第九章二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析

TianjinMedicalUniversity天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院《藥物分析》第

九章——二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析本章主要內(nèi)容

第一節(jié)二氫吡啶類結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第二節(jié)鑒別試驗第三節(jié)有關(guān)物質(zhì)的檢查第四節(jié)含量的分析學(xué)習(xí)要求一、掌握二氫吡啶類藥物的基本結(jié)構(gòu)及主要的理化性質(zhì)；結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分析方法間的關(guān)系；以及鈰量法測定該類藥物含量的原理、方法以及注意事項。二、熟悉二氫吡啶類藥物的化學(xué)鑒別反應(yīng)及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法。三、了解二氫吡啶類藥物其他的鑒別試驗及含量測定的方法。二氫吡啶是農(nóng)業(yè)部首次批準(zhǔn)在我國使用的獸藥類促生長添加劑，現(xiàn)列入農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中。二氫吡啶是一種具有天然抗氧化劑VE的某些作用的新型多功能添加劑，可抑制脂類化合物的過氧化過程，形成肝保護(hù)層；具有抗氧化作用。改變血清中的某些激素水平，促進(jìn)生長發(fā)育、增強免疫功能，而且其代謝完全、幾乎無殘留。二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物，也稱“鈣拮抗藥”（calciumchannelblocker）。L亞型鈣通道最重要。分布于心肌，血管平滑肌和其他組織。是細(xì)胞興奮時鈣內(nèi)流的重要途徑。二氫吡啶類鈣拮抗劑具有L亞型鈣通道的特殊選擇性，又稱為二氫吡啶類敏感鈣通道。心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高(鈣離子內(nèi)流或儲存鈣離子釋放),導(dǎo)致心肌收縮力增加，耗氧量增加。鈣拮抗劑使心肌細(xì)胞松弛，擴張血管，減少心肌作功量和耗氧量。解除痙攣，又減弱心肌收縮力，減慢心率，適用于各型心絞痛。還有抗心率失常作用和抗高血壓作用。依其結(jié)構(gòu)可以分成：

選擇性鈣離子通道阻滯劑：

二氫吡啶類(Dihydropyridines)

苯烷胺類(phenylalkylamines)

苯并硫氮雜卓類(benzothiozepines)非選擇性鈣離子通道阻滯劑：

氟桂利嗪類普尼拉明類二苯基哌嗪類(Diphenylpiperizines)吡啶的結(jié)構(gòu)：二氫吡啶類藥物的母核結(jié)構(gòu)：本類藥物均含有苯基-1,4二氫吡啶的母核.第一節(jié)二氫吡啶類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)第九章

二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析二氫吡啶類藥物的基本骨架：為活性必需，變成吡啶環(huán)或六氫吡啶環(huán)活性消失為活性必需，若為乙?；蚯杌钚越档停魹橄趸鶆t激活鈣通道鄰、間位有吸電子基團活性較佳，對位取代活性下降取代基與活性關(guān)系次序：H＜甲基＜環(huán)烷基＜苯基或取代苯基影響作用部位，5,6位取代酯基不同，為手性中心。二氫吡啶類藥物的特點口服經(jīng)胃腸道吸收完全，1-2h達(dá)到血藥濃度最大峰值有效時間持續(xù)長經(jīng)肝臟代謝對熱穩(wěn)定特異性高有很強的擴血管作用--在整體條件下不抑制心臟用于冠脈痙攣、高血壓、心肌梗塞等可與beta受體阻滯劑、強心苷合用

二氫吡啶類

DHP類是目前臨床上特異性最高，作用最強的一類鈣拮抗劑。第一代代表藥物硝苯地平(Nifedipine),松弛血管平滑肌和擴張血管的作用強，作用時間長，對L亞型鈣通道具有特殊選擇性。尤其適合冠脈痙攣所致心絞痛。硝苯地平（nifedipine)合成

鄰硝基苯甲酸，二分子乙酰乙酸甲酯，過量氨水，在甲醇中回流即可代謝：1脫氫二氫吡啶芳構(gòu)化。2酯鍵水解成羧酸（經(jīng)常水解一個）。3側(cè)鏈氧化成羥基。4形成內(nèi)酯。第二代DHP類產(chǎn)品有尼莫地平(Nimodipine)。在二氫吡啶環(huán)3，5二羧酸上形成不同的酯基，3位是甲氧乙基酯，5位是異丙酯，這一結(jié)果的改變使得C4忽然具有了手性。可選擇性作用于腦血管平滑肌，用于缺血性腦血管疾患。并且開辟了新型的鈣通道拮抗劑。尼群地平（nitrendipine)能降低心肌耗氧量，對缺血性心肌有保護(hù)作用。尼莫地平（nimodipine)擴張冠狀動脈作用更強大，且作用持續(xù)時間長，耐受性良好。有明顯的血管及腦血管擴張作用。尼索地平（nisoldipine)為當(dāng)前作用最強的鈣拮抗劑，能選擇性擴張冠狀動脈，降低心肌氧耗量，用于缺血性心臟病。非洛地平（Felodipine)拉西地平（Lacidipine)尼伐地平（Nilvadipine)伊拉地平（Isradipine)苯磺酸氨氯地平（Amlodipine

