人類(lèi)疾病動(dòng)物模型

人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型

AnimalModelsRepresentingHumanDiseases第一頁(yè)，共83頁(yè)。第一節(jié)人類(lèi)疾病動(dòng)物模型的概述一、概念人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型(animalmodelsofhumandiseases)：指醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類(lèi)疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料借助動(dòng)物復(fù)制出類(lèi)似人類(lèi)的疾病及某些生命現(xiàn)象的模型進(jìn)展研究將研究結(jié)果推論到人類(lèi)，說(shuō)明生命的奧秘；認(rèn)識(shí)人類(lèi)疾病的發(fā)生和開(kāi)展規(guī)律，以有效防治之第二頁(yè)，共83頁(yè)。二、分類(lèi)(一)按產(chǎn)生原因分類(lèi)自發(fā)性、誘發(fā)性、抗疾病、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型1．自發(fā)性疾病動(dòng)物模型(spontaneousanimalmodels)：指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何有意的人工處理，在自然情況下動(dòng)物自然發(fā)生的疾病，或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過(guò)遺傳育種保存下來(lái)的動(dòng)物模型自發(fā)性疾病動(dòng)物模型以遺傳病和腫瘤居多例如:自發(fā)性高血壓大鼠，中國(guó)地鼠自發(fā)性真性糖尿病，裸鼠、小鼠和大鼠各種自發(fā)腫瘤，肥胖癥小鼠，腦中風(fēng)大鼠優(yōu)點(diǎn)：減少了人為因素，更接近自然的人類(lèi)疾病缺點(diǎn)：疾病種類(lèi)有限，飼養(yǎng)條件要求高，自然發(fā)病率低，發(fā)病周期長(zhǎng)，不可能大量應(yīng)用，如山羊家族性甲狀腺腫、牛免疫缺陷病毒(BIV)所致者第三頁(yè)，共83頁(yè)。2．誘發(fā)性疾病動(dòng)物模型(experimentalartificialorinducedanimalmodels)指使用物理、化學(xué)、生物等致病手段，人為地造成動(dòng)物組織、器官或全身形成類(lèi)似人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型，又稱(chēng)為實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型，即人工地誘發(fā)出特定的疾病，以供研究bacteria,viruses;carcinogenicchemicals,oncogenicviruses,rays優(yōu)點(diǎn)：可短期內(nèi)復(fù)制出大量的疾病動(dòng)物模型，能?chē)?yán)格控制各種條件，合適研究目的，醫(yī)學(xué)研究中常用缺點(diǎn)：其和自然產(chǎn)生的疾病模型在某些方面存在差異；有些人類(lèi)疾病不能用人工方法誘發(fā)出來(lái)第四頁(yè)，共83頁(yè)。(1)物理因素誘發(fā)動(dòng)物疾病模型指常見(jiàn)的物理因素(如機(jī)械損傷、放射線(xiàn)損傷、氣壓、手術(shù)等)，使用物理方法復(fù)制的動(dòng)物模型比較直觀、簡(jiǎn)便，常用外科手術(shù)→大鼠肺水腫,大鼠急性肝功能衰竭放射線(xiàn)損傷→萎縮性胃炎,大、小鼠和犬的放射病機(jī)械損傷→骨折

第五頁(yè)，共83頁(yè)。(2)化學(xué)因素誘發(fā)動(dòng)物疾病模型指化學(xué)因素如化學(xué)藥致癌、化學(xué)毒物中毒、強(qiáng)酸強(qiáng)堿燒傷、某種有機(jī)成分的增加或減少導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)性疾病等例如，用羥基乙胺復(fù)制大鼠急性十二指腸潰瘍、用D-氨基半乳糖復(fù)制大鼠肝硬化，用缺碘飼料復(fù)制大鼠缺碘性甲狀腺腫，用膽固醇鹽、甲基硫氧嘧啶及動(dòng)物油復(fù)制雞、兔、大鼠動(dòng)脈粥樣硬化癥劑量：不同品種的動(dòng)物對(duì)化學(xué)藥物耐受量不同性質(zhì)：某些化學(xué)藥物的活性代謝物易造成許多組織、器官損傷預(yù)實(shí)驗(yàn)第六頁(yè)，共83頁(yè)。(3)生物因素誘發(fā)動(dòng)物疾病模型主要用于傳染病、寄生蟲(chóng)病、微生物學(xué)和免疫學(xué)等模型復(fù)制生物因平素見(jiàn)細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)、生物毒素在人類(lèi)疾病中，由生物因素引起的人畜共患病(傳染性或非傳染性)占很大比例例如，以柯薩奇病毒(B組)復(fù)制小鼠、大鼠、豬等心肌炎；以福氏Ⅳ型痢疾桿菌或志賀桿菌復(fù)制猴的細(xì)菌性痢疾；以錐蟲(chóng)病原體感染小鼠，復(fù)制錐蟲(chóng)??；以鉤端螺旋體感染豚鼠，復(fù)制鉤端螺旋體所致肺出血?jiǎng)游锬Ｐ虲oxsachievirus為單股正鏈小RNA病毒

椎蟲(chóng)椎蟲(chóng)病鉤端螺旋體鉤體是唯一可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)的螺旋體恢復(fù)期并發(fā)癥之一:眼葡萄膜炎第七頁(yè)，共83頁(yè)。(4)復(fù)合因素誘發(fā)動(dòng)物疾病模型有些疾病模型必須使用多種因素誘導(dǎo)才能復(fù)制成功成模時(shí)間較長(zhǎng)，方法較繁瑣，但與人類(lèi)疾病比較相似如復(fù)制大鼠或豚鼠慢性支氣管炎動(dòng)物模型可使用細(xì)菌加寒冷，或香煙加寒冷，或細(xì)菌加SO2等方法以四氯化碳(40%棉子油溶液)、膽固醇、乙醇等復(fù)合因素復(fù)制大鼠肝硬化自發(fā)與誘發(fā)的疾病動(dòng)物模型有很多疾病可用不同的方式獲得一些自發(fā)性腫瘤模型，也可用各種致癌劑誘發(fā)，但發(fā)病機(jī)制和疾病的內(nèi)在特征各有特點(diǎn)，如自發(fā)性腫瘤和誘發(fā)性腫瘤對(duì)藥物的敏感性明顯不同第八頁(yè)，共83頁(yè)。3．抗疾病的動(dòng)物模型(negativeanimalmodels)指特定的疾病不會(huì)在某種動(dòng)物身上發(fā)生，可藉以討論為何這種動(dòng)物對(duì)該疾病有天然的抵抗力例如，哺乳動(dòng)物易感染血吸蟲(chóng)病，而洞庭湖流域的東方田鼠卻不感染血吸蟲(chóng)病，故可用于血吸蟲(chóng)感染和抗血吸蟲(chóng)病的研究

個(gè)兒大,跑得慢,喜甜味對(duì)良田莊稼危害大→滅鼠東方田鼠不感染血吸蟲(chóng)病血吸蟲(chóng)尾蚴40倍第九頁(yè)，共83頁(yè)。4.生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型(biomedicalanimalmodels)：指利用動(dòng)物生物學(xué)特性來(lái)提供人類(lèi)疾病相似表現(xiàn)的疾病模型例如，沙鼠缺乏完好的腦底動(dòng)脈環(huán)，左右大腦供血相對(duì)獨(dú)立，是研究中風(fēng)的理想動(dòng)物模型鹿的正常紅細(xì)胞是鐮刀形的，被用于鐮刀形紅細(xì)胞貧血研究但這類(lèi)動(dòng)物模型與人類(lèi)疾病存在著一定的差異第十頁(yè)，共83頁(yè)。(二)按系統(tǒng)范圍分類(lèi)1．疾病的根本病理過(guò)程動(dòng)物模型(animalmodelsoffundamentalpathologicprocessesofdiseases)：指各種疾病共同性的一些病理變化過(guò)程模型致病因素在一定條件下作用于動(dòng)物，使動(dòng)物組織、器官或全身造成一定病理?yè)p傷，出現(xiàn)功能、代謝和形態(tài)構(gòu)造的某些變化，其中有些變化是許多疾病都可能發(fā)生的、共有的，不是某種疾病所特有的，如發(fā)熱、缺氧、水腫、休克、彌漫性血管內(nèi)凝血、電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)等，稱(chēng)為疾病的根本病理過(guò)程第十一頁(yè)，共83頁(yè)。2．各系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型(animal

