血型抗體檢測與新生兒溶血病-呂先萍

血型抗體檢測

與新生兒溶血病鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呂先萍血型抗體分類抗人球蛋白試驗抗體篩查和鑒定定義血型抗體定義抗體(antibody)是機體在抗原物質(zhì)刺激下,經(jīng)過免疫應(yīng)答,由漿細胞產(chǎn)生的免疫球蛋白,具有與相應(yīng)抗原發(fā)生抗原、抗體反應(yīng)的能力.血型抗體包括IgM、IgG和IgA，其中IgA不多見，且常與IgG共存，故血型抗體主要是IgM和IgG。根據(jù)重鏈二硫鍵數(shù)目和位置，抗體還可分亞類，如IgG包括IgG1,IgG2,IgG3,IgG4四個亞類，不同亞類激活補體及通過胎盤能力不同，IgG2通過胎盤能力最差。血型抗體分類抗人球蛋白試驗抗體篩查和鑒定定義血型抗體分類按免疫球蛋白的特點

IgM IgG IgA分子量 950000 150000 18000056℃3h處理 活性減弱 不受影響 不受影響2-Me處理 降解 不受影響 部分降解固定補體 能 能 不能通過胎盤 不能 能 不能血型物質(zhì)的作用 易被中和 難被中和血型抗體分類

按抗體產(chǎn)生原因和條件天然抗體（naturalantibody）：也是機體對抗原免疫應(yīng)答的產(chǎn)物，只是沒有可覺察的抗原刺激，并非天然產(chǎn)生的抗體。主要存在于ABO,MN,P,Lewis。產(chǎn)生機制可能與環(huán)境中廣泛存在的菌類、花粉、塵埃等有關(guān)，這些物質(zhì)與某些抗原有共同成分，通過隱性刺激產(chǎn)生血型抗體。免疫抗體：有可查知的抗原刺激而產(chǎn)生，一般通過輸血、妊娠、注射3種方式引入抗原。血型不相容的輸血是很強的免疫刺激，輸入受血者體內(nèi)沒有的血型抗原，可能產(chǎn)生相應(yīng)抗體。血型抗體分類按抗體產(chǎn)生規(guī)律規(guī)則抗體：ABO系統(tǒng)產(chǎn)生抗A、抗B是有規(guī)律的，即A型人產(chǎn)生抗B，B型人產(chǎn)生抗A，O型人產(chǎn)生抗A和抗B，這是符合Landsteiner規(guī)則的，稱為規(guī)則抗體（regularantibody）。不規(guī)則抗體(irregularantibody)：除ABO系統(tǒng)外，其它系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體均無此規(guī)律，稱為不規(guī)則抗體或意外抗體，不規(guī)則抗體通稱意外抗體(unexpectedantibody)。血型抗體分類按在鹽水介質(zhì)中與相應(yīng)抗原是否凝集完全抗體(completeab)：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細胞，又稱鹽水抗體，多為IgM抗體。不完全抗體(incompleteab)：能使紅細胞致敏，但在鹽水中不能凝集紅細胞的抗體，多為IgG，通過抗球蛋白法或其它非鹽水介質(zhì)法檢測。血型抗體分類

按免疫球蛋白結(jié)構(gòu)差別同種型:種屬特異性標(biāo)志同種異型:個體特異性標(biāo)志個體基因型:機體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)血型抗體分類總結(jié)天然抗體規(guī)則抗體IgM抗體完全抗體鹽水抗體多為冷抗體同種抗體免疫抗體不規(guī)則抗體IgG抗體不完全抗體意外抗體多為溫抗體