Besylate）起效慢，持續(xù)時間長，適用于心絞痛。二、主要理化性質(zhì)1.二氫吡啶環(huán)的還原性二氫吡啶環(huán)，具有還原性，可用氧化還原反應(yīng)鑒別和氧化還原滴定法進(jìn)行含量測定。2.硝基的氧化性苯環(huán)上大多有硝基，具有氧化性，可被還原劑還原為芳伯氨基，可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別。3.二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性二氫吡啶類藥物與堿作用后，二氫吡啶環(huán)1,4-位氫可以發(fā)生解離，形成共軛環(huán)發(fā)生顏色變化，可以進(jìn)行鑒別。4.穩(wěn)定性二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，因此要避光保存此類藥物。5.旋光性本類藥物的C4位多為手性碳原子，具有旋光性。6.吸收光譜特性本類藥物具有芳環(huán)，有明顯的紫外吸收特征和紅外特征。藥物溶劑濃度（μg/ml）λmax/λmin(nm)吸光度比值硝苯地平無水乙醇15237,320-335寬吸收尼群地平無水乙醇20236,353/303A353/A302=2.1-2.3尼莫地平乙醇10237尼索地平無水乙醇10237非洛地平乙醇20238,361第二節(jié)鑒別試驗一、化學(xué)鑒別法（一）與亞鐵鹽的反應(yīng)如尼莫地平（ChP2010）的鑒別：取本品20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亞鐵銨溶液2ml，1.5mol/L硫酸1滴與0.5mol/L氫氧化鉀溶液1ml，強烈振搖，1分鐘內(nèi)沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色。苯環(huán)硝基的氧化性，可將Fe(OH)2氧化成Fe(OH)3(紅色沉淀）（二）與NaOH試液反應(yīng)丙酮溶液+NaOH如：硝苯地平，尼群地平，尼索地平（ChP2010）橙紅色溶液藥物被堿水解后，水解后的苯基-1,4二氫吡啶基團溶于丙酮呈現(xiàn)橙紅色。ChP2010硝苯地平的鑒別：

取本品約25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氫氧化鈉溶液3～5滴，振搖，溶液顯橙紅色。（三）沉淀反應(yīng)本類藥物含有1,4-二氫吡啶結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類形成沉淀。

尼莫地平+HgCl2白色沉淀尼群地平+KBiI4橙紅色沉淀ChP2010尼莫地平注射液的鑒別：

取本品適量（約相當(dāng)于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振搖提取，靜置，分取乙醚層，置水浴上蒸干，放冷，殘渣加乙醇2ml，攪拌使溶解，移至試管中，加1%氯化汞溶液3ml，即發(fā)生白色沉淀。（四）重氮化-偶合反應(yīng)如硝苯地平（BP2010）的鑒別：取本品25mg,加10ml-水-乙醇混合溶液（1.5：3.5：5），溫?zé)幔尤脘\粒0.5g，放置5分鐘，濾過，濾液加亞硝酸鈉試液（10g/L）5ml,放置2分鐘，再加入氨基磺酸胺溶液（5g/L）2ml,搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml,即顯紅色。苯環(huán)硝基具有氧化性，在酸性條件下可被鋅粉還原成芳伯胺基，可用重氮化-偶合反應(yīng)進(jìn)行鑒別。二、分光光度法（一）紫外分光光度法：本類藥物具有芳香環(huán)，有強烈的紫外吸收。因此可用UV進(jìn)行鑒別。如尼群地平軟膠囊的鑒別：取本品的內(nèi)容物約1g，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋置刻度，搖勻，取10ml,置100量瓶中，用無水乙醇稀釋置刻度，在353nm與303nm的波長處分別測定吸光度，在353nm與303nm的吸光度比值應(yīng)為2.1-2.3。（二）紅外分光光度法如尼群地平片的紅外鑒別試驗三、色譜法：基于二氫吡啶類藥物具有不同的分子結(jié)構(gòu)，其色譜行為有所差別，可用于分離鑒別。（一）、HPLC尼群地平片的鑒別：供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致。（二）、TLC如硝苯地平的鑒別：對照品和供試品固定相：硅膠F254薄層板上流動相：乙酸乙酯-環(huán)己烷（40：60）

檢查：紫外光燈（254nm）下檢查。BP2010硝苯地平的鑒別：

取本品加甲醇制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝苯地平對照品適量，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠F254薄層板上，以乙酸乙酯-環(huán)己烷（40∶60）為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應(yīng)與對照品溶液的主斑點一致。第三節(jié)、有關(guān)物質(zhì)的檢查

二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)歧化作用，引入雜質(zhì)，因此各國藥典標(biāo)準(zhǔn)中均規(guī)定在避光條件下進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，大多采用HPLC法。第九章

