生理學(xué)實驗報告計劃2蛙腓腸肌及刺激頻率強(qiáng)度關(guān)系

個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)生理學(xué)實驗報告實驗內(nèi)容：一、蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備二、骨骼肌縮短的實驗課程名稱：動物生理學(xué)實驗指導(dǎo)老師：實驗人：院系專業(yè)：學(xué)號：2010年10月20日實驗內(nèi)容一蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備（4-1）【實驗?zāi)康摹?、學(xué)習(xí)蛙類動物單毀髓與雙毀髓的方法。2、學(xué)習(xí)并掌握蛙類坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備方法?！緦嶒炘怼客茴惖囊恍┗旧顒雍蜕砉δ芘c恒溫動物相像，而其離體組織所需1/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)的生活條件比較簡單，易于控制和掌握。所以在實驗中常用蟾蜍或青蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)原來察看歡樂與歡樂性、刺激與肌肉縮短等基本生理現(xiàn)象和過程。制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本室生理學(xué)實驗中必然掌握的一項基本技術(shù)。個人收集整理勿做商業(yè)用途【實驗器材】常用手術(shù)器材（包含粗剪刀、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、眼科剪、眼科鑷、金屬探針、玻璃分針）、固定針、鋅銅弓、蠟盤、培育皿、廢物缸、棉線、紗布、滴管、任氏液。個人采集整理勿做商業(yè)用途【實驗對象】蛙【實驗步驟】1、毀腦和脊髓取青蛙一只，用紗布包裹青蛙的四肢和軀干，露出頭部。左手握住青蛙，并用食指按壓頭部前端，拇指按壓背部使頭部前俯；右手找到青蛙枕骨大孔所在地點。將探針由凹陷處垂直刺入，刺破皮膚即進(jìn)入枕骨大孔，這時將探針由枕骨大孔轉(zhuǎn)向頭方，向前探入顱腔內(nèi)，此后向各個方向攪動探針，以搗毀腦組織。如探針的確在顱腔內(nèi)，可感覺出針在四周皆壁的腔內(nèi)。腦組織搗毀后，將探針退出，在由枕骨大孔刺入并轉(zhuǎn)向尾方，與脊髓平行刺捻入椎管，以損壞脊髓。椎管較細(xì)，故若已刺入椎管針則不可以搖動。脊髓被損壞時蛙腿后瞪挺直。要確立腦和脊髓能否圓滿被損壞可檢查蛙四肢肌肉緊張性能否圓滿消逝。個人收集整理勿做商業(yè)用途2、剝制后肢標(biāo)本自青蛙雙側(cè)腋部以下圓滿剝離皮膚（注意：可起初剪去尾椎尾端及泄殖腔2/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)周邊的皮膚，使剝離更簡單）。此后倒提蛙腿，使其頭部向下，用手術(shù)間橫向剪開腹部肌肉，看清脊神經(jīng)后，用粗剪刀剪斷脊柱（注意勿損害坐骨神經(jīng)）。把標(biāo)本浸泡于盛有任氏液的培育皿中。將手及用過的剪刀、鑷子等所有手術(shù)器材洗凈。個人采集整理勿做商業(yè)用途3、制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本（1）分別兩腿。用粗剪刀縱向剪開脊柱（尾扛骨留在一側(cè)）和與兩后肢相連的肌肉，再用粗剪刀剪開趾骨聯(lián)合（為保證雙側(cè)坐骨神經(jīng)圓滿，應(yīng)防備剪刀傾向一側(cè)）。將以分其余標(biāo)本浸入任氏液。