只用45000美元就可以得到5倍覆蓋率的小鼠基因組序列數(shù)據(jù)。Celera公司的序列基于四個(gè)小鼠株系，其中包括了DBA株系，但不包括公共基金項(xiàng)目已經(jīng)在測(cè)的C57BL/6J株系。第四十一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2002年5月––16號(hào)染色體

RichardMural等人對(duì)Celera公司測(cè)得的小鼠16號(hào)染色體序列作了分析，并將結(jié)果發(fā)表在Science上。他們發(fā)現(xiàn)該染色體上有一大段區(qū)域與已被分析的人類21號(hào)染色體序列高度相似。第四十二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2002年8月––小鼠基因組物理圖譜

一個(gè)國(guó)際協(xié)會(huì)提供了通過(guò)構(gòu)建基因組物理圖譜來(lái)詳細(xì)確定DNA序列的框架。小鼠和人類間大量序列的相似性使得解碼小鼠序列變得相對(duì)容易；反過(guò)來(lái)，小鼠的圖譜也能用來(lái)填補(bǔ)人類基因組序列中存在的空缺。第四十三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2002年12月

––小鼠基因組小鼠基因組測(cè)序協(xié)會(huì)發(fā)表了一份高質(zhì)量的小鼠基因組序列草圖，同時(shí)對(duì)C57BL/6J小鼠株系做了分析。這個(gè)基因組大小約為2.5Gb，比人類基因組要小，預(yù)計(jì)的基因也少于30000個(gè)。約有40%的小鼠和人類基因組序列相高度似性，80%的人類基因在小鼠基因組中能找到相應(yīng)的基因。同時(shí)還有不少文章對(duì)小鼠遺傳組成的其它方面做了詳細(xì)討論。在日本RIKEN基因組科學(xué)實(shí)驗(yàn)室的努力下，很多相關(guān)的重要資源都能夠被免費(fèi)獲取。

第四十四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體系打破了自然繁殖中的種間隔離，使基因能在種系關(guān)系很遠(yuǎn)的機(jī)體間流動(dòng)，它將對(duì)整個(gè)生命科學(xué)產(chǎn)生全局性影響。因此轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)在1991年第一次國(guó)際基因定位會(huì)議上被公認(rèn)是遺傳學(xué)中繼連鎖分析、體細(xì)胞遺傳和基因克隆之后的第四代技術(shù)，被列為生物學(xué)發(fā)展史上126年中第14個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn)。第四十五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日二、命名1．符號(hào)(1)一個(gè)轉(zhuǎn)基因符號(hào)由以下三部分組成：TgX(YYYYYY)＃＃＃＃＃Zzz，TgX=方式；(YYYYYY)=插入片段標(biāo)示；＃＃＃＃＃=實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)；Zzz=實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代號(hào)；第四十六頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日(2)方式—TgX轉(zhuǎn)基因符號(hào)通常冠以Tg字頭。隨后的一個(gè)字母X，表示DNA插入的方式：

H代表同源重組；

R代表經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染的插入；

N代表非同源插入。第四十七頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日（3）插入片段標(biāo)示—(YYYYYY)是由研究者確定的表明插入基因顯著特征的符號(hào)。通常由放在圓括號(hào)內(nèi)的字符組成：可以是字母（大寫(xiě)或小寫(xiě)），也可由字母與數(shù)字組合而成，不用斜體字，上下標(biāo)、空格及標(biāo)點(diǎn)等符號(hào)。第四十八頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：1）標(biāo)示應(yīng)簡(jiǎn)短，一般不超過(guò)六個(gè)字符。2）如果插入序列源于已經(jīng)命名的基因，應(yīng)盡量在插入標(biāo)示中使用基因的標(biāo)準(zhǔn)命名或縮寫(xiě)，但基因符號(hào)中的連字符應(yīng)省去。3）插入片段標(biāo)示只表示插入的序列，并不表明其插入的位置或表型。第四十九頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日一些標(biāo)示的標(biāo)準(zhǔn)命名縮寫(xiě)：

An匿名序列；Ge基因組；

Im插入突變；Nc非編碼序列；

Rp報(bào)告基因；Sn合成序列；

Et增強(qiáng)子捕獲裝置；

Pt啟動(dòng)子捕獲裝置。第五十頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日（4）實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)及實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代號(hào)實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)：是由實(shí)驗(yàn)室對(duì)已成功的轉(zhuǎn)基因系給予的特定編號(hào)，最多不超過(guò)5位數(shù)字。而且，插入片段標(biāo)示的字符與實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)的數(shù)字位數(shù)之和不能超過(guò)11。實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代號(hào)：是對(duì)從事轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)室給予的特定符號(hào)。第五十一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日2.舉例

C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg：

來(lái)源于美國(guó)杰克遜實(shí)驗(yàn)室（J）的C57BL/6品系小鼠被轉(zhuǎn)入人的CD8基因組（Ge）；轉(zhuǎn)基因在JonW.Gordon(Jwg)實(shí)驗(yàn)室完成，獲取于一系列顯微注射后得到的序號(hào)為23的小鼠。

