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第2節(jié)動物細(xì)胞培養(yǎng)一
動物細(xì)胞培養(yǎng)從社會中來在治療大面積燒傷時,通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。但對這樣的病人來說,自體健康皮膚非常有限,使用他人皮膚來源又不足,而且會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。那么,怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚?能不能用自體皮膚的單個細(xì)胞培養(yǎng)出可供移植的皮膚?通過細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建的人造皮膚一
動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)1.動物細(xì)胞工程常用技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合和動物細(xì)胞核移植等。(1)常用技術(shù):(2)基礎(chǔ):動物細(xì)胞培養(yǎng)。2.動物細(xì)胞培養(yǎng)(1)概念:從動物體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細(xì)胞,然后在適宜的培養(yǎng)條件下,讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。(2)培養(yǎng)條件①營養(yǎng)屬于合成培養(yǎng)基將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基。需加入天然成分:血清。是液體培養(yǎng)基,即培養(yǎng)液②無菌、無毒的環(huán)境a.對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理。b.在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。c.培養(yǎng)液需定期更換,以清除代謝物,防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害。a.成分:糖類、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素等。b.類型:③溫度、pH和滲透壓a.溫度:以36.5℃±0.5℃為宜。b.pH:以pH為7.2~7.4為宜。c.適宜的滲透壓:④氣體環(huán)境O2作用:細(xì)胞代謝所必需的。CO2主要作用:維持培養(yǎng)液的pH。a.動物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。b.在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時,通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)皿培養(yǎng)瓶CO2培養(yǎng)箱維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能(3)原理:細(xì)胞增殖(有絲分裂)(4)培養(yǎng)過程①體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞類型懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖的細(xì)胞②過程動物組織塊用機(jī)械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理分散成單個細(xì)胞問題細(xì)胞分裂受阻懸浮生長貼壁生長原因原因細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累和營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制解決傳代培養(yǎng)制成細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)分瓶①原代培養(yǎng):指動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。②細(xì)胞貼壁:懸液中分散的細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上。③接觸抑制:當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時,細(xì)胞停止分裂增殖的現(xiàn)象。④傳代培養(yǎng):分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。單層貼壁的豬輸卵管上皮細(xì)胞貼附于某些基質(zhì)表面生長增殖的細(xì)胞思考·討論有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題1.幼齡動物的細(xì)胞與老齡動物的細(xì)胞比較,分化程度低的細(xì)胞與分化程度高的細(xì)胞比較,哪些細(xì)胞更易于培養(yǎng)?為什么?幼齡動物的細(xì)胞和分化程度低的細(xì)胞更易培養(yǎng),原因是這些細(xì)胞分裂能力強(qiáng)。2.動物細(xì)胞培養(yǎng)時,除了添加糖類、氨基酸等必要的營養(yǎng)成分外,往往還需添加血清等一些天然成分。為什么?人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)尚未全部研究清楚,血清等一些天然成分的營養(yǎng)成分比較齊全,可以彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足。3.進(jìn)行動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細(xì)胞,說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么?用胃蛋白酶可以嗎?為什么思考·討論蛋白質(zhì);不可以;多數(shù)動物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2~7.4,胃蛋白酶(適宜pH為1.5左右)在此環(huán)境中沒有活性,而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高,因此胰蛋白酶適用于細(xì)胞培養(yǎng)時的處理。有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題1.動物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)處理(1)使細(xì)胞分散開的原因:一是能保證細(xì)胞所需要的營養(yǎng)供應(yīng);二是能保證細(xì)胞內(nèi)有害代謝物的及時排出。(2)使用胰蛋白酶時,要控制好作用時間,因為胰蛋白酶不僅能分解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),長時間作用還會分解細(xì)胞膜蛋白等,對細(xì)胞造成損傷。進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時不能用胃蛋白酶分散細(xì)胞,主要是因為pH不合適。核心歸納(3)動物細(xì)胞的整個培養(yǎng)過程中可能多次用到胰蛋白酶或膠原蛋白酶,第一次使用的目的是使組織細(xì)胞分散開;貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)時使用的目的是使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來,分散成單個細(xì)胞,便于分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。(4)①懸浮生長細(xì)胞:原代培養(yǎng)→分裂受阻→離心法收集→制成細(xì)胞懸液傳代培養(yǎng)。②貼壁生長細(xì)胞:原代培養(yǎng)→分裂受阻→胰蛋白酶處理→離心法收集→制成細(xì)胞懸液傳代培養(yǎng)。核心歸納核心歸納2.植物組織培養(yǎng)與動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基過程外植體↓脫分化愈傷組織
