甾體激素類藥物的分析

甾體激素類藥物的分析基本要求1．掌握甾體結(jié)構(gòu)類藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系。2．掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3．掌握甾體類藥物的含量測定原理與方法。4．熟悉甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。2021/3/102基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲

概述

甾體激素類藥物的母核是由A、B、C、D四個(gè)環(huán)組成的。環(huán)上碳原子編號(hào)：1－17。D環(huán)：環(huán)戊烷結(jié)構(gòu)A、B、C環(huán)：全氫化菲（菲烷)菲

所以甾體激素類藥物的母核叫環(huán)戊烷駢多氫菲。2021/3/103分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素2021/3/104雌二醇

黃體酮

睪丸素

皮質(zhì)酮

2021/3/105

腎上腺皮質(zhì)激素天然的皮質(zhì)激素——?dú)浠傻乃?021/3/106腎上腺皮質(zhì)激素醋酸地塞米松2021/3/107腎上腺皮質(zhì)激素曲安息龍2021/3/108腎上腺皮質(zhì)激素地塞米松磷酸鈉2021/3/109雄性激素甲睪酮2021/3/1010雄性激素丙酸睪酮2021/3/1011蛋白同化激素苯丙酸諾龍2021/3/1012孕激素黃體酮2021/3/1013孕激素醋酸甲地孕酮2021/3/1014雌性激素雌二醇2021/3/1015雌性激素炔雌醇2021/3/1016炔諾酮此外2021/3/1017炔諾孕酮2021/3/1018一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

1.腎上腺皮質(zhì)激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑

反應(yīng)

C17

–

α–醇酮基還原性2021/3/1019

此反應(yīng)首先是N-H鍵斷裂和與羰基加成，然后再脫去一分子水生成肟或腙。2021/3/1020

醛、酮與2，4-二硝基苯肼作用生成的2，4-二硝基苯腙是黃色結(jié)晶，具有一定的熔點(diǎn)，反應(yīng)也很明顯，便于觀察，所以常被用來鑒別醛、酮。其它反應(yīng)的產(chǎn)物肟、腙大都也是具有一定熔點(diǎn)的晶體，亦可用來鑒別醛、酮。因此，把這些氨的衍生物稱為羰基試劑（即檢驗(yàn)羰基的試劑）。2021/3/10212.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17–

β–羥基可成酯2021/3/10223.孕激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–酮UV、與羰基試劑反應(yīng)C17–甲酮基與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)2021/3/10234.雌性激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)C17–乙炔基與AgNO3反應(yīng)C17–羥基可成酯2021/3/1024香2021/3/1025特臭特臭2021/3/1026二、鑒別試驗(yàn)（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)甾體激素類藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）2021/3/1027與硫酸顯色反應(yīng)

藥品名稱顯色熒光加水稀釋后

潑尼松龍深紅紅色消失灰色絮狀↓

潑尼松橙色黃→藍(lán)綠

炔雌醚橙紅黃綠

↓紅色炔雌醇橙紅黃綠絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄清帶橙色2021/3/1028(二)官能團(tuán)的反應(yīng)腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽OHˉ1、C17

–

α–醇酮基還原性呈色反應(yīng)此外還有與斐林試液、多倫試液的沉淀反應(yīng)2021/3/1029甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼2021/3/1030異煙腙（黃色）睪酮Forexample：2021/3/1031黃體酮異煙雙腙（黃色）2021/3/1032具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛3.甲酮基2021/3/1033黃體酮藍(lán)紫色亞硝基鐵氰化納其他甾體淡橙色不顯色2021/3/1034藍(lán)紫色2021/3/1035有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯Clˉ4.有機(jī)鹵素茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓

呈色2021/3/1036茜素氟藍(lán)藍(lán)紫色F-2021/3/1037雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基2021/3/1038含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基的沉淀反應(yīng)↓2021/3/1039炔雌醇白2021/3/1040

(三)制備衍生物測定m.p.鹽酸氨基脲4ml，30min苯丙酸諾龍50mg縮氨基脲衍生物縮氨基脲的生成m.p.約182℃甲醇2ml溶解水浴上濃縮，冷卻，濾過沉淀用甲醇洗，水洗，105℃干燥2021/3/1041△４-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu)（四）UV法1.結(jié)構(gòu)依據(jù)240nm左右280nm左右2021/3/10422021/3/10432.應(yīng)用示例曲安西龍丙酸倍氯米松

溶劑甲醇乙醇20μg/ml濃度20μg/ml結(jié)果判斷在238nm處有最大吸收在239nm處有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.25～2.452021/3/1044結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（五）IR法2021/3/10451505cm-1ν3505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)炔基伸縮振動(dòng)亞甲基、角甲基吸收帶2021/3/1046黃體酮結(jié)構(gòu)特征：△４-3-酮、C17-酮基2021/3/10471700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵2021/3/1048（七）TLC法