modelsofdifferentsystemdiseases)：指與人類(lèi)各系統(tǒng)疾病相應(yīng)的疾病動(dòng)物模型,可分為消化、呼吸、心血管、泌尿、神經(jīng)、血液與造血系統(tǒng)、內(nèi)分泌、骨骼等系統(tǒng)的動(dòng)物模型；也包括按科分類(lèi)，如傳染病、婦科病、兒科病、皮膚科病、五官科病、外科病、寄生蟲(chóng)病、地方病、維生素缺乏病，物理?yè)p傷疾病和職業(yè)病等動(dòng)物模型(三)按模型種類(lèi)分類(lèi)：包括整體動(dòng)物，離體器官和組織，細(xì)胞株，數(shù)學(xué)模型等疾病模型，也較常用第十二頁(yè)，共83頁(yè)。(四)按中醫(yī)藥體系分類(lèi)根據(jù)中醫(yī)證型分類(lèi)，可分為陰虛、陽(yáng)虛、氣虛、血虛、脾虛、腎虛、厥脫證動(dòng)物模型等按中藥理論分類(lèi)，解表藥、清熱藥、瀉下藥、祛風(fēng)濕藥、利水滲濕藥、溫里藥、止血藥、止咳藥、化痰藥、平喘藥、安神藥、平肝息風(fēng)藥、補(bǔ)益藥、理氣藥、活血化瘀藥等動(dòng)物模型中醫(yī)藥動(dòng)物模型，不管從證或從藥分類(lèi)，每個(gè)證的動(dòng)物模型不止一種動(dòng)物及一種方法由于中醫(yī)藥的特殊理論體系、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和觀察指標(biāo)，非常準(zhǔn)確的動(dòng)物模型并不多，有待改進(jìn)和完善第十三頁(yè)，共83頁(yè)。三、人類(lèi)疾病動(dòng)物模型的意義1.防止在人體進(jìn)展實(shí)驗(yàn)許多病如外傷、中毒或腫瘤等的研究不可能在人體進(jìn)展，但可在動(dòng)物身上進(jìn)展動(dòng)物可作為人類(lèi)的替難者2.簡(jiǎn)化研究周期很多病埋伏期長(zhǎng)、有的病程很長(zhǎng)，如高血壓、慢性支氣管炎、肺心病及腫瘤等許多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生命周期短，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)可進(jìn)展幾代甚至十幾代的觀察動(dòng)物模型可作為人類(lèi)疾病的“縮影〞第十四頁(yè)，共83頁(yè)。3．提供發(fā)病率較低的疾病材料有些疾病不易搜集，如放射病、烈性傳染病、遺傳病、腫瘤，但可隨時(shí)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上復(fù)制4．可嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料可比性人類(lèi)疾病很多，各種因素均起作用；同時(shí)患多種疾??；年齡、性別、體質(zhì)等對(duì)疾病的發(fā)生和開(kāi)展均有影響復(fù)制疾病模型應(yīng)選擇標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(同品系、同性別、年齡、體重等條件一樣)，可用單一的病因引起疾病第十五頁(yè)，共83頁(yè)。5.樣品搜集方便，結(jié)果容易分析動(dòng)物模型可看到全部過(guò)程，有始有終可按實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰S時(shí)搜集各種樣品6.有助于全面認(rèn)識(shí)疾病的本質(zhì)通過(guò)對(duì)人和畜進(jìn)展比較研究，可充分地認(rèn)識(shí)同一病原體在不同機(jī)體引起的損害，全面認(rèn)識(shí)該疾病的本質(zhì)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中動(dòng)物模型的最終目的是為了防治人類(lèi)疾病,對(duì)動(dòng)物模型應(yīng)有一個(gè)正確的評(píng)估第十六頁(yè)，共83頁(yè)。疾病動(dòng)物模型的結(jié)果可靠程度取決于模型與人類(lèi)疾病的相似性沒(méi)有一種動(dòng)物模型能完全復(fù)制出人類(lèi)疾病的所有表現(xiàn)，模型只是一種外延法的間接研究動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)結(jié)論的正確性是相對(duì)的，還須在人體得到驗(yàn)證一旦出現(xiàn)異于人類(lèi)疾病的情況，要隨時(shí)分析差異的程度和性質(zhì)，找出相平行的共同點(diǎn)，正確評(píng)估其價(jià)值第十七頁(yè)，共83頁(yè)。四、人類(lèi)疾病動(dòng)物模型的復(fù)制原那么1.盡可能重現(xiàn)所要求的人類(lèi)疾病的模型復(fù)制的動(dòng)物模型應(yīng)盡可能近似人類(lèi)相應(yīng)的疾病充分理解所用動(dòng)物模型的全部信息，如動(dòng)物的特性、誘發(fā)條件、疾病的表現(xiàn)和病變部位，分析是否能到達(dá)預(yù)期的結(jié)果如研究動(dòng)脈粥樣硬化，兔常用，易復(fù)制，但兔為食草動(dòng)物，膽固醇劑量要高，病變部位不在主動(dòng)脈弓，病理以纖維組織和平滑肌增生為主，與人發(fā)生的病變差異較大，豬卻是較理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物第十八頁(yè)，共83頁(yè)。2．選用有實(shí)用價(jià)值的、標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)合適大多數(shù)研究人員使用，易于復(fù)制，便于操作及采集標(biāo)本應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)條件對(duì)于慢性疾病模型，動(dòng)物須有較長(zhǎng)的生存期，以便長(zhǎng)期觀察，以免模型完成時(shí)動(dòng)物已瀕死或因并發(fā)癥死亡例如，研究慢性支氣管炎，普通級(jí)別的大、小鼠在開(kāi)放環(huán)境下飼養(yǎng)是不適宜的(因肺炎支原體感染率高達(dá)90%，與某些因子誘發(fā)的慢性支氣管炎的病變易混淆),這種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用SPF級(jí)大、小鼠，飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)內(nèi)3．經(jīng)濟(jì)易行多用小動(dòng)物如小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠等，同樣可復(fù)制出相似于人類(lèi)疾病的模型，其遺傳背景大多明確，質(zhì)量和規(guī)格可供選擇，且價(jià)廉易得，便于管理除非非常重要的研究，非用不可，一般不采用靈長(zhǎng)類(lèi)

第十九頁(yè)，共83頁(yè)。4．不能盲目使用近交系動(dòng)物近交系動(dòng)物遺傳背景清楚，反響均一，個(gè)體差異小，廣泛地用于復(fù)制疾病模型使用近交系時(shí)應(yīng)注意：①動(dòng)物形成亞系后，不應(yīng)再視為同一品系，要充分理解新品系的特征和背最材料②即使作為已形成模型的品系，由于不適當(dāng)?shù)挠N方法和環(huán)境改變，還可發(fā)生新的基因突變和遺傳漂變(geneticdrift)，即存在著變種甚至斷種的危險(xiǎn)③國(guó)外常用2種近交系交配成的雜交Fl代動(dòng)物作為模型

遺傳漂變:指當(dāng)一個(gè)族群中的生物個(gè)體的數(shù)量較少時(shí)，下一代的個(gè)體容易因?yàn)橛械膫€(gè)體沒(méi)有產(chǎn)生后代，或者有的等位基因沒(méi)有傳給后代，而和上一代有不同的等位基因頻率。一個(gè)等位基因可能〔在經(jīng)過(guò)一個(gè)以上的世代后〕因此在這個(gè)族群中消失，或固定成為唯一的等位基因。這種現(xiàn)象就叫“遺傳漂變〞C57bl/6mouseC57bl/6jmouse第二十頁(yè)，共83頁(yè)。第二節(jié)動(dòng)物模型在