↓再分化芽、根或胚狀體↓生長發(fā)育植物體動物的組織
↓機(jī)械法或酶細(xì)胞懸液↓原代培養(yǎng)↓細(xì)胞懸液↓傳代培養(yǎng)結(jié)果新的植株新的細(xì)胞培養(yǎng)基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、動物血清相同點(diǎn)①兩技術(shù)手段培養(yǎng)過程中都進(jìn)行有絲分裂,都不涉及減數(shù)分裂;②均需要無菌操作、無菌培養(yǎng),需要適宜的溫度、pH等條件二、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用1.干細(xì)胞的概念:
動物和人體內(nèi)仍保留的少數(shù)具有分裂和分化能力的細(xì)胞。在一定條件下,干細(xì)胞可以分化成其他類型的細(xì)胞。2.干細(xì)胞來源:早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。3.干細(xì)胞類型:胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞等。4.胚胎干細(xì)胞(簡稱ES細(xì)胞)電鏡下的胚胎干細(xì)胞(照片經(jīng)后期人工上色處理,放大約1500倍)(1)胚胎干細(xì)胞的分布:存在于早期胚胎中(3)應(yīng)用實例:具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞,并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個體的潛能。(2)特點(diǎn):ES細(xì)胞可在體外分化成心肌細(xì)胞、神經(jīng)元、造血干細(xì)胞等。(4)局限性:胚胎干細(xì)胞必須從胚胎中獲取,這涉及倫理問題,因而限制了它在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。5.成體干細(xì)胞(1)分布:成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞。(2)類型(3)特點(diǎn):具有組織特異性,只能分化成特定的細(xì)胞或組織,不具有發(fā)育成完整個體的能力。骨髓中的造血干細(xì)胞睪丸中的精原千細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)千細(xì)胞(4)作用:有著自我更新能力及分化潛能的干細(xì)胞,與組織、器官的發(fā)育、再生和修復(fù)等密切相關(guān)。(5)應(yīng)用①造血干細(xì)胞:治療白血病、一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病。②神經(jīng)干細(xì)胞:治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病(如帕金森病、阿爾茨海默病等)。6.誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(1)概念:通過體外誘導(dǎo)成纖維等細(xì)胞,獲得類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞,被稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(簡稱iPS細(xì)胞)。取成纖維細(xì)胞等轉(zhuǎn)入相關(guān)因子細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化神經(jīng)元iPS細(xì)胞血細(xì)胞胰島細(xì)胞移植分化腸上皮細(xì)胞肝細(xì)胞心肌細(xì)胞(2)應(yīng)用治療小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血;現(xiàn)在用iPS細(xì)胞治療阿爾茨海默病、心血管疾病等領(lǐng)域的研究也取得了新進(jìn)展。(3)優(yōu)點(diǎn):無需破壞胚胎;iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞,將它移植回病人體內(nèi)后,理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。本節(jié)知識網(wǎng)絡(luò)第2節(jié)動物細(xì)胞培養(yǎng)二、動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體一、動物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念:使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)。2.原理:細(xì)胞膜的流動性3.誘導(dǎo)融合的方法PEG融合法電融合法滅活病毒誘導(dǎo)法4.結(jié)果:形成雜交細(xì)胞。融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息。用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力,但不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)。5.意義:細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6.應(yīng)用(1)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制造單克隆抗體。動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性步驟酶解法制備原生質(zhì)體,誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合,形成雜種細(xì)胞,再經(jīng)植物組織培養(yǎng)形成雜種植株分散成單個細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合,形成雜交細(xì)胞方法聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法、電融合法、離心法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法結(jié)果形成雜種植株形成雜交細(xì)胞,以生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品意義打破生殖隔離,實現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種突破有性雜交的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能核心歸納二、單克隆抗體及其應(yīng)用1.傳統(tǒng)抗體的獲得(1)方法:向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原,使動物產(chǎn)生抗體,然后從動物血清中分離所需抗體。