膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中IGF2BP2的表達及臨床意義

膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中IGF2BP2的表達及臨床意義薛皓予;劉文慶;尚明華;王文斐;劉仲濤;田繼輝【摘要】目的探討胰島素樣生長因子2結(jié)合蛋白2(insulin-likegrowthfactor2bindingprotein2IGF2BP2)在腦膠質(zhì)瘤中的表達狀況.方法應用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測47例不同病理級別(9例Ⅱ級,21例Ⅲ級,17例Ⅳ級)膠質(zhì)瘤組織IGF2BP2表達情況,同時采用免疫組化法檢測47例腫瘤組織中IGF2BP2的表達情況.結(jié)果Ⅱ級膠質(zhì)瘤IGF2BP2蛋白陽性表達率陽性率(100％)明顯高于膠質(zhì)瘤Ⅲ級(52.38％)(P=0.013)和Ⅳ級(11.76％)(P=0.000)膠質(zhì)瘤Ⅲ級高于Ⅳ級(P=0.015);Ⅱ級膠質(zhì)瘤IGF2BP2的基因表達量(0.075±0.020)高于Ⅲ級(0.047±0.011)(P=0.016)和Ⅳ級膠質(zhì)瘤(0.026±0.004)(P=0.000),Ⅲ級膠質(zhì)瘤IGF2BP2的基因表達量高于Ⅳ級膠質(zhì)瘤(P=0.000)IGF2BP2IGF2BP2【期刊名稱】《寧夏醫(yī)科大學學報》【年(卷),期】2014(036)005【總頁數(shù)】4頁(P487-490)【關(guān)鍵詞】膠質(zhì)瘤;免疫組化;IGF2BP2;實時熒光定量PCR【作者】薛皓予;劉文慶;尚明華;王文斐;劉仲濤;田繼輝【作者單位】寧夏醫(yī)科大學,銀川750004;寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院神經(jīng)外科,銀川750004;寧夏醫(yī)科大學,銀川750004;寧夏醫(yī)科大學,銀川750004;寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院神經(jīng)外科,銀川750004;寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院神經(jīng)外科,銀川750004【正文語種】中文【中圖分類】R739.412mRNA-2(insulinlikegrowthfactors2bindingprotein2，IGF2BP2)是胰島素生長因子家族中的一員[1]IGFIGFBPsIGF2BP2PCRIGF2BP2IGF2BP2材料與方法20125201347272015～7546(WHO2000963211561710%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋。所有標本均經(jīng)病理科醫(yī)師確診為腦膠質(zhì)瘤。TrizolReagent(InvitrogencDNAsynthesiskit(FermentasSYBRGreen/ROXqPCRMasterMixPCRIGF2BP2Anti-IGF2BP2antiboby(Abcam)；FTC2000PCR(Bio-RAD)。RNA100mgTrizolReagentlmL；徹底勻漿后加入0.2mL氯仿,顛倒混勻；12000r·min-1離心，取上清，加入等體積異丙醇，顛倒混勻；12000r·min-1離心，棄上清，加入1mL75%乙醇洗滌RNA沉淀，12000r·min-1離心，棄上清；無酶ddH2O溶解RNA沉淀；紫外分光光度法檢測RNA含量和純度，瓊脂糖凝膠電泳分析RNA完整性。cDNARNA5μg，PCR0.5μLOligo(dT)引物，ddH2O12μL，充分混勻；70℃5min，冰浴冷卻；依次加入5×reactionbuffer4μL、Ribonucleaseinhibitor(20U·mL-1)1μLdNTPmix(10mmol·L-1)2μL，充分混勻并離心，37℃5minM-MuLVReverseTranscriptase(200U·mL-1)1μL；42℃60min70℃10min中止反應，冰上冷卻。-20℃cDNAPCRβ-actinIGF2BP2β-actin5.0-3'，反向：5'-CTCTGGATAAGAGTGATGAT-3'，產(chǎn)物大小153bp；β-actin正向：5'-TGACGTGGACATCCGCAAAG-35'-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3'，204bp。PCRPCR20μL：cDNA1μL，5×PCRbuffer4μL，Primers(25pmol·μL-1)0.5μL×2，SYBRGreenⅠ0.2μL，dNTPs(10mmol·L-1)1μL，Taq(5U·μL-10.2μL，Mg2+(25mmol·L-1)2μL，ddH2O11.1μLPCR：94℃4min；94℃30s、60℃30s、72℃30s30Ct基因表達指數(shù)測定本實驗技術(shù)使用表達恒定的管家基因(β-actin)作為內(nèi)參，來獲得IGF2BP2相對于β-actin的表達指數(shù)計算各組2-ΔCt值并統(tǒng)計。免疫組化0.12min，3%H2O21∶100IGF2BP2(Abcam公司)孵育，40.1%PBS3IgGPBSTE2000-eNikonIGF2BP25200IG2FBP21；200%；1<25%；2：25%～50%；3>50%。