人類(lèi)疾病研究中的應(yīng)用

一、腫瘤動(dòng)物模型研制抗癌藥物，常用大鼠和小鼠，也用豚鼠、倉(cāng)鼠、豬、兔、鳥(niǎo)，魚(yú)及靈長(zhǎng)類(lèi)等(一)自發(fā)性腫瘤模型(animalsmodelofspontaneoustumors)是一類(lèi)不經(jīng)人工處置而自然發(fā)生的腫瘤模型，其發(fā)病類(lèi)型、發(fā)病率與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系有關(guān)如C3H小鼠的乳腺癌發(fā)病率為97％，AKR系小鼠的自發(fā)性淋巴性白血病發(fā)病率雌性為76％～99％，雄性68％～90％優(yōu)點(diǎn)：腫瘤發(fā)生率更似于人類(lèi)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果易推廣于人，影響腫瘤發(fā)生、開(kāi)展的因素容易觀察缺乏：數(shù)量有限，發(fā)生時(shí)間上參差不齊，實(shí)驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，而所需動(dòng)物數(shù)量較多，消耗大C3H小鼠：1920年Strong將一只Baggalbino雌鼠和一只DBA雄鼠進(jìn)展雜交得到該品系A(chǔ)KR系小鼠：最早由洛克菲勒大學(xué)以隨機(jī)交配維持的動(dòng)物，1928-1936年Furth作為白血病易發(fā)群維持著。Rhoades將其兄妹交配了9代，之后Lynch進(jìn)展到21代C3H小鼠第二十一頁(yè)，共83頁(yè)。(二)誘發(fā)性腫瘤模型(animalmodelsofinducedtumors)是用化學(xué)致癌物質(zhì)、物理因子或生物因子來(lái)誘導(dǎo)例如,二苯芐芘誘發(fā)纖維肉瘤黃曲霉毒素B1及奶油黃可誘發(fā)大鼠肝癌N-甲基-N-硝基-亞硝基胍(MNNG)誘發(fā)大鼠胃癌二乙基硝胺(DEN)可誘發(fā)小鼠肺癌γ-射線(xiàn)及某些病毒對(duì)某種動(dòng)物誘發(fā)不同類(lèi)型腫瘤對(duì)病因?qū)W研究或藥物預(yù)防性研究，有獨(dú)特價(jià)值但誘癌過(guò)程通常很長(zhǎng)，個(gè)體埋伏期差異大，腫瘤細(xì)胞形態(tài)特征變化很大，有些可誘發(fā)多部位腫瘤，罕用于抗癌藥物挑選模型第二十二頁(yè)，共83頁(yè)。致癌劑體內(nèi)致癌特點(diǎn)1.芳香族或偶氮類(lèi)2.亞硝胺類(lèi)3.黃曲霉毒素B1①需長(zhǎng)期大量給藥①致癌性強(qiáng)，有時(shí)①毒性極強(qiáng)，只需②本身常為前致癌小劑量一次給藥亞硝胺劑量的幾十物，在體內(nèi)經(jīng)藥酶即可致癌分之一即可致癌活化才變成致癌物③種屬差異明顯，②對(duì)多種動(dòng)物，不同②能誘發(fā)多種不同致癌物對(duì)不同部位及器官均能致癌，動(dòng)物的腫瘤種屬動(dòng)物的致癌能甚至可通過(guò)胎盤(pán)力有明顯的不同，使子代致癌且在不同部位產(chǎn)生不同的腫瘤④致癌作用受營(yíng)養(yǎng)③一些亞硝胺類(lèi)③能誘發(fā)多種癌腫及激素等的影響化合物對(duì)器官有明顯的親和性第二十三頁(yè)，共83頁(yè)。(三)移植性腫瘤模型(animalmodeloftransplantationtumor)腫瘤細(xì)胞株/無(wú)細(xì)胞濾液→宿主動(dòng)物目前抗癌藥物研制中使用最多的一類(lèi)腫瘤模型，主要用于腫瘤藥物挑選和藥效學(xué)研究通常接種一定數(shù)量的腫瘤細(xì)胞(皮下、腹腔、靜脈、顱內(nèi)等)，甚至是無(wú)細(xì)胞濾液(病毒性腫瘤)，使動(dòng)物在幾乎一樣的時(shí)間內(nèi)患同樣的腫瘤，成功率近100％腫瘤形態(tài)、生長(zhǎng)率、對(duì)藥物的敏感性、死亡時(shí)間等非常相近移植性腫瘤模型作為藥物挑選的模型是非常適宜的全世界保種的瘤株有500種以上，其中約40種常用于挑選及藥效學(xué)試驗(yàn)多數(shù)是小鼠腫瘤，少數(shù)為大鼠或倉(cāng)鼠的腫瘤，較少用豚鼠、兔、貓、犬、豬、馬及靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的腫瘤接種第二十四頁(yè)，共83頁(yè)。挑選腫瘤時(shí)多用：小鼠白血病P388和L1210(宿主為DBA/2小鼠)Lewis肺癌及B16黑色素瘤(宿主為C57BL/6小鼠)結(jié)腸癌Colon26、Colon38(宿主為BALB/c小鼠)小鼠:Erlish腹水癌、肉瘤180(S180)、白血病L5l70Y、Friend白血病、腺癌755、Ridaway骨肉瘤、小鼠肝癌2HAC、肉瘤37、腦瘤22、小鼠宮頸癌、白血病615大鼠:腫瘤W256、吉田肉瘤這些腫瘤大多數(shù)生長(zhǎng)較快，倍增時(shí)間短，對(duì)抗癌藥物的敏感性較高DBA/2小鼠Balb/c小鼠Wistar大鼠SD大鼠第二十五頁(yè)，共83頁(yè)。(四)人體腫瘤的異種移植性腫瘤模型(animalmodelsoftransplantationhumantumors)應(yīng)用多種人體腫瘤模型進(jìn)展抗癌藥物的挑選，特別是疾病定向性挑選具有合理性，也是尋找抗實(shí)體瘤新藥的一個(gè)重要途徑早期人體腫瘤動(dòng)物異種移植模型，主要是利用動(dòng)物的一些免疫遲發(fā)的部位，如雞胚、動(dòng)物的眼前房、地鼠的頰囊等，但成活率較低、生長(zhǎng)緩慢、腫塊小、難以傳代第二十六頁(yè)，共83頁(yè)。1966年免疫缺陷性裸鼠可異種移植人體腫瘤瘤株在裸鼠體內(nèi)可以傳代，而且腫瘤細(xì)胞形態(tài)、染色體數(shù)量和同工酶程度等，仍保持不變，對(duì)臨床常用的抗癌藥物敏感性也大致相似1977年NIC提出將人的乳腺癌(MX-1)、結(jié)腸癌(CX-1)和肺癌(LX-1)作為體內(nèi)第二期挑選模型各類(lèi)人體腫瘤在裸鼠體內(nèi)異種移植模型仍在進(jìn)一步考核，為抗癌藥物尤其是對(duì)實(shí)體瘤敏感藥物的尋找，提供了更好的模型該類(lèi)模型挑選的結(jié)果與臨床相關(guān)性較其他腫瘤模型為好，可作為三期臨床的參考nudemice人乳腺癌MX-1人結(jié)腸癌裸鼠原位移植第二十七頁(yè)，共83頁(yè)。二、心血管系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

(一)高血脂和動(dòng)脈粥樣硬化模型

1．高膽固醇、高脂肪飼料喂養(yǎng)法目前常用的造成血脂紊亂，引起動(dòng)脈粥樣硬化的方法死亡率低，可長(zhǎng)期觀察，與臨床情況有較好的相關(guān)性飼料中添加蛋黃、豬油、膽酸等可促進(jìn)高脂血癥常用家兔、大鼠及鵪鶉；小鼠、雞、鴿、豬、犬及猴均可用quailrabbitrat第二十八頁(yè)，共83頁(yè)。(1)兔最早用于高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化模型，至今仍用兔對(duì)外源性膽固醇吸收率高達(dá)75%～95%，對(duì)高血脂去除才能低，致血中膽固醇很快升高，主動(dòng)脈斑塊生成率可達(dá)100%，動(dòng)脈粥樣硬化病變與人體相似，3個(gè)月即形成動(dòng)脈粥樣硬化模型但高脂飼料易使家兔內(nèi)臟脂質(zhì)沉著，抵抗力下降，易死亡。病變部位主要出如今心臟的小動(dòng)脈，而人主要在冠狀動(dòng)脈的大分支；兔為食草動(dòng)物，代謝與人迥異，實(shí)驗(yàn)及結(jié)果評(píng)價(jià)時(shí)要慎重第二十九頁(yè)，共83頁(yè)。(2)大鼠飼料中單純?cè)黾幽懝檀?，效果不佳；參加膽酸，可增加膽固醇的吸收；參加抗甲狀腺藥，病理模型較理想大鼠抵抗力較強(qiáng)，食性與人相似，飼養(yǎng)方便，應(yīng)用較廣，病理改變類(lèi)似人的早期病變，不易形成后期病變(3)鵪鶉普通飼料中參加膽固醇，通?？芍赂咧Y，且易發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，有時(shí)伴有鈣化及潰瘍，病變發(fā)生快，批間波動(dòng)小，常被應(yīng)用雞、鴿均類(lèi)似，但因品種不同，常有很大差異

第三十頁(yè)，共83頁(yè)。(4)豬豬是動(dòng)脈粥樣硬化比較理想的動(dòng)物模型某些品種的豬在喂高膽固醇、高脂肪的飼料后，能在較短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈及腦血管的粥樣硬化，與人類(lèi)疾病非常相似，假如設(shè)法損傷主動(dòng)脈或冠狀動(dòng)脈，那么動(dòng)脈粥樣硬化形成更快豬心血管的解剖和生理類(lèi)似于人，體形大，便于實(shí)驗(yàn)研究，是制備動(dòng)脈粥樣硬化較理想的動(dòng)物第三十一頁(yè)，共83頁(yè)。(5)猴猴的解剖、生理、血脂、動(dòng)脈粥樣硬化的部位及性質(zhì)、病癥及對(duì)藥品的療效等，均與人相似高脂飲食僅1～3個(gè)月，即可產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化，血中膽固醇高達(dá)～15.6mmoL/L，可伴發(fā)生心肌梗死，腦、腎動(dòng)脈亦產(chǎn)生病變