主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別

方法：對(duì)照品法要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。2021/3/10491、溶液的配制Forexample:

醋酸潑尼松片的鑒別

樣品液對(duì)照液2、色譜條件薄層板：硅膠G點(diǎn)樣：樣品液和對(duì)照液各5l展開劑：二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（385∶60∶15∶2）顯色劑：堿性四氮唑藍(lán)試液3、判斷樣品液主斑點(diǎn)的顏色及位置應(yīng)該與對(duì)照液主斑點(diǎn)相同。2021/3/1050Anotherexample:丙酸睪酮注射液的鑒別

取本品約相當(dāng)于丙酸睪酮10mg無水乙醇10ml強(qiáng)力振搖冰浴靜置分層，取上層離心，上清液作為供試品液另取丙酸睪酮對(duì)照品無水乙醇制備1mg/ml的對(duì)照溶液1、溶液的配制樣品液對(duì)照液2、色譜條件薄層板：硅膠GF254點(diǎn)樣：樣品液和對(duì)照液各10l展開劑：二氯甲烷-甲醇（19∶0.5）檢測：在254nm的紫外燈下檢視3、判斷：以Rf值定性。2021/3/1051（八）HPLC法：主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）

方法：對(duì)照品法要求在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。用“標(biāo)樣”的保留值定出被測組份的位置2021/3/1052三、特殊雜質(zhì)檢查（一）其他甾體的檢查1、定義：與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”2來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物3、特點(diǎn)：（1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似2021/3/1053檢查方法：

TLC法（高低濃度對(duì)比法）

HPLC法（類似高低濃度對(duì)比法）2021/3/1054（1）TLC法（高低濃度對(duì)比法）

判定方法：

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色2021/3/1055例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對(duì)照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）

60μg/ml層析：供試液點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。

對(duì)照液判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。2021/3/1056例：醋酸氟輕松中其他甾體的檢查

取本品加氯仿-甲醇（9：1）制成3.0mg/ml作為供試液，精密量取適量，加氯仿-甲醇（9：1）稀釋成0.06mg/ml作為對(duì)照液；照薄層色譜法，各取5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇（97:3）為展開劑，展開后晾干，在105℃干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于2個(gè)，其顏色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。2021/3/1057（2）HPLC法（主成分自身對(duì)照法）判定方法：

規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積2021/3/1058（二）硒的檢查來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫有毒方法藥物氧瓶燃燒二氨基萘比色法測定2021/3/1059（三）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉對(duì)照品比色法供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸磷鉬酸藍(lán)：740nm對(duì)照液：同上2021/3/1060RP－HPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）

甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾四、含量測定測定對(duì)象：甾體激素類藥物的原料和制劑。(一)、HPLC法USP、BP、JP均采用2021/3/1061示例：黃體酮的含量測定

色譜條件：固定相：ODS，流動(dòng)相甲醇-水（65:35），檢測波長254nm，內(nèi)標(biāo)物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：N>1000，R符合規(guī)定。2021/3/1062（二）UV法△４-3-酮

240nm（±）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥苯環(huán)

280nm（±）雌激素2021/3/1063示例：醋酸地塞米松片的含量測定（1）配制供試液

（2）測定240nm的吸光度

（3）按為357計(jì)算

醋酸地塞米松的紫外吸收光譜2021/3/1064

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于醋酸地塞米松7.5mg），置100ml量瓶中，加乙醇75ml，置50℃~60℃的水浴中保溫10min，時(shí)時(shí)振搖使溶解，放冷至室溫，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20ml，置另一100ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，在240nm的波長處測定吸收度，按C24H31FO6的吸收系數(shù)為357計(jì)算，即得。具體操作及計(jì)算：2021/3/1065腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理異煙腙（黃）酮基異煙肼-3CHCl（縮合）1.異煙肼比色法（三）比色法2021/3/1066異煙腙（黃色）2021/3/1067（2）方法對(duì)照品法55℃異煙肼?lián)]去乙醇對(duì)照液供試液A暗45min2021/3/1068（3）討論A.反應(yīng)專屬性：具有△4–3–酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量的與異煙肼反應(yīng)，本法對(duì)△4–3–酮基具有一定的專屬性。C3-酮基＞C20-酮基、C17-酮基

C11-酮基不反應(yīng)B.溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇2021/3/1069C.水分、溫度、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓溶劑不揮發(fā)、不吸收水分時(shí)→

O2與光線無影響D.酸的種類和濃度酸與異煙肼摩爾比2：1可獲得最大吸收值異煙肼0.00365mol/LHCl0.0074mol/LH2SO40.0037mol/L

