專(zhuān)題3課題2月季的花藥培養(yǎng)

（一）被子植物的花一、基礎(chǔ)知識(shí)花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊1.花的結(jié)構(gòu)2、花的作用被子植物的有性生殖是在花里進(jìn)行的，雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖的主要部分(二)被子植物花粉粒的形成花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒1、雄蕊的結(jié)構(gòu)雄蕊2.被子植物的花粉發(fā)育小孢子母細(xì)胞（2n）（）時(shí)期（n）單核（）期（n）雙核期（）細(xì)胞核（n）（）細(xì)胞核（n）（）細(xì)胞（n）（）細(xì)胞（n）（）個(gè)精子(n)（）分裂（

）分裂單核（）期（n）（

）分裂1)被子植物的花粉是在

花藥

中由

花粉母細(xì)胞

經(jīng)過(guò)

減數(shù)分裂形成的。2)結(jié)合教材內(nèi)容填下列示意圖：減數(shù)小孢子四分體居中靠邊有絲生殖花粉管生殖營(yíng)養(yǎng)有絲2有絲分裂有絲分裂減數(shù)分裂1個(gè)花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子4個(gè)花粉管細(xì)胞核（營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞）4個(gè)生殖細(xì)胞（核）8個(gè)精子4個(gè)花粉粒同一個(gè)花粉粒中，精子和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的基因型相同。1、被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷哪些階段？小孢子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等。2、花粉發(fā)育過(guò)程中的四分體和減數(shù)分裂中的四分體相同嗎？不相同，花粉發(fā)育中的四分體是：花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂形成的4個(gè)連在一起的單倍體細(xì)胞（小孢子）。減數(shù)分裂中四分體：是聯(lián)會(huì)配對(duì)后的一對(duì)同源染色體（含有四條染色單體）思考與討論4、營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在花粉萌發(fā)過(guò)程中的作用是什么？

3、在正常情況下，一個(gè)基因型為AaBb的小孢子母細(xì)胞可以產(chǎn)生幾個(gè)幾種精子？8個(gè)2種思考與討論控制花粉的萌發(fā)并提供營(yíng)養(yǎng)。①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和兩個(gè)精子。③同一個(gè)花粉粒中，精子和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的基因型相同。一個(gè)成熟的花粉粒即為雄配子體，有兩種情況：1．產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）的兩種途徑：一是花粉通過(guò)

階段發(fā)育為植株，二是通過(guò)

階段發(fā)育為植株。這兩種途徑的區(qū)別主要取決于培養(yǎng)基中

的種類(lèi)及其

的配比。2．填寫(xiě)培育花粉植株的途徑圖解：3．胚狀體的結(jié)構(gòu)及其發(fā)育過(guò)程與種子相似，所以把胚狀體到叢芽的過(guò)程稱(chēng)為

，而把從愈傷組織到叢芽的過(guò)程稱(chēng)為

。（三）產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑（）花藥中的花粉（）（）胚狀體愈傷組織叢芽生根移栽胚狀體愈傷組織激素濃度脫分化再分化分化分化再分化（四）影響花藥培養(yǎng)的因素影響花藥培養(yǎng)的主要因素：

和

等。1．材料的選擇：（1）不同植物的誘導(dǎo)成功率不同；（2）同一植物的不同生理狀況：①?gòu)幕ㄋ巵?lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（初花期）的花藥；②從花粉來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（單核期）的花粉；③從花蕾來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（完全未開(kāi)放）的花蕾。材料的選擇培養(yǎng)基的組成1.為什么不選擇使用單核期之前或之后的花粉？

單核期之前，花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；單核期之后，花瓣開(kāi)始松動(dòng)，消毒困難。2.為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料消毒帶來(lái)困難？

外界環(huán)境中的微生物容易侵入到花藥中。思考2.培養(yǎng)基的組成培養(yǎng)不同的植物，所采用的花藥培養(yǎng)基不同：eg.小麥：N6培養(yǎng)基馬鈴薯、月季：MS培養(yǎng)基油菜：B5培養(yǎng)基3.植株生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等二、實(shí)驗(yàn)操作（一）材料的選取1．選擇花藥時(shí)一般通過(guò)

確定花粉發(fā)育時(shí)期，此時(shí)需要對(duì)花粉細(xì)胞核進(jìn)行染色，最常用的方法是

，某些不易著色的細(xì)胞核，可采用

，它們分別可以將細(xì)胞核染成

色和

色。2．在使用焙花青－鉻釩溶液時(shí)，需要首先將花藥用

處理20min。該試劑的配制方法是將

按體積比為

的比例混合均勻。鏡檢醋酸洋紅法焙花青－鉻釩法紅藍(lán)黑卡諾氏固定液無(wú)水酒精和冰醋酸3：1（二）材料的消毒

花蕾（70％

酒精）大約30s（無(wú)菌水）清洗（無(wú)菌吸水紙）吸干水分（1％氯化汞溶液）2～4min（無(wú)菌水）沖洗

月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比較，二者有何不同？

在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗；

酒精和氯化汞處理的時(shí)間稍長(zhǎng)些。思考（三）接種和培養(yǎng)1．剝?nèi)』ㄋ帲合竞蟮幕ɡ伲?/p>

條件下除去萼片、花瓣。剝?nèi)』ㄋ帟r(shí)，一是注意不要損傷花藥，原因是容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織；二是要徹底除去花絲，原因是花絲不利于愈傷組織或胚狀體的形成

2．接種花藥：剝?nèi)〉幕ㄋ幰⒖探臃N到

上。每個(gè)培養(yǎng)瓶接種

個(gè)花藥。3．培養(yǎng)：花藥培養(yǎng)利用的培養(yǎng)基是

培養(yǎng)基，pH為

，溫度為

℃，幼苗形成之前（需要、不需要）光照。4．培養(yǎng)20－30d后，花藥開(kāi)裂，長(zhǎng)出

或釋放出

。前者還要轉(zhuǎn)移到

上進(jìn)行分化培養(yǎng)成再生植株；后者要盡快

并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。5．通過(guò)愈傷組織形成的植株，常常會(huì)出現(xiàn)

的變化，因而需要鑒定和篩選。無(wú)菌培養(yǎng)基7-10MS5.825愈傷組織胚狀體分化培養(yǎng)基分開(kāi)染色體組數(shù)

為什么通過(guò)愈傷組織形成的花粉植株會(huì)發(fā)生染色體組數(shù)的變化？（1）有的是由花粉發(fā)育形成的單倍體花粉植株：有的是由花粉中的生殖細(xì)胞核和花粉管細(xì)胞核融合后發(fā)育形成的二倍體花粉植株。（2）有些是由花粉發(fā)育形成的單倍體花粉植株，有些是由花粉壁細(xì)胞發(fā)育形成的二倍體花藥壁植株。思考與討論植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)相同點(diǎn)：理論依據(jù)、基本過(guò)程、影響因素、操作流程等。不同點(diǎn)：1.生殖方式：組織培養(yǎng)為無(wú)性繁殖；花藥培養(yǎng)為有性繁殖。2.可育性：組織培養(yǎng)的植株可育；花藥培養(yǎng)的植株高度不育，秋水仙 素處理加倍后