自身抗體:包括冷抗體和溫抗體血型抗體的臨床意義并非所有血型抗體都有臨床意義。一般來說，在37℃不與紅細胞發(fā)生反應(yīng)的抗體無臨床意義。能夠引起紅細胞存活期縮短、新生兒溶血病、溶血反應(yīng)的抗體具有臨床意義。對于有臨床意義的抗體，輸血時應(yīng)選擇相應(yīng)抗原陰性的紅細胞。對于無臨床意義的抗體，輸血時選擇交叉配血相合的紅細胞即可。血型抗體分類抗人球蛋白試驗抗體篩查和鑒定定義抗人球蛋白試驗抗球蛋白試驗是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗?？骨虻鞍自囼灥慕⒃谘脱鍖W(xué)上有著非常重要的意義。分為直接抗球蛋白試驗（DAT）和間接抗球蛋白試驗（IAT）?？谷饲虻鞍自囼炘鞩gG類血型抗體（如Rh血型抗體）分子量小，與紅細胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，是一種不完全抗體，但在加入抗人球蛋白后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。補體成分在體內(nèi)被紅細胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細胞表面。在體外含補體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補體致敏的紅細胞反應(yīng)，產(chǎn)生的凝集或溶血也稱為抗球蛋白試驗。DAT陽性的意義正常人可出現(xiàn)DAT陽性，但沒有溶血表現(xiàn)。內(nèi)源性紅細胞被致敏近期輸過紅細胞近期輸過血漿母嬰血型不合藥物引起紅細胞致敏丙球蛋白過高直接抗人球蛋白試驗DAT是用來檢測體內(nèi)紅細胞致敏情況，尤其是IgG和C3d包被的紅細胞。用于：HDN和自身免疫溶血性貧血的診斷紅細胞被藥物抗體致敏的檢查遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查間接抗人球蛋白試驗用于測定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。用不完全抗體測定紅細胞血型，如Rh血型。交叉配血。注意事項每次試驗要設(shè)有陰性和陽性對照。陰性結(jié)果要加入一滴IgG致敏紅細胞實驗器材清潔。注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條件。嚴(yán)格按照實驗方法操作。排除自身抗體干擾。血型抗體分類抗人球蛋白試驗抗體篩查和鑒定定義抗體篩選和鑒定目的：篩查出能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細胞存活期縮短的免疫抗體.37℃有反應(yīng)的自身抗體?？笰，抗B以外的抗體。對血清中抗體檢測的要求選擇足夠敏感、高特異性的技術(shù)檢測出受檢者血清中低水平的有臨床意義的抗體。要注意即使受血者血清中的抗體對輸入的不相容紅細胞抗原呈弱反應(yīng)，也能夠發(fā)生快速回憶反應(yīng)，抗體迅速產(chǎn)生，破壞紅細胞。對試劑紅細胞的要求不能將多人份紅細胞混合，一定要用2-3人份的試劑紅細胞，以避免紅細胞混合后，對弱抗原紅細胞的稀釋。美國FDA對注冊和批準(zhǔn)作為商品供應(yīng)的用作不規(guī)則抗體篩檢的試劑紅細胞的要求為必須表達：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb?？贵w篩選方法鹽水凝集法抗人球蛋白法聚凝胺法微柱凝膠法LISS抗球蛋白法DCEce患者1患者21R1R1++00++-2R2R200++0-+3rr000++--結(jié)果的判讀和解釋溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。根據(jù)篩查細胞抗原譜推斷可能存在的抗體抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。抗體鑒定通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進一步作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。自身細胞檢查-排除非特異性譜紅細胞檢查抗體鑒定譜細胞：一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實驗?？贵w篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陰性，交叉配血相合見于臨床上絕大多數(shù)標(biāo)本。抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義的抗體.鹽水介質(zhì)試驗作配血可能漏檢有意義的IgG類抗體。只有用非鹽水介質(zhì)交叉配血，才能保證待輸?shù)难褪苷呦嗪??？贵w篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合ABO血型錯誤抗A1存在于A2或A2B，在直接鹽水交叉配血實驗中，抗A1能引起大部分A型紅細胞不相合。抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合獻血者紅細胞DAT陽性（約1/10000）患者抗體弱，獻血者紅細胞抗原性很強，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗陽性。針對低頻抗原的抗體，如Diego系統(tǒng)抗-Wra?？贵w篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陽性，交叉配血不合免疫抗體、自身抗體、緡錢狀凝集，應(yīng)在輸血前查明原因。必須進行包括抗人球蛋白試驗在內(nèi)的交叉配血。同種抗體的處理對策交叉配合相合與否取決于涉及抗原的頻率。鑒定抗體的特異性后，先用抗血清篩選相應(yīng)抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。用受血者血清還是試劑抗血清篩選血液，應(yīng)根據(jù)病人的血清反應(yīng)強度，能得到的受者血清量以及抗血清的來源和費用等決定。醫(yī)院庫存血中難以找到配合血時，求助血液中心。自身抗體冷自身抗體干擾血型鑒定、抗體篩選和鑒定以及交叉配血試驗，結(jié)果判讀困難。最常見的特異性是抗-I。溫反應(yīng)自身抗體很少引起ABO定型困難，但可引起Rh定型困難?？贵w篩查陽性DCEce患者1R1R1++00+-2R2R2+0++0+3rr000++-新生兒溶血病學(xué)習(xí)內(nèi)容血型相關(guān)知識定義發(fā)病機制分類臨床表現(xiàn)血清學(xué)檢查治療與預(yù)防血型相關(guān)知識