二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析

硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產(chǎn)物：雜質(zhì)I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯雜質(zhì)II：2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯

具體方法（P259-260）1.供試液Ⅰ和Ⅱ的制備2.有關(guān)雜質(zhì)對照品液Ⅰ和Ⅱ的制備3.色譜條件填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠;流動相：甲醇-水（3：2）；檢測波長：235nm。結(jié)果：按外標(biāo)法以峰面積計算，均不得超過0.1%，其他單個雜質(zhì)的峰面積不得大于對照品溶液中硝苯地平峰面積，雜質(zhì)總量不得過0.5%。第四節(jié)、含量測定一、鈰量法二氫吡啶類藥物具有還原性，可用鈰量法測定該類藥物的含量。鈰量法簡介：也稱為硫酸鈰法，是以Ce(SO4)2為標(biāo)準(zhǔn)溶液的氧化還原滴定法。優(yōu)點：

①以Ce(SO4)2標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定，長時間放置、曝光、加熱不會引起濃度的變化。

②Ce4+還原為Ce3+是單電子轉(zhuǎn)移，不是生成中間價態(tài)，反應(yīng)簡單，副反應(yīng)少。

③大部分有機物不與Ce(SO4)2作用，不干擾測定。

④特別適用于糖漿劑以及片劑等制劑藥物的測定。

終點指示：①Ce4+為黃色，Ce3+為無色，Ce4+可自身作為指示劑，但不夠靈敏。②常用鄰二氮菲作為指示劑，即稍過量的Ce4+將指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈無色，以指示終點的到達(dá)。鄰二氮菲指示液：鄰二氮菲-Fe(II)指示劑：配置方法：將1.485g一水合鄰二氮菲和0.695gFeSO4·7H2O溶于100mL水中來配制。如硝苯地平的測定測定原理：可用下列反應(yīng)式表示：

終點時（鄰二氮菲-Fe(II)指示劑）:微過量的Ce4+將指示劑中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈無色，以指示終點的到達(dá)。如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用該法定量。（ChP2010）ChP2010硝苯地平的含量測定：取本品約0.4g（0.4053g），精密稱定，加無水乙醇50ml，微熱使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、鄰二氮菲指示液3滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定（實際濃度為0.1012M），至近終點時，在水浴中加熱至50℃左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，消耗滴定液23.37mL;并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正,消耗滴定液0.14mL。每1ml硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.32mg的C17H18N2O6。含量計算公式：二、紫外-可見分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊（10mg/粒）的含量測定：避光操作，取本品10粒置小燒杯中，用剪刀剪破嚢殼，加無水乙醇少量，振搖使溶解后，將內(nèi)容物與嚢殼全部轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，用無水乙醇反復(fù)沖洗剪刀及小燒杯，洗液并入錐形瓶中，將錐形瓶密塞，置40℃水浴中加熱15分鐘，并時時振搖，將內(nèi)容物移入100ml量瓶中，用無水乙醇反復(fù)沖洗嚢殼和錐形瓶，洗液并入量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在353nm的波長處測定吸光度0.632；另精密稱定尼群地平對照品10.04mg，置50mL量瓶中，流動相溶解并稀釋至刻度，精密量取1mL,流動相溶解并稀釋至10mL，(制成1ml中約含20μg的溶液)，同法測定吸光度為0.648，計算即得本品含量。三、高效液相色譜法ChP2010尼莫地平分散片（2mg/片）的含量測定：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水（35∶38∶27）為流動相；檢測波長為235nm。理論板數(shù)按尼莫地平峰計算不低于8000，尼莫地平峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。測定法：避光操作。取本品20片，精密稱定為3.9882g，研細(xì)，精密稱取1.0012g(約相當(dāng)于尼莫地平10mg)，置50ml量瓶中，加流動相適量，超聲處理15分鐘使尼莫地平溶解，放冷；用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心10分鐘(每分鐘3000轉(zhuǎn))，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，尼莫地平面積為794356；

另精密稱定尼莫地平對照品10.02mg，置50mL量瓶中，流動相溶解并稀釋至刻度，精密量取1mL,流動相溶解并稀釋至10mL，(制成1ml中約含20μg的溶液)，同法測定尼莫地平峰面積為816472。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。練習(xí)與思考題1.尼莫地平具有氧化性，與亞鐵鹽反應(yīng)，呈現(xiàn)的顏色變化是A.溶液變?yōu)榘咨獴.出現(xiàn)沉淀，沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色C.溶液顯橙紅色D.出現(xiàn)橙紅色沉淀E.無變化2.各國藥典規(guī)定對二氫吡啶類藥物中引入的雜質(zhì)檢查大多采用的方法是A.TLCB.紫外分光光度法C.比色法D.HPLCE.IR1.二氫吡啶類藥物的共同特征是均含有————的母核。2.二氫吡啶類藥物的苯環(huán)硝基具有———

性，在酸性下被鋅粉還原為—————，可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別。鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸(PABA