醋酸4.4mol/L2021/3/1070

腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基（1）原理2.四氮唑比色法有色甲四氮唑鹽醇酮基-a-17COH-[還原]還原性2021/3/1071藍(lán)四氮唑（BT）氯化三苯四氮唑（TTC）2021/3/1072三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）2021/3/1073藍(lán)四氮唑（BT）雙甲瓚（暗藍(lán)）2021/3/1074（2）方法：對(duì)照品法25℃氫氧化四甲基銨對(duì)照液供試液ATTC40～45′暗2021/3/1075Forexample：醋酸潑尼松龍軟膏的含量測定對(duì)照液：精密稱取醋酸潑尼松龍對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加無水乙醇振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。供試液：精密稱取本品4g（約相當(dāng)于醋酸潑尼松龍20mg），置燒杯中，加無水乙醇約30ml，置水浴上加熱，充分?jǐn)嚢瑁勾姿釢娔崴升埲芙?，再置冰浴中冷卻，濾過，濾液置100ml量瓶中，同法提取三次，濾液并入量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2021/3/1076測定法：精密量取上述溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液2ml，搖勻，再各精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃暗處放置40～50分鐘，照分光光度法，在485nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。2021/3/1077（3）討論A.基團(tuán)對(duì)反應(yīng)速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯B.溶劑、水分的影響

含水量大時(shí)使呈色速度減慢，當(dāng)含水量不超過5%時(shí)，對(duì)結(jié)果幾無影響。故以無醛乙醇為溶劑。2021/3/1078D、堿的種類及加入順序：以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳，加入順序：堿試液四氮唑鹽皮質(zhì)激素溶液E.溫度與時(shí)間：25℃暗處反應(yīng)40-45min。C.O2與光線的影響：避光，隔絕空氣or充N22021/3/1079（1）原理λmax=465λmax=515雌激素3.Kober反應(yīng)比色法△△桃紅黃色雌激素2OH乙醇-42SOH2021/3/1080雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=5152021/3/1081練習(xí)與思考[A型題]1.醋酸地塞米松的鑒別方法是A.三氯化鐵反應(yīng)B.水解反應(yīng)C.柯柏反應(yīng)D.與堿性酒石酸銅試液反應(yīng)E.雙縮脲反應(yīng)2.丙酸睪酮《中國藥典》規(guī)定的含量測定方法為A.非水溶液滴定法B.溴酸鉀法C.HPLC法D.紫外分光法E.旋光法2021/3/1082112．甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應(yīng)的基團(tuán)

A.酚羥基

B.活潑次甲基

C.甲酮基

D.C17-α-醇酮基

E.酮基2021/3/1083

能與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)生成蘭紫色的藥物是

A．雌二醇

B．黃體酮

C．醋酸可的松

D．苯丙酸諾龍

E．以上都不對(duì)2021/3/1084113．異煙肼比色法測定甾體激素類藥物時(shí)，藥物的呈色基團(tuán)是

A.酮基

B.酚羥基

C.活潑次甲基

D.炔基

E.甾體母核2021/3/1085四氮唑比色法可用于下列哪個(gè)藥物的含量測定

A.可的松

B.睪丸素

C.雌二醇

D.炔雌醇

E.黃體酮2021/3/1086

用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時(shí)，其溶液的環(huán)境是：

A．強(qiáng)酸性

B．中性

C．強(qiáng)堿性

D．弱堿性

E．以上都不對(duì)2021/3/1087

可與重氮苯磺酸作用生成紅色偶氮染料的甾體激素類藥物是

A.醋酸可的松

B.睪酮

C.黃體酮

D.雌二醇

E.炔諾酮2021/3/1088

紅外吸收光譜圖中，羥基的伸縮振動(dòng)范圍約為：

A.3600-3300cm-1B.3300-3000cm-1

C.3000-2700cm-1D.2400-2100cm-1

E.1900-1650cm-12021/3/1089

紅外吸收光譜圖中，羰基的伸縮振動(dòng)波數(shù)為

A.3600-3300cm-1

B.3300-3000cm-1

C.3000-2700cm-1

D.2400-2100cm-1

E.1900-1650cm-12021/3/1090

用四氮唑比色法測定皮質(zhì)激素類藥物，是利用C17–α醇酮基的何種性質(zhì)

A．氧化性

B．還原性

C．可加成性

D．酸性

E．堿性2021/3/1091問題31～35A．維生素B1B．醋酸地塞米松

C．兩者皆是D．兩者皆不是

31.異煙肼比色法

32.硫色素反應(yīng)

33.紫外分光光度法

34.羥肟酸鐵反應(yīng)

35.綠奎寧（Thaciaquin）反應(yīng)BACDD2021/3/1092Kober反應(yīng)是

A.雌性激素與硫酸乙醇共熱呈色

B.皮質(zhì)激素與硫酸一乙醇共熱呈色

C.雌性激素與硫酸－乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后加熱顏色改變

D.維生素A與無水三氯化銻的無醇氯仿溶液呈色

E.異丙嗪于酸性條件下與鈀離子呈色2021/3/1093[B型題]A.亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)B.Vitali反應(yīng)

C.Kedde