將兩者的乘積做為免疫組化半定量的評判標準：0分(-)、1～3分(+)、4～6分(++)、7～9分(+++)。統(tǒng)計學方法SPSS18.0PCR:Dunnetts，P≤0.05結(jié)果PCRIGF2BP2IGF2BP2IGF2BP22-ΔCt：Ⅱ級膠質(zhì)瘤(0.075±0.020)，Ⅲ級膠質(zhì)瘤(0.047±0.011)；Ⅳ級膠質(zhì)瘤(0.026±0.004)；經(jīng)單因素方差分析檢驗，不同病理級別膠質(zhì)瘤組織之間IGF2BP2基因表達量總體差異有統(tǒng)計學意義(P=0.006DunnettsIGF2BP2IGF2BP21膠質(zhì)瘤患者中的IGF2BP2的染色強度明顯高于Ⅲ級和Ⅳ級，Ⅲ級高于Ⅳ級,見圖1(4)；根據(jù)顯色強度和范圍進行評價得知，表達“+++”只見于Ⅱ級中；在Ⅲ級和Ⅳ級中表達范圍在“-～++”；10052.3811.761(P<0.05)。Ⅱ級膠質(zhì)IGF2BP2(P=0.013)和Ⅳ級(P=0.000)膠質(zhì)瘤；Ⅲ級強于Ⅳ級(P=0.0151。表1各級別膠質(zhì)瘤中IGF2BP2的陽性表達水平分級nIGF2BP2表達-++++++陽性率/%Ⅱ級 90144100.00Ⅲ級 211074052.38?Ⅳ級171511011.76??★與Ⅱ級比較*P<0.05，**P<0.01；與Ⅲ級比較★P<0.013討論近年來研究發(fā)現(xiàn)[4]在多種類型的腫瘤，如乳腺癌、肝癌、脂肪肉瘤和結(jié)腸癌中有IGF2IGFIGFBPsIGFBPsIGFsIGFIGF-R的相互作用[5]IGFBPsIGFBPsIGFRsIGFs[6]。IGF2BP2IMP2。IGF2BP22mRNA結(jié)合因子家族中的一員[7-8]。IMPIGF2IMPIGF2的翻譯，從而降低IGF2的水平。反過來IMP促進IGF2的翻譯，提高IGF2的水平。47IGF2BP2IGF2BP2～++”之間，特別是在IGF2BP2PCRIGF2BP2(0.075±0.020)的基因平均表達量明顯高于Ⅲ級膠質(zhì)瘤(0.047±0.011)和Ⅳ級膠質(zhì)瘤(0.026±0.004)，隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增高，IGF2BP2mRNAIGF2BP2IGF2BP2目前對于IGF2BP2的研究甚少，在近年許多臨床流行病學研究顯示IGF2BP2基因多態(tài)性與胰島β細胞功能受損、胰島素抵抗及糖代謝紊亂等有關(guān)，提示IGF2BP2可能參與了2型糖尿病的發(fā)病。雖然對于IGF2BP2在腫瘤中的研究甚少，但是IGFBPs中的很多成員已經(jīng)證實和腫瘤存在一定的相關(guān)性。有資料證明，IGFBP-4IGFBP-4抑制細胞IGFBP-4Y[9IGFBP7IGFBP7IGF2BP2性。本實驗結(jié)果可能提示在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤組織中的IGF2BP2抑制IGF2IGF2BP2IGF2BP2IGF2IGF2IGF2IGF2BP2惡性進展，而不依賴于與IGF2的結(jié)合。目前對于膠質(zhì)瘤尚缺乏準確的分子標記物，我們的研究為IGF2BP2成為未來可能的腫瘤標記物提供了一種可能，還可以為分子病理診斷提供一定的幫助，但其目前的作用機制尚不清楚，有待于進一步的研究。后期我們將增加樣本量及增加試驗方法，來進行進一步的驗證和探討?！鞠嚓P(guān)文獻】ChristoforidisA，ManiadakiI.StanhopeR2005Growthhormoneinsulin-likegrowthfactor-1axisduringpuberty[J].PediatrEndocrinolRev,2005，3:5-10.SasakiJ，KonishiF，KawamuraYJ，etal.Clinicopathologicalcharacteristicsofcolorectalcancerswithlossofimprintingofinsulin-likegrowthfactor2[J].IntJCancer，2006，119(1):80.OMalleyFP,ParkersR,LattaE,etal.ComparisonofHER2/neustatusassessedbyquantitativepolymerasechainreactionandimmunohistochemistry[J].AmJClinPathol,2001,115:504-511.VMMacaulay.Insulin-likeGrowthFactorsandcancer[J].BrJCancer,1992，65:311-320.AJemal，RSiegel，EWard，etal.Cancerstatistics[J].CACancerJClin,2008，58:71-96.DSachdev，DYee．TheIGFsystemandbreastcancer[J].Endocrine-RelatedCancer，2001，8:197-209.ZhangJY，ChanEK.AutoantibodiestoIGF-ⅡmRNAbindingproteinp62andoverexpressionofp62inhumanhepatocellularcarcinoma[J].AutoimmunRev，2002,1(3):146-153.LuM，NakamuraRM，DentED，etal.AberrantexpressionoffetalRNA-bindingproteinp62inlivercancerandlivercirrhosis[J].