第三十二頁(yè)，共83頁(yè)。2．其他方法如免疫學(xué)方法、注射藥物法、乳幼大鼠法免疫學(xué)方法：通常給兔注射大鼠主動(dòng)脈勻漿，可引起血脂升高；假設(shè)注射牛血清那么可引起動(dòng)脈內(nèi)膜的損傷，如同時(shí)給予高膽固醇飼料，那么病變較明顯；給兔喂含1%膽固醇飼料，再靜注BSA，可加速動(dòng)脈內(nèi)膜的病變給兔靜脈注射兒茶酚胺類(lèi)藥物(如NA)或皮下注射半胱氨酸硫代內(nèi)酯皆可產(chǎn)生動(dòng)脈病變，類(lèi)似動(dòng)脈粥樣硬化未斷奶的大鼠因奶汁中脂肪含量較高，而甲狀腺功能不完全，血脂程度較高，可用此模型測(cè)試藥物的降脂效果，但該模型對(duì)甲狀腺素及其衍生物很敏感，對(duì)抑制膽固醇生物合成的藥物效果不佳半胱氨酸硫代內(nèi)酯：高同型半胱氨酸(Hcy)血癥是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其致病主要與同型半胱氨酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成同型半胱氨酸硫內(nèi)酯(HTL)有關(guān)，Hcy通過(guò)氧化作用引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、降低抗氧化物的程度、增加自由基依賴(lài)的血管平滑肌細(xì)胞數(shù)量和膠原增殖、引起/促進(jìn)低密度脂蛋白氧化及其功能、降低血管反響性、降低內(nèi)皮細(xì)胞的抗血栓形成才能；HTL通過(guò)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、損傷蛋白質(zhì)、與低及高密度脂蛋白結(jié)合、引起自身免疫反響，可從多方面引起動(dòng)脈粥樣硬化第三十三頁(yè)，共83頁(yè)。(二)高血壓動(dòng)物模型目前動(dòng)物高血壓模型多從不同角度(病因/病理過(guò)程)來(lái)模擬。常用大鼠、犬，貓、兔、猴1．自發(fā)性高血壓模型遺傳性高血壓模型有大鼠和兔，Okamoto等培育成功的SHR突變系大鼠是目前廣泛應(yīng)用的高血壓模型，可產(chǎn)生腦血栓、腦梗死、腦出血、腎硬化、心肌梗死、纖維化等?，F(xiàn)又培育出:SHRSresistant:抗腦出血和腦栓塞的自發(fā)性高血壓大鼠SHRSprone:出生后出現(xiàn)嚴(yán)重高血壓、腦出血和腦栓塞

SHR大鼠SHRSP大鼠卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠第三十四頁(yè)，共83頁(yè)。2．實(shí)驗(yàn)性高血壓模型電刺激大鼠及猴的中樞神經(jīng)系統(tǒng)或電刺激犬的喉上神經(jīng)或迷走神經(jīng)中樞端，造成反射性高血壓將兒茶酚胺或血管緊張素等注射給大鼠、貓、犬、兔，可引起急性血壓升高；注射前摘除雙腎，那么動(dòng)物對(duì)注射加壓藥物的敏感性大大進(jìn)步3．聽(tīng)源性高血壓模型采用大白鼠與家鼠雜交所生的大灰鼠，在噪聲刺激下，血壓普遍升高，與人的高血壓相似，可用于降壓藥的挑選。但造模時(shí)間較長(zhǎng)并需一定的設(shè)備、條件4．腎動(dòng)脈狹窄型高血壓模型常用大鼠、犬或家兔，手術(shù)使一側(cè)腎動(dòng)脈狹窄(一腎模型)或雙側(cè)腎動(dòng)脈狹窄(二腎模型)，均可產(chǎn)生持續(xù)性高血壓；假設(shè)采用腎門(mén)結(jié)扎型，也可造成高血壓模型第三十五頁(yè)，共83頁(yè)。(三)心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ妥畛Ｓ玫男募∪毖Ｐ蛣?dòng)物是犬，大鼠、家兔、貓、豬、豚鼠等亦常用犬的體重適中，手術(shù)較易，且抵抗力較強(qiáng)，不似兔在實(shí)驗(yàn)中易死亡；但犬的冠狀動(dòng)脈變異較大，側(cè)支吻合豐富，室間隔動(dòng)脈特別興隆，故在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈主干時(shí)，易死亡；而結(jié)扎側(cè)支那么不易成功，常需多處結(jié)扎豬的冠狀動(dòng)脈分布和構(gòu)造類(lèi)似于人，但目前應(yīng)用不多遺傳性高血壓大鼠(自發(fā)性高血壓大鼠,spontaneouslyhypertensiverats,SHR)是經(jīng)培育而獲得的一個(gè)大鼠突變系，自發(fā)性心肌梗死的發(fā)生率高，用于抗心肌缺血藥物的研究，廣為重視

第三十六頁(yè)，共83頁(yè)。心肌缺血性動(dòng)物模型，一般通過(guò)造成冠狀動(dòng)脈狹窄或堵塞，或輔以增加心臟負(fù)荷的方法包括電刺激、藥物法及冠狀動(dòng)脈阻塞法電刺激法：將電極埋入右側(cè)下丘腦背內(nèi)側(cè)核以強(qiáng)弱電刺激而造成心肌缺血，但目前新藥研究中較少用藥物造成的心肌缺血，方法較多，例如，用垂體后葉素給家兔靜脈推注或滴注可致心肌缺血；異丙基腎上腺素sc可使大鼠、豚鼠、兔、犬等產(chǎn)生心肌缺血，心電圖顯示S-T段降低等，每天反復(fù)尚可造成心肌缺血壞死，是評(píng)價(jià)抗心肌缺血藥物的常用模型冠狀動(dòng)脈堵塞法,最常用，選用犬、兔、豬等，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，均可造成心肌缺血壞死，用油質(zhì)或塑料微粒也可致冠狀動(dòng)脈發(fā)生阻塞。用一種遇水會(huì)膨脹的纖維環(huán)(Ameriod環(huán))，可在2～3周內(nèi)造成冠狀動(dòng)脈閉塞，該法目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用不多第三十七頁(yè)，共83頁(yè)。(四)心律失常動(dòng)物模型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性心律失常模型常用于挑選和考核抗心律失常藥物1.按心律失常引發(fā)部位分房性及竇性心律失常；刺激中樞造成交感或副交感神經(jīng)失調(diào)所致的中樞源性心律失常和直接作用于外周所致的心律失常2.按誘發(fā)因素藥物、電刺激誘發(fā)心律失常,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈引起心肌梗死所致心律失常常用動(dòng)物:小鼠、大鼠、豚鼠、兔、貓和犬等大鼠、豚鼠、兔和貓的心室顫抖可自行恢復(fù)犬一旦發(fā)生室顫，很難自行恢復(fù)，需用電除顫第三十八頁(yè)，共83頁(yè)。大鼠對(duì)強(qiáng)心苷不敏感，不宜用于哇巴因或地高辛造模豚鼠心率較低，心電圖波形及心臟對(duì)藥物的敏感性較接近于人，常用作整體或離體心律失常模型兔胸腔縱隔構(gòu)造特殊，可不用呼吸機(jī)行整體開(kāi)胸實(shí)驗(yàn)貓那么較宜于進(jìn)展中樞刺激誘發(fā)的心律失常(1)藥物誘發(fā)的心律失常動(dòng)物模型常用小鼠、大鼠、豚鼠、兔，亦可用犬氯仿可誘發(fā)小鼠心室顫抖，用Ach后再加氯仿那么可誘發(fā)心房顫抖或心房撲動(dòng)(可用于藥物挑選)，但氯仿對(duì)較大動(dòng)物常難誘發(fā)心律失常氯仿加用大劑量Adr能誘發(fā)兔室性心律失常Adr加速靜脈注射可誘發(fā)豚鼠和犬的室性心律失常第三十九頁(yè)，共83頁(yè)。強(qiáng)心苷中毒可出現(xiàn)多種類(lèi)型的心律失常，常用于誘發(fā)心律失常的藥物為哇巴因(毒毛花苷G),亦可用地高辛、毛花苷丙(西地蘭)等;動(dòng)物多用豚鼠，亦用犬，哇巴因頻繁給藥可觀察其誘發(fā)豚鼠心律失常所需劑量烏頭堿可致心律失常(直接興奮心肌、加速Na+內(nèi)流),利多卡因、胺碘酮等對(duì)該模型常有效。常用大鼠，亦用兔或犬。大鼠和家兔常用靜脈滴注或靜脈注射，在整體情況下觀察預(yù)防和治療效果，犬心臟部分用烏頭堿，部位不同而誘發(fā)不同的心律失常氯化鋇或氯化鈣可誘發(fā)大鼠心律失常；犬心房部分用Ach，也可誘發(fā)心律失常；腦室內(nèi)用某些藥物亦可引起心律失常藥物誘發(fā)動(dòng)物心律失常的發(fā)活力制與人體臨床相差較大，用單一模型評(píng)價(jià)藥物作用時(shí)須慎重第四十頁(yè)，共83頁(yè)。(2)電刺激引起的心律失常動(dòng)物模型電刺激中樞、外周神經(jīng)及心臟皆引發(fā)心律失常電刺激兔丘腦，可因交感神經(jīng)活動(dòng)亢進(jìn)而心律失常;而貓因交感和副交感神經(jīng)活動(dòng)均亢進(jìn)導(dǎo)致心律失常刺激星狀神經(jīng)節(jié)亦可引起心律失常心臟部分刺激，因部位及強(qiáng)度不同易產(chǎn)生不同的心律失常，其閾值可測(cè)，強(qiáng)度適宜時(shí)心律失常是可逆的該型心律失常更貼近自然的異位沖動(dòng)，為評(píng)價(jià)抗心律失常藥物的重要模型常用兔誘發(fā)心室顫抖，以其閾值為評(píng)價(jià)指標(biāo)；貓亦可用，但犬心室顫抖后需用電極除顫，損傷大，故少用第四十一頁(yè)，共83頁(yè)。(3)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎引起心肌梗死后心律失常動(dòng)物模型冠狀動(dòng)脈結(jié)扎引起心肌梗死后，可誘發(fā)心律失常，這與人心肌梗死后心律失常很相似，是重要?jiǎng)游锬Ｐ痛笫笤诮Y(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支后5min可產(chǎn)生室性心律失常，可持續(xù)30min至數(shù)小時(shí)，該模型手術(shù)簡(jiǎn)單，動(dòng)物小而易得，術(shù)后即刻產(chǎn)生心律失常，是挑選抗心律失常藥物的常用模型犬的冠狀動(dòng)脈左前降支中段至上1/3處結(jié)扎，術(shù)后20h～72h之間產(chǎn)生多源性室性心律失常，但不少犬因早期心室顫抖死亡;而應(yīng)用Harris兩步結(jié)扎，死亡率降低，室速成功率進(jìn)步，可在動(dòng)物清醒狀態(tài)下觀察經(jīng)心導(dǎo)管從冠狀竇注射塑料微球，阻塞冠狀動(dòng)脈，亦可造成心律失常第四十二頁(yè)，共83頁(yè)。(五)心力衰竭動(dòng)物模型常用犬、貓、豚鼠，也可用兔，一般不用大鼠，因大鼠對(duì)強(qiáng)心苷和PDEI的強(qiáng)心反響不敏感常用模型是用戊巴比妥鈉靜脈滴注給貓、犬或豚鼠，以LVdp/dtmax(左心室內(nèi)壓最大上升速率)作為心收縮力的指標(biāo)，觀察強(qiáng)心藥物的治療量、中毒量、致死量和治療寬度普萘洛爾、維拉帕米制備豚鼠等心力衰竭模型