ABO血型遺傳規(guī)律母親血型父親血型嬰兒可能出現(xiàn)的血型O型A型A型O型B型B型O型O型O型AB型A型B型AB型

血型相關(guān)知識

ABO血型抗體

A型抗-B多為IgM抗體B型抗-A多為IgM抗體O型抗-A抗-B含有IgG抗體高AB型不含抗-A、抗-B

新生兒溶血病(HDN)基本概念

新生兒溶血病一般特指母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病(haemolyticdiseaseofthenewborn.簡稱HDN)新生兒期可由多種疾病引起溶血或黃疸遺傳性紅細胞膜異常感染所致紅細胞獲得性缺陷生理性黃疸新生兒溶血病(HDN)基本概念

胎兒從父親方繼承來的紅細胞抗原,恰為母親所缺乏時,是謂母子間血型不合.這種胎兒紅細胞對母親來說是一種異型抗原,當(dāng)它通過胎盤進入母體后,可以刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫抗體.這些抗體又可以通過胎盤進入胎兒體內(nèi),與胎兒紅細胞起反應(yīng),從而使胎兒紅細胞遭到破壞而出現(xiàn)新生兒黃疸、貧血、水腫、肝脾腫大、甚至死胎、新生兒死亡等。新生兒溶血病(HDN)的發(fā)病機制胎兒紅細胞對母體免疫系統(tǒng)的刺激正常情況下，母嬰的血液循環(huán)互相獨立。通過胎盤進行物質(zhì)交換。妊娠后期，胎盤局部破裂可出現(xiàn)出血現(xiàn)象，稱為經(jīng)胎盤出血。使母嬰之間出現(xiàn)少量紅細胞交換，胎兒紅細胞進入母體時，可刺激母體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。經(jīng)胎盤出血在妊娠后期較易出現(xiàn)，當(dāng)胎兒紅細胞進入母體內(nèi)超過0.05ml（0.1ml全血）時即可被檢驗出，當(dāng)母嬰ABO血型不合時，在母親體內(nèi)檢出的胎兒細胞數(shù)量會少于預(yù)期值。新生兒溶血病(HDN)的發(fā)病機制母體對胎兒抗體的轉(zhuǎn)移

IgG是唯一能通過胎盤的免疫球蛋白，它先與胎盤漿膜上的Fc受體結(jié)合，然后被動輸入胎兒體內(nèi)，盡管大部分母親的IgG抗體對新生兒是有益的，但如果母嬰血型不合，則相應(yīng)的IgG類血型特異性抗體在妊娠的大部分過程中和新生兒期間對胎兒和新生兒紅細胞能產(chǎn)生有害作用。新生兒溶血病(HDN)的發(fā)病機制能引起HDN的血型抗體凡是以IgG性質(zhì)出現(xiàn)的血型抗體理論上都可引起HDN．已知有20多個血型系統(tǒng)200余種血型抗原，以ABO血型系統(tǒng)最常見，其次為Ｒh系統(tǒng)，其他如Ｋell,Duffy,kidd等系統(tǒng)也有報道．ＡＢＯ新生兒溶血病臨床較多見,孕婦與胎兒發(fā)生ＡＢＯ血型不合妊娠率為20－25％，約10％發(fā)生新生兒溶血．母親為Ｏ型，子女為Ａ型、Ｂ型發(fā)病率高．可發(fā)生在第一胎，約占40－50％．臨床表現(xiàn)大多癥狀輕，黃疸多發(fā)生在生后2-5天．判定夫婦血型是否配合妻子血型丈夫配合血型丈夫不配合血型OOABABAOABABBOBAABABOABABRh(+)Rh(+)Rh(-)Rh(-)Rh(-)Rh(+)夫妻ABO血型不合，非Ｏ型妻子在妊娠期間體內(nèi)

IgG抗－Ａ，抗－Ｂ效價分布情況夫妻ABO血型不合,O型妻子在妊娠期間體內(nèi)

