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第第頁125I標(biāo)記單克隆抗體技術(shù)125I標(biāo)記單克隆抗體技術(shù)

同位素標(biāo)記是一種重要的抗體標(biāo)記技術(shù)，牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻(xiàn)而獲得醫(yī)學(xué)和生理學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)。McAb標(biāo)記同位素后除應(yīng)用于放射免疫測定外，還可用于競爭結(jié)合試驗(yàn)、體內(nèi)腫瘤定位等。

一原理

氯胺桾即對(duì)甲苯碘氯胺鈉，在水溶液中生成次氯酸，為一種溫柔氧化劑，當(dāng)加入到有蛋白質(zhì)和碘的弱堿水溶液中，可將I２氧化為I＋并結(jié)合到氨基酸上。如標(biāo)記條件溫柔，標(biāo)記后的McAb仍具有良好的結(jié)合活性，通過放射性同位素強(qiáng)度的測定可反映相應(yīng)抗原的含量。

二方法

在細(xì)胞凍存管內(nèi)加入純化的McAb100g／100l，

再加入10l0.05M磷酸緩沖液

再加入10l含1mCi125I

加入10l氯胺-T5mg／ml溶于0.05M

磷酸鹽緩沖液，孵育時(shí)間不超過30秒

加入100l偏重亞硫酸鈉1.2mg／ml溶于

0.05M磷酸緩沖液

加入200lKI溶液少許結(jié)晶KI溶于0.05M

磷酸緩沖液＋4％牛血清白蛋白

用PD10柱SephadexG25除去游離125I

用4％BSAPBS洗脫

分部收集，0.5ml／管

每管取5l進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算標(biāo)記抗體的比活性和標(biāo)記率

結(jié)合于McAb１２５I放射性強(qiáng)度cpm

標(biāo)記率％＝───────────────────

總放射性強(qiáng)度cpm

結(jié)合于某一管McAb上的放射性強(qiáng)度

比活性Ci／gMcAb＝────────────────

某一管McAb總量

三試劑器材

1.純化后的McAb

2.0.05M磷酸緩沖液，氯胺桾，偏重亞硫酸鈉，KI，BSA

3.125I

4.有通風(fēng)裝置的超凈臺(tái)，計(jì)數(shù)儀

5.PD10柱SephadexG25

四留意事項(xiàng)

1.嚴(yán)防同位素污染，工作人員必需穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必需在嚴(yán)密的通風(fēng)櫥或通風(fēng)超凈臺(tái)中操作。操作前后對(duì)試驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測。所用12

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