第四十三頁(yè)，共83頁(yè)。三、呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

(一)肺水腫動(dòng)物模型(animalmodelsofpulmonaryedema)

肺水腫多數(shù)是由于肺毛細(xì)血管壁通透性增加或毛細(xì)血管內(nèi)壓升高所致常用化學(xué)物質(zhì)(如硝酸銀、氯化銨)注射或化學(xué)毒氣(如氯氣、雙光氣(diphosgene;perchlormethylformate,過(guò)氯甲酸甲酯;superpalite)吸入等方法雙光氣主要作用于呼吸器官，認(rèn)為是刺激呼吸道感受器，通過(guò)迷走神經(jīng)將沖動(dòng)傳入四疊體以下中樞，再通過(guò)交感神經(jīng)將沖動(dòng)傳至肺血管，使其通透性增高，而發(fā)生肺水腫氯化銨中毒性肺水腫，認(rèn)為是通過(guò)神經(jīng)系統(tǒng)選擇性地對(duì)肺毛細(xì)血管起作用，使毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加，而致肺水腫有些化學(xué)藥物和毒氣可直接作用于肺毛細(xì)血管，使其通透性增高，引起肺水腫

第四十四頁(yè)，共83頁(yè)。1．氯氣吸入小鼠體重25g左右，用1g重鉻酸鉀加5mL濃HCl，使瓶中生成薄薄一層云霧狀氣體后，將動(dòng)物投于瓶中，小鼠吸入氯氣而致肺水腫2.NO吸入犬18～23kg、兔2.5kg、大鼠200～300g、豚鼠400～500g，分別吸入含有1.35%(犬)、0.73%(兔)、0.8%～0.9%(大鼠)、0.9%～1.1%(豚鼠)濃度的NO即可發(fā)生肺水腫3．雙光氣吸入將12mg/L雙光氣滴在濾紙上，干后放入密閉容器內(nèi)，將小鼠置于容器內(nèi)15min，即可形成肺水腫，全部操作應(yīng)在通風(fēng)柜中進(jìn)展4．氯化銨中毒選擇大鼠、小鼠、豚鼠，分別ip氯化銨0.6mL/100g體重(大鼠)、0.15mL/10g體重(小鼠)和～0.7mL/kg(豚鼠)，使藥液濃度分別達(dá)6%、3%、6%，即可發(fā)生肺水腫5．生理鹽水注射安康家兔或犬，靜脈快速輸入大量生理鹽水，按每分鐘40mL/kg體重注入動(dòng)物全血量1～倍時(shí)即可發(fā)生肺水腫第四十五頁(yè)，共83頁(yè)。(二)肺炎動(dòng)物模型1.大腸桿菌動(dòng)物模型新西蘭白兔，將抽取大腸桿菌液的注射器經(jīng)皮膚插入環(huán)狀軟骨下的氣管內(nèi)，回抽見(jiàn)有大量氣泡后，抬高兔頭頸部，使菌液緩慢流入氣管下段及肺部。1/2～1h后出現(xiàn)噴嚏、喉鳴、拒食、聳毛、蜷縮、顫抖持續(xù)1～3h；5～6h體溫上升,12h體溫顯著升高,呼吸增快,不安，部分見(jiàn)紫紺2.肺炎克雷伯桿菌動(dòng)物模型Wistar大鼠，乙醚麻醉，垂直固定，顯露聲門(mén)，針頭插入氣管內(nèi)，注入細(xì)菌混懸液，保持垂直體位5min。動(dòng)物5～12h后，不活潑、納差、反響遲鈍、背部微弓，繼而四肢癱瘓，最后呼吸漸弱而死亡

第四十六頁(yè)，共83頁(yè)。3．肺炎支原體動(dòng)物模型金黃地鼠，ip苯巴比妥鈉麻醉，取肺炎支原體液鼻腔內(nèi)滴入4.仙臺(tái)病毒性肺炎動(dòng)物模型仙臺(tái)病毒雞胚傳代，保存于30℃，1個(gè)月內(nèi)使用。ICR小鼠從鼻腔內(nèi)滴入仙臺(tái)病毒液。第2天起小鼠出現(xiàn)聳毛、蜷縮、少食、少動(dòng)、呼吸急促、飲水增加、大便枯燥、體重減輕。10天左右漸漸恢復(fù)第四十七頁(yè)，共83頁(yè)。5.腺病毒性肺炎動(dòng)物模型新西蘭家兔，取頭高45°仰臥位。將7型人腺病毒液(Bristo株傳代，Hela細(xì)胞培養(yǎng)，TCID(tissuecultureinfectiousdose,組織培養(yǎng)感染性量)(l0-4～10-5)5ml/kg體重,分3次氣管內(nèi)注入，每次間隔15min。24h后耳緣靜脈注入0.9％NaCl10mL，10min后靜脈注射N(xiāo)A(200mg/L)1.5ml/kg體重,1ml/min，勻速推注，再滴入NA(60mg/L)20ml/kg體重，1h。靜注NA后，出現(xiàn)呼吸困難，肺部X射線(xiàn)片可見(jiàn)片狀陰影，病理:炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、淤血、水腫、出血和微循環(huán)障礙假設(shè)僅氣管注入腺病毒液，不注入NA，那么動(dòng)物呼吸平穩(wěn)，肺部X射線(xiàn)檢查正常，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集第四十八頁(yè)，共83頁(yè)。6．肺孢子蟲(chóng)肺炎動(dòng)物模型Wistar大鼠(120-150g)，觀察1周無(wú)異常后sc醋酸可的松，每次25mg，每周2次。同時(shí)在飲水中參加四環(huán)素(100mg/100mL)，以預(yù)防細(xì)菌感染，用藥7周可誘發(fā)大鼠肺孢子蟲(chóng)肺炎小鼠肺孢子蟲(chóng)肺炎模型，從第6周開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)精神萎靡、進(jìn)食減少、毛色灰暗、體毛松散并呈斑片狀脫落、呼吸急促第四十九頁(yè)，共83頁(yè)。(三)肺氣腫動(dòng)物模型(animalmodelsofpulmonaryemphysema)常用蛋白水解酶類(lèi)霧化吸入或氣管內(nèi)滴入1．霧化吸入法：家兔或大鼠，50mL2％豬胰彈性蛋白酶或5％木瓜蛋白酶，經(jīng)超聲霧化器霧化后(直徑5μm以下顆粒占90％以上，50mL約4h霧化完畢)經(jīng)管道送入自制霧化箱。經(jīng)霧化吸入箱的開(kāi)口處吸入酶的氣霧劑。每次吸入約4h(至酶液霧化完)，每周吸入1次，共2次。末次吸入后1個(gè)月，可作為肺氣腫動(dòng)物模型第五十頁(yè)，共83頁(yè)。2.氣管內(nèi)滴入法:大鼠，3％豬胰彈性蛋白酶或木瓜蛋白酶。ip戊巴比妥鈉(20mg/kg)及吸入乙醚麻醉。別離氣管，用4號(hào)細(xì)針穿刺兩軟骨環(huán)間，向氣管內(nèi)快速推注酶液(0.1ml/100g體重)，注畢拔出針頭，使大鼠保持直立位，左、右來(lái)盤(pán)旋轉(zhuǎn)1～2min，使酶液盡可能均勻地到達(dá)兩側(cè)肺的深部，滴注酶液后2個(gè)月可作為肺氣腫動(dòng)物模型。病理：肺泡隔數(shù)量明顯減少，所存肺泡隔變窄，部分肺泡隔斷裂、消失，假設(shè)干肺泡交融形成大圓囊，甚至肺泡管擴(kuò)張，作為肺氣腫的形態(tài)學(xué)診斷指標(biāo)目前多采用氣道內(nèi)直接注射蛋白酶類(lèi),復(fù)制肺氣腫動(dòng)物模型第五十一頁(yè)，共83頁(yè)。(四)肺結(jié)核動(dòng)物模型豚鼠(350～500