IgG抗－Ａ，抗－Ｂ效價分布情況

ＡＢＯ新生兒溶血病雖然ABO血型不合的機會多，但ABO新生兒溶血病發(fā)病率低，約占分娩數(shù)的0.7％．發(fā)病原因：與新生兒抗原強弱有關(guān)：抗原數(shù)量少，親和力低。與母體內(nèi)相應(yīng)IgG抗－Ａ，抗－Ｂ效價有關(guān)與IgG亞類有關(guān)，IgG1、IgG3效價和溶血嚴(yán)重性有線性關(guān)系．胎盤的屏障作用血型物質(zhì)含量Ｒh新生兒溶血病是由于母嬰Ｒh血型不合造成的，是母親的Rh免疫抗體作用于胎兒紅細胞造成的胎兒及嬰幼兒貧血和高膽紅素血癥。該系統(tǒng)主要包括D、C、c、E、e五種抗原，抗原性強弱依次為D＞E＞c＞C＞e。D抗原免疫性最強，Rh血型不合溶血病中，以D抗原不合最常見。Ｒh新生兒溶血病大部分HDN發(fā)生在母親是Rh陰性情況，抗體種類有抗D、抗cD、抗DE、抗CDE等。HDN也可以發(fā)生在Rh陽性母親D變異型母親也可產(chǎn)生抗DRh陰性母親懷有D變異性胎兒也可產(chǎn)生抗DＲh新生兒溶血病抗Ｄ引起ＨＤＮ發(fā)病重，60％以上都要換血治療Ｒh母嬰血型不合一般不影響第一胎，病死率第一胎小于２％，第二胎可達29％．孕產(chǎn)期免疫：產(chǎn)后6個月內(nèi)，有7%可測得抗體外祖母學(xué)說ABO不合對Ｒh免疫作用的影響孕婦血清IgG抗Ｄ抗體的滴定度ＨＤＮ的臨床癥狀水腫黃疸肝脾腫大貧血核黃疸ABO系HDN與Rh系HDN比較，無論是黃疸程度、貧血輕重、肝脾大小和核黃疸發(fā)生率都比較輕。由IgG抗體引起的新生兒溶血?。龋模蔚膶嶒炇覚z查產(chǎn)前檢查：夫婦雙方ＡＢＯ血型Ｒh血型抗體篩查抗體效價妻子Ｏ型丈夫Ａ型測妻子IgG抗Ａ效價

妻子Ｏ型丈夫Ｂ型測妻子IgG抗Ｂ效價

妻子Ｏ型丈夫ＡＢ型測妻子IgG抗Ａ，Ｂ效價ＨＤＮ的實驗室檢查注意：正常人血清中的抗Ａ（Ｂ）往往是IgＭ和IgG混合物，當(dāng)IgＭ抗Ａ（Ｂ）效價大于或等于IgG抗Ａ（Ｂ）時，IgG抗Ａ（Ｂ）被掩蓋，故必須去除IgＭ抗Ａ（Ｂ）．常用方法：２－ＭeＤＤＴ血型物質(zhì)ＨＤＮ的實驗室檢查抗體效價結(jié)果判定第一管是４倍稀釋IgG抗體比IgM抗體高2管才有意義產(chǎn)前查ABO以外抗體，ABO血型配合時，用丈夫紅細胞做抗體篩選．一經(jīng)檢出抗體，確定夫婦相應(yīng)Ｒh血型．測定抗體效價一般從20周開始．ABO血型不合Ａ型、Ｂ型丈夫測定抗體效價時用丈夫紅細胞，丈夫為AB型則用標(biāo)準(zhǔn)紅細胞檢測．ＡＢＯ溶血病的新生兒標(biāo)本

實驗室檢查直接抗球蛋白試驗血清游離抗體紅細胞釋放試驗血清膽紅素測定ＡＢＯ溶血病的新生兒實驗室檢查結(jié)果判讀ＡＢＯ新生兒溶血病游離、釋放試驗的陰、陽性結(jié)果判定（以Ａ型新生兒為例）新生兒血型Ａ型紅細胞Ｂ型紅細胞Ｏ型紅細胞結(jié)果Ａ型＋００陽性＋＋０陽性００＋陽性（有ＡＢＯ以外抗體）０＋０陰性ＡＢＯ溶血病的新生兒實驗室檢查結(jié)果判讀

通過直抗游離放散試驗確定ＡＢＯ新生兒溶血病（不包括Ｏ型陽性）直抗試驗游離試驗釋放試驗結(jié)論陰性陰性陰性不能證實陽性陰性陰性可疑陰性陽性陰性可疑陰性陰性陽性證實陽性陽性陰性證實陰性陽性陽性證實陽性陽性