個人采集整理勿做商業(yè)用途（2）游離坐骨神經(jīng)。取一條蛙腿，先用玻璃分針沿著脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)腹腔部，此后用固定針將標(biāo)本背位固定于干凈蠟盤上。用玻璃分針循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分別裸露坐骨神經(jīng)的大腿部分，直至分別腘窩脛神經(jīng)分叉處。此后剪斷二頭肌、半腱肌和半膜肌肌腱，并繞至前面剪斷股四頭肌腱。自上而下剪斷所有坐骨神經(jīng)分支，將連著3-4節(jié)椎骨的坐骨神經(jīng)分離出來。個人采集整理勿做商業(yè)用途（3）分別腓腸肌。用玻璃分針或鑷子分別腓腸肌與跟腱，并穿線結(jié)扎。在結(jié)扎遠(yuǎn)端用粗剪刀剪斷跟腱，左手執(zhí)線提起腓腸肌，用手術(shù)剪減去其四周聯(lián)系的組織，但保存腓腸肌初步點與骨的聯(lián)系，注意切勿損害支配該肌的神經(jīng)分支。個人采集整理勿做商業(yè)用途（4）達(dá)成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本。將已游離的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關(guān)節(jié)四周向上剪除并刮凈所有大腿肌肉，在距膝關(guān)節(jié)1cm處剪斷股骨。棄去上段股骨，保存部分即為坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本。將標(biāo)本放入盛有新鮮任氏液的培育皿待用。個人采集整理勿做商業(yè)用途3/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)（5）標(biāo)本活性查驗。用手術(shù)鑷輕輕提起標(biāo)本的脊柱骨片，再用經(jīng)任氏液潤濕的鋅銅弓刺激神經(jīng)。若腓腸肌快速發(fā)生縮短反響，表示標(biāo)本機(jī)能優(yōu)秀，制備成功。應(yīng)實時移至盛有任氏液的培育皿中待用。個人采集整理勿做商業(yè)用途【實驗結(jié)果】用鋅銅弓查驗標(biāo)本活性，腓腸肌快速發(fā)生縮短反響，標(biāo)本機(jī)能優(yōu)秀，制備成功。【討論】1、制備過程中必然要不停滴加任氏液以防備標(biāo)本干燥，不然標(biāo)本可能喪失正常生理活性。2、操作過程中應(yīng)防備強(qiáng)力牽拉、手捏神經(jīng)、夾傷神經(jīng)肌肉和用金屬器材觸碰坐骨神經(jīng)。3、所用器材要干凈，若接觸蛙皮膚需洗凈再用。4、蛙的皮下有淋巴囊，故皮膚很簡單剝落。為防備剝離皮膚時滑脫，可用紗布墊著手使勁一次剝下。【思慮題】1、制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本時應(yīng)注意些什么？答：①動作要柔和；②不要牽拉神經(jīng)、手捏神經(jīng)或夾傷神經(jīng)肌肉；③盡量防備金屬器材觸碰神經(jīng)；④不要把股骨所有剪掉，需要留一段固定標(biāo)本。個人采集整理勿做商業(yè)用途2、鋅銅弓為何可以檢測神經(jīng)肌肉的歡樂性？答：平常將金屬浸入電解質(zhì)溶液中，如Zn便溶解而成Zn離子。而在Zn的里面則形成負(fù)離子。Cu在溶液中則相反，金屬與溶液之間便產(chǎn)生了電位差，即電極電位。假如將Zn和Cu一端接觸，則在接觸部位電流由Cu向Zn方向4/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)流動；而在溶液中則相反，由Zn向Cu流動。