g)，分別于感染結(jié)核桿菌的前3周、6周，每鼠腹股溝皮下注射佛氏佐劑

0.1mL，在一個(gè)特制的空氣傳播裝置內(nèi)，通過(guò)結(jié)核菌霧化吸入呼吸道感染，懸液中含活結(jié)核菌應(yīng)達(dá)4×104／ml，該濃度可使每只豚鼠吸入5個(gè)活結(jié)核桿菌第五十二頁(yè)，共83頁(yè)。接觸致病菌2周期間，致病菌在接種與未接種卡介苗的豚鼠中以同樣的速度繁殖，然后繁殖減慢，首先見(jiàn)于接種過(guò)高效卡介苗的動(dòng)物，幾天以后見(jiàn)于接種過(guò)低效介苗的動(dòng)物，最后，未接種卡介苗動(dòng)物也見(jiàn)病菌繁殖減慢。感染24天后，將接種與未接種卡介苗的動(dòng)物處死，見(jiàn)原發(fā)病灶鄰近組織損傷將2～4個(gè)致病結(jié)核桿菌氣霧吸入，12～14周以后處死，未接種卡介苗的動(dòng)物肺內(nèi)有明顯空洞，而接種卡介苗的動(dòng)物卻沒(méi)有；吸入低度感染氣霧以后3周，未接種卡介苗的動(dòng)物中有相當(dāng)數(shù)量的結(jié)核桿菌進(jìn)入血液循環(huán)而且又回到肺，使每個(gè)肺葉中存活的結(jié)核桿菌超過(guò)100個(gè)病灶，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間血源播散導(dǎo)致結(jié)核桿菌繁殖，形成繼發(fā)病灶，而接種卡介苗的豚鼠明顯地減少和延緩了空氣傳播結(jié)核桿菌菌血癥期第五十三頁(yè)，共83頁(yè)?！参?鎮(zhèn)咳藥的挑選和藥效學(xué)試驗(yàn)豚鼠對(duì)化學(xué)和機(jī)械刺激都很敏感，刺激喉上神經(jīng)亦能引起咳嗽，且較廉價(jià)，易獲得，豚鼠是鎮(zhèn)咳藥的藥效學(xué)研究中最常用的模型動(dòng)物豚鼠的枸櫞酸法或丙烯酸引咳法以及豚鼠和貓的電刺激喉上神經(jīng)法皆是常用的藥效學(xué)模型大、小鼠亦常用于初篩，大、小鼠能被化學(xué)刺激誘發(fā)咳嗽，但咳嗽和噴嚏很難區(qū)別，而且變異很大小鼠的氨水或二氧化硫引咳法，常用鎮(zhèn)咳藥的初篩貓?jiān)谏項(xiàng)l件下很少咳嗽，但機(jī)械、化學(xué)刺激均可誘發(fā)咳嗽犬無(wú)論在清醒還是麻醉狀態(tài)下，均可引起咳嗽，且在反復(fù)刺激時(shí)變異少，可用于藥效學(xué)試驗(yàn)兔對(duì)化學(xué)刺激或電刺激均不敏感，且誘發(fā)噴嚏比咳嗽為多，故兔很少作為鎮(zhèn)咳藥的挑選模型第五十四頁(yè)，共83頁(yè)。四、消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

(一)膽管囊腫動(dòng)物模型采用綿羊或山羊(出生后14天內(nèi))

