免疫組化結果判斷及常見問題的分析優(yōu)秀課件

免疫組化結果判斷及常見問題的分析第一頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二頁，共四十七頁，2022年，8月28日肝臟：CK8理想著色，膽管上皮細胞強陽性，肝細胞呈不同層次陽性。第三頁，共四十七頁，2022年，8月28日

panCK（AE1/AE3）在肝臟理想的染色，采用了熱修復。肝細胞膜、膽管強而清晰的著色。背景干凈。第四頁，共四十七頁，2022年，8月28日一、特異性染色的判斷1.特定的定位

細胞陽性——根據靶抗原不同而呈現胞膜型、胞漿型或胞核型間質陽性——表現為細胞外著色，局限性或彌散性2.染色的不均一性陽性細胞的染色分布不均，片狀或點狀散在分布染色強弱不等，顏色深淺反映抗原量的多少3.排除人為造成的非特異性染色

切片的折疊、刀痕，色素沉著，組織細胞壞死。4.顆粒性顯色

DAB顯色在高倍鏡下呈顆粒狀而非均勻著色。第五頁，共四十七頁，2022年，8月28日免疫組化標準化照片CK10CD44v6ER第六頁，共四十七頁，2022年，8月28日第七頁，共四十七頁，2022年，8月28日第八頁，共四十七頁，2022年，8月28日第九頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日合格的免疫組化染色切片

是正確判斷染色結果的基礎和前提

不合格的免疫組化染色切片

容易導致誤判第十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日C-erbB-2優(yōu)良中差第十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日4321ER第十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日子宮內膜PR染色，修復不足子宮內膜PR染色，修復良好

PR第十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日編號陽性片待檢片陰性對照結論12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失誤，抗體失效非特異性著色陽性片不含靶抗原待檢片不含定位抗原待檢片含定位抗原二、染色結果的判斷第十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM陽性強度20×10視野下，隨機選取5個視野，測100個陽性細胞的平均光密度即為此片的陽性強度。三、結果分析第十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日P53陽性細胞百分比計數100個瘤細胞，其中陽性細胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）第十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日PCNABarnes法A：瘤細胞顯色有無及深淺0（不著色）1（淺黃色）2（棕黃色）3（棕褐色）B：顯色細胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）評分=A×B0分：陰性1~4分：弱陽性＞4分：強陽性第十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日膠原染色陽性面積百分比40×10視野，選取5個視野，計算陽性區(qū)域面積占整個參考面積的百分率。第二十頁，共四十七頁，2022年，8月28日CD34Weidner法（MVD計數）孤立的棕黃色細胞族代表一條微血管。低倍鏡下找到組織內密度最高區(qū)域。40×10視野下計數微血管數目。第二十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日K-rasVEGF第二十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日附：定量分析——圖象處理系統

1、圖象處理：利用儀器按照不同的目的進行圖象的修正、變換、特征提取和測量。1）“狹義”指消除圖象的模糊不清部分，校正畸變。2）“廣義”包括對圖象的結構分析，提取特征進行測量。

第二十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日2、圖象處理系統組成圖象輸入（顯微鏡、掃描儀）圖象處理運算（病理圖文分析軟件）圖象、數據輸出

第二十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日

3、圖象處理系統功能

幾何形態(tài)學定量分析細胞核、漿的大小、面積、核漿比；細胞分布密度、個數；血管、腺體的面積、密度；間質的面積

免疫組織化學分析按著色灰度分類，計算陽性、陰性細胞的面積含量DNA倍體分析計算正常細胞及腫瘤細胞DNA含量，給出倍體參數、DNA參數分布直方圖

AgNOR分析顆粒分析：數目、大小、面積、比例

第二十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日四、免疫組化異常著色及對策1.非特異性著色及其對策非特異性著色原因對策操作過程沖洗不充分每步沖洗3×5min內源性過氧化物酶3％H2O2封閉內源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥第二十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日內源性生物素—腎小管第二十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日內源性生物素—淋巴結轉移性甲狀腺腺癌第二十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日蛻膜組織部分胞核PR陽性，血管內紅細胞過氧化物酶顯色第三十頁，共四十七頁，2022年，8月28日嗜酸性粒細胞中細胞色素顯色第三十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日吞噬細胞內

含鐵血黃素

第三十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日壞死組織著色：AE1/AE3第三十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日壞死組織著色第三十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日交叉反應：乳腺ki-67組織細胞胞漿著色第三十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日黑色素瘤，細胞內含黑色素，呈紫黑色，HE染色第三十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日灶狀著色：機械原因著色第三十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日CyclinD1套細胞淋巴瘤全片著色第三十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日全片著色第三十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日邊緣著色第四十頁，共四十七頁，2022年，8月28日“陰陽臉”著色第四十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日氣泡第四十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日非特異性著色原因對策操作過程沖洗不充分每步沖洗3×5min內源性過氧化物酶3％H2O2封閉內源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥非特異性著色及其對策第四十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日無信號片CD30第四十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日2.染色的假陰性及其對策染色假陰性原因對策組織處理不當（固定、浸蠟）改善條件，重取材一抗與二抗種屬連接錯誤確定抗體種屬無誤抗體失效不得使用過期的試劑盒顯色系統不相適配更換適配的顯色系統操作不當，遺漏重要步驟嚴格遵守操作規(guī)程第四十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日無色或淺色片MCL理想的CD5著色。所有的瘤細胞都著色很強。散在的T細胞著色比瘤細胞深。MCL的CD5染色不足(一抗?jié)舛忍?。MCL瘤細胞幾乎都沒有著色。