當(dāng)鋅銅弓接觸組織時（注意：表面必然濕潤），電流便沿Zn→可歡樂組織→Cu方向流動，而產(chǎn)生流動作用。這樣，鋅銅弓憂如一個電池，Zn憂如其陽極，Cu憂如陰極而發(fā)揮作用。神經(jīng)或肌肉的電刺激閾值特別小，所以僅用鋅銅弓接觸，即可構(gòu)成刺激，以便查驗組織的機(jī)能活性。個人采集整理勿做商業(yè)用途3、剝皮后神經(jīng)肌肉標(biāo)本出現(xiàn)的血液能用自來水沖刷嗎？答：不可以。原由：①自來水的濃度遠(yuǎn)小于標(biāo)本的細(xì)胞液濃度，所以會以致標(biāo)本吸水，可能使得標(biāo)本吸水漲破；②自來水中可能含有一些金屬離子，如Ca2+，會使肌肉抽搐，可能使得標(biāo)本失掉生物活性。個人采集整理勿做商業(yè)用途實驗內(nèi)容二骨骼肌縮短的實驗（4-2,4-4）【實驗?zāi)康摹?、學(xué)習(xí)肌肉實驗的電刺激方法及肌肉縮短的記錄方法。2、察看刺激強(qiáng)度與肌肉縮短反響的關(guān)系3、用不一樣樣頻次的電刺激(最大刺激強(qiáng)度)作用于坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本，察看刺激頻次與縮短反響之間的關(guān)系，認(rèn)識復(fù)合縮短的形成過程。個人采集整理勿做商業(yè)用途【實驗原理】1、腓腸肌有好多肌纖維構(gòu)成。刺激腓腸肌時，不一樣樣的刺激強(qiáng)度會惹起肌肉的不一樣樣反響。當(dāng)刺激強(qiáng)度過小時，不會惹起肌肉發(fā)生縮短反響，此時的刺激為閾下刺激。當(dāng)所有肌纖維同時縮短時，則出現(xiàn)最大的縮短反響。這時，即便增大刺激強(qiáng)度，肌肉縮短的力量也不會再隨之加大。可以惹起肌肉發(fā)生最大縮短反應(yīng)的最小刺激強(qiáng)度為最適刺激強(qiáng)度。個人采集整理勿做商業(yè)用途2、不一樣樣頻次的電脈沖刺激神經(jīng)時，肌肉會產(chǎn)生不一樣樣的縮短反響。若刺激頻次5/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)較低，每次刺激的時間間隔超出肌肉單次縮短的連續(xù)時間，則肌肉的反響表現(xiàn)為一連串的單縮短；若刺激頻次漸漸增添，刺激間隔漸漸縮短，肌肉縮短的反應(yīng)可以交融，開始表現(xiàn)為不圓滿強(qiáng)直縮短，此后成為圓滿強(qiáng)直縮短。個人采集整理勿做商業(yè)用途【實驗器材】常用手術(shù)器材、計算機(jī)采集系統(tǒng)、JZ100型張力換能器（100g）、支架、一維位移微調(diào)器、肌槽、雙凹夾、固定針、鋅銅弓、蠟盤、培育皿、廢物缸、棉線、紗布、滴管、任氏液。個人采集整理勿做商業(yè)用途【實驗對象】蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本【實驗步驟】（一）刺激強(qiáng)度與骨骼肌縮短反響的關(guān)系1、制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本，置于任氏液中堅固5-15分鐘，以堅固其歡樂性，備用。2、固定標(biāo)本將坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本所帶的股骨斷端固定于肌槽的骨頭固定孔內(nèi)，腓腸肌肌腱上的扎線與張力換能器金屬彈性梁臂上相連，此后將標(biāo)本的坐骨神經(jīng)干搭在肌槽的電極上，電極接頭與刺激輸出線相接，見以下列圖。利用一維位移微調(diào)器調(diào)理扎線的張力，不可以過松或過緊，使肌肉自然拉平為宜，保證肌肉一旦縮短即可牽動張力換能器的金屬彈性梁。