1．膽總管遠(yuǎn)端結(jié)扎術(shù)麻醉后手術(shù)顯露肝門(mén)部，在膽總管與近側(cè)小腸段匯接點(diǎn)的上方(一般距幽門(mén)4～5cm)，用絲線(xiàn)將膽總管全周縫扎，造成膽總管完全梗阻2．膽總管置管膽囊結(jié)扎術(shù)用1號(hào)絲線(xiàn)近肝總管處全周縫扎膽囊管，再將膽總管前壁縱行切開(kāi)，在膽總管內(nèi)置入一硅膠管，在硅膠管兩端約處，分別用絲線(xiàn)全周縫扎肝總管和膽總管，造成膽總管不全性梗阻。術(shù)后膽道造影或直接觀察見(jiàn)膽管節(jié)段性擴(kuò)張，寬度達(dá)鄰近膽管2～3倍以上，或直接見(jiàn)膽囊憩室，示造模成功第五十五頁(yè)，共83頁(yè)。(二)急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)動(dòng)物模型由于不能控制胰腺的病變程度，一些模型如食物誘導(dǎo)法、十二指腸閉袢法、總膽管結(jié)扎法或靜脈滴注大劑量鈴蟾肽(蛙皮素)法等，都不合適于評(píng)價(jià)藥物的最大治療效應(yīng)牛膽酸鈉誘導(dǎo)法、結(jié)扎胰管法，那么能制備出反映胰腺病變依次加重的急性胰腺炎模型，且穩(wěn)定、可靠第五十六頁(yè)，共83頁(yè)。1.牛膽酸鈉(sodiumtaurocholate，NaTc)誘導(dǎo)法選用Wistar大鼠(180～260g)，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水。麻醉剖腹后經(jīng)十二指腸用4號(hào)頭皮針頭，插入胰管開(kāi)口，向內(nèi)逆行注入NaTc溶液(0.1mL／100g)。％、2.0%NaTc誘導(dǎo)AP后12h出現(xiàn)輕、重度水腫型急性胰腺炎。％NaTc可誘導(dǎo)壞死型胰腺炎2.結(jié)扎胰管法成年雜種犬(10～15kg)，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水，于胰管開(kāi)口附近切開(kāi)十二指腸壁，置一細(xì)塑料管于胰管內(nèi)，然后向內(nèi)注入胰蛋白酶和犬自身膽汁混合液2～3mL(0.3mL／kg，lmL膽汁加4mL胰酶溶液，內(nèi)含4mg胰蛋白酶)，滯留5min后拔去塑料管，荷包縫合十二指腸壁,可誘發(fā)犬急性壞死型胰腺炎第五十七頁(yè)，共83頁(yè)。(三)慢性胰腺炎動(dòng)物模型成年雜種貓，隔夜禁食后，全麻，剖腹將尼龍導(dǎo)管插入主胰管，縫合固定后，燒灼閉合導(dǎo)管外露端，造成主胰管完全梗阻或先將一根尼龍導(dǎo)管插入主胰管內(nèi)，緩慢注入94％乙醇1.5mL，然后截下長(zhǎng)1cm導(dǎo)管留置在主胰管內(nèi)，最后用26號(hào)細(xì)針頭均勻點(diǎn)狀注射94％乙醇1.5mL于胰腺本質(zhì)內(nèi)6周后出現(xiàn)典型的慢性胰腺炎，26周后慢性胰腺炎的發(fā)生率為100%第五十八頁(yè)，共83頁(yè)。(四)胃黏膜潰瘍動(dòng)物模型1．應(yīng)激法用饑餓、刺激、寒冷等方法造成潰瘍，以水浸應(yīng)激法復(fù)制的胃潰瘍(大、小鼠)模型較穩(wěn)定2．燒灼法用電極或冰醋酸燒灼胃壁，可造成潰瘍，潰瘍部位由實(shí)驗(yàn)者自定，此模型為治療性給藥3．幽門(mén)結(jié)扎法大鼠較宜，小鼠和豚鼠亦可用，術(shù)后18h解剖，計(jì)數(shù)胃潰瘍面積或用Oabe法計(jì)算潰瘍指數(shù)4．乙醇胃黏膜損傷模型大鼠禁食48h，灌服無(wú)水乙醇，計(jì)數(shù)潰瘍發(fā)生情況5．藥物法大鼠或小鼠，注射組胺、皮質(zhì)激素、利血平、保泰松或水楊酸等，可致潰瘍復(fù)制潰瘍病模型時(shí)，需禁食禁食時(shí)間，各不一樣禁食不理想或同籠動(dòng)物由于在饑餓時(shí)咬毛、吃糞均可影響潰瘍程度第五十九頁(yè)，共83頁(yè)。(五)肝炎動(dòng)物模型除狨猴外，紅面獼猴、恒河猴、野生樹(shù)鼩及甲獺等均可形成一定程度的陽(yáng)性結(jié)果2.乙型肝炎動(dòng)物模型(1)HBV有嚴(yán)格的宿主選擇，除人外，目前僅在黑猩猩復(fù)制成功，也不能作為常規(guī)研究(2)鴨乙型肝炎模型鴨肝炎病毒在鴨體內(nèi)產(chǎn)生的病理過(guò)程和預(yù)后與人的乙型肝炎相似，目前多用鴨肝炎作為人乙型肝炎的模型，挑選藥物，但鴨屬禽類(lèi)，與哺乳類(lèi)動(dòng)物相距甚遠(yuǎn)美國(guó)把美洲早獺用作乙型肝炎的動(dòng)物模型，我國(guó)也從喜馬拉雅早獺成功地別離到類(lèi)人乙型肝炎病毒(3)現(xiàn)使用攜帶有HBV的肝癌細(xì)胞株(HepG22.2.15)在裸鼠身上傳代，HBV能在肝癌細(xì)胞中繼續(xù)繁殖，可作為抗乙型肝炎病毒藥物的挑選模型第六十頁(yè)，共83頁(yè)。3.丙型肝炎動(dòng)物模型(1)黑猩猩是公認(rèn)的HCV感染最理想的模型動(dòng)物，其在HCV的感染過(guò)程、致病機(jī)制和免疫應(yīng)答等與人類(lèi)相似，黑猩猩感染HCV后血清ALT升高，肝活檢顯示肝臟炎癥性病理變化，核苷酸類(lèi)似物和蛋白酶抑制劑結(jié)合應(yīng)用可降低黑猩猩體內(nèi)血清中HCV病毒載量并有效治愈黑猩猩的丙肝(2)樹(shù)鼩在進(jìn)化上與靈長(zhǎng)類(lèi)親緣關(guān)系最為接近,將HCVRNA陽(yáng)性患者血清接種成年樹(shù)鼩，34.8%樹(shù)鼩出現(xiàn)間歇性病毒血癥，在急性感染期有病毒血癥和細(xì)微炎癥表現(xiàn)，感染后的樹(shù)鼩血清可再感染新生樹(shù)鼩，2/4樹(shù)鼩感染２年后發(fā)生肝纖維化和肝硬化第六十一頁(yè)，共83頁(yè)。(3)小鼠自然狀態(tài)下不能感染HCV,一直以來(lái)致力于研究HCV不能進(jìn)入嚙齒類(lèi)動(dòng)物肝細(xì)胞并在其內(nèi)有效復(fù)制的原因,同時(shí)利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)和肝細(xì)胞移植等方法改造小鼠,使其可以感染HCV,目前有價(jià)值的HCV感染小鼠模型主要包括通過(guò)將人肝細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)建立的人鼠嵌合肝模型和表達(dá)人HCV受體基因的人源化轉(zhuǎn)基因小鼠模型(4)HCV感染大鼠，人鼠嵌合肝模型在大鼠孕期的第15-17天ipHuh7人肝癌細(xì)胞,此時(shí)胎鼠的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育,從而對(duì)人肝癌細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受,在胎鼠出生后24h內(nèi)將人Huh7肝癌細(xì)胞注射到大鼠體內(nèi),不僅不發(fā)生免疫排斥反響,而且可以在大鼠肝臟中發(fā)現(xiàn)人白蛋白，但血中HCV載量遠(yuǎn)低于人第六十二頁(yè)，共83頁(yè)?！擦?膽結(jié)石動(dòng)物模型1．食餌法選用敘利亞倉(cāng)鼠(60g)，喂以高糖、不含非飽和脂肪酸飼料，20天左右可形成結(jié)石2．感染法多用兔、犬或大鼠，無(wú)菌條件下暴露十二指腸，從十二指腸乳頭插管，注入蛔蟲(chóng)卵(3萬(wàn)～15萬(wàn)/mL)或大腸桿菌懸液，數(shù)月后，可形成結(jié)石3．狹窄法選用安康成年家兔，無(wú)菌手術(shù)，探明膽囊和膽道，用銀夾適當(dāng)?shù)貖A住膽囊頸部，產(chǎn)生梗阻，6個(gè)月后可形成膽囊結(jié)石4．切除迷走神經(jīng)干法常用犬、兔，麻醉，手術(shù)暴露兩側(cè)迷走神經(jīng)，從食管下端切除兩側(cè)的迷走神經(jīng)干，術(shù)后兔膽汁成清楚顯改變，4～5周形成膽固醇結(jié)石5．異物植入法安康成年兔或犬，手術(shù)暴露膽囊，在膽囊底部剪一小口，植入滅菌的蛔蟲(chóng)碎片，荷包縫合膽囊，2～3個(gè)月后可形成結(jié)石第六十三頁(yè)，共83頁(yè)。

五、泌尿系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型(一)腎小球腎炎動(dòng)物模型腎毒素性腎炎，給予異種抗腎血清血清病型，給予大量異種血清抗原抗體復(fù)合物型細(xì)菌抗原與腎組織抗原致病1．L型菌誘發(fā)安康白兔(2～2.5kg)，耳緣靜脈注入約1000萬(wàn)細(xì)菌2.靜脈注射抗基底膜血清加脂多糖取BALB／c小鼠腎皮質(zhì)碾成勻漿，再加4mL福氏完全佐劑，多點(diǎn)注射，滴度為1:8時(shí)取血清，小鼠尾靜脈注射，24h后注射脂多糖3．異種血清法在(♂)大鼠背部皮下多點(diǎn)注射(福氏完全佐劑和陽(yáng)離子化牛血清白蛋白)免疫，后ivBSA第六十四頁(yè)，共83頁(yè)。(二)急性腎功能衰竭動(dòng)物模型方法:注入油酸、NA、變性血紅蛋白；甘油、二氯化汞、硝酸鈾、腎動(dòng)脈夾閉等1.油酸法雄性Wistar大鼠，體重180～250g。0.15ml／kg油酸直接注入大鼠的左腎動(dòng)脈內(nèi)，油酸用植物油稀釋2．去甲腎上腺素法大鼠150-220g，用銀夾阻斷腎動(dòng)脈，直接向腎動(dòng)脈中注入NA，輔以im甘油3．變性血紅蛋白法實(shí)前禁水48-72h，由大鼠尾靜脈注入人的變性血紅蛋白。發(fā)生腎功能衰竭的大鼠表現(xiàn)為嘔吐、少尿及鼻、口、眼明顯出血，血鉀和尿素氮升高，與人的腎功能衰竭病癥相似，死亡率可達(dá)93.5％4．甘油法體重150-250g的大鼠。將動(dòng)物放在代謝籠中，飼喂含有嘌呤的飲食。用藥前禁水24h，選擇體重減輕和脫水的大鼠，以10ml／kg體重50％甘油溶液，分別在大鼠兩側(cè)后肢肌內(nèi)注射。多數(shù)動(dòng)物少尿或無(wú)尿，尿浸透濃度降低。甘油引起的血紅蛋白尿急性腎功能衰竭與人類(lèi)急性腎功能衰竭表現(xiàn)的病癥相似第六十五頁(yè)，共83頁(yè)。(三)泌尿系結(jié)石動(dòng)物模型一般用藥物誘發(fā)泌尿結(jié)石，用食餌法復(fù)制膀胱結(jié)石1．藥物誘發(fā)泌尿系結(jié)石動(dòng)物模型(1)乙二酰胺飼喂法SD大鼠，體重220-240g，飼喂l.2％乙二酰胺鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料3天以上，100％的大鼠造成泌尿系結(jié)石；4個(gè)月齡新西蘭兔，體重2.0-2.3kg飼喂1％乙二酰胺兔標(biāo)準(zhǔn)飼料20天，100％復(fù)制成腎結(jié)石。輸尿管結(jié)石常發(fā)部位在入膀胱口處，有的中部和上部呈栓塞樣結(jié)石(2)TPA和DMT飼喂法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用F344近交系大鼠。將研磨好的對(duì)苯二酸(TPA)拌入食物制成含3%～5％的飼料或二甲基對(duì)苯二酸(DMT)拌入食物制成含1％～3％的飼料，分別飼喂14-28天。飼喂14天后可誘發(fā)出泌尿結(jié)石模型，其病癥和對(duì)藥物反響與人類(lèi)自發(fā)性結(jié)石很相似2．食餌性膀胱結(jié)石1個(gè)月齡左右的幼年雄性大鼠，用維生素A缺乏的食物飼養(yǎng)，經(jīng)過(guò)10-14天后動(dòng)物體重下降，生長(zhǎng)停滯，可見(jiàn)眼病。30～60天中有14％發(fā)生膀胱結(jié)石，180～250天以后，膀胱結(jié)石發(fā)生率可達(dá)88％,但腎結(jié)石的發(fā)生率較低，只有41％第六十六頁(yè)，共83頁(yè)。六、內(nèi)分泌及代謝疾病動(dòng)物模型〔一)糖尿病動(dòng)物模型主要以鼠、兔、小型豬為主1．化學(xué)試劑誘發(fā)的高血糖動(dòng)物模型常用四氧嘧啶，可引起各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰島B細(xì)胞功能抑制，部分B細(xì)胞破壞，該型糖尿病與人類(lèi)1型糖尿病非常類(lèi)似，是降糖藥物研究的良好模型。但因四氧嘧啶直接損傷B細(xì)胞，對(duì)諸如磺酰脲類(lèi)刺激胰島素分泌的降糖藥是不適宜的第六十七頁(yè)，共83頁(yè)。2．自發(fā)性糖尿病動(dòng)物模型自發(fā)性糖尿病的動(dòng)物，主要有高血清胰島素型，例如，obes／SHR、SHR／N-cp、fa/fa大鼠，小鼠有ob/ob，db/db，ad/ad，KK等；低血清胰島素模型如BB大鼠、51.0121小鼠及中國(guó)地鼠等db/db小鼠是C57BL/Ks小鼠的突變株，db與ob并不是等位基因，但是db/db小鼠仍發(fā)生肥胖，血糖可由11.1mmol/L(200mg/d1)以下的正常程度逐漸升到33.3mmol/L(600mg/d1)以上，使雌鼠喪失生殖力，壽命較短(8個(gè)月)，主要表現(xiàn)為肥胖、高血糖、糖尿、蛋白尿，最后死于酮癥第六十八頁(yè)，共83頁(yè)。ob/ob為肥胖小鼠和肥胖大鼠，幼齡時(shí)，肥胖無(wú)糖尿，5-6個(gè)月齡后，肥胖穩(wěn)定，血中胰島素和葡萄糖程度上升。該鼠無(wú)生育才能，用雜合子交配才能產(chǎn)生子代，種系維持比較困難ad/ad為成年肥胖和糖尿病鼠，7-10周齡后才表現(xiàn)為糖尿病，該型鼠也是不育的第六十九頁(yè)，共83頁(yè)?！捕?缺鐵性貧血(IDA)動(dòng)物模型常用大鼠、小鼠、兔、雞、貓、犬、猴等，其中以大鼠的IDA模型最常用，該模型成模時(shí)間短、穩(wěn)定、可行性及重復(fù)性強(qiáng)IDA模型的復(fù)制方法通常有3種：①給予低鐵飲食②給動(dòng)物逐次少量放血，造成鐵的慢性喪失③低鐵飲食輔以定期少量放血由于放血通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起鐵的喪失，而且還引起其他營(yíng)養(yǎng)素的喪失，不能排除鐵以外因素對(duì)貧血的影響；另一方面剪尾常易引起動(dòng)物感染而死亡。目前主要采用低鐵飲食的方法第七十頁(yè)，共83頁(yè)。通過(guò)絡(luò)合劑1％EDTA-2Na除去國(guó)產(chǎn)飼料中的鐵缺鐵性貧血大鼠外在表現(xiàn)早期(Hb≤100g／L)以毛發(fā)生長(zhǎng)差、脫毛；眼球腫脹突出、蒼白、興奮為主，晚期(Hb≤60g／L)那么表現(xiàn)為倦怠、活動(dòng)減少、易感染為主，血液學(xué)及生化檢查表現(xiàn)為血紅蛋白及骨髓鐵(功能池)、血清濃度(交換池)、血清運(yùn)鐵蛋白及肝臟鐵含量(儲(chǔ)存池)均顯著低于正常對(duì)照組,尤以血紅蛋白和骨髓鐵的變化較敏感以低鐵飼料喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用大鼠5-6周即可復(fù)制出IDA大鼠模型，但應(yīng)注意不同種系的大鼠對(duì)低鐵飼料的反響性不同,F344、Wiser大鼠的反響性?xún)?yōu)于SpragueDawley大鼠第七十一頁(yè)，共83頁(yè)。七、神經(jīng)系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型一、癲癇動(dòng)物模型癲癇是一種相當(dāng)復(fù)雜的多因素臨床癥候群癲癇形成和發(fā)作的機(jī)制，比動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所能捉供的資料更復(fù)雜更多樣化，但由于種種原因，研究人類(lèi)癲癇的發(fā)病機(jī)制仍主要依靠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。但由于癲癇的遺傳及后天因素非常復(fù)雜，遠(yuǎn)非任何一種動(dòng)物模型所能代表，故在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)務(wù)必慎重第七十二頁(yè)，共83頁(yè)。1．大鼠部分簡(jiǎn)單性癲癇模型該模型相當(dāng)于急性或慢性部分簡(jiǎn)單性發(fā)作，與外傷性癲癇的發(fā)病及病理改變類(lèi)似。將大鼠麻醉后切開(kāi)硬膜，直流電泳儀正極接PE管(PE管遠(yuǎn)端恰好接觸腦皮層外表)內(nèi)的FeCl3液(100mmol／L)，負(fù)極通過(guò)針灸針接同側(cè)顳肌，通電電泳。分別在冠狀縫單側(cè)中線(xiàn)以及人字縫中線(xiàn)兩側(cè)鉆骨孔，此三孔分別旋入平頭螺紋釘接觸硬膜外表，作為腦電記錄電極。電泳完畢立即記錄EEG3h，為急性期EEG。電泳完后15天及30天記錄EEG，為慢性期EEG2．大鼠復(fù)雜部分性癲癇模型目的被公認(rèn)為研究腦興奮性、可塑性及長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)最實(shí)用的模型為點(diǎn)燃效應(yīng)(kindlingeffect)模型第七十三頁(yè)，共83頁(yè)。麻醉后在大鼠海馬CAll區(qū)坐標(biāo)，冠狀縫后3.8cm，中線(xiàn)旁2.0cm，雙側(cè)顱骨鉆孔，將尖端裸露的漆包線(xiàn)所制的電極置入雙側(cè)海馬：CAll區(qū)，用牙科水泥固定，也可選擇雙側(cè)杏仁核團(tuán)。術(shù)后7天，通過(guò)所置入的電極每日給予電刺激，刺激數(shù)日后可記錄到對(duì)該刺激反響的后放電，隨著刺激天數(shù)的增加，后放電逐漸延長(zhǎng)并復(fù)雜化，直至出現(xiàn)癲癇樣放電并伴癲癇發(fā)作。刺激30-50天，這種痛樣放電及癲癇發(fā)作開(kāi)場(chǎng)穩(wěn)定，說(shuō)明動(dòng)物已被點(diǎn)燃，以后不予刺激也有自發(fā)性癲癇發(fā)作Racine在1978年將其分為5級(jí)，即I級(jí)：面部陣攣；Ⅱ級(jí)：I級(jí)加節(jié)律性點(diǎn)頭；Ⅲ級(jí)：Ⅱ級(jí)加前肢陣攣；Ⅳ級(jí)：Ⅲ級(jí)加后肢站立；V級(jí)為Ⅳ級(jí)加跌倒。Ⅳ、V級(jí)可作為繼發(fā)性全身性癲癇模型。哺乳類(lèi)動(dòng)物均可建立該類(lèi)模型，廣泛用于抗癲癇藥物的藥效研究，但其發(fā)病機(jī)制仍未完全說(shuō)明第七十四頁(yè)，共83頁(yè)。3．慢性癲癇動(dòng)物模型各種動(dòng)物的大腦皮質(zhì)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)區(qū)是致病敏感區(qū)之一(1)鈷法150-300g大鼠。在前囟后3mm、正中線(xiàn)右側(cè)，以骨鉗切除直徑約為8mm的顱骨，并切開(kāi)硬腦膜。將消毒的市售鈷粉(200篩孔)約30mg，放在皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)的前側(cè)(面積約為10mm2，安好記錄電極，縫合，每日肌內(nèi)注射卡那霉素125mg/只；連續(xù)3天，以預(yù)防感染。在放置鈷后2-3周，可見(jiàn)置鈷對(duì)側(cè)肢體發(fā)生陣攣，少數(shù)動(dòng)物于部分