GB/T 14926.56-2008實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狂犬病病毒檢測(cè)方法

犐犆犛６５．０２０．３０

犅４４

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１４９２６．５６—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１４９２６．５６—２００１

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狂犬病病毒檢測(cè)方法

犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犪狀犻犿犪犾—犕犲狋犺狅犱犳狅狉犲狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犚犪犫犻犲狊狏犻狉狌狊

２００８１２１０發(fā)布２００９０３０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜１４９２６．５６—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１４９２６《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物》共５４個(gè)部分，為不同微生物和病毒檢測(cè)技術(shù)方法。

本部分自實(shí)施之日起代替ＧＢ／Ｔ１４９２６．５６—２００１《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狂犬病病毒檢測(cè)方法》。

本部分與ＧＢ／Ｔ１４９２６．５６—２００１相比主要技術(shù)差異如下：

ａ）刪除原標(biāo)準(zhǔn)中“２引用標(biāo)準(zhǔn)”內(nèi)容；

ｂ）對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中“３原理”中所有內(nèi)容改為“在微孔板上預(yù)包被純化狂犬病毒抗原，使免疫反應(yīng)在

固相載體上進(jìn)行。當(dāng)被檢血清中有狂犬病病毒抗體存在時(shí)，則與孔壁上的抗原形成抗原抗體

復(fù)合物，再與抗犬ＩｇＧ酶標(biāo)記物反應(yīng)，最后通過測(cè)定酶作用底物催化后的產(chǎn)物，進(jìn)行定性

檢測(cè)”；

ｃ）刪除原標(biāo)準(zhǔn)中所有關(guān)于血凝抑制試驗(yàn)的試劑、方法及結(jié)果判定；

ｄ）對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中所有關(guān)于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的內(nèi)容進(jìn)行修改，包括試劑、方法及結(jié)果判定等；

ｅ）對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中“６結(jié)果判定”中增加了“６．３基礎(chǔ)級(jí)犬群體免疫抗體合格率：免疫抗體合格率＝

（被檢動(dòng)物抗體陽性數(shù)／被檢動(dòng)物總數(shù)）×１００％。基礎(chǔ)級(jí)犬群體免疫抗體合格率達(dá)到７０％以

上可判為該犬群免疫合格”內(nèi)容。

本部分由全國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。

本部分由全國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)負(fù)責(zé)起草。

本部分主要起草人：田克恭、陳西釗、曹振、王傳彬、何秀敏、湯漢文。

本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１４９２６．５６—２００１。

Ⅰ

書

犌犅／犜１４９２６．５６—２００８

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狂犬病病毒檢測(cè)方法

１范圍

ＧＢ／Ｔ１４９２６的本部分規(guī)定了狂犬病病毒（ＲＶ）的檢測(cè)方法、試劑等。

本部分適用于犬ＲＶ的檢測(cè)。

２原理

在微孔板上預(yù)包被純化狂犬病毒抗原，使免疫反應(yīng)在固相載體上進(jìn)行。當(dāng)被檢血清中有狂犬病病

毒抗體存在時(shí)，則與孔壁上的抗原形成抗原抗體復(fù)合物，再與抗犬ＩｇＧ酶標(biāo)記物反應(yīng)，最后通過測(cè)定酶

作用底物催化后的產(chǎn)物，進(jìn)行定性檢測(cè)。

３主要試劑和器材

３．１試劑

犬狂犬病毒ＩｇＧ抗體檢測(cè)試劑盒（定性），包括：

ａ）預(yù)包被狂犬病毒抗原的微孔板；

ｂ）狂犬病毒ＩｇＧ酶標(biāo)記物；

ｃ）狂犬病毒ＩｇＧ陽性對(duì)照；

ｄ）狂犬病毒ＩｇＧ臨界對(duì)照；

ｅ）狂犬病毒ＩｇＧ陰性對(duì)照；

ｆ）顯色液Ａ：磷酸氫＝鈉檸檬酸緩沖液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ５．０）１０００ｍＬ，３０％過氧化氫Ｈ２Ｏ２

（ＭＷ３４．０）３．５ｍＬ；

ｇ）顯色液Ｂ：檸檬酸１．０５２ｇ，乙二胺四乙酸二鈉（ＥＤＴＡＮａ２）０．１８６ｇ，四甲基聯(lián)苯胺（ＴＭＢ）

０．２５ｇ，二甲基亞砜（ＤＭＳＯ）８．０ｍＬ，純化水９９２ｍＬ；

ｈ）終止液：９８％硫酸２７．８ｍＬ，純化水９７２．２ｍＬ；

ｉ）１０倍濃縮洗滌液：ＰＢＳ（０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．２～７．４）９９５ｍＬ，吐溫２０，５ｍＬ；

ｊ）樣品稀釋液：硼酸鹽緩沖液（０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ８．０）９５６．０ｍＬ，甘油（ＭＷ９２．０９）４０．０ｍＬ，酪蛋白

（ｃａｓｅｉｎ）１０％硫柳汞鈉溶液２．０ｍＬ，吐溫２０，１．０ｍＬ１％酚紅溶液，１．０ｍＬ。

試劑在使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（１８℃～２５℃）。

３．２器材

器材包括：

ａ）精密移液器１０μＬ～１００μＬ；