(2)缺陷:產(chǎn)量低、純度低、特異性差。(1)制備原理①B淋巴細(xì)胞特點(diǎn):一種B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體,B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖。②骨髓瘤細(xì)胞(癌細(xì)胞)特點(diǎn):能在體外大量增殖,但不能產(chǎn)生抗體。2.單克隆抗體的制備③雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn):B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞,既能大量增殖,又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生專一抗體骨髓瘤細(xì)胞(癌細(xì)胞)能在體外無限增殖一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體動物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞(2)制備過程用特定的抗原對小鼠進(jìn)行免疫,并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。注射特定的抗原培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞誘導(dǎo)融合將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選:在該培養(yǎng)基上,未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。對上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,經(jīng)多次篩選,就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞??贵w檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞(分泌的抗體能與特定抗原結(jié)合)雜交瘤細(xì)胞(既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生抗體)從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。單克隆抗體多種雜交細(xì)胞(2)制備過程注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng),或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。誘導(dǎo)融合的方法有哪些?注射抗原的目的是什么?大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法多種B淋巴細(xì)胞小鼠注射抗原骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基
篩選1多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體思考:兩次篩選的目的?抗原-抗體雜交法篩選2克隆化核心探討1.給小鼠注射特定抗原的目的是什么?目的是能從該小鼠的脾中得到可以產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。2.B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)融合后,培養(yǎng)基中共出現(xiàn)幾種細(xì)胞?其中融合的細(xì)胞有幾種?(如融合的話,只考慮兩兩融合),誘導(dǎo)方法有哪些?共有5種細(xì)胞;其中融合的細(xì)胞有3種。誘導(dǎo)的方法:電融合法、PEG融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法3.單克隆抗體制備過程中,第一次篩選的目的是什么?方法是什么?目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞;方法是用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。4.單克隆抗體制備過程中,第二次篩選的目的是什么?方法是什么?其原理是什么?目的是篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞;方法是抗體檢測;其原理是抗原—抗體的特異性結(jié)合。比較項目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種融合細(xì)胞,還有未融合的細(xì)胞等由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,所以經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選目的篩選出雜交瘤細(xì)胞篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選;未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長用96孔板培養(yǎng),在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細(xì)胞的情況下進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,經(jīng)多次篩選得到足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞單克隆抗體制備過程中兩次篩選的比較核心歸納思考·討論單克隆抗體的應(yīng)用細(xì)胞凋亡ADC的作用機(jī)制示意圖①ADC被細(xì)胞吞噬②⑤ADC抗體藥物接頭思考·討論(1)ADC的抗體和藥物各具有什么作用?(2)除了細(xì)胞毒素,還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物?抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用,即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原,將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞;藥物發(fā)揮治療效應(yīng),如殺傷靶細(xì)胞??梢杂梅派湫酝凰貥?biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療。一些作用于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細(xì)胞的信號通路來抑制其生長,理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療。思考·討論(1)ADC的抗體和藥物各具有什么作用?(2)除了細(xì)胞毒素,還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物?抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用,即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原,將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞;藥物發(fā)揮治療效應(yīng),如殺傷靶細(xì)胞。可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療。