轉(zhuǎn)基因符號(hào)縮寫(xiě):C57BL6J-TgN23Jwg第五十二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日TgN(GPDHIm)1Bir以人的甘油磷酸脫氫酶基因（GPDH）插入（C57BL/6JXSJL/J）F1代雌鼠的受精卵中，并引起插入突變（Im），這是EdwardH.Birkenmeier(Bir)實(shí)驗(yàn)室命名的第一只轉(zhuǎn)基因小鼠。根據(jù)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物命名原則，如果轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的遺傳背景由不同近交系或遠(yuǎn)交群混合而成時(shí)，該轉(zhuǎn)基因符號(hào)不使用動(dòng)物品系或種群的名稱?？s寫(xiě)：TgN1Bir第五十三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日三、遺傳修飾動(dòng)物模型的建立方法1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)：目的基因整合受精卵（或胚胎干細(xì)胞）導(dǎo)入受體子宮發(fā)育成含目的基因的個(gè)體，此個(gè)體能把目的基因遺傳下去。2、核移植技術(shù):又稱動(dòng)物整體克隆技術(shù)。將一個(gè)體細(xì)胞的核導(dǎo)入另一個(gè)體的去核卵細(xì)胞中，使之發(fā)育成個(gè)體。3、基因剔除技術(shù)：又稱基因靶向滅活。指有目的地去除動(dòng)物體內(nèi)某種基因的技術(shù)?；驹硎峭粗亟M技術(shù)。第五十四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日導(dǎo)入基因的主要方式顯微注射法ES細(xì)胞法電穿孔脂質(zhì)體逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法精子載體導(dǎo)入法等第五十五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日（一）雄原核顯微注射法以單細(xì)胞受精卵為靶細(xì)胞，利用顯微注射技術(shù)將構(gòu)建好的載體DNA直接注射入受精卵的原核，再將接受注射的受精卵移入假孕母體輸卵管繼續(xù)發(fā)育獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體。

目前應(yīng)用較廣泛，最早最經(jīng)典的方法。第五十六頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日一、設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)基因構(gòu)件

1、目的基因的獲取

2、基因載體（復(fù)制子）的選擇與構(gòu)建3、目的基因與載體的連接（連接酶）：重組DNA分子二、動(dòng)物操作

1、準(zhǔn)備假孕母鼠（養(yǎng)母）2、受精卵的準(zhǔn)備3、基因?qū)?、胚胎移植5、對(duì)幼鼠的鑒定

第五十七頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日轉(zhuǎn)基因工作需要的動(dòng)物1、需要的野生型小鼠類型包括：幼齡雌鼠（21-28天）用作胚胎供體；成年雄鼠；成年雌鼠，作為胚胎移植的受體；輸精管結(jié)扎的雄鼠，用來(lái)產(chǎn)生假孕雌鼠；青年野生型雄鼠和雌鼠，與轉(zhuǎn)基因鼠交配，建立轉(zhuǎn)基因品系。2、從胚胎移植到成年小鼠總計(jì)約11周的時(shí)間胚胎移植約19天幼鼠約21天斷乳小鼠約4-5周成年小鼠約19天幼鼠。第五十八頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日原核注射法制備轉(zhuǎn)基因鼠技術(shù)路線第五十九頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日第六十頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日第六十一頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日第六十二頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)：外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；導(dǎo)入過(guò)程直觀；整合率高缺點(diǎn)：設(shè)備昂貴、環(huán)節(jié)較多對(duì)操作人員有較高的技術(shù)要求低效率（尤其是大家畜）對(duì)卵子傷害大，胚胎存活率低基因整合隨機(jī)性轉(zhuǎn)基因沉默第六十三頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日（二）胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）法ES細(xì)胞是早期胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)建立起來(lái)的多潛能細(xì)胞系。將攜帶有外源基因的ES細(xì)胞注入到動(dòng)物的早期胚胎內(nèi)，可產(chǎn)生嵌合體及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。它本身是二倍體，能在體外培養(yǎng)，具有高度的全能性，可以形成包括生殖細(xì)胞在內(nèi)的所有組織，并且在不同的培養(yǎng)條件下表現(xiàn)出不同的功能狀態(tài)。在ES細(xì)胞上的基因操作：可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、脂質(zhì)體介導(dǎo)、電穿孔、磷酸鈣共沉淀等方法將外源基因?qū)隕S細(xì)胞。第六十四頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)：外源基因整合情況的可控性高?？深A(yù)先在細(xì)胞水平檢測(cè)外源基因的拷貝數(shù)、定位、表達(dá)的水平及插入的穩(wěn)定性。外源基因?qū)隕S細(xì)胞的方法多樣，細(xì)胞鑒定及篩選方便。缺點(diǎn)：ES細(xì)胞系建立及培養(yǎng)困難維持ES細(xì)胞的未分化及多向分化潛能不易所得個(gè)體為嵌合體第六十五頁(yè)，共七十三頁(yè)，2022年，8月28日（三）完全基因剔除轉(zhuǎn)基因動(dòng)物完全基因剔除(entirelyknock-out)：