個人采集整理勿做商業(yè)用途3、實驗儀器連結(jié)及參數(shù)設(shè)置翻開計算機(jī)采集系統(tǒng)，連結(jié)各儀器，選擇實驗項目“刺激強(qiáng)度與反響的關(guān)6/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)系”。調(diào)理刺激延時至最小，波寬為1ms，選擇強(qiáng)度遞加的刺激方式進(jìn)行刺激。放大倍數(shù)一般設(shè)為10-20倍或敏捷度30g/div，濾波頻次為100Hz，掃描頻度1.0s/div（放大倍數(shù)、濾波頻次及掃描速度可依據(jù)實驗標(biāo)本不一樣樣詳細(xì)設(shè)置，延時設(shè)為最?。﹤€人采集整理勿做商業(yè)用途4、實驗察看（1）啟動刺激圖標(biāo)，察看肌肉縮短反響。假如肌肉無縮短反響，則適合增加刺激強(qiáng)度，其余刺激參數(shù)保持不變。間隔少量時間，重復(fù)進(jìn)行刺激，直到出現(xiàn)肌肉的最小縮短。丈量縮短幅度并記下刺激強(qiáng)度，此時的刺激強(qiáng)度位閾強(qiáng)度。個人采集整理勿做商業(yè)用途（2）漸漸增添刺激強(qiáng)度，察看刺激強(qiáng)度與肌肉縮短反響的關(guān)系。（3）當(dāng)刺激強(qiáng)度達(dá)到某一數(shù)值后，肌肉縮短幅度不再隨刺激強(qiáng)度的增添而高升。記錄此時的縮短刺激強(qiáng)度。（二）刺激頻次與骨骼肌縮短反響的關(guān)系1、實驗儀器用品的準(zhǔn)備同實驗內(nèi)容二（一）的準(zhǔn)備。2、翻開計算機(jī)采集系統(tǒng)，連結(jié)各儀器，選擇實驗項目“刺激頻次與反響的關(guān)系”。調(diào)理刺激的延時、波寬至最小，放大倍數(shù)一般設(shè)為10-20倍，濾波頻次為100Hz。個人采集整理勿做商業(yè)用途實驗察看強(qiáng)直縮短：用“連續(xù)刺激”方波刺激坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本，改變電刺激頻次，觀察不一樣樣頻次的閾上刺激惹起肌肉縮短形式的變化。刺激的波寬和電壓強(qiáng)度調(diào)到最適刺激強(qiáng)度，保持此參數(shù)不變，每次給刺激僅改變連續(xù)刺激方波的頻次。分別記錄不一樣樣頻次時的肌肉縮短曲線。察看不一樣樣刺激頻次時肌肉縮短形式的變化。7/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)個人采集整理勿做商業(yè)用途【實驗結(jié)果及結(jié)論】（一）刺激強(qiáng)度與骨骼肌縮短反響的關(guān)系結(jié)果：1、腓腸肌標(biāo)本刺激強(qiáng)度與骨骼肌縮短反響的關(guān)系如附：圖1所示。此中，閾刺激強(qiáng)度為0.035V，最適刺激強(qiáng)度為0.125V。最大反響的縮短幅度為17.33g。個人采集整理勿做商業(yè)用途2、將圖1中的峰值連結(jié)起來成為一條圓滑的曲線，大概形狀以以下列圖：17.330.0350.125結(jié)論：當(dāng)賞賜閾下刺激時，不可以惹起肌肉縮短反響；當(dāng)賞賜閾刺激時，惹起肌肉的最小縮短；當(dāng)賞賜的刺激強(qiáng)度由閾刺激至最適刺激漸漸增添時，肌肉的縮短反響隨之高升；當(dāng)賞賜的刺激強(qiáng)度達(dá)到最適刺激后，肌肉的縮短幅度不再隨刺激強(qiáng)度的增添而高升。（二）刺激頻次與骨骼肌縮短反響的關(guān)系結(jié)果：腓腸肌標(biāo)本刺激頻次與骨骼肌縮短反響的關(guān)系如附：圖2所示。此中，頻次<6.0Hz時，腓腸肌進(jìn)行單縮短，縮短幅度??；個人采集整理勿做商業(yè)用途8/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)7.0Hz<頻次<18.0Hz時，腓腸肌進(jìn)行不圓滿強(qiáng)直縮短，縮短幅度較單收縮大；頻次>19.0Hz時，腓腸肌進(jìn)行強(qiáng)直縮短，縮短幅度很大。結(jié)論：1、隨刺激頻次的增大，骨骼肌分別進(jìn)行單縮短、不圓滿強(qiáng)直縮短、強(qiáng)直縮短，后兩者是新的縮短過程與前一次還沒有結(jié)束的縮短過程發(fā)生綜合的結(jié)果。個人采集整理勿做商業(yè)用途2、單縮短、不圓滿強(qiáng)直縮短、強(qiáng)直縮短三者中強(qiáng)直縮短的縮短幅度最大，不圓滿強(qiáng)直縮短其次，單縮短再次，可以表示三種縮短所能發(fā)出的力量為強(qiáng)直收縮>不圓滿強(qiáng)直縮短>單縮短。個人采集整理勿做商業(yè)用途【討論】1、在“刺激強(qiáng)度與縮短反響的關(guān)系”實驗中，當(dāng)刺激強(qiáng)度達(dá)到最適刺激強(qiáng)度后，已經(jīng)惹起肌纖維同時縮短，所以再增大刺激強(qiáng)度，肌肉縮短幅度不再增大。個人采集整理勿做商業(yè)用途2、在察看“刺激頻次與反響的關(guān)系”時，每次肌肉縮短后應(yīng)讓肌肉歇息后再做下一次刺激，由于肌肉在連續(xù)受刺激后會產(chǎn)生肌肉疲備，這是由于肌肉內(nèi)部積蓄的能量有限的緣由。假如嚴(yán)禁歇息肌肉可能所以產(chǎn)生痙攣或失掉活性。個人采集整理勿做商業(yè)用途3、固定標(biāo)本時，懸線松緊應(yīng)適合，防備前負(fù)荷造成影響。4、在整個實驗過程中（包含標(biāo)本制作和實驗）應(yīng)不停的用任氏液濕潤標(biāo)本從而使標(biāo)本保持活性，防備標(biāo)本干燥而失火。個人采集整理勿做商業(yè)用途5、在不正式記錄時應(yīng)將電子刺激器輸出端斷開防備不用要的刺激。6、肌肉若出現(xiàn)痙攣，可能是漏電原由惹起的，也可能是空氣流動快惹起的，9/11個人采集整理僅供參照學(xué)習(xí)應(yīng)注意檢查電路、關(guān)窗。7、在附：圖2中，頻次為4.0Hz時的單縮短幅度要大于頻次為7.0Hz的不完全強(qiáng)直縮短，可能原由是賞賜的刺激強(qiáng)度過大。應(yīng)該將刺激強(qiáng)度調(diào)為最適刺激強(qiáng)度為好。個人采集整理勿做商業(yè)用途【思慮題】1、同一標(biāo)本的閾刺激強(qiáng)度與最適刺激強(qiáng)度能否會發(fā)生變化？為何？答：同一標(biāo)本的閾刺激強(qiáng)度和最適刺激強(qiáng)度會發(fā)生變化。由于跟著標(biāo)本離體時間的增添，它的歡樂性會發(fā)生變化，所以會發(fā)生變化。個人采集整理勿做商業(yè)用途2、連續(xù)電刺激神經(jīng)，為何簡單產(chǎn)生肌肉疲備？答：肌肉縮短的系統(tǒng)是肌纖維相對滑動,當(dāng)橫橋與細(xì)肌絲聯(lián)合時,橫橋履行ATP酶的功能,耗費ATP使肌絲間滑動,所以肌肉縮短是一個耗費能量的過程,而肌肉內(nèi)積蓄的ATP是有限的,所以長時間的縮短會使肌肉疲備。個人采集整理勿做商業(yè)用途3、分析討論肌肉發(fā)生縮短總和的條件與系統(tǒng)。答：條件：后一次刺激落入前一次刺激的縮短期內(nèi)。系統(tǒng)：若后一次刺激落入前一次刺激的絕對不該期內(nèi)，則不會有動作電位產(chǎn)生，所以不會產(chǎn)生二次縮短的任何反響，若后一次刺激落入前一刺激的相對不該期內(nèi)，會產(chǎn)生一次