一些作用于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細(xì)胞的信號通路來抑制其生長,理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療。3.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)(1)能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異。(2)與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合。(3)可以大量制備。4.單克隆抗體的應(yīng)用(1)作為診斷試劑,如定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。(2)運(yùn)載藥物,如ADC。(3)治療疾病。資料:(1)細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑,其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。(2)免疫的B淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑,但它不能分裂增殖,其本身也不能在體外長期存活。(3)鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑,沒有S途徑,但它能不斷分裂增殖。如果它的D途徑被阻斷的話,它會因不能合成DNA而死。請根據(jù)上述資料提出篩選出雜交瘤細(xì)胞的方法?培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤。思考·討論第2節(jié)動物細(xì)胞培養(yǎng)三動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物從社會中來2017年11月27日和12月5日,克隆猴“中中”和“華華”先后在上海誕生。克隆猴的誕生,標(biāo)志著我國克隆技術(shù)走在了世界前列。靈長類動物是和人類最相似的實驗動物,對研究人類的生殖、發(fā)育和疾病等有著重要意義??寺游锷婕暗纳锛夹g(shù):體細(xì)胞核移植技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動物細(xì)胞融合技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)、胚胎移植技術(shù)等。其中核心技術(shù)是體細(xì)胞核移植技術(shù)。一、動物細(xì)胞核移植1.動物細(xì)胞核移植技術(shù)概念將動物一個細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中,使這個重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育為動物個體的技術(shù)。2.哺乳動物核移植分類種類難易程度原因胚胎細(xì)胞核移植相對容易分化程度低,全能性容易表現(xiàn)體細(xì)胞核移植十分困難分化程度高,全能性難表現(xiàn)將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞。二、體細(xì)胞核移植過程從屠宰場收集牛卵巢,采集卵母細(xì)胞(左邊照片為研究人員正在使用設(shè)備從牛的卵巢采集卵母細(xì)胞),在體外培養(yǎng)到MII期從供體高產(chǎn)奶牛身體的某一部位(如耳)上取體細(xì)胞,進(jìn)行培養(yǎng)高產(chǎn)奶牛(供體)通過顯微操作去核。通過電融合法使兩細(xì)胞融合,供體核進(jìn)入卵母細(xì)胞,形成重構(gòu)胚。用物理或化學(xué)方法(如電刺激、Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑等)激活重構(gòu)胚,使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛將胚胎移入受體(代孕)母牛體內(nèi)二、體細(xì)胞核移植過程細(xì)胞培養(yǎng)MII期去核細(xì)胞融合用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚取供體細(xì)胞采集卵母細(xì)胞供體細(xì)胞去核卵母細(xì)胞重構(gòu)胚將胚胎移入受體(代孕)母牛體內(nèi)生出與供體遺傳物質(zhì)基本相同的克隆動物將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞思考·討論有關(guān)體細(xì)胞核移植的問題1.在將體細(xì)胞的核移植到卵母細(xì)胞之前,為什么必須先對卵母細(xì)胞進(jìn)行去核操作?2.用上述體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的克隆動物,是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎?為什么?為了使核移植的胚胎或動物的核遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞。不是;克隆動物細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)來自供體動物,但細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)同時來自供體細(xì)胞和受體卵母細(xì)胞。此外,生物性狀還受環(huán)境因素的影響。思考·討論有關(guān)體細(xì)胞核移植的問題3.體細(xì)胞核移植技術(shù)與誘導(dǎo)iPS細(xì)胞相比,有什么相似或不同之處?請你預(yù)測它們應(yīng)用前景的差異。體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得的重構(gòu)胚和iPS細(xì)胞都具有發(fā)育的全能性;不同之處:體細(xì)胞核移植技術(shù)需對卵母細(xì)胞進(jìn)行去核操作,誘導(dǎo)iPS細(xì)胞需要借助載體將特定基因?qū)爰?xì)胞。前景:體細(xì)胞核移植技術(shù)主要應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)獲得克隆動物、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域治療人類疾病;iPS細(xì)胞除用于治療人類疾病外,也可用于對體細(xì)胞編程機(jī)理、細(xì)胞再生機(jī)理等的研究。1、原理:2、供體:3、受體:(1)選擇原因:動物細(xì)胞核的全能性有重要利用價值的動物的體細(xì)胞MⅡ期卵母細(xì)胞核心歸納動物細(xì)胞核移植①體積大,易操作;②MⅡ期卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有激發(fā)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。(2)卵母細(xì)胞去核:①去核對象:去核去的是紡錘體-染色體復(fù)合物②去核原因:保證克隆動物的核基因全部來自供體細(xì)胞③去核方法:常用使用顯微操作法;也可采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法去核或使其中的DNA變性3、將供體細(xì)胞整個注入去核卵母細(xì)胞中的原因:①對卵母細(xì)胞損傷較??;②保證供體細(xì)胞的細(xì)胞核不被破壞,